Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 33
Текст из файла (страница 33)
8. Меазиге сЬе ОР оЕа 1:!00 й!ирои оуйе сеП зцзрепз!оп. ТтПисе сЬе сеП зизрепяоп со а сопсепсгасюп оЕ 2 х 10'о со 3 х 10'о сеПзЕт! (!.0 ОР = -2.5 х 10з сеПзПи1) ъчПЬ !се-со!а ОУТ тейши. 9. Тгапзуег 40 )с! оЕ йе зцзрепяоп со ап ке-со!8 е1ессгорогаПоп сичессе (0.2-ст Пар) апс! сезс ъчЬейег агс)па оссигз ъчЬеп ап е!ессгка1 йзсЬагае !3 аррПес) (р1еазе зее 5сер 16 Ье1оьч). 1Е зо, ъчазЬ сЬе геша)пс)ег оЕ сЬе сеП зизрепяоп опсе тпоге ъчиЬ ке-соЫ ОУТ тейшп со епзцге сЬас сЬе сопс)исс)ч)су оЕ йе Ьассе|ба! ялзрепяоп !з зиЕПс|епс1у 1оъч (<5 тЕ|1). 10.
То изе сЬе е!ессгосо|пресепс сеПз иптейасе1у, ргосеес) йгес|1у со 5сер 12. ОсЬег|| !зе, зсоге йе сеПз ас -70"С ипП! ге|!шгей Рог зсога8е, йзрепзе 40-)л! а!щиосз оЕ сЬе сеП зизрепяоп шсо зсеН1е, ке-со!8 0.5-тп1 т)сгоуи8е шЪез, |1гор !псо а ЪасЬ оЕ 1нрлЫ пПго8еп, ап|1 сгапзуег со а — 70'С Егеехег. 11. То изе Егохеп е1ессгосотресепс сеПз, геточе ап арргорНасе ишпЪег оЕ аПс)иосз оЕ сеПз Еготп йе — 70"С Егеехег. 5соге сЬе сиЪез ас гоотп сетрегасиге ипП1 йе Ьассепа1 зцзрепзюпз аге сЬаъче|1 ап|1 сЬеп сгапзуег сЬе тЬез со ап ке ЬасЬ.
Е!есФгорога6оп 12. Р|рессе 40 )л! оЕ йе !гезЫу тпа|1е (ог сЬаъчес)) е1ессгосотпресепс сеПз тисо ке-со!8 зсеП1е 0.5- п|1 т)сго6л8е сиЪез. Р1асе сЬе сеПз оп ке, со8есЬег ъч!ЕЬ ап арргорпасе пшпЬег оЕ ЬастеПа1 е1ессгорогайоп сичессез. !.!22 СЬарсег 1: Р!аяи|гЬ аиг) ТЬесг (Ли!и!иея т Мо!еси!аг С!отиП АИ 10 рд со 25 п8 оГ сЬе Т))ь)А со Ъе е1ессгорогасе|1 сп а чо1шпе оЕ 1 — 2 )с! со еасЬ ги|сгоГице сиЬе апс1 спсиЬасе сЬе сиЬе оп ке Еог 30 — 60 аесопс)я 1пс1и|1е а11 оЕ йе арргорпасе рояНче апс) пе8аНче сои!го!8 (р1еаае аее СЬе рапе! оп ВАСТЕЕ)АЕ Т)САЫБЕО))МАТ)ОЫ |п Ргогосо! 23). 1ПеаПу, йе РИА со Ъе е)ессгорогасег) аЬои)П Ъе геаырепйеП ас а сопсепсгасюп оЕ 1 — | 0 )с8|т! ш Н О ог ТЕ (РН 8.0).
Тню ориона аге ачаг!аЫе ччЬеп а РС(А 1г8асюп геаспоп Ь ыеП Йгесс!у Еог е! ессгорогасюп, ЕиЬег |Ье 88ас)оп геассюп сап Ъе г)Пнсег) 1(10 со 1720 |и НгО ог |Ье РХА сап Ье ршгйед Ьу арии-со1шип сЬгогиасо8гарЬу ог Ьу ехсгасиоп чг)сЬ РЬепоЬсЫогоЕоип ЕоПоьчес| Ьу ргесгриаиоп ьч|сЬ ейапо1 гп йе ргеаепсе оЕ2 м аиипопшиг асесасе. ТЬе ргес)р)сасег) ОНА Ь йеп г)паег) ю)сЬ 703ь есЬапо1 апг| геанарепг)ес) гп ТЕ (РН 8.0) ог Н О ас а сопсепсгасюп оЕ 1 — 10 р8|гп). Рог йе сопасгиссюп оЕ 1гЪгапеа, ьчЬеге Ьг8Ь еЕПсгепсу Ь гег)шгес) апг) сосгапаЕоппаись аге ипс1еягаЫе, соса1 Тс)ь)А сопсепсгасюпа оЕ <10 п8(ги! аге гесотгпепс)ед ())огчег ес а). 1988).
Еог гоиипе сгапаЕоггиасюи оЕ Е. со!! ъчПЬ а ялрегЬе1Ыа! р!аяпЫ, 10 — 50 р8 оЕ )3ЫА Ь ас)е9насе. СЧЬеп юЬ- с!опгп8 |пса а р1аяпЫ, ир со 25 п8 оГ РЫА Й!исеП |гоги |Ье 88асюп иихтге сап Ье иаей 13. Бес сЬе е1ессгорогаНоп аррагасиа со г)е1|чег ап е!есспса1 ри!ае оГ 25 )ср сарасЬапсе, 2.5 )сЧ, апс) 200 оЬгп геа!асапсе. Рсрепе йе Т))ч)А(се!1 пихсиге |псо а со!8 е)ессгорогаНоп сичеие. Тар йе сю1исюп со епаше йас сЬе аиарепяоп оЕ Ъассепа ап|1 Т))х)А яса ас )Ье Ьопогп оЕ йе сичессе.
Г)гу сопс1епаасюп апс1 гпоьшге Егопс сЬе оисяс)е оГ сЬе сичеае. Р1асе сЬе сичессе ш сЬе е1ессгорогасюп с1ечке. Т)е1|чег а ри1ае оЕ е!есспсЬу со )Ье се! 18 ас йе аесс|п83 |пйсасес) аЬоче. А Нгпе сопасапс оЕ 4 — 5 пи!1!аесопс)а ъчйЬ а Е)е18 асгеп8)Ь оЕ 12.5 )сЧЕсгп аЬои1с) ге8!асег оп йе шасЬ|пе. ТЬе ргеаеисе оГ юпа ги |Ье е1ессгорогаиоп сичеие )псгеааеа йе сопйиссиПсу оЕ сЬе ао1шюп апг) саыеа йе е1есспса! сиггепс со агс ог аЫР |ЬгоиЕЬ сЬе ао1ис|оп оЕ сеПа апс) Г)ЫА. Агсгп8 Ь ыиа!- )у тапгТеьс Ьу йе Еепегасюп оЕ а рорр|и8 шипи ш йе сичепе с)нг)п8 сЬе е!есспса! Ри!ае. ТЬе нпечеп сгапаЕег оЕ сЬе сЬаг8е сЬгоиЕЬ сЬе сичессе ПгаасссаПу гес)исса сЬе еП|сПепсу оЕ сгапаЕоппаиоп, Агс|и8 гпсгеааеа ас ЬгЕЬег сетрегашгеа апг) оссша гЫЕЬ ю1ииопь Ьаяп8 ап е!есспса1 сопс)иссапсе >5 тЕО (е.8., 10 игм аа1| ог 20 гпм МЕг' ао!ииоиь).
1Е агсги8 оссигь гп сЬе ргеаепсе оГ РЫА Ьис пос ш Ьа аЬаеисе, геточе юпа Егопс сЬе РХА ргерагас1оп аа с)еьспЬег) ш Бсер 13. 16. 17. ТгапаЕег сЬе се!13 со а 17 х 100-пип ог 17 х 150-пип ро1ургору1епе шЬе апс1 спсиЪасе йе си!сигеа сч|сЬ цепйе госасюп Еог 1 Ьоиг ас 37 С . |Г асгееп|п8 Ьу и-сотр1етепсасюп, ргосееП со Ргососо! 27 Еог р!асш8. 18. Р!асе с)|йегепс чо! игпеа (ир со 200 )с1 рег 90-гпгп р1асе) оЕ йе е)ессгорогасег) се1!а опсо 5ОВ а8аг гиейшп сопса|п|п8 20 п|М МВБО4 апс1 йе арргорпасе апиЬюск. ЪЧЬеп сгапаЕогпип8 нисЬ а ьирегЬе!Ыа! р!аяпЫ, ьчЬеге !гана(остаось сап Ье ехрессег) |и аЬипПапсе, а япаП чо! нисе оГ сЬе Ьассепа! си!шге сап Ье ьсгеа)сес) счЬЬ а ыеп1е )оор опсо ап а8аг р!асс (ог а ае8тепс оЕ а р!асе) сопсагпш8 сЬе арргорпасе апиЬсосйь.
Ноьчечег, гТ ои1у япаП пшпЬегь оЕ иапьЕоппапь аге ехрессеи,!с Ь Ьеас со ьргеас) 200-)г) а!щнось оГ йе Ьапепа! ьньреи*юи ни еасЬ оЕ Пче р!асеа, ЪЧе г)о иос гесоттепг) р!аии8 а сопсепсгасег) анарепяоп оЕ |Ье Ьассепа! си1снге оп а яп8)е р1асе япсе йе 1аг8е пшпЬег оГ г)еаг) сеПь геьи16п8 !гонг е!ессгорогасюп игау шЫЪ|с сЬе 8гониЬ оГ гаге сгапаЕопиапи. йоге йе р!асех ас гоош сеспрегаСиге ип01 ЕЬе 1!с)и|с) Ьах Ьееп аЪаогьег. 20.
1пчеп йе р!асеа апг) шсиЬасе сЬегп ас 37 С. ТгапаЕогшег) со1оп|еа БЬои1с) арреаг |п 12-16 Ьоигя Тгапа(огтес) со!опгеь гпау Ье асгеепег) Еог йе ргеаепсе оГ гесотЬгпапс р)аяпЫь иа|п8 опе оЕ йе тесЬос)а с)еасг)Ьег) ги Ргососо!ь 27, 28, 31, апг) 32 оГ йи сЬарсег.
21. Аа с!шсИу аа роаяЫе аЕсег сЬе ри!ае, гепюче сЬе е1ессгорогасюп сичеие апс) асЫ 1 гп1 оЕ 5ОС шее)!шп ас гоогп сегпрегасиге. Боте гичеас!Еасога ЬеПече сЬас сЬе агЫгПоп о|'гиейшп ас гааги сегпрегасше рготаеа а Ьеас ьЬос1с сЬас гпсгеаьеа йе еП)с)енсу оЕ !гана(оста!)ои. Рго1осо! 27 5сгееп~пд Вас1епа! Со!опрея 0ыпц Х-ца! апд ! РТС: а-Сотр! егпеп1а6оп Н!3 рКОтОСО!. РКЕЗКНтЬ МГтНОВЬ ГОК !Огнт!ГЧ!НС гесошЪ|папт р1аяпЫа Ьу а-сошр!ешепгагюп !гог а г1ега11ес) 61аспаяоп оГ а-сошр1ешепгагюп, р1еаве аее йе 1пггог!ис6оп го гЫз сЬарсег).
ТЬе сЬгогподеп)с апЬьггасе Х-ца! (Р!еаье аее йе 1п1оппагюп рапе1 оп х-САЕ) )а пихт ъчгЬ йе Ьасгепа1 сц1гиге, сошЬ~пег1 ичгЬ гпо!сеп гор аааг, апд гЬеп ьргеаг) оп ае!есбоп р1атея 11 геьопгсеь аге!ппЬег1, йе гег!шгег! чо!шпе оу Х-ца! сап Ье аргеас1 оп сор от ап аааг р!асе (р!еаае атее йе рапе! оп АЕтианАТК р!тОтоСоо ВЫСт АРРПСАт!Ом Ор Х-САЕ А! !О !РТС то АСА!Г р!АТР3 а! йе еп6 оГ гЫа ргогосо1).
ТЬе е6)с)епсу отггапайгша6оп )а к11цЬВу Ь)аЬег ччЬеп йе Ьасгепа аге р!асег! ш гор айаг гайег тЬап оп йе ьпггасе ог" аааг р1агея РегЬара гЬе ггапауогшес) Ьасгепа ргеуег йе ь!1аЬ6у апаегоЬ)с агаге чбйгп гЬе аой аааг ог гЬе 1аояпо1аг)гу ргочЫе6 Ъу гЬе айаг шейшп. 1пс1пбе гЬе Го11огч)пц соптго!я ° А а!та)п оК Е. со1! аупгЬеяг)па йе го-1гадпеп! оу )3-аа1асгоя6аве. Ап Ыеа! сопсго1 )а йе рагепса1 ппггапагогшес) к!та)п )гош тчЬ|сЬ гЬе ггапагогшег! со!ошеа ипг!ег сев! аге бепчей Со!ошей ог" йе рагепта!, ппггапь1оггпег! агга)п ьЬоп16 а11 Ье х)6ге. ° ТЬе загпе го-ргодис)пц багга)п ггапьГогшег) Ьу гЬе егпргу р1аяпЫ чесгог, ччЫсЬ епсог!еа гЬе аГгаашеп! ог" )3-аа1асгоыдаье. ТЬеае со!ошей аЬои!4 а1! Ье Ыпе. МегЬосЬ гог рег1огш)па а-сошр1ешепсабоп чбгЬ Ъасгег!орЬаце Х апг! ЬасгегюрЬаце М13 чесгога аге беьспЬе6 гп СЬаргега 2 ап4 3, геарес6че1у.
МАТЕК1А$5 В611егь апг! Ьо!обои Р1еаье атее Аррепг)!х т 1ог сотропеп!ь о1 а!осЕ ьо1и6опь, Ьийегь, апг! геааел!я О!!и1е МосЕ ьо!и6опь !о 1Ье арргорпа!е сопсеп!га6опя !РТС ьо!иооп (20 чч)ч) Х-да! гю!ибоп <!> 12%о и)ч) р!еаье атее йе !лГоппаг!оп рапе! оп Х-САС 1.123 1.124 СЬартег /: Р!аьттдь апд ТЪетг 1ЛеЕи!петь ш Мо/еси/аг С!оптпе 1РТС Вюргору!+О-ТЫоеа!астоь!де) В а поп(еппептаЫе апа(ое о/ !астоье йат /паст!чатеь йе /асг гертеььог (Ваг!е!еу апд Воигцеоа 1970), апд (Ьегетоге (пдисеь тгапьсг!ртгоп от' (Ье /ас орегоп.
Мои ьтгапа о1 Ьастепа сотптпоп!у иьед Еог и-сагир!етептадоп, Ьотчечег, до пот ьуп(Ьеь!ге ь!Еп!агап( г)иапт!т!еь о/ /ас гергеьюг. Сопьегртепду, (Ьеге В иьиаоу по пеег! (о (пдисе ьуп(Ьеь/ь о/ Фе Ьоьт- апд р!аьт(д-епсодед ЕгаВтпепть о/ 11- ! Ва!астоь!даье Еог ЫьтосЬет!са( апа!уьь о/ Ьастепа! со!оп(еь. В (Ье Ьастепа! ьтга!и сагпеь йе /о а1!е!е о/ /ас гергеьюг апд/ог В (Ье р!аятз!д сагпеь а /ас/ депе, !РТС ЕЬои!д Ье иьед то (пдисе ьуп(Леь!ь оl Ьой Егаетепть о/ йе епгугпе. Мее1!а ЕВ ог УТ аааг р/атеь солта/и/па Яе арргорпате апВЬтопс ЕВ ог УТ Еор айаг прес!а! Ее!о!репеп1 Е/еаттпа Ыос/г ргеьет то 45пС Игоодеп тоо/Ьр/с/сь ог /поси/айпи пеед/еь ЧесЕог5 апе! Валер!а! Ягатпь Е. со!1 си/гиге, тгапь/огтед тч/Я гесотЬтпап( рlаьт/дь 1Ые Ьастепа тгапь/оппед Ьу опе оЕ тЬе шейодь деьепЪед тп рготосо1ь 23 (ЬгопаЬ 2й оЕ тЬЬ сЬартег.
МЕТНО0 1. Е)!ьрепье а!нрюп оЕ пю!теп гор аВаг што 17 х 100-ппп ТиЪеь. Р!асе йе тиЬеь ш а 45"С Ьеат!пВ Ыос1с ип61 йеу аге пеес1ед. 1)ье 3-ш! а1п!пота Еог 90-пип р!атее апд 7-ш! а!нрюта Еог 150<и! р!атее. 3. Ореп ТЬе тиЬе апг1 адд ТЬе арргортдате атоипть оЕ Х-да! апс1 1РТС (ЕЕ тес(шгег1) аь ьЬотчп !п ТаЫе 1-10. С!оье йе тор оЕ йе тиЪе апд Веп(1у тпчегт Ь ьечега1 тппеь то ппх (Ье соптеппк 4. ( ти!с!г!у роиг йе то1теп сор аеаг што ТЬе септег оЕ а Ьагдепед аВаг р1ате сопсаш(пц йе арргорг!ате апт!Ьют(с апд д(ьтг(Ъите ТЬе ьо1итюп Ъу ьтч(г1!па. 5. Кереат 51ерь 2 — 4 ип61 а!1 оЕ йе ьатр1еь Ьаче Ьееп р1атед. 6.
АПотч йе ьоЕЕ аВаг то Ьагдеп ат гоогп тегпрегатиге, тч(ре апу сопдепьапоп Егот (Ье 1(д оЕЕЬе р1атеь, апд ТЬеп шсиЬате ТЬе р!атеь ш ап шчегтед роь!т!оп Еог 12 16 Ьошь ат 37'С. ТАВЕЕ 1-10 Соптропепть 1ог Тор Аеаг Амоиптт Ое КеАсептт 5(гь ОЕ РЕАТЕ МОЕТЕ14 ТОР АОАЕ !РТС' Х-САЕ 3 ш! 7 ш1 40 р1 (ОО )т! 7 р1 20 р1 90 пнп 150 ппп 'Мау пот Ье геогагеа р!еаае аее тЬе ептгу ап 1РТС гп тье Матепа1а Еат. 2. Кеточе ТЬе Вгьт тиЪе Егот ТЬе Ьеат!пц Ыос)г. 'тА/ог)г(пВ г!шсЫу, адд 0.1 т1 оЕ Ьастетда! ьиьрепедоп сои(а!и!пц <3000 ч/аЫе Ьастег(а Еог а 90-ппп р1ате апс1 <10,000 Еог а 150-ппп р1ате. С1оье йе сор оЕ ЕЬе тиЬе апг1 !пчегт К ьечега1 т(гпеь со д(ьрегье ТЬе Ьастег!а ТЬгоиВЬ ТЬе пю1(еп аВаг. Ргососо1 27| Бсгеепте Вас(ее(а! Со!отег Их(и~Х-Еа! апд 1РТС| а-Сотр!етепсас(оп !.!25 7.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
