Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 17
Текст из файла (страница 17)
АеЫйопа! КеаеепЬ 5сер 7 оЕ СЛВ ргососо1 гедгйгеь сЛе геайепга Вагег) гп Ргососо) 7 ог 4 оу йга сЛаргег, 57ер 20 оЕ йга ргогосо1 гедиугеь геайепга ВаСег7 и Ргогосо) В, 9, 70, ог 7 7 оЕ СЛВ сЛаргег. МЕТНО0 Ргерага6оп о4 Се!15 1. !поси1асе 30 гп1 оупсЬ псег!1шп (ЬВ,'гТ ог Тегпйс ВгосЬ) сопса)п)па сЬе арргорпасе апВЬсойс есйег сч)сЬ а япй!е со1опу оЕ сгапауоппег! Ьассепа ог чч)сЬ 0.1-1.0 гп1 оЕ а япа)1-аса1е 1н!иЫ си!Сиге Вгоччп !Тоги а яп81е со1опу.
То епаиге сЬас йе си!сиге ь аоегСиасе!у аегасегй ° ТЬе чо!шпе оЕ сЬе си!сиге йааСс аЬои14 Ье ас !еаза! Соиг с!шея агеасег сЬап сЬе чо!шпе оЕ сЬе Ьассепа! си1шге. ° ТЬе си1сиге йаь)г ьЬои14 Ье !ооье!у саррегС. ° ТЬе си1сиге гЬои!с) Ье !осиЬасесС ш а госагу аЬаСсег гес ас 250 гргп. 2. 1псиЪасе йе си!сиге ас йе арргорпасе сегпрегасиге чч)й ч)аогоиа аЬа)г)пй !250 сус1еа1 пиписе 1п а госагу аЬа)сег) ип61 сЬе Ьассепа геасЬ йе 1асе 1ой рЬаае оЕ агосчсЬ ().е., ап Сс)3аа оЕ -0.6). 3. !поси1асе 500 пс1 оЕ 1.В, УТ, ог Тегпйс Вгой Ергеъчагспес1 со 37'С) сопса)п)па йе арргорп'- асе апВЬюйс сп а 2-!пег йаа)с ччссЬ 25 гп| оЕ сЬе 1асе-1оа-рЬаае си1шге. 1псиЬасе йе си1сиге Еог 25 Ьоига ас 37'С чч)сЬ ч)аогоиа аЬа)с)пй 1250 сус1еаугп)писе оп а госагу аЬа)сег). ТЬе ОР, оЕйе геы1цпй си1сиге гйои!д Ье -0.4.
ТЬе агоъчсЬ гасеь оЕчаг!ош Ьассепа! асга!пь ог оЕ а япа!е асса!о сопса!о!пй о!ЕЕегеос р!ааш!оылч!! часу, ТЬия ш гипсе сагея сЬе си!сиге гоау Ьаче со Ье !псиЬасео ьййЬс!у !ооаег ог аЬогсег сЬап 2.5 Ьоига со геасЬ сЬе оеа!гео орйса! оепг!су. 4. АгЫ 2.5 сп! оЕ34 гпаугп1 сЫогагпрЬеп)со1. ТЬе йпа1 сопсепсгасюп оусЫогагпрЬепгсо1 1п йе си1Сиге аЬои!й Ье 170 )сйугп!. 1псиЪаСе СЬе си1гиге Еог а йсгСЬег 12 — !б Ьоига аС 37'С чч)СЬ ч)В- огоиа аЬа)с)па !250 сус!еаугп)писе оп а госагу аЬа)сег). Р!еаье все сЬе !пЕогшасюп рапе1 оп СНЕОВАМРНЕ!ч71СОЬ 5.
Вепсоче ап а11диос ! 1-2 гп1) оЕ сЬе Ьассепа1 си!сше со а ЕгеаЬ гп)сгоуиае сцЪе апг1 асоге ас 4"С. Нагчеас сЬе ге!па)пг1ег оЕ сЬе Ьассепа1 се1Ь 6огп сЬе 500-гп! си1сиге Ьу сепспййайоп ас 2700е (4!00 грсп ш а 5огча11 СВА госог) Еог 15 гп)писеа ас 4"С. 131асагг1 сЬе аирегпасапс. 5сапг1 йе ореп сепспййе Ъосйе сп ап )пчегсей рояйоп со а!1оъч а11 оЕ сЬе ягрегпасапс со с1га)п аччау. !'тотосо! 5: РтератаВоп оЕ Р!азтЫ Р)ъЕА Ьу Еагче-зса!е Вот!тч Еуз)з !А9 6.
Кезизрепс( гЬе Ьасгепа1 ре!!ес си 200 гп! оЕ ке-со!й 5ТЕ. Со11есс йе Ьассепа1 се11з Ьу сеп- спЕ08аг(оп аз ъсезспЬеъ1 тп 5сер 5. 5гоге сЬе реПес оЕ Ьассепа 10 сЬе сепспЕиде Ьоп1е аг — 20'С. 7. Ргераге р1аяиЫ Р)ъ)А Ьогп СЬе 1-2-гп1 а!)ъ)иог оЕ ЬасСепа зеС азЫе ш 5Сер 5 Ьу СЬе ппп(ргерагаСюп ргогосо1 (еВЬег РгоСосо1 $ ог 4). Апа1ухе йе ппшргерагаСюп р1аяиЫ Р)ъ)А Ьу т(!Вез!(оп ъч)сЬ сЬе арргорпасе гезспссюп епгуше(з) со епзиге сЬас сЬе соггесс р!аз- шЫ Ьаз Ьееп ргорааагет( сп йе 1аг8е-зса1е си1сиге.
ТЬта съсптс оЕ сопстос шау зееш очаг!у сошри!яче. Ноъчечег, и рточЫез ча! иаЫе спзитапсе ахаспзг еттотз сЬас птау Ье йрбси!с то геспече апъс тпау саизе сопз(ъсетаЪ(е созз оЕ сапе. 8. А!1оъч сЬе Егохеп Ьассепа1 се1! ре11ес Ьош 5гер 6 со гЬаъч Еог 5 — 10 ппписез ас гоош сешрега- шге. Кезизрепс) сЬе ре!1ес ш 10 гп! оЕ ке-со!8 5ТКТ. ТгапзЕег йе зизрепяоп со а 50-ш1 Ег! ешиеуег Ваз)с. 9. АсЫ 1 гп1 оЕ а ЕгезИу ргерагес) зо!ибоп оЕ 10 ш8(ш! 1узохуше. 10. $3зе а с!ашр го ЬоЫ гЬе Ег!епшеуег Ваз)с очег йе ореп Е(аше оЕ а Випзеп Ьигпег ип81 сЬе 11с)и)с$ !изс зсагсз со Ьо(1.
5Ьа(се йе Ваз)с сопзсапг1у с(иппВ сЬе Ьеаг)08 ргосет)иге. аъ С4$А$$6$$$ъсС Рот!па Ьеаг(па, (ъеер йе ореп пес1ь оЕ йе Ваз(ь роспВпц аъчау Егош уои апгс ечетуопе есзе ъчот(ъспа $0 йе саЬ. 11. 1пипес)(асе1у ипшегзе сЬе Ьопош Ьа1Е оЕ сЬе Ваз(с ш а !аг8е (2-! Нег) Ьеа1сег оЕ Ь011108 ъчасег. Но!8 гЬе ВазЬ 1и йе Ьот!ш8 ъчасег Еог ехасС1у 40 зесопъ)з.
РтосопВеъс ехрозите оЕ зиретЬестсас РЬ$А со Ьеас свез ъттечетяЫе ъсепагигас(оп ( ътспохтаъс апъ$ ЬеЪоъчсгх $966). ТЬе тези!с!па сус!тс соссеъс РХЛ саппос Ье с!еачет$ ъчЬЬ тезспсс!оп епаушез, апъс Ь пиВтасез сЬтоиВЬ аеагозе цест ас аЬош съчссе йе таге о! зиретЬе1кас РЬ$А апъс зсаъиз роотсу ъч(сЬ есЬЫштп ЬгопъЫе.
ътат(аЪсе апюипгз оЕ сЬЬ Еопп иЕ РЬ$Л ате а!ъчауз ртезепс ш рсаяпЫз ртератетс Ьу сЬепиа!!уяз о ! Ъассепа. Ноъчечет, сЬе циапсЬу и( сус1ьс соссеъс РХА сап Ье стерт со а пипипити Ьу епзиг(па сЬас сЬе Ьассепа1 1узасе ь Ьеагеъс итуоттсу со ЪоссспВ апъс сЬас сЬе сузасе ы стерт ас $00"С Еог ехасссу йе гесопппепъсеъс сппе.
12. Соо1 йе Ваз)с пс ке-со!8 ъчасег Еог 5 ипписез. 13. ТгапзЕег йе чгзсоиз сопсепсз оЕ сЬе Ваз)с со ап 01сгасепспЕиВе сиЬе (Весйпап яАт4$ ог (сз ес!шча1епг). СепспЕи8е сЬе !узасе ас 150,0000 (30,000 грш 10 а Вес)апап 5ъът4$Т1 гогот) Еог 30 пппигез аг 4"С. ТЬе ъсепзет сЬе ВтоъчсЬ оЕ сЬе от(В(па! Ьассепа! си1юге, сЬе пюге сВЕВси!с и тз со сгапзЕег сЬе чгя соиз 1узасе то йе сепсисе шЬе. $Е аЬзосисе1у песеыату, сЬе 1узасе сап Ье сЬорреъс спсо сЬипсъз оЕ шаиаВеаЪ(е яхе ъчссЬ а раът оЕ сопц-Ыаъсе зсъяотз, от ъс сап Ье рат6а11у зЬеатеъс Ьу тстаъчспВ тс тисо тЬе Ъапе! оЕ а $0-иъ! зутсъъхе, ТЫз ртоЫеш Вепешс!у ъсоез иис апзе ъчЬеи Ьосатшц р!аяиЫ РЬ$А Етопь Ьассепа! сисситез йас Ьаче Ьееп гтеасеъс ъчтй сЫотапърЬепъсо1.
14. ТгапзЕег аз пшсЬ оЕ сЬе зирегпасапс аз розяЫе со а пеъч сиЬе. Р)зсагъ$ йе ч)зсоиз 11с)и(д геша)п(па сп СЬе сепсг16сВе ШЬе. $Е сЬе Ьассепас ъсеЪтсз ъсоез пот Еопи а ВВЫ!у рас1ъеъ$ реПес, теист(ЕиВе аВасп ас 2!0,000ч (35,000 грги тп а Весйпап 5СЧ4$Т$ тоюг) Сот а 6пйет 20 пиписез, апъс йеп стапз(ет йе зиретпасапс аз ъсезст(Ъеъс аЪоче. 15.
(Орс)опа!)!ЕсЬе зирегпасапс сои!а!из ч(яЫе зсппВз оЕдепогпк сЬгогпаВп ог Е)осси1епс рге- ссрЬасе оЕ ргосе)пз, 81сег и гЬгоиВЬ 4-р1у Ваиге ЬеЕоге ргосеес(108 (Ниап8 апс1 СагпрЬе11 1993). 1.50 Сйаргет 1: Р1азтисй аисГ Тйест БьеСи1иея си Мо1еси!ат С1ои!ие Кесочегу оЕ Р!аьстзЫ О!ъ)А Меааиге йе чо1ите оЕ СЬе аирегпаСапС. ТгапаЕег СЬе аирегпагапС, СойеСЬег ъч)СЬ 0.6 чо1игпе оЕ Ьоргорапо!, со а ЕгеаЬ сепсййлце сиЬе!а), 8соге сЬе сиЬе!а) Еог 1О т)писеа ас гоогп сепс- регагиге, айег пихт8 йе сопгепя ъчеП.
16. Ресочег СЬе ргес)р)Сагеъ) пис1ек ас)сЬ Ьу сепгг)Еийаг)оп аг 12,000г (10,000 грт ш а 8огчаП 88-34 госог) Еог 15 пиписеа ас тооти гегиретасите. 8асс гпау ргсс!рйасе !Е сепсг1Еийас!оп Ь сагг!48 ош ас 4'С. 17. 13!ахи!че йе реПес оЕ пис1ек асЫ ш 3 т1 оЕ ТЕ ГРН 8.0). 19. РиПГу сЬе сгис)е р!аяпЫ Р)ъ)А ейЬег Ьу сЬготасойгарЬу оп сопипегсса1 геа!па !Р!еаае аее РгоСосо1 9), ргес!РйаПоп ъч)СЬ ро1уейу!епе 81усо! ГРгогосо! 8), ог ес!ш1сЪгпип сепгг!Еийа- Поп ш СаС1-еСЬЫ)ит ЪгогпЫе 8гас)1епса !Ргососо1а 10 апс1 11). 20. СЬес1с йе аггисгиге оЕ йе р1аяпЫ Ьу геаСгкСЫп епхуте с)!8еаг)оп ЕоПоъчес) Ьу 8е1 е1ес- сгорЬогеяя 21.
ТЬе Суртса! у!еИ ос Ы8Ь-сору-пиюЬет р!аяпЫ несгота ог ос аюр!!йес! !оъч-сору-пиюЬег чесхота ргерагес) Ьу СЫа юеСЬос! Ь вЂ” 3 — 5 и8 ос СЗЫМп! ос оп8!па! Ьасгепа! си!Сите. ТЬе у!е!с) ос тесоюЫпапг р!ая ю!сЬ сопса!пв8 !паепа ос Гоге!8п СЗЫА Ь иаиа!!у а1!8Ьс!у !оъчет, с)ерепйпц оп йе яае апс) пасию ос 8ъе с!опас) !3ХА Етайюепс.
'г!е!сЬ ос < 1.0 Ссфтп! !пйсасе сйас сйе РЬагпк) СЗС4А Ь сох!с со Е, со!й сйе сопър!есе аЬаепсе оГ !ЗА 1пйсаСеа йаг СЬе р!аыпЫ Ьаа Ьееп !оЯ с)от! п8 ехгтасСюп апс! РипйсаСюп. ТЬе 8таС ргоЬ- !епъ сап ойеп Ье аоЫес! Ьу аъчССсЫп8 Со а !оъч-сору-пиюЬет чесгот апсСГот Со а чесСот СЬаг сагг!еа ртокагуойс сгапаспрйопа! сеггйпасюп а!8 ъаЬ. ТЬе аесопй ргоЫепь Ь ойеп сйе гехи!с ос ассЫепса! !оя ос йе р!аяпЫ !ЗА ре!!ес айет ейапо! Ртес!р!Сас!оп.
И а!гю оссита ъчйеп йе тесоюЫпапс р!аагпк) Ь !атйе епоийй со Ье ртес!р!сасес! со8есйег ъч!сЬ йе сйтоюоаогпа) с3!ъ!А айет Ьо!!!п8. 8исЬ а !ат8е р!аяпЫ ъч!!! Г п. ТЫа й16сийу сап яъ!чес) Ьу ияп8 а осо! 7. 1)есапс йе аирегпасапс сагеЕиПу, апс) )пчегс сЬе ореп сиЪе(а) оп а рарег соъче1 со аПоъч йе 1аас с!гора оГ аирегпасапс со с!га!и аъчау. Ръ)пае йе реПес апс) йе ъчаПа оГ йе сиЬе!ъ) ъч)сЬ 70% ейапо1 ас гоопг сегпрегасиге.
13гаш оЕГ йе есЬапо!, апъс иае а Раасеиг ргрейе ассасЬес1 со а часиит !спе со геточе апу ЪеасЬ оГ 1н)иЫ йас ас)Ьеге со сЬе ъча1Ь оЕ сЬе сиЪе(а). Р1асе сЬе 1пчегсес), ореп сиЬе(а) оп а рас) оЕ рарег соъче1а Еог а Ееъч т)писеа ас госип сегпрегасиге ип61 по сгасе оЕ ейапо! Ь ч)яЫе. Ас йЬ асайе, йе реПес аЬои1и апП Ье с1агпр. 1.52 СЛаргег !: Р/аьт!дь апд ТЛеп 1ЛеЕи/пеьь т Мо!еси/аг С!оп/08 Е|Л|йит Ьгот|де (70 тВ/гп/) <!> ог 5УВИ Со/д <!> КС/ (4 Аг) А/55 ьо/идол 0.2 я )еаОН 0.59о 5РВ 2096 юсгоье ТЬ!ь ьо!ш|оп ьЬои!0 Ье шайе Еге|Ь Еог еасЬ ые, 5|иге йе ю!ш/оп ас гоогп |е|прега|нге ипд! Ь и ге0шгей О!ьсаг|) апу Ы55 ьо!одоп йа| гешашь ипиьей Се!5 АВагоье Ве/ (О. 7ую 5-тгп /Л/с/г), саьс т Тг/ь-Лога/е Ьи(/ег ог т Тг/ь-асеса/е ЬиПег |ч/сЛоис есЛ/д/ит Ьгопиде ЪНЬеп оп!у а ьп|а!! ЙВегепсе |и яге Ь ьпс!с!Расе|С ашоп8 р!аяпЫь, йе а8агоье це! ьЬои!0 Ье саьс апа гип ш Тпь-асесасе е!ессгорЬогеьЫ Ьи((ег (ТАЕ; р!еаье ьее СЬар|ег 5, Рго|осо! !), Ьесаме оЕ |с| юреп'- ог аЬ!!)су со ге|о!ъе юрегЬе!!са! ОС4Аь о( г)!Е(егепс яьеь.
Ойепиж, Тгсь-Ьогасе-ЕНОТА (ТВЕ) ЫЬе Ьес|ег сЬоке Ьесаиье оЕ |и Ь!8Ьег Ьи(Еепп8 сарасау. АВагоье ае/ Р!еаье ьее 5|ер !4. Месс)а / В, УТ, ог 5ОВ (псЛ Ьгоса Еог Вгои4пВ Е. со!!) ЕВ, УТ, ог 5ОВ а8аг р/агеь соп/а/и/лц Яе арргорпаге апИЬсодс прес!а! ЕсснсрпсепЕ ТЛеппа/ сус/ег Ига/ег Ьа|Л ргеьег Со 70"С и'оос(еп соосЛр/с/гь АЕЫсЕссосса! Кеацесс45 5|ер 72 о( СЛ/ь ргогосо/ гес/и|геь йе геа8епгь //ь/ед |и СЛар|ег В, Ргогосо/ 7. 5|ер 74 о( СЛ|ь ргогосо/ гес/и/геь йе геаделгь I/ьгед |и Ргогосо/ 7 ог 4 о( Я|ь сЛаргег.
МЕТНОО Ргерага6осс оЕ СеИ5 7. Сгои| ЬассеПа1 со1ошеь, сгапьЕогшег) и4сЬ гесошЬшапс р1аяпЫ, оп гкЬ а8аг гпе|1|игп (1.В, УТ, ог 5ОВ) солса!и!пц йе арргорпасе апс!Ъ!ос/с ипс!1 сЬеу аге -2-3 ппп ш д!агпесег (-18 — 24 Ьоигь ас 37'С Еог гпоьс ЬассеПа! ьсга|пь). 2. 1)ье а ьсеП1е соосЬр!с)с ог г!!ьроьаЫе 1оор со сгапьЕег а япа11 ье8шепс оЕ а Ъассепа1 со1опу со а ьсгеа)с ог рассЬ оп а |паьсег а8аг р1асе сопса!и!08 сЬе арргорпасе апс!Ъ!ос)с. ТгапьЕег йе геша!пдег оЕ йе со1опу со а пишЬегег/ ппсгори8е сиЬе солса!п/п8 50 р1 оЕ ьсеп1е !О шм ЕЕ)ТА (рН 8.0). !п ааса|!оп |о йе со!оп|еь ип|/ег |еьс, |гапярг а пшпЬег о( со!ошеь сноса!и!п8 йе "еп|р|у," попгесо|пЬ|пап| р!аяп|8 чес|ог. ТЬеье ьашр!еь аге ньег) аь шаг)гегь )п 8е! е!ес|горЬогеяь (р!еаье ьее 5Сер Н), 3. Вереас 5сер 2 ипс!! йе деяге|Е пшпЬег оЕ со1отеь Ьаь Ьееп Ьагчеьсед.
4. ЮЬеп а/! оЕ сЬе со!оп|еь Ьане Ьееп гер1касед апд !галь(еггей |псиЪасе сЬе шаьсег р!асе Еог ьечега1 Ьоигь ас 37'С ап|1 сЬеп ьсоге и ас 4'С ипс!! |Ье геьи1сь оЕ йе Ве1 е1ессгорЬогеыь (5сер Ргогосо! бг РгерагаНоп оГ Р!ахт(д Рог ТоогЬР(с)г Мт(ргерагаг(оих 853 11 оГ йЫ ргососо1) аге ачаг1аЫе. Со!оп(ех сои!а(пспц р1ахш(дх оГ сЬе деягед яхе сап сЬеп Ье гесочегед Ггогп йе шахсег р1асе. С'т0г11е сЬе шахсег р1асе Ы шсиЬадп8, ргосехх сЬе ЪассеПа1 аихрепяопх ах Го11отчя То еасЬ ш(сгоГи8е сиЬе ш сиги, адд 50 р! оГ а ГгеаЫу шаг1е хоЬл6оп оГ Ы55.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
