Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 29
Текст из файла (страница 29)
5сег61ае сЬе яо106оп Ъу 6)!гас(оп йгои8Ь а д(ароааЫе ргеПпаес1 Ха!8епе 6!сег (0.45-(сш роге яге). 1?1ч(сне Ьпо 10-сп1 а1нрюса апс1 асоге ас -20'С. Ь. Ргераге ТРВ Ъу с(1аао!ч(п8 аП сЬе сю1исеа !соей Ье1оьч ш -500 ш( оЕ Н О апг( сЬеп асЫ 10 пс! оЕ 1 М МЕ5 Ьийег (РН 6.3). Ас)!иаг СЬе чосите о( СЬе ТРВ Со 1 16ег сч(СЬ риге Н,О. Ипа! сопсепсгасюп Агиоипс рег !пег Кеа8епс 1 М МЕ5 (РН 6.3) 10 ш1 МпС1, 4Н,О 8.91 8 СаС! '2Н О 1.47 8 КС1 7.46 8 НехашпппесоЪа1с сЫогЫе 0.80 8 НО со 1 !йег с.
5сег1!1ае йе ТРВ Ьу 6!сга6оп сЬгои8Ь а сбароааЫе ргег(паес( Ха!депе 6)сег (0.45-(сш роге же). Т3счЫе йе ао!06оп 1псо 40-гп! а1нсиоса ш ссааие-си!сиге йая1са (е.8., Согпш8, ог ес)шча!епг) апс( йоге СЬесп аС 4 С. 10 псМ 45 шМ 10 шМ 100 псМ 3 гпМ ТО РКЕРАКЕ ГКОХЕЬС 5ТОКАСЕ ВС7ГГЕК а. Ргераге 1 М росаае4шп асесаге Ьу с)1аао1ч(п8 9.82 8 оЕ росааа(иш асесасе (и 90 сп! о( риге Н О (М1!11-О, ог ес(шча1епС). Ас))иаг СЬе РН оЕйе сю)иСюп Со 7.5 плСЬ 2 М асе6с асЫ, асЫ риге Н О со ЬПп8 сЬе 6па1 чо!шпе со 100 ш!.
!3(чЫе сЬе ао1исюп шсо а1н)иоса апс) йоге ас — 20'С. Рюсосо! 23: ТЬе НапаЬап МегЬог(сог Ргерага6оп апг( Тгапфогтаг(оп 07'Сотрегепг Е. со1с 6107 !.108 СЬаргег 1: Р!агтиЬ апс) ТЬесг Ие)и!пея т Мо1ееи!аг С!оп)пе Ь. Ргераге РВВ Ьу с)!аао)ч!пц а11 оЕ )Ье хо1исеа 1!хсес) Ье1осч !и -500 гп1 оЕ риге Н О. АЕ)ег сЬе согпропепса аге с)!яо1чес), ас))иас сЬе рН оЕ йе хо)ис!оп со 6.4 сч!)Ь 0.1 Ы НС1. Тоо Ь!8Ь а рН саппос Ъе аг))иасес) Ъу а66!п8 Ьаае) юасеай с)!хаасс) )Ье ьо1ис!оп апс) апс) ЪеВ!и а8а!и.
А6)иас сЬе чо!шпе оЕ )Ье Впа1 ао!ис)оп со 1 !Нег ччЬЬ риге Н,О. Аспоипс рег !иег Р!па) сопсепсгас)оп Кеа8епс )О гп! ) М роСаяшгп асесасе (рН 75) МпС! '4Н О СаС1 '2Н О КС) НехагппипесоЬа!с сЫог)6е С)усего! Н,О 10апм 8.9) 8 1.47 8 7.46 8 0.80 8 )00 сп1 со ) !иег 45 гпм )О спм )О гпм )00 спм )09о (ч)ч) с. 5)ег!1!хе сЬе ао1ис!оп Ъу 61)га6оп )Ьгои8Ь а 6!ьроааЫе ргеПпьес1 Ха!8епе В!сег (0.45-)спс роге яхе).
)3)арепае йе ао!ис)оп спсо 40-пс! а!!г)носа апс) а)осе )Ье а)!с)носа !п сгяие си!- сиге Е)авЬа (е.8., Согп!п8, ог есрича!епс) ас 4'С. )3иг!п8 асога8е, )Ье рН оЕ йе ао!ис!оп с)г!Еса 6осчп со а Впа! ча1ие оЕ 6.1 — 6.2 Ьис йеп яаЬ)1)хея 2. с)ае ап !посо!а)!п8 1оор со асгеаЬ Е. соВ оЕ йе деягед асса!и с))гесс!у Егогп а Егохеп асосЬ опсо йе аигЕасе оЕ ап 5ОВ а8аг р!асе. 1псиЬасе йе р1асе Еог )6 Ьоига ас 37'С. )с Ь нос несеяагу со )Ьаъч сЬе Егохеп асосЬ оЕ Ьассег)а.
5нЕВс)епс се)!о ч6)! ас)с)г со йе 1оор яЬен и Ь аегассЬе6 ассом йе онгЕасе оЕ сЬе Егохеп о)ос)с. А ып8!е снЬе оЕ Егохеп о)ос)г сан Ье сяе6 шапу синея 4. Сгоъч йе се!1ь Еог 2.5-3.0 Ьоигь ас 37'С, гпопЬоПпд )Ье Вгосч)Ь оЕ йе си!сиге. Гог еЕВс)енс сгапоЕогшас)оп, Ь Ь еяен6а1 сЬас сЬе ншнЬег оЕ ламе се))ь пос ехсеед )О" се)!яш), яЬ)сЬ Еог гнои) яга)пь оЕ Е. со0 Ь ерша а1епс со ан ОО „оЕ -0.4. То еньнге йас сЬе он)саге боем пос Вго1ч со а ЫВЬег бепясу, шеааше сЬе ОЕ) оЕ сЬе сн!сиге ечегу )5-20 пнннсея Р)ос а 8гарЬ оЕ )Ье баса оо йас йе 6ше яЬеп )Ье ОЕ)ооо оЕ сЬе сн)сиге арргоасЬеь 0.4 сап Ье ргейссед ъч))Ь гоше агонгасу.
Ве8)н со Ьагчеос сЬе сн)сиге и Ьеп сЬе О)3оо геасЬео 0.35. Рог геаьоно )Ьас аге нпс)еаг, йе Ь)8Ьеос еЕЕсс)епс)ео оЕ сгапосогшас)оп аге оЬ)а)ней ас сяо оерагасе Ро)нго сн йе 8гошй снгче оЕ Е, со))с сн еаг!У- со шм 1о8 РЬаье (ОРооо = О 4) (НапаЬап ) 983) ан6 )и!асе-!о8 РЬаье (ОО „=- 0.95) (Тан8 ес а1. )994). ТЬе еаг)у реаЬ я еаяег со яогЬ гбй Ьесаное сЬе Ь)8Ь ейк)енсу оЕ афгано(огшас)оп Ь ьысасне6 Еог а )он8ег шне.
ТЬе )асег реа)с ыпнсЬ яеерег анд а 2-3-пнпше бе)ау сп со!)ес6п8 )Ье се))ь сан сов) ан огбег оЕ гпа8п)сние ш сганоЕоггаа6оп еЕВс)енсу. Весаное йе ге)асгоньЬср Ъесяееп сЛе ООооо ан6 )Ье нншЪег оЕ ч)аЫе се1!ь/п6 чапек аашеяЬас Ьогн апаш со ьсгасн, Ь ы еяен6а! со са))Ьгасе йе орессгорЬосошесег Ьу нсеаанпн8 сЬе О)3ооо оЕ а 8гоъ )н8 сн)сиге оЕ )Ье раг6сн)аг ягаш оЕ В го0 ас ййегепс 6шео )и )ь ВгоясЬ сус)е ап6 6есегпнн)п8 йе пшпЬег оЕ ч)аЫе се!)з ас еасЬ оЕ )Ьеое сипев Ьу р)а6н8 401нсгоно оЕ йе сн!сиге он 18 а8аг р!асео )н сЬе аЪоепсе оЕ ан6Ъ)ос)я. 5.
ТгапаЕег йе се!15 со асеП1е, д!ароааЪ|е, ке-со)6 50-гп) ро1ургору1епе сиЬея Соо1 йе си!сигех Со 0'С Ьу аСоПп8 йе СиЪеь оп ке Еог 10 пипигея 6. Весочег йе се!!а Ьу сепсг!Еи8ас!оп ас 27008 (4)00 гргп !п а 5огча11 С5А госог) Еог 10 гп!иисеа а)4 С. 7. )3есапс )Ье гпееВшп Егопс сЬе се!1 ре)1еся 5сапс) йе сиЬех !и ап !пчегсес) роя6оп Еог ! пс!нисе со а11осч йе !асс сгасеь оЕ псес)!ипс со дга!и асчау. 3. ТгапьЕег Еоиг ог Вче иге!1-!ао!аСес) со!оп!еь )пСо 1 гп! оЕ ВОВ санса!и!п8 20 п)М М850 . )3!аресте йе ЪассеПа Ъу чогсех)п8 ас спо6егасе ареей апд сЬеп 6!1исе йе си!сиге сп 30 — ) 00 гп1 оЕ 5ОВ сои)а!п)п8 20 гпМ М8504 сп а 1-1Ьег Ваь)с.
ТЬе со!ошео оЬон)й Ье по шаге )Ьан 2-3 пнн ш 40ашесег. Ртогато! 250 ТЬе НапаЬап Л4есЬод Сот Ртератабоп апд Ттапфотпсаг!оп оЕСсппрегепт Е. соП 1.109 8. Кеаизрепд сЬе реПеса Ьу анчсгПпП ог Пепс1е чогсех!пП !п -20 гп! Ерег 50-т! сиЬе) оЕ !ее-со1д ТгВ ог ЬВВ сгапьЕоппаПоп Ъийег.
5!иге сЬе геаиарепдед сеПа оп ке Еог 10 пипшеа. 9. Кесочег йе сеПа Ьу сепгг!ПгПаС!оп аС 27000 (4100 грт сп а 5огчаП СЯА гоСог) Еог 10 пиписеь ас 4 С. 1О. Ресапс йе ЬиЕЕег Егогп йе сеП реПеся 5сапд сЬе сиЬеа !п ап 1пчегсег1 роядоп Еог 1 пиписе со аПосч сЬе 1ая сгасеа оЕ Ъийег со дгасп ачнау. 11. Кеаиарепд йе реПеса Ьу ачдг!шу ог аепс1е ногсех!па сп 4 гп! Ерег 50-пс1 сиЬе) оЕ ке-со!д ТЕВ ог РВВ. Ргосеед еПЬег ччссЬ 5сер 12 а !Е йе сотресепс сеПв аге со Ъе иаег1 ппспееПасе1у ог сн!сЬ 5сер 12Ъ |Е сЬе согпресепс сеПа аге со Ъе а!отед ас — 70'С апд иьед ас а 1асег дасе. Ргерагабоп оЕ СоосреЕеоЕ Се!!5 ! 2.
Ргераге сотресепс сеПа Еог сгапаЕогтас!оп. ТО РуРА!се еке5н сОмРетейт се!05 а. АгЫ 140 Сс! оЕ РпР ао106оп шсо йе сепсег оЕеасЬ сеП аиарепа!оп. 1пипееПасе1у пих Ъу асн!гПпа Пепс!у, апд сЬеп а!иге сЬе аиарепа!оп оп ке Еог 15 пиписея Ь. Адд ап адд!с!опа! 140 Сс! оЕ РпР ао!идоп со еасЬ аиарепыоп. Мгх Ьу ьсч!г1шП Пепс1у, апс1 СЬеп а!иге СЬе аиарепь!оп оп ке Сот а Еигйег 15 пнпигея с. Ргарепае аП9иось оЕ йе анрепа!опа тисо сЬгПед, яеН1е 17 х 100-ппп ро1ургору1епе сиЬея 5соге сЬе сиЬеа оп ке.
Еот шоас с1опшц ригроаеь, 50-Сс! аПциоь оЕ йе сошресепс-сеП сиарепяоп ндП Ье тоге сЬап адегСиасе. Носненег, гнЬеп !ага пшпЬегь оЕ сгапасогшед со!оп!та аге гецшгед !е.д., снЬеп соааггисс)пд сЕСХА ПЬгапез),!аг5ег аЬ9иоСь тпау Ье пеедед. б!ааа сиЬеь аЬои10 пос Ье мед аа йеу 1оснег сЬе ейк!епсу оЕ ггапасоппасюп Ьу -10-Ео!д. ТО РссеРАгсе ессОхеь! 5тОск5 Ое сомретеь!т се!05 а. Адд 140 )г! оЕ РМ50 рег 4 гп1 оЕ геаиврепдед сеПа.
Мгх Пепс1у Ьу ялгПпП, апд асоге йе аиарепяоп оп ке Еог 15 пиписев. Ь. АгЫ ап аг10ППопа1 140 Сс! оЕ РМ5О Со еасЬ анрепа!оп. Мгх ПепС1у Ьу ачдг!гпП, апд СЬеп гесигп сЬе аиарепа!опа со ап ке Ьай. с. 'нСгог)г!пц Пи!сИу„д!арепае а)!Попса оЕ йе аиарепа!опа !псо сЬП1ед, асед1е ткгоЕиПе сиЬеь ог Пяие си1сиге ч!а1я 1пипегПасе1у ьпар-Егееге йе сотресепс се1Ь Ьу !ттегяпП йе с!ПЬс!у с!оаед сиЬеа !п а Ьай оЕ !н)шд и!сгоПеп, 5соге йе сиЬеь ас -70 С ипсП пеег1ес1. рог шоас с! оп!ад ригроаея 50-р! аПциоь оЕ сЬе тошресепс-сеП аиарепяоп ю01 Ье пюге йап аде9аасе.
Ноюенег, ннЬеп!агре пишЪегь ос сгапауоггпед со!оп!еа аге гегСшгед Ее.ц., гнЬеп сопасгисс!п5 ссгС4А 1!Ьгапеа), 1агцег аЬ9иоыпау Ье пеедед. д. САтЬеп пеедед, геточе а сиЬе оЕ согпресепс сеПа Егогп сЬе -70'С Егеехег. ТЬачч йе сеПь Ъу Ьо1сПпП сЬе шЬе гп сЬе ра!гп оЕ йе Ьапд.
!иас аа сЬе сеПв сЬаъч, сгапаЕег йе сиЪе со ап ке ЪасЬ. 5соге сЬе сеПа оп !се Еог 10 пипи!ею е. ТЛе а сЬсПег1, асегде ргреие Пр со сгапаЕег йе сотресепс сеПа со сЬП1ед, яеП1е 17 х 100- пип ро1ургору1епе сиЬея 5соге сЬе сеПа оп ке. 61ааа шЪеа аЬоиЬ! вос Ье чаед аа йеу 1огнег сЬе еЕПдепсу оЕ сгапьсогпгадоп Ъу -10-Ео!д. 1.110 СБаргет 1| Р!азтЫз апт( ТЬе(т Рзе~и1пезз т Мо!еса!ат С1опт Тгап5ЕогптаЕгоп А|Ы (Ье ггапзЕог|и(п8 РЬ(А (ир го 25 и8 рег 50 П1 оЕ согпре(епг се115) (и а чо!шпе по! ехсеесПп8 5% оЕ йаг оЕ йе согпрегепг се!15. 5|ч|г1 йе шЬез 8еп(1у зечега1 !пиеа го пих йе(г сопгепгя 5е! ир аг 1еаз! !|чо сопгго1 гиЬез Еог еасЬ ггапзЕоппа6оп ехрегипепг, )пс!об!08 а гиЪе оЕ соти регеп! Ьас(еПа (Ьа! гесе|чез а Ьпо|чп апюип! оЕ а агапе)агс) рте рагагюп оЕ зирегЬе!ка1 р!аяпЫ РЬ(А ап|1 а гиЬе оЕ се1!з (Ьа! гесе|чез по р!аяпЫ Р)чА а! а11.
йоге (Ье гиЬез оп |се Еог 30 пипигез. 13. ТгапзЕег (Ье гпЬез го а гас)с р1асег) |п а ргеЬеаге6 42 С с(гси1аг(п8 ъчасег Ъа(Ь. 8(оге (Ье гиЪез |п йе гасЕ Еог ехасбу 90 зесопс(з. Ро по! зЬа)се (Ье шЬез. Неаг зЬос1| ы а сп|с|а1 яер. 1г ы чету ипроггапс гЬа| йе сеПз Ье гапе6 |о ехасбу йе г(8Ь| гегпрегашге а| гЬе соггес| гаге. ТЬе |псиЬагюп гииез аи6 геп|регаыгез 8!чеп Ьеге Ьаче Ьееп чог)гед оиг ы|п8 Ра!соп 2059 шЬез. О|Ьег |урез о( гиЪез |чП! пос песеяаи1у у(е16 ег)и(ча1еиг гези10.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
