Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 30
Текст из файла (страница 30)
ВарЫ)у ггапзЕег (Ье гиЬез го ап |се Ьа(Ь. А)1очч (Ье се1!з со соо1 Еог 1-2 пипигез. 15. АТЫ 800 р1 оЕ 5ОС гпе6(шп го еасЬ ГиЬе. Чтаггп йе си1Шгез го 37'С ш а |чагег Ъай, апг! йеп ггапзЕег (Ье гиЪез Го а зЬаЫп8 |псиЬагог зе! а( 37'С. 1исиЪаге йе си1(игез Еог 45 пипигез Со а11о|ч (Ье Ьасгепа го гесочег ап|1 го ехргезз йе ап6Ью6с геязгапсе гпаг1<ег епсос)е6 Ьу (Ье р1аяпЫ. То и|ахипые гЬе е(Е|оепсу о( |гааз(отта!(оп, Пепг!у а8(гасе (<225 сус1ез/т(пиге) |Ье сеПз 6иг(п8 йе гесочегу регюй !Е зсгеетп8 Ъу а-сотр1етепса6оп, ргосее6 го Ргососо! 27 Еог р!а6п8. ТгапзЕег йе арргорпаге чо!шие (ир го 200 р1 рег 90-пии р1аге) оЕ ггапзЕопие|1 согпрегепс сеПз оп!о а8аг 5ОВ гпес)!шп соп(а|шп8 20 гпМ М850з ап|1 йе арргорпаге ап6Ь~о(к.
35|Ьеп зе1ес6п8 Еог геяз|апсе |о ге|гасусПпе, |Ье еп6ге ггапзуоипа|юп пихшге |пау Ье зргеад оп а яп81е р1ате (ог р!ате6 ш Гор а8аг). Гп й|з сазе, соПест йе Ьасгеиа Ьу септг((и8(п8 Еог 20 зесоп|Ь ас гоогп гетпрегагше |и а иисго6|8е, ап6 |Ьеп 8епг!у гезизреп6 йе сеП реПе| |п 100 р! о( 5ОС тейшп Ьу гарр(п8 йе я|1ез о( йе гиЬе. А 1МРОКТА!9Т 5тега(хе а Ьепт 8!ам год Ьу барр!п8 (Г (пто еГЬапо! апд йеп |и ГЬе Патпе о( а 8ипзеп Ьитпет. ИЪеп йе год Ьаз соо(ед го тоотп гетреташге, зртеад йе гтапз(остей сеПз 8епг!у очет йе спасе о( йе а8аг р(а|е.
3ЧЬеи зе1ес6п8 Еог гез(згапсе го ага рк01ш, !гааз(огте6 сеПз зЬои16 Ье р1агед аг 1о|ч 6епз!гу (<104 со!отез рег 90-пии р!а|е), апд йе р!агез зЬои!6 пос Ье (псиЬаге6 Еог тоге йап 20 Ьоигз аг 37'С. ТЬе епхугие )3-1асгатазе Ь зесгеге6 |и|о |Ье |песошп (гоп| ашр(сППп-гез(агап! ггапзгогтапь ап6 сап гар|8!у шас6чаге |Ье апиЪюгк ш ге8(опз зиггоипспп8 |Ье со)ошез. ТЬы, р!абп8 сеПз аг 168Ь Пепягу ог шсиЬа6п8 гЬегп Еог 1оп8 реггобз о( гиие гехи!гз |и |Ье арреагапсе о( ап|р|сППп-зепы'- Пче загеПпе со)отез. ТЬ|з ргоЫет Ь агпе!юга|ей Ьш по| согпр1е|е!у еПпипа|ей Ьу ияп8 сагЬетсППп гайег йап атр(сП!ш ш зе1ес6че п|есПа ап6 (псгеаяп8 гЬе сопсепггабоп о( апг|Ъю6с поп| 50 )|8(т1 го !по щ(т1.
ТЬе пшпЬег о( атркПЬп-геязгап| со1ошез диез пот |псгеазе |и Ппеаг ргорог|юп го |Ье питЬег о( сеПз аррПе6 го йе р1аге, регЬарз Ъесаые о( 8го|чгЬ-ш)ПЬ(ьп8 зиЬяапсез ге1еазе6 Ьош гЬе сеПз (|П!е6 Ьу гЬе ап6Ьюгк. йоге йе р1агез а! гоогп гегпрегагпге ип6! (Ье 1(г)шд Ьаз Ъееп аЬ~югЪей 18.
1пнег! (Ье р!агез апд )псиЪаге (Ьегп аг 37'С. ТгапзЕог|пес) со1ошез зЬоиЬ1 арреаг !п 12 — 16 Ьоигз. Тгапз(огтей со!ои(ез тау Ье зсгеепе6 Еог йе ргезепсе о( гесогпЬ~папг р!аяпЫз ияп8 опе о( |Ье тегЬобз 6езсг(Ье6 ш Ргогосо1з 27, 28, 31, апд 32 о( йь сЬар|ег от Ргогосо1 12 |и СЬаргег 8. 1ис1ис)е а1! оЕ (Ье арргорпаге роя6че апс) пе8а6че соисго15 (р1еазе зее (Ье рапе1 оп ПАСТРП(АЕ ТКАЮРОЙМАТ!О(Ч).
Ргоюосоl 2чЬ Тйе Напайал Мейою()огРгерагагюол аию( Ттапфогтаююол о1 Сотреюелг Е. со|з 1.111 ВАСТЕК|АЕ ТКА)ъ)5ЕОК)ч(АТ)О)ъ) 1и ечегу ехрепгпеп(, |1 |а еааеп6а! 1о |пс)оде роа(6че соп(гоЬ 1о теаязге 1Ье е(3|с)епсу о( (гапйоггпа(юп, апд пееабче соп(гоЬ (о еПлнпа1е (Ье роаа|Ы6(у о( сопзапз|па(юп апд 1о 36еп6Ту 1Ье ро1еп6а| салаев о( (а|Ыге. )ъ(еда1|че Соп1го|я Ап аПю(ио( о( союпре1еп( се| Ь (о и ЫсЬ по 0Ь)А |а асЫед ьЬоиЫ Ье сагпед (ЬгоиеЬ (Ье (гала(оггпа6оп ехрегппеп(. ТЬе еп6ге а|а|поз аЬои)с3 Ье р)а(ею) оп а ь)пе)е аеаг р|аюе соп(а)п(пд 1Ье арргорпа(е апПЬюо6с овеса (о ке)ес( 1гапМогтап(ь.
Мо Ьас|епа! со)оп)еь аЬов)д егоъч оп 1Ыь р|а(е ог оп а ье(есбче р3а(е (Ьа1 гесе|чею) по Ьас|епа аз аП. 3(апу аге ю|е1ес1ес|, (Ье (оПоъч|пе роьвЬю|Шек зЬои|ю| Ье сопа|6еге6: ° ТЬе сотрезелю се11з аге сопюатюлазею3 июю(Ь ап апзюЬюойсгезюьюалю езгазл о1 Ьасюегюа ю$игюпд З)зе ехрегзтепз.
РегЬарь опе о( 1Ье ао)в6опь!геаеепзь иье6 |и 1Ье згапйоггпабоп рго(осо! |а сопзагпюпа1ею!. ° ТЬе ее)ес(юче р)а(ея аге ю1еуес(зче. РегЬарк юЬе ап6Ьюбс иая опзППед а)1оее(Ьег (гоги (Ье р)а1ея ог ъчая аюЫес! 1о аеаг юЬа( и ах 1оо Ьо1. ° ТЬе яе)ес(юче рlазея аге солюатюла|ею( зчю(Ь ал ал6Ьюзюс геьзеюап1 езгаюл ау Ьасзегюа. |и Пз|а саве, со|оюбеь иьоаПу арреаг Ьо(Ь оп (Ье ююг(асе о( 1Ье пъедвт апд |п Пзе аеаг. Роя1|че Соп1го|а Ап а)|ю(ио( о( сопзре(еп1 сеПв аЬоо)6 Ье (гапФоггпею( ъи(Ь а |юпоъчп алзоип( о( а я(аюх(аи) ргерага1юп о( с|ген)аг аорегЬеПса) р)аат|ю( 0Ь(А. ТЬЬ соп1го| ргочЫеь а гпеаъиге о( |Ье ейс|епсу о( (гапйоггпа6оп апд а|)оъча а ь(апдаг6 1ог сот раз|хоп ию|1Ь ргеч|оиь (гала(оггпабоп ехрег|пзеп1ь.
'ъъюе гесогпгпеи6 ргераг)пе (ио )агее Ьа1сЬея о( с(По(ею) ьирегсоПед р)оп)6 0НА (1 пфп! (ог юЬе НапаЬап апс| )поле ргоседи зев; 500 пуггп! (ог |Ье са|сюогп сйопде ргосею(оге). ТЬеье ргерага6опь аЬои)6 Ье а(огес( а1 -70'С юп ТЕ (рН 7.8) юп чеюу ьгпаП а|юс|ио1ь.
ТЬе арргорпазе а(апс(агс( ргерага(юп (2-5 р|) зЬои|д Ье иьею3 1о пзеазоге юЬе е(уюс)епсу о((гала(огтабоп о( еасЬ пеи Ьа1сЬ о(сопзре1еп1 сеПь апд (о сЬес)ю (Ье ейк|епсу о( (гала(оггпабоп Ы ечегу ехреггпеп1. РаПоге (о оЬ(а|п 1гапйоипес$ со)оп|ее )и а е|чеп ехрепгпепз |пюП- сазерн ргоЫета ъч|1Ь юЬе согпре(еп1 Ьас|епа ог (Ье (гапйогта6оп Ьийег.
'ъчЬеп а Пеабоп геас6оп |ыьес3 т а апогее о( 1гапйогт|пе 0ХА, |Ье згапйоггпабоп ебс)епсу |ь гедисе6 Ьу а1 (еаза( Ьчо огс)его о1 тали)(ию(е согпрагею( ъч)1Ь Пзе зюрегсо3|ею| р)аат|с( 0ЫА соп1го3. ТЬе ас|иа| пигпЬег о( 1гапйогтапзь оЬ(а| пег) рег рц о( Пфа(ес( 0 МА июП! дерепс) оп (Ье агпооп( о( гесогпЫ- пап( р)аьт|6 еелега(ею( дог)пе (Ье Пеабоп геас|юп, апю| оп 1Ье ргевепсе о( )пЬ~Ь|1огь о( 1гапйоппа6оп ыюсЬ аъ аеагоье апю( епаутеь.
Рго1осо! 24 ТЬе! поие Мейод гог Ргерага6оп апд ТгапМ'оггпайоп о1 Согпре1еп1 Е. Сой: "Итога-Согп ре1еп1" СеЬ д т |т5 вввт, тнь митноо ров рвврлв|нс сомрнтнт Е. сой Егош 1поие е| а1. 11990) сап сЬа!- !еп8е |Ье еЕВс|епс|еь асЬ)ехед Ьу НапаЬап (1983). Нотхехег, ипдег Яапдагд 1аЬога|огу сопд1- 6опя ейк!епс!ех оЕ 1 х 1Ое го 3 х 10' ггапаЕогшед со1оп!ея 88 оЕ р1аяп)д РЫА аге |поге гурка1. ТЬе адхапгацеь оЕ |Ье ргоседиге аге |Ьаг Ь Ех !охи Егп!с)су, пюге гергодис|Ъ)е, апд йегеЕоге пюге ргед!сгаЫе |Ьап |Ье ог!8!па! НапаЬап шейод.
ТЬгв ргоуосо! д)ЕЕегх Егогп ойег ргоседигеып ЕЬаг |Ье Ьассепа1 си1|иге !х 8го|хп а| 18"С га|Ьег йап |Ье сопхепг!опа! 37 С. ОГЬег|х)хе, |Ье ргогосо1 Ра ипгегпаг1саЫе апд Ео11оъъ а Еа!г!у ьгапдагд соигхе. ЮЬу Вгоъчп8 |Ье се1!х аг 1о|х геп|регагиге ьЬои1д аЕЕесг |Ье еЕЕ|с1епсу оЕ сгапьЕоппагюп 1х апуЬоду'х 8иеья РегЬарх |Ье согпроягюп ог йе рЬуяса1 сЬагасгепхбсх оЕ Ъас1еН- а) шешЬгапех хупгЬех!хед аг 18 С аге пюге ЕаногаЫе Еог ирга)се оЕ Р)х!А, ог регЬарх |Ье рЬахех оЕ |Ье 8готхгЬ сус1е |Ьаг Еахог еЕЕ|с)епг ггапьЕогшагюп аге ехгепдед.
!псиЪа6п8 Ьасгепа1 си!1игех аг 18'С !х а сЬа1!еп8е. Моя 1аЬогагопех до пог Ьахе а хЬа)с|п8 |псиЬагог ГЬаг сап ассигаге1у ша!пгаш а |ешрегагиге оЕ 18'С я|пипег апд ъчпгег. Опе ьо1и6оп 1х го р1асе ап !псиЬагог ш а 4'С со1д гоогп ап|1 иве йе гешрегашге сопгго1 го Ьеаг йе !псиЪагог |о 18'С. А1|егпа|Ье1у, |Ьеге 1х а!шоя по!охх оЕ еЕЕ|с)епсу !Е |Ье си!гигех аге 8го|сп аг 20-23"С, тхЬ|сЬ Гь йе ашЬ)епг ге|прегагиге 1п шапу!аЬогагопея Си1гигез !псиЪагед аг !Ьехе гешрегагигех 8го|х х)о|х!у ъчиЬ а доиЫ!п8 гипе оЕ 2.5 го 4 Ьоигя ТЬ)х сап 1еад !о Егихггаг!оп, еврее!а1!у 1аге а| п18Ь| игЬеп 6 хеешх |Ьа| |Ье си!|иге гхч1! пехег геасЬ йе |1еьпе|1 ОР „оЕ 0.6. ТЬе апяхег со й|х ргоЫеп| !х го хег ир си1гигех |и |Ье ечеп!п8 ап|1 Ьагхея йе Ьассепа еаг1у |Ье Ео!1отх)п8 шогп|п8.
ТЬе ргосе|1иге |чог)сз |хе!1 |х)ГЬ |папу хгга!пх оЕ Е. сой ш сопипоп иве 1п шо1- еси1аг с1опш8, 1пс!ид)п8 ХЬ1-В1ие, РН1, !М103, !М108!9, РН5а, апд НВ101. МАТЕ|с!АЕ5 САОТЮ|х|| Р!еахе хее Аррепд1х 12 Гог арргорг1аге Ьапд!|п8 оГ о|а|ее!а!ипат!сед чагЬ <! >. ВоЕЕег5 апс! Ьо!6Е!опв Р!еахе атее Аррепд)х ! Гог сошропепгх оЕ х1ос)с хо1и6опь, ЬиГЕегя апд геа8еппп Р!!иге а!ос)с хо!и6опх Ео ЕЬе арргорг1аге сопсепЕга6опя РМ5О <! > Ох|даиоп ргодисп оГ РМ5О, ргеьигоаЫу Епгоейу! ьи!Гопе апд свгоегЬу! со18де, аге |пЫЬЬог| оГ |гап||оппадоп ГнаоаЬап |985).
То ахогд ргоЫепь, рогсЬаье ОМ5О оГ |Ье Ывве|| цоа1ау. Гпоие Ггапь|оггпапоп Ьиууег Грlеаве хее 5|ер 7) СЬьвед со О'С Ьетоге ые. 1.114 С)таргет 1г Р!атис(тЕт аит( ТЬегг (Етети!иетт ги Мо1еги!аг С!ои)и8 Рк(т а яп81е ЬассеПа1 со!опу (2 — 3 ипп (и еПатпесег) Егош а р!асе сЬас Ьаа Ьееп шспЬасет) Еог 16 — 20 Ьопга ас 37'С. ТгапаЕег сЬе со1опу шго 25 гп1 оЕ ЬВ ЬгосЬ ог 5ОВ тпееПшп тп а 250- ш1 Йаа(т. 1псиЬасе йе си!сиге Еог 6 — 8 Ьопга ас 37'С ъч(сЬ ч(8огопа аЬаЫп8 (250-300 грит). Ас аЬопс 6 о'с!ос(т ти сЬе ечеи(п8, иае сЬта яагсег си!сиге со шосп1асе йгее 1-Псег Паа(та, еасЬ сопсашшВ 250 пт! оЕ 5ОВ. ТЬе Вгас Ваа!т тесе(чеа 10 ш1 оЕ асагсег сп!сиге, сЬе аесопт! тесе(чеа 4 ш1, апт( йе сЬ!гт( гесегчеа 2 тп!.
1пспЬасе аП йгее Пах!та очегп!ВЬс ас 18 — 22'С ъч(СЬ шот!ег- асе аЬаЫи8. ТЬе ЕоПоъч(и8 шоти(п8, геат( сЬе ОО оЕ аП йгее сп!сигея Соисшие со шопПог сЬе ОО ечегу 45 пипшеа. реп СЬе О)3а оЕопе о(йе сп!Спгеа геасЬеа 0.55, !тапа(ег йе си!Сиге чеаае1 Со ап ке-шаСег Ьай Еог 10 ш(потея !3(асагт( сЬе съчо осЬег сп1спгея ТЬе атпЬтепс сетрегасоге оЕ гпоас 1аЬогатопеа пает дштп8 сЬе г1ау аигс Еа11а тСогси8 йе ш8Ьс.
ТЬе пшиЬег оЕ ъСе8гееа апд тЬе спши8 оЕ сЬе ъ!гор Егопт реаСь со сгоо8Ь чаг!еа гСерепеС!и8 ои йе сапе оЕ уеаг, тЬе ишпЬег оЕ реор!е ъчогСгси8 1и сЬе!аЬогасогу ас ш8ЕШ апгС то оп. Весаые оЕ !!ба чап'- аЬт!иу, 1с та гПЕВео1с со ргегПес тЬе гасе ат ъчЬсеЬ со1согеа ъч111 8гоъч ои апу 81чеп и18Ьт. !Лти8 сЬгее ЙЕЕегепт тпоео!а тиегеааеа йе сЬапееа йас оие оЕ тЬе ео1тогеа ъчс!1 Ье ас тЬе соггесс гСеоасту айег ао очеги!8Ьт тпеоЬаиоп. Нагчевс сЬе сеПа Ьу сепсг(ЕпВас!ои ас 2500тт (3900 грш ти а 5огчаП 65А гогот) Еог 10 гп!ипсеа аС4 С.
Ропг оЕЕ сЬе шееПшп апг( а!иге йе ореп сепсНйлВе Ьосс1е оп а атас)т оЕ рарег соъче15 Еог 2 пиппсея ТЛе а часпшп аар!гасит со гегпоче апу т)гора оЕ гешаш(п8 шегПшп апет(пВ со ъчаПа оЕ сЬе сепсг(ЕиВе Ьосс1е ог сгаррет1 ш (са пес)т. Кеаиарепт( йе сеПз Вепс1у ш 80 тп1 оЕ ке-со!6!попе сгапа(оппаПоп Ьи((ег. ТЬе се! 1а аге Ьеас аоареитСетС Ьу аъчтг!ти8 гатЬег тЬаи р!репси8 от чоттехш8. Нагчеас сЬе сеПа Ьу сепспртВасюп аС 2500ч (3900 грш тп а 5огчаП СВА госог) Еог 10 ппипсеа ас4 С. Ропг оЕЕ йе тпееПшп апт! асоге йе ореп сепсг(Еп8е спЬе оп а атас(т оЕ рарег соъче15 Еог 2 пип- псея Уае а часишп аар(гасит со гешоче апу г1гора оЕ геша(п(п8 шееПшп ат1ЬеПп8 со йе ъчаПа оЕ сЬе сепсг(ЕиВе спЬе ог сгаррег1 ш 1са пес(т.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
