Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 20
Текст из файла (страница 20)
Сюгап Ргогосо) 9| Риг!!ссас!оп ог'Р!агтЫРХА ))у Осготаго8гар)су 1.63 иръчагд ог 100 ш!и!Ргерагаг!опх Ьегоге Ппйп8 а Сгапх(оппапС сопСашш8 йе с1опе ог" шгегеаг. Ас Со!д 5рпп8 НагЬог ЕаЬогасогу, сЬе гесогд, ехсаЫ!аЬед |п 1981, хсоод ас 168 пнп|ргерагадопа сошр!есед Ьу опе рег|юп !и сЬе соигае ог" а яп8!е дау. Тодау, Ьоъчечег, ъчиЬ |Ье ъчЫехргеад |ье ог' Ыся сЬ!х ь пос а рагски1аг!у !шргеаа!че пшпЪег.
Е|Тогс оп сЬь аса!е ь по!оп8ег гес)и!гед ог ехрессед. С!оп!п8 — ечеп ог' "ййки!с" сопасгисса |и р1аяпЫ чессога — цоеа ишсЬ гаасег апд ыписЬ гпоге е6)с!епс. ТЬе дече!оршепс ог Ь!8Ь-сору-пишЬег чессол Ьаз е1нп!пасе|1 ппкЬ ог" сЬе пеед со 8гоъч апд ргосе|ь 1аг8е-аса1е си1- сигея Апд Ьесагье ог" |Ье адчепс ог удся |Ье |Рла1иу ог" сЬе РХА |п пшнргерага6опа ыю Ь!8Ь сЬас гоидпе рипбсасюп ог" р1аяпиЬ Ъу Ьиоуапс депясу сепспгицас(оп ь по !опцег песе|ьагу ог деягаЫе. ъъге деасг!Ье Ьеге а цепега! шесЬод гог риг!(у!п8 р1аяпЫ Р)ъ)А ияп8 сЬгошасо8гарЬ- !с гпе|Ьо|Ь.
ТЬе ъчау со сапу ош сЬЬ ргососо! ь со Ьиу а Ыс апд |ье П ассогйп8 со йе шапи- (ассигегЬ йгес6опя Рог а 6|г|Ьег ехр1ападоп ог" Ьоъч сЬеве Рдь ъчог)с, р1еазе геад оп. ТЬе сЬгошасо8гарЬу геяпа аиррПед !и Ыса сосне !и ичо Вепега! сурея сЬохе |Ьас у!еЫ р1ая шЫ Р)ъ)А аигбс!епс1у риге (ог епгугпадс гиап|ри1асюп (е.8., РСК, гехспсдоп, ап|1 68ас!оп) апд рго)гагуос!с сеП сгапхгоппас!оп Ъ|п пос песе|ьап1у еи)сагуос!с сеП сгапагесс!оп, апд сЬоае |Ьас у|еЫ ошсе риге р!аяпЫ Р)ъ)А аи!СаЫе гог аП ог" СЬеае рыроаея Во|Ь Суреа ог" геяпа сап Ье ихед Со рип'- гу РХА Ггпу сгиде !уааСех ог" ЬасСепа ргерагед Ъу шеСЬодь деаспЬед |п Ргогосо1а ! СЬгоиВЬ 5 апд ш Ргососо! 7. ТЬе сЬепнса! асгиссигеа о( шоас о( |Ье соинпегс|а1 геяпх аге 1аг8е!у ргорпесагу, ъчЬ|сЬ гпеапх йас ъчду сЬе|пьс соПеа8иеа саппос сЬеар!у аупсЬеяге а !агре ЬассЬ ог геяп !ог !аЬогасогу иае (Ьи| р1еахе хее СагСег апд МПСои 1993; Воу!е апд Ьеъч 1995).
!п Вепега1, йе геяпа (аП шСо съчо с!агьея сЬоае йас |ье ЬудгорЬоЬ|с 1псегасс!опа со рипгу |Ье пис1ек аснЬ апд сЬоае йас ге1у оп инхед юп-ехсЬап8е/а|Ьогрдоп 1псегасс!опх сог рипбсадоп (ТаЫе 1-6). ТЬе гпоас рори!аг сеяна гог |Ье Вепегас!оп ог р1аяпЫ РХА Гог еи)сагуос!с сеП сгапагесс!оп и61|ге юпехсЬап8е/а|Ьогр6оп |псегасдоп сЬгошасоцгарЬу. ТЬе деъе1оргпепс ог' йь с!а|ь ог' геяпа ь ап !исегеас(пц асогу. 1с Ьаа Ъееп 1|поъчп япсе сЬе 1950х сЬас Р)ъ)А Ь~псЬ !и а гечепдЫе гпаппег со я1ка !и йе ргеаепсе о( сЬаосгорк аа1|я ТЬе !псегассюп Ьесъчееп доиЫе-ягапдед РХА апд сЬе я1касе |па|их ь сЬоицЬ| со Ъе дие со |Ье деЬудгадоп ог йе РЬоарЬод!еасег Ьас)|Ъопе Ъу сЬаосгорк аа!ся ъчЫсЬ аПоъчх сЬе ехроаед РЬохрЬасе геядиех со а|ЬогЬ со |Ье я!ка.
Опсе а|ЬогЬе|1, сЬе доиЫе-ягап|1ед Р)ъ)А геша!пх !и еиЬег а пас!че ог рагдаПу депасигед (а!п81е-зсгапдед) ьсасе апд саппо| Ье е1иСед ггош СЬе шаСпх Ьу |ю!чепСх (е.8., 5096 ейапо1) СЬаС Жар!асе ойег Ь|оро1ушегв аисЬ аа КХА апд сагЬоЬудгасе. Ноъчечег, ъчЬеп сЬе |пнпоЬ|1|гед Р)ъ)Л ь геЬудгасед Ъу ъчааЬ!пц ъч!сЬ аъ)неона Ьийега (сур|саПу ТЕ ог Н О), и сап Ъе г)паис!сас!че1у гесочегед ш |Ье со1- шпи ей1иепс. ТЬь Ьоду ог" Ьаяс геаеагсЬ ъчаа ехр1одед |п йе 1980х Ьу сЬеш!хса хисЬ ах СЬис(с Уог)с ас Рго|пе8а, апд Ьу осЬега ас д)СТегепс шо!еси1аг Ъю1о8у геа8епс сошрашея со дече1ор |Ье геяпх поъч сопипегс!аПу ачадаЫе.
ТЬе а|Ьогрдоп ог" доиЫе-асгапдед РЫЛ со я!|са ь шдереп|1епс ог" Ьаае сошроясюп апд соро1о8у. ТЬеае геасигех ог' сЬе геяп ша)се П Ыеа! гог йе рипбсадоп ог с|ген!аг р1аяпЫ Р)ъ(Аа апд 1оп8 1шеаг РХА (га8шепгя Ноъчечег, СЬе !пСегасСюп ь 1еп8й-дерепдеп|, апд Р)ъ)Аа йаС аге !е|ь йап 100 — 200 Ьр |п!еп8й а|ЬогЪ роог!у со |Ье геяп. Рог сЬ!а геааоп, сиггеп|1у ачадаЫе я1- !са-Ъахед сЬгогпасо8гарЬу геа8епь аге пос иаед Сог риг!гу!и8 япаП Р!ъ)А гга8шепся ТЬе агпоипс о( геяп ге|!шге|1 Сог рип6садоп ог" р1аяпиЬ дереп|Ь оп сЬе ап|оипс ог Ъассепа1 1уаасе.
ТЬия д!ггегепС ЫЬ аге ригсЬааед гог рип6садоп ог" р1аяпЫ Р!ъ)А боги япаП (! — 1О гп!), гпейшп (10-100 ш!), ог!аг8е си!сигеа (>!00 |п!). ТЬе геа!па аге |шррПед еПЬег |п ЪиП|, 6огп ъчЬкЬ |Ьеу шау Ье р1асед |и а со!шпп ог ауппце гог иае ш Р)ъ)А рип6сасюп, ог ргерас)сед !исо со1шппа гог ипшейасе иае. ТЬе сЬепнса1 сошроядоп ог" сЬе Ъшйп8, ъчахЬ!п8, апд е1идоп Ьийега Сог а рагски!аг геяп ь хиррПед Ьу |Ье шапи(ассигег. А шопеу-аач!п8 а!сегпадче ь со Рго1осо! 10 Риггйса6оп ог С!оьед С~гси!аг 0МА Ьу Е~и~!~Ьпигп Сеп1г~1ица6оп ~п СэС1-Ей~йит ВготМе Сгайегйь: Сопбпооиь Сгайепй н лялт|ом ое ил5м|о л|лгл снаомо5омлг РНЛ5 Ьу Ьиоуап| |1епя|у сеплг16|8ал!оп 8гад!епга сопса)тп8 сеяшп сЬ!оП|1е апд е|ЬЫшт Ьго|пЫе дерепда оп дНегепсеа Ъе|ъчееп гЬе атоипга ог" егЬ|йшп ЪгогпЫе |Ьас сап Ье Ъоцп|1 |о!шеаг апд с1оаед с!гси1аг РХА гпо1еси1еа !р1еаае аее |Ье )пуоппадоп рапе! оп СЕ5|ГЛМ СНЕО8|ОЕ).
Рог п|апу уеагя ег!и!!!Ъг!цт сеп|П6л8адоп !п С|С1-е|Ь|йшп ЪготЫе 8гад!епга ччаа |Ье те|Ьод оу сЬоке |о ргераге !аг8е атоипь оу р!аяпЫ РХА. Нолчечег, |ЬЬ ргосея Ь ехрепяче апд г!те-соп|шт!п8, апд |папу а1гегллаг!че |пе|Ьода Ьаче Ъееп дече1оред, |пс! ийп8 д)ууегепг!а1 ргес|рьа|юп (Рголосо! 8) апд со1шпп сЬгогпа|о8гарЬу (Ргососо! 9). Хечег|Ье!еы, |гайдопа1- ыя оу лчЬот |Ьеге аге п|апу, ьг!11 Ье11ече гЬа| р1аяпЫа рип6ед Ъу Ъапд!п8 |п СвС1-егЬ|йшп ЬготЫе 8гад!епь аге |Ье ригея апд Ьеал РМАа Гог то1еси!аг Ью1о81са! ехрегцпепь. С!оаед сц.— си1аг РИАя ргерагед Ьу ьоруспк сепгг!гц8агюп !п СаС1-егЬ!д!ит ЬгогпЫе 8гайепь аге сопгат!пагед Ъу япа!1 Ега8тепь оу РМА апс1 К1 !А депчед Егогп гЬе Ьоаг Ьас|еПа.
ТЬеае япа!1 6.а8- тепга га!се Еаг 1оп8ег |о геасЬ ес!ш11Ъг!цт |п СаС!-е|Ь|йшп Ьгопцде 8гад!епга |Ьап |Ье 1аг8ег р!аяпЫ 1Э)ч)Ая Непсе, ччЬеп то1еси!еь оу с1оаед с|гси!аг РМА аге а| ел!ш1!Ьг)цт, япа11 Гга8- тепь аге 4611 Еа)г1у ечеп!у йяПЪ|л|ед |Ьгои8Ьоцг |Ье 8гад!епл, ТЬЬ ргоЫегп сап Ье ао1чед Ьу аЬапдоп!п8 СаС1-е|ЬЫппп 8гад!епга апд риП1у|п8 р!аатнЬ Ъу сЬгота|о8гарЬу оп согптегс!а1 геяпа !5сЫееу апд Неипапп 1993), ог и сап Ье а11еч!а|ед Ъу |шЪ)есдп8 с1оаед с|гсц1аг р1аяпЫ РХА гесочегед Егот опе СаС!-е|Ь|йшп 8гайепс со а аесопд сус!е оуел!ш11Ьг!цт сепгг!Ец8аг!оп. !п апо|Ьег те|Ьод, )сполчп аа йасопдпиоца СаС! 8гайепг сепгг!Ти8аг!оп (р1еазе |ее Рго|осо! 11), |Ьгее ао1цлюпа сои|а!и!п8 дНегепс сопсепггаг!опл оГ С|С! аге!ауегед шсо |Ье сепгг)гц8е |иЬе.
Ридп8 |шЪлес)пепл сеп|П6|8а|юп, |Ье С|С! 8гад!епл уолта тоге г!шсИу, лчудсЬ а!!олча |Ье сеп|ПГи8адоп |ппе |о Ье гедисед |о 6 Ьоигя ТЬе ге|ю1цдоп оу с!озед с)гсц!аг р1азт)д РХАа 6от сЬгопю|югпа1 апс1 ореп с|гси!аг р!аль!д РЬ1Ал Ь по| г!ц!ле аа 8оод 1п йасопдпиоиа СаС! 8гайепь аз 1п сопдпиоил 8гайепея 1п ЕЬе ргосе|1иге Еог сопл)пицца 8гад!епгя деасг)Ьед Ье1о|ч, егЬЫцип ЪготЫе ап|1 спи1е р1аяпЫ РМА аге пцхед лч!|Ь а С|С! ао1идоп оу с1епя|у р = -1.55. ЮЬеп гЬе пцхшге 14 сеп|П6л8ед а| Ь18Ь ареед, йе сепгг!6|8а! Еогсе ь ацубс)епг |о 8епегаге апд гпа|п|аш а 8гад!епг оу сеяшп асогпя Рипп8 логтаг)оп оу |Ье 8гад!епг, РЫАа оГ д)Кегепг Ъиоуапс депядел пугале |о роягюпа |и |Ье шЬе а| лчЬ!сЬ гЬе депя|у оу |Ье ялггоипйп8 СаС! |ю!и|юп ес!ца!а |Ьас ог |Ье РХА цае16 1п еаг1!ег СесЬпо!о8у, 1оп8 (24-48 Ьоиь) сепсг)Й8е 6|пел ъчеге гес!шгед со ЬПп8 гЬе 8гайепс |о ел!ш11Ьг)цт. Нолчечег, !п пюдегп чег|ка1-шЬе го|ига лч1|Ь ЕЬе|г Ь!8Ь ч Еогсев ап|1 япа!! гад!1, ле!г'-гогт!п8 8гайепь дече1ор пшсЬ гпоге |!шсИу |Ьап |п оЫег апд а!оччег 6хед-ап8!е го|огя 665 1.66 СПаргег 1г Р!ахти!3 апгЕ 7 Ьесг 'с)хе)и!пея и Мо!еси1аг С!оп(п5 МАТЕЙ!АЕ5 СА()Т!Ой: Р!еахе хее Аррепг11х 72 Гог арргорпаГе Ьапс1!!пав оЕ та1ег(а!х тагЬес1 сч(ГЬ <1>.
В61тег8 апс! Ьо!06оп8 Р1еахе хее АррепгЕ)х 7 Еог соспропеп18 оГ 8!ос!с хо106опя ЬиГГегь, апсЕ геаиепГя Р!1и1е хсосЬ хо!ипопх Ео Йе арргорпа1е сопсепсга6опя СхС) (301)сЕ) С8СЕ геЬапгЕ(пд хо1ипоп Орсгопа!, р1еахе хее 5серх 4 апг) 8. ЕГПапо) ЕГП(гЕ(ит ЬготГЕГе Г70 от!) (1> РагаГГ(п ог) Ь)пс!е!с Асн!5 апс! О!!Воппс!ео$!с!е8 СгигЕе р7ахгпЫ ргерага6оп ()хе гпагепа! Егого еЬЬег 5сер ! 7 оЕ Ргососо) 3, 5гер 19 о! Ргососо1 5, ог 5гер 20 оГ Ргососо) 7 оГГЬ!х сЬарГег. Сеп$г!ЕпВе8 апс! Ко!ог5 5огчаИ 55-34 гогог ог ег)и(ча1епг ИГгасепГг)Еиее гогог Г егпса) гогогх аге ргеЕеггео1) апс7 ЕиЬех Рог ехашр!е, Весйпап НТ!65; ап8!е Т!50, Тг65, ог Т!70 госогх ог г!ге!г 5огча11 ег(и!ча1епгх аге ассергаЫе гГ сепгпЕихе игое В пог а! итнип8 Еасгог. Ухе а ()шс)г-хеа! Ро!уа!!ошег шЪе ог ег)шча1епг. прес!а! Ес!и!ргпеп1 НурогЕегт(с пеесЕ)е (27 ааи8е) РахГеиг рГреяе ог а бьрохаЬ)е хуг(п8е ЕЕГГегЕ ввгП а Гагде-8аиде пеег71е гсеЕгасГотегег Горпопа!) А)йои8Ь пос еяепиа1, а ге(гассогпегег ь ехсгегие1у ихе(и( Еог еггипаип8 йе г(епх!гу оЕ СхС) ю1ииопх.
5угЕпае Г5-70 сс) гЕгхрохаЬ!е, Г(ггег7 сий а хгег(1е 78-раичке ПуросГегтГс пеес7)е Ас!Й!!опа! Кеадеп!8 5гер 8 оЕ ЕП(х ргогосо) гес7и(ген ЕПе геадепгх 1гхгес7 гп Ргогосо) 72 ог 73 оЕ ЕП)х сПаргег. МЕТНО0 1. Меахиге СЬе гпахх оуйе сгис!е р1аяпЫ Р)х(А ргерага6оп. Меаыгегпепг 18 Ьехг с)опе Ьу Сгапя Гегг(па (Ье хо!ис(оп !пса а ГгехЬ сиЬе йаг Ьах Ьееп гагес! оп а гор-1оа6(пц Ьа1апсе.
Рог ечегу агаси оГ р1аяпЫ Р)х(А ю106оп, асЫ ехасс!у 1.01 а оЕ 801Ы СхС1. С!охе йе сор оЕ йе сиЬе со ргечепг ечарогаьоп апс! !Ьеп счагт (Ье хо!ис(оп со 30"С со Гасг1Ьасе (Ье йхю1исюп оГ ГЬе С8С! ха!с. М)х йе ю1исюп аеп(1у ип61 сЬе ха!1 !х с)!8301чес). Ах а ги(е оЕ йшпЪ, ГЬе спЫе р1аяоЫ ргерагаиоп Егош по гпоге йап 50 го1 оЕ ап очегш8!и си1- сиге хЬои16 Ье ихег) рег Вгасиепг. Аз чегиса) сиЪег Гог йе Весйпап НТ165.2 госог сап ассогопюг(аге -5 пг! о( СхС1-ейЫшпг ЪгогпЫе ю1игюл, гЬе сгсЫе р!ахшЫ ргерагасюп Егого 50-ги) си!гигег ьЬои!Й Ье гесоихс!сосед ш -3 ги1 оГ ТВ (РН 8.0). 2.
АсЫ 100 р1 оГ 10 та)гп! ейЫппп ЬготЫе 1ог еасЬ 5 а оГ ог(а(па1 Р)х(А 80106оп. ТЬе Впа1 г)гиясу оЕ йе го!исюи хЬои16 Ье - !.55 8)ги! (ге(гасиче (пг(ех = !.3860), апг( гЬе сопсеосгаиоп о( есЬЫЫш ЬгошЫе гЬои!8 Ье -200 )г8)ш!. 1п йе рая, пшсЬ 1аг8ег агооииь о( егЬЫшго ЬгогиЫе ггеге ихег1 (Ваг(!оЕГ ег а1. !967).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
