Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 25
Текст из файла (страница 25)
Ро/уписlеодс/е /апаае Кеагг/сдоп епдопис/еааез Мос!е!с АспЬ апс! О!коппс!ео1Ыеь Роге/Вп ог гагВег 0с/А оадтепг 5упйедс о/!Вопис!еог!де ог адаргог дьего/еед !и ТЕ ГрН В.О! аг а сопсепггадоп о/ -400 РВ/т!. рог а Ьехагоег, гЬ/я сопсепиапоо ь ецо1ча!еаг го а 50 рм зо1ог!оп. Аоаргогя аге ага/1аЫе /гош Яггагааеае. Р1еаее еее йе ш!оппапоп раое! оп АОАРТОК5. Ргососо! 18: Ассасйгие Аг!аргогг го Ргоггиг!гие Тегтгпг' 1.89 прес!а! Ес!и!рпсеп$ Егсшртепс !ог хрип-со!итп сйгогпасо8гарйу !р1еаье хее Аррепсйх 8) Ма!ег Ьай ргеьег Со 65 С МЕТНО0 1.
То РЬохрЬогу1асе сЬе айарсопй аг)г! Со а асеп1е шкгой8е шЪе: 1псиЬасе сЬе геассюп Сог 1 Ьош ас 37'С. ТЬеге 6 ио иеегС со ригсгу сЬе РЬоарЬогу!асег) айарсоги А!гйиоь оу йе геассюи пихсше саи Ъе сгаиагеггегС гйгесс!у спсо 1гцайои геассюиа, 2. То!18асе йе РЬОРЬогу)асей ас$арсога со а Рсч!А Сгайшепс шЬЬ согпр1ешепсагу ргоспн)ш8 епсЬ, хес пр а 118айоп геасйоп аа Со!!очча: ОНА 1гаатеиг !00-200 иа РЬоврЬогу!асегС аг1арсог ! 0 — 20-го!и то1аг ехсея 10х !!ха!!оп Ьийег !.О Сс! Ьассег!орЬаае Т4 РС4А !!хааа О.! чуева пи!С 10 тм АТР !.О р! Н2 о со 10 р! 1пспЬасе сЬе 118ассоп ппхспге уог 6-16 Ьопгх ас 4'С. То асЫече сЬе гиахипши еуйсгеису ос !!ха!!оп, асс ир сЬе геассюиа т ав апай а чо!итие аа роыгЫе 15 — 10 р!).
АгЫсид АТР аа а согироиеис о!йе 10х !саас!ои Ьийег 1еачеа тоге чо1шие уог чессог ог Гоге!аи ЕсгсА !и сЬе геассюп иихсиге. 5огие соиипегсга1 !!Еаае Ьийега сопсаги АТР. ЪЧЬеи иа!иа аисЬ Ьийега, сЬе адсйсюи осАТР !а иос геошгегС. 3. !пасйчасе йе Р)ч)А!18аье Ьу шспЬайп8 сЬе геасйоп ппхспге гог 15 шсппсеа ас 65'С. 4. Р11иге сЬе 1сйасюп геасйоп чч)сЬ 10 Сс1 ог сЬе арргорпасе 10х гехапссюп епхугпе Ьийег. АсЫ хгеп1е Н,О Со а йпа1 чо1шпе ог 100 Сс) 1011оччес) Ьу 50-100 шпгх ог' геьгпсгюп епгугпе. 5.
1псиЬасе сЬе геасйоп Еог 1 — 3 Ьопга ас 37'С. ТЬе геаспссюи епхуисе саса!ухеа сЬе геиюча1 ос ро!угиеггеес! 1т1гега Стоги йе еигЬ оу йе Тс24А угаатеис аигС сгеасеа ргосгигйи8 сегииш. А Ьийе аиюипс ос гегапсйои епгугпе ы гегСшгегС го е йеп сЬе !агае циапийеь ог адарсол ргеаеис ги йе геассюп.
6. Ехсгасс йе геаспсйоп г!18еясюп ъч)сЬ РЬепо1:сЬ)ого)опп апс) гесочег сЬе РХА Ьу агапе!агг1 ейапо1 ргессрйасюп. 7. Со11есс сЬе ргессрссасегс РХА Ьу сепгп168абоп ас шахипшп фреей гог 15 шсписех ас 4'С сп а ппсгосЬ8е, апс1 гехпхрепг! сЬе РХА ш 50 р! ог" ТЕ (РН 8.0). 8. Рахх сЬе гехпарепдес! РХА сЬгоп8Ь а хрип со1шпп со гешоче ехсеах айарсогх апг1 сЬеп с1еачаае ргойкпи 9. ТЬе эпос!11)е8 РХА Сга8шепс сап посч Ье 118асес) со а р!ааш18 чессог ччЬЬ ргосгпййп8 епсса йас аге согпр1егпепсагу со сЬояе ог" йе с1еачес1 ас1арсог (р!еаае атее Ргососо1 17). аупйейс о!!цоиис!еоСЫе ог аг)аргог !Ох !си!гег Ыиаае Ьийег 10 гим АТР Н,О Ъассег!орЬа8е Т4 ро1уиис1еогЫе Ыпаае 0.5-2.0 Сг8, Йяо1чей ги ТЕ 1РН 8.0) !.О р! !.о н! со 10 р! 1,0 ишс Рго1осо! 19 В! спи-епдед С!оп~пц ~про Р!аьтМ ~lес1огэ т о овтл!н тне млх!мом номвеа от еооввест" т!Олт(он ргодистк ш с!оп!па Ыипт-епс( тасует Егаатептк, 1Ье ичо сотпропепь оЕ РМА )и йе 1)аа6оп геас6оп тикт Ъе ргекепт ат ап арргорпате гатю.
1Е 1Ье тпо1ат табо оЕ р1аяпЫ честог то 1агает РМА ь тоо Ь!аЬ, йеп 1Ье 1!аа6оп геас6оп тау аепетате ап ипбеягаЫе пшпЬег оЕ с)гси)аг етрту р1аяп!6к, ЪотЬ тпопотепс апс) ро)уптепс; )Е тоо )очч, йе 1)аабоп геас6оп тау аепегате ап ехсекк о( 1!пеаг апс( с!гси1аг Ьото- апс) Ьетегоро1утпетк оЕ часу(иа ятек, опепта6опк, аис1 сотроя6опк. Рот 1Ык т еако, йе опептатюп оЕ 1Ье Еоте)ап РМА ап6 1Ье пшпЬег оЕ !пкегЬ )и еасЬ гесогпЫпапт с)опе ишкт а1тчаук Ье ча)Ыатес) Ъу геяпс6оп епбопис1еаке тарр!па ог коте ойег теаик. Ак а аепега) ги)е, ассертаЫе у!е)6к оЕ гпопотегк с!гси1аг гесотЬтпапь сап Ъе оЬта!пес) (тот 1(аа6оп геас6опк соп1а!п!иа ес)и!то)аг аиюипь оЕ р)ак- тпЫ апд тагает РМАк, тч)1Ь йе 1ота) РМА сопсептга6оп < 100 )та(т! (Вегсоч(сЬ ет а1.
1992). ТЬь рго1осо1 с!експЬек ргосейигек Еог с!оп)па Ыипт-еред РМА Етаатепь (пто 1(пеаптед р)аяпЫ чес1огк. Рготосо!к 20 апс1 21 ргекепт Еигйет ктгатеа(ек то Еас!Раате 1Ье гесочету оЕ йе соггест 1)аабоп ргобись !и Ыипт-епбе6 с)ои(па. тсеточа) оЕ 5'-РЬокрЬа1е тек)апек Егот 1Ье честог (р1еаке кее Рготосо) 20) кч!11 кирргекк гесЬси)апаатюп оЕ йе 1)пеаг р1аяпЫ.
Мосе, Ьокчечег, йат оршюпк нату ак то ъчЬетЬег дерЬокрЬоту)абоп (к ас)чаптааеоик; Еог Еиг1Ьег 6)ксиккюп оЕ йь !ккие, р!саке геЕег то 1Ье штгос)ис6оп то Рготосо1 20. Ак а пюге еЕЕес6не арргоасЬ, купйетк 1)п1сегк епсо6(па гектпстюп епс1опис)еаке гесоаппюп ятек тпау Ъе 1(аатес1 то Ыип1-епс)е6 РМА тегпип( (р1еаке кее Рготосо) 21) то ргочЫе соЬеяче епбк Еог с!оп)пц Ьу йе тетЬос! ш Рготосо) 17.
Рго1осо1к Еог Ет)1)па тесекке6 3' 1егт!п! ог Еог гетин!па рготги6)па 5' ог 3' теппшт аге 6експЪе6 сп СЬартег 9, Рго1осо1 10. МАТЕК1АЕй СА()Т1ОМ: р)еаке кое Аррепс))х 12 Еог арргорпа1е Ьаис)1!пв о( та1епа1к таг)сес) чч)1Ь < 1>. В6ЕЕетв апт! $о!6Е1опв Р1еаке кое Аррепа(х 1 Еог согпропепЬ о( атос)с ко!и6опк, Ьибегк, апс) геааептк.
Рби1е к1ос)с ко1и6опк 1о 1Ье арргорпа1е сопсеп1га6опк. АТР (!О птм) Оиш АТР !гота йе !тцавоп геасиоо ш втер 2 1(1Ье 1сВатгоп Ьи((ег сооташк АТ!1 Е1Ьапо! РЬепо(:сИого(оггп (тст, ч)ч) <! > Ро!уеду(епе 8(усо! (30уа и)ч РЕС 8000 ко(и6оп) <! > 5ос(ют асетате (3 М, рН 5.2) ТЕ (рН 8.0) Ргогосо! !9: В!ипс-епг(егГ С!оп(п8 тисо Р!актЫ \гессогк 691 Епкуепеб апд Вмйегб Васгег)орЬаде Т4 Г274А Г!еаае Р)еаае аее сЬе шЕоппапоп рапе) оп ОХА С!СА5Е5.
кеасг(с!гоп епс(опис!еааеа Се!5 МЕТНОЕг 1. 1п аератасе теаспопа, с(18еас 1-10 р8 оГ йе р!аагпЫ 12МА апс( Гоге]8п Г)ХА сч(сЬ сЬе арргорпате театпсгюп епгутпе(а) йаг 8епегате Ыипг епс]я 2. Риг(Гу йе с]18еатес] Гоге]8п ЕтХА апс( чесгог Г)ХА Ъу ехггасСюп сч]СЬ РЬепоЬсЫогосоггп апс1 агапе]агс) ейапо] ртес!Рпасюп (р!еаае аее Аррепйх 8). Гсерепс(!п8 оп йе ехрепгпепс, и спау Ье песеаааку ог с1еягаЫе со скю!асе йе саг8ес Ега8шепс(а) оЕ Гоге!8п )2ХА Ьу пешга1 а8агоае ог ро1уасгусашсае 8е) е!ессгорЬогеа!а аа с(еаск!Ьес) ш СЬарсек 5. Т)ба ьо1абоп Ь 8епега)1у с!опе счЬеп сЬеге аге а 1аг8е пшпЬег оЕ сеяпсбоп Гка8шепса сп йе ргерагасюп оЕ Гоке!8п йХА сЬас сап 1с8асе со йе чессок.
КасЬег сЬап асгееп!п8 пш1сср!е !капа(огпсапь Еог йе с!еягес1 с)опе(а), спапу !пчеас!8асога ргеЕег со еппсЬ Гог йе Гогес8п асс)пепсеа оЕ 1псегеас Ъе(оге !18асюп. 3. Кесопас(сисе сЬе ргес!Р(сасес] Лба аерагасе!у си ТЕ (РН 8.0) ас а сопсепсгабоп оГ -100 )сц/гп1. Са]си1асе сЬе сопсепстасюп оГ сЬе Г)ХАа (!и рпсо1е(гп1) аааипип8 сЬас 1 Ър Ьаа а спаса оЕ 660 сЫсопя Сопбпп сЬе арргохппасе сопсепсгабоп оЕ йе секо ЕсХАа Ьу апа1ус!п8 а!!с(пока Ьу а8агоае 8е) е!ес- сорЬокеыя 4. с)ерЬоарЬогу!асе сЬе р!авпсЫ чессог Г)ХА аа г]еасг]Ьес( ш Ргососо1 20.
5. ТгапаГег арргорпаСе агпоипЬ оГ йе Пса Со агеп!е 0.5-т1 ппсгоЕи8е СиЬеа аа Го!1осчас ТиЪе Г2ХА чессог' (60 6по1еа (-100 пц] ) Гоге]8пс (60 6по1еа (-1О п8]) чессог' (60 6по1еа) р!сь Гоге(8п (60 6по1еа)' 1(пеат]гег( чессог (сопсатпа 5'-сеппспа] РЬоарЬасеа) (60 6по!еа) аирегЬе1(са! чесгог (6 6по!ез (-10 п8]) А апс! Е В С апг( Р 15 С 'Чессог ЕсХА Ь с)ерЬоарЬогу!асес( аа с(еаск!Ъес) ш Ргососо! 20, ссап(сека гпау Ье 1!8асес( со Гоге!8п саг8ес ОкХА. сТЬе гпо!ак кайо оЕ р!аяпса чессог со !паеп 1!ХА Гта8шепс аЬоп!6 Ье - с; ! сп сЬе !!8ас!оп кеасбоп.
ТЬе сота! ЕсХА сопсепстапоп ш сЬе 1с8асюп геассюп аЬоп!д Ье -10 п8)р1. АВагоае де)а ОрСюпа), р!еаае аее 5кера 2 апс) 3. Ро)уасгу)ат(с(е де!а <! > Орсюпа1, р!еаае аее 5сер 2. Нос!есс АСЫ5 апд О!коппс]ео(сде5 Гоге(8п ог Сагдег ОГ4А (ЬГипС-епгГ Ггадтепо Месгог Гр(аатггГ) Г2ХА АЕЫЖопа! Кеаееп(5 5сер 4 оГ СЬ(а ргососо! гег)и(геа йе геадепса Г(асес( и Ргососо! 20 оГ ГЬ(а сЬарсег. 5сер 7 оГ СЬ(а ргососо! тес)и(геа йе геаВепса !!атее( т Ргососо! 23, 24, 25, ог 26 оГ ГЬГа сЬарсег. а. То ТиЬеяА,В, апсЕ С а|Ы: 10х Ъ18ассоп ЬиЕЕег ВасгепорЬа8е Т4 РЪ!А 118аяе 5 гпсчс АТР Нсо 30% РЕС 8000 1.0 01 0.5 Чтесзз ипЬ 1.0 Сс! Со 8.5 С|1 1-1.5 01 Ъ.
То ТиЬея Р, Е, апс! Е а|Ы: 10х ЫВасюп Ъийег 5 п|м АТР Н,О 309о РЕС 8000 по РЬ!А 1!Вазе 1.0 Сс! !.О р! Со 8.5 Сс! 1-1.5 Сс! То асЬ|ече сЬе гпахипшп е01ссеису о! 1|8ас1ои, яес ир йе геасиопя |и аз зша1! а чо1шпе ая рояюйе 15 — 10 р1!. А|Ыш8 АТР ая а сошроиепс оЕ |Ье !Ох 1|8асюп ЪиЕЕег 1еачея июге чо1шпе Еог | ессог ог Еоге18п РЪСА ш сЬе геас6ои пихшге. 5оше сопппегс|а! 118аяе ЪиЕЕегя сопсаш АТР.
Сз|Ъе|с ияи8 яисЬ ЪиЕЕегя, сЬе а8тВсюп оЕ АТР ь пос ге|Си!гей ТЬе РС4А Ега8шеисз сап Ъе агЫе|С со йе сиЪея со8есЬег иисй йе Н О аи|1 |Ьеп зчагше|С со 45 С Еог 5 иипшез со Ье1р йонас|асс аиу с!ширя оЕ РС4А йа|Ьаче Еоппе|1 |Ъ|пи8 Ега8|пепс ргерагаиоп. СЕВ!1 йе РС4А яо1шюп со 0'С ЪеЕоге йе теша!и|Сея оЕ сЬе 1|8асюи геа8епь аге а|Ые|1. !с ся ипропапс Я со |чапп сЬе РЕС зсос!| 130|%1 яо1шюп со гоош се|прегасиге ЪеЕоге а|Ы!и8 со сЬе 1|8ас!ои геасиоп ап|! 161 со а|Ы йып8гетВеис 1аяп РЕСА сап ргес|риасе ас со!8 се|прегасигез |п йе ргеяепсе оЕ РЕС 8000. 6.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
