Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 19
Текст из файла (страница 19)
1 О. АгЫ 2 ги1 оЕ а ЕгеаЫу ргерагег) !уаогуте ьо1шюп ( 10 т8)т)) Е011оъчес! Ьу 8 гп1 оЕ 0 25 м ЕРТА !рН 8.0). 11. М!х !Ье аиарепяоп Ьу Веп11у шчегОп8 йе тЬе аечега! Оплел. 5!осе 1Ье гиЬе ои ке Еог 10 пппшея ТЬе сошЬгпаПоп оу!уьогуше апг) ЕРТА Ьгеа)га догчп йе Ьасгепа) сеП ччаПа апг) рипсшгеа гЬе ошег гпешЬгапе. ТЬе геаи1г)п8 арЬегор!аагя а!йоиВЬ!еа)гу, аге яаЬг1гаеП Ьу йе ЬояпоПс еисгоае 5О1иг!оп. 12. АгЫ 4 пл1 оЕ 1096 5Р5. 1ттег)!аге!у ипх йе сопсепо оЕ йе гпЪе лч!й а 8!ааа гол! гю аа со с))я регае йе ао1и!!оп оЕ ВР5 ечеп1у гЬгоиВЬои! йе ЪасгеПа1 аиарепяоп. Ве аа Веп11е аа роьяЫе со пни)ппхе 5ЬеаПп8 оЕ гЬе 1!Ъегагес) сЬгопюсюгпа1 РХА.
13. Аа аооп аа иихш8 ге сотр!елей агЫ 6 т1 оЕ5 Ы ЫаС! !Впа1 сопсепггаОоп = 1 М).АВаш, иае а 8!ааа гог! со ппх йе сопгепга оЕ йе !пЪе Вепг!у Ъпг 1Ьогоп8Ыу. Р!асе йе гпЬе оп ке Еог аг 1еая 1 Ьоиг. гсесолгегу оЕ Р!а5гпЫ ОНА 14. Реточе ЫПЬ-то1есп1аг-лче)ВЬ1 РХА апе! Ъас!еПа1 г!еЬг!5 Ьу сепсПйл8аОоп аг 71,000е (30,000 грлп ш а Вес)стаи Туре 50 гогог) Еог 30 т!пи!ее аг 4 С.
СагеЕЫ!у ГгапаЕег йе аирегпалапг го а 50-гп! ЙароааЫе р!аеас сепГПЕ08е гпЬе. Р)асагг! 1Ье ре!1еС. 1! гЬе Ъасгепа) деЬг)а г)оеа пог Еопп а ЬВЫ1у рас)гег) реПег, сепгпуи8е а8аш аг 06,000ч 155,000 гргп гп а Вес)гшап Туре 50 госог) гог а ЕипЬег 20 пипшея апг) ггапауег аыписЬ оГ гЬе аирегпагапг аа роаяЫе го а ЕгеаЬ шЬе. Р)асагг) гЬе ъПасоиа 89и)г) гешагшп8 ш гЬе сепгпбл8е шЪе. 15. Ехггасг 1Ье аирегпасапг опсе ччИЬ РЬеиоЬсЫогоЕопп апг1 опсе чч!1Ь сЫогоЕогт. 16. ТгапаЕеггЬе аг)иеоиа РЬаае го а 250-гп1 сеп!Пйце Ъоо1е. АгЫ 2 чо1итеа (-60 гп1) оЕейапо1 аг гоот сетрегагпге.
М!х 1Ье ао108оп лче11. 51оге йе ао!иОоп Еог 1-2 Ьоша аг гоот гегпрега1цге. 1 7. Кесочег 1Ье пис!ек аснЬ Ьу сеп!ПВл8аооп ал 5000гг (5500 грт ш а 5огча11 05А гогог ог 5100 грт )и а 5огчаП Н54 ачч!п8-оиг голог) Еог 20 т)пи!еа а! 4"С. 5ипп8-оиг 1Ьопгопга1) го!оса аге Ьепег йап ап81е гоюга Гог гЫа ыер, япсе йеу сопсепггаге йе пис!ек аснЬ оп йе Ьопош о! гЬе Ьоп1е гайег гЬап япеапп8 йеш оп гЬе ччаПа. 18. Р!асагг! йе ялрегиагапг. ЪЧааЬ йе ре1!е! апг1 ядеа оЕ йе сепгПйл8е гиЪе чч!й 7096 ейапо1 аг гоот гегпрегатге апг! 1Ьеп сепсПйл8е аа !и 5!ер 17. 1.5В СЬарсег 1: р!аьгпи)г апг( ТЬеп ~Леси)пея гп Мо(еси!ат С!оп)пе 19. Ивсагс) аа сппсЬ ог" сЬе есЬапо1 аа роаа!Ые, апд сЬеп шчегс сЬе сепсг1(пае Ьосс!е оп а рас( ог" рарег сосче! а со а1!очч сЬе 1ая ос йе ейапо1 со с)га)п аччау.
(Ле а часпппс аар(гасог со гешоче с)гор)еса ог' ейапо! 1гогп сЬе сча11а ос сЬе сепсг(чае Ьоп1е. осапс1 сЬе Ьосс!е ш ап шчегсес1 роя!(оп ппс(1 по !гасе ос есЬапо1 (а ч(а!Ые. Ас сЬ(а агапе, сЬе ре11ес аЬоп14 ас)11 Ье с(ашр. 20. Р(аао!че йе с(акр ре!1ес ос ппс!е)с асЫ 1п 3 ш1 ог" ТЕ (РН 8.0). 21. Рпг)гу сЬе сгпс)е р!аяпЫ ЭХА еЬЬег Ьу сЬгогпасоагарЬу оп сопппегсса1 геяпа (р1еаае аее Ргососо! 9) ог (аорусп(с сепсг)6~пас(оп ш СаС1-есЬЫ(пш ЪгоспЫе агайепса (р1еаае аее Ргососо1а 10 апс) !1).
Ьагае р!аппо (>са !сЬ) аге чо1пегаЫе со и!с!с!па сспг!па сЬе сечега! рсессрссабоп перь сЬас аге пьес! сп рап6сассоп о! р!аяпЫ Р1СЛ Ьу ро1уесЬу!епе а!усе!. 22. СЬес1с сЬе ягпсшге ог" сЬе р1аяпЫ Ъу геьсг(сс)оп епгуше с((аеас(оп со11осчес) Ьу ае1 е!ес- сгорЬогеяя РГО1осо! 8 Рипйсабоп о1 Р!аьгпЫ 0МА Ьу Ргес~р~1абюп члй Ро!уеду!епе С!усо! т нь метно() ъъА6 ов)с)нАегт ()еъ()вео въ К)снлвег ТвньмАн (1СКР, Еопдоп, Т)п(гед К!пйдош) Го11оидпЕ йе иог)с оу Е(а (1980), ъъЬо рюпеегег1 (Ье ые оу ро1уе(Ьу1епе Е1усо1 (РЕС) со Ггасйопаге Т))ь)Аь оГ гййегепг яхея Тге(япап'ь гпе(Ьод (а иЫе1у паед (о рпйуу р1аяпЫ !ТАЛА ргерагед Ьу (Ье аПса!ше!уа(ь гпейод (Ргососо! 3).
Сгпде ргерагайопь оу р1аяпЫ ЭХА аге 6гя ггеа(ес1 ид(Ь Ышпп сЫопде (о ргесгрпаге 1агйе К)ъ)Аа апд ийй К)ъ)аде (о йдеаг япа!1ег сопгапппайпц К)ъ)Ая А гю!шюп оу РЕС (п ЫЕЬ аа!с (а йеп ыед го ргесгрйаге (Ье!агйе р1аяпЫ РТъА ье1есйие1у, !еагдпд ьЬог( К)ъ)А апд Т))ъ)А Тгайшепга ш йе апрегпасапг. ТЬе ргес(рйагед р1аяпЫ (3ХА ь рппйег1 Ьу ехггасйоп ич(Ь рЬепойсЫогоуогш апг1 ейапо! ргесгрйагюп. А гпосййсагюп оу(Ье Тгеыпап ргоседиге )а деьсПЪед Ьеге ш и ЫсЬ а ю1пг(оп оу РЕС апд МцС1, )а ыед (о ргесгрг(а(е (Ье р1аяпЫ 13(ь)А ()ъ)ко1е((1 апд Сопдоге111 1993).
Рог Тпг(Ьег шуоппайоп, р1еаае аее (Ье ш1огша(юп рапе1 оп РОГ~ЕТНТЕЕНЕ СЕУСОС Ргесгрйа(юп ип(Ь РЕС/МВС1, д)гТегз 1гош рпййсайоп оу р1аяпЫ )3)ъ)Аь Ъу со!шпп сЬгошагоцгарЬу (Ргогосо! 9) апд ег)ш!гЪПшп сепгг(упйайоп ш СзС1-е(ЬЫ)пгп Ьгоппс1е Егад(епь (Рго(осо1 ! О) ш опе ша)ог геаресг: 1( доев по( ейк!епйу ьерагаге п!с)сед сггсп1аг шо1есп)еь Ггош йе с!оьед сггсп1аг 1опп оТ р1аяпЫ Т))ъ)А. ТЬе!анег гъъо рго(оса!а аге йе шейодь оГ сЬоке Гог йе рппйсагюп оуъегу 1агЕе р1аяпнЬ ()15 1сЪ) йа( аге ъи1пегаЫе го шсЫпЕ апд с!оьед с(гсп1аг р1аьппда йа( аге (о Ье пьед Тог ЪюрЬуяса! шеаапгешеп(я Ноъъеъег, р1аяпЫ Е))ъ)А рпП6ед Ьу РЕС!МЫС!2 ргес)рйагюп (а ьп)гаЫе Тог а11 епауша((с геасйопа сопппоп!у чаед ш пю1есп1аг с!оп)пЕ ()пс1пд)пВ Т))ъ)А аес(пепе(пй) апд сап а!ьо Ье паед со ггапьгесг шапппа1(ап се!!а ъъ)(Ь ЫВЬ ейкгепсу.
! Е1ТН1Е)М СНЕОК10Е ЕС! 'ь а аггопВ де 6удгаг! па геацепс йа( )оъчегь йе ао(пЫ)((у оТ й(ъА (Неагаг апд Мповгад ) 96)а, Ь) апд агирре , рго(е)пь (гогп сЬготадп (Копдо е! а!. 1979). Соп(апъ(па((пв Ь(ВЬ-гпо!есо!аг-ъъе)ф( КНА апд рго(е(пь сап ! (Ьеге(оге Ье ргес(р((а(ед йогп сгиде р(аапз(д ргерага()опа Ьу ЫВЬ сопсеп(га()опт о( ОС! апг! гегпоъес! Ьу (оъъьреед сеп(г((пса((оп (е.В., р!еаъе атее Копг!о е! а1. 199) ). ТЬе ые о( ОС! аа а ье)есвье ргес(р((а(ог о( Ь)аЬ- гпо)есп!аг-ъъе(ВЬ( Р)ъ(А иъаа Вгаг героггед )п ) 963 Ьу ВоЬ (М(!(агпаоп апд со!)еайпеа (Ваг!оъч е( а!.
1963). 1.59 !.60 СЬарсег !: Р/аьти/г апг( ТЬегг ЮеЕи!пем т Мо(еса/аг С!опгп5 МАТЕ К!АЕ5 САОТ!О)ъ(: Рсеаье аее Аррепспх 12 Еог арргорлаСе Ьапг!Ппе о( та(епаЬ шаг/ъег! ъч!СЬ <!>. Вс)ЕЕег5 апд 5о!оЕ1опь Рсеахе атее Аррепепх 1 Еог сошропепСа оЕ МосЕ хо!и!!опт, Ьийегя апг! геаПепСМ ОПиСе а!ос(ъ ао1иС!опа Со СЬе арргорнаге сопсепСга6опя СЛ/ого(огт <с> ЕСЬало( /гюргорапо/ Е/С/ (5 М) Р1еаье атее СЬе рапе) оп с(ТН!С)!ЪС СНСОЯ!ОЕ. РЕС-/ИдС/ хо/ипоп <! > РЬепо/кЬ/ого(огт (1:1, ч/ч) <1> 5осПит асе(аге (3 М, рН 5.2) ТЕ (рН 8.0) ТЕ (рН 8.0) соп(а(п(лП 20 РП/т/ Я(чаае А )ъ)ос!есс АсЫ5 апс! О!коппс!ео6с!е5 Сгис/е р/аьтЫ ргерага6оп С)ае гпасепа! (гогп е!йег 5сер 17 о( Ргососо! 3 ог Бсер!9 о( Ргососо! 5 о( йа сЬаргег.
СепЕг1Еодеь апет Косого 5огча// 55-34 ог ес/и/ча/елг Ьресса! Ес!шрспеп$ /се ъча(ег Лай МЕТНО0 1. ТгапаЕег 3 ш1 оЕ сЬе сгиъ(е !агае-зса1е р1аяпЫ ргерага6оп со а !5-гп1 Согех сиЬе апс) сЬгП сЬе хо1исюп со 0'С ш ап ке Ьай. 2. АсЫ 3 ш! оЕ ап ке-со!6 гю!исюп оЕ 5 (ъс ЫС! со йе сгиъ)е р1аяпЫ ргерагасюп, пих ъчеП, апъ( сепгг)ЕиПе йе хо1ибоп аг ! 2,0005 ( ! 0000 гргп ш а 5огчаП 55-34 го!ос) Еог 10 ш)пигеа аг 4'С.
3. ТгапаЕег сЬе хирегпасапс со а ЕгеаЬ 30-гп! Согех сиЬе. АсЫ ап еъ)иа1 чо1шпе оЕ Ьоргорапо!. М)х ъчеП. Кесочег СЬе ргес)р(гагед пис1ек аснЬ Ьу сепгг)Еицаг!оп аг 12,0005 (10,000 грпс ш а 5огчаП 55-34 госог) Еог 1О пиписеа ас гоогп сегпрегасиге. 4. Е)есапс сЬе аирегпасапс сагеМ!у, апъ) спчегс сЬе ореп сиЬе со аПоъч сЬе !аеас ъ)гора о( аирегпасапс со Ига)п аъчау. Еппае сЬе реПес апг) йе ъчаПа оЕ сЬе сиЬе ъисЬ 70ч~б есЬапо1 ас гоош сепърегашге.
СагеЕиПу йасагъ( йе ЬиПс оЕ сЬе есЬапо1, апс1 сЬеп иве а часишп аар(гасог со гепюче апу ЪеасЬ о( Пс)шд йас агйеге со сЬе ъчаПа оЕ йе шЪе. Р1асе сЬе /пчегсес1, ореп сиЬе оп а рад оЕ рарег соъче1х Еог а Ееъч ш(писеь ип61 по сгасе оЕ есЬапо1 Ь чса!Ые. Ас йЬ асье, йе реПес ьЬои1с1 ьсП! Ье г!ашр. 5. Е)Ьао!че сЬе г)ашр реПес о( пис1ек асЫ ш 500 р! о( ТЕ (рН 8.0) сопСаш!пП КХаае А. Тгапь(ег йе хо!ис!оп со а ш)сгоЕиее сиЬе апг! йоге П Еог 30 ш)лисса ас гоош сепсрегасиге. Рго1осо! 9 Рипйса6оп ог Р~аьт~д ВМА Ьу Спгогпа1оцгарпу р с|х|лс тнс с 990ь, миму сюсчеаь — гжс|лссч гни чосслс — Ьесате адд?ссед со соиипегс|а1!у ача!1аЫе сЬготасоцгарЬу геяпа |ьед со риг!Гу р1аяпЫ Р!ъ?А со пеаг Ьопюцепеьу.
ТЬе|г дерепдепсе оп сЬеее геяпя |поя оГ ъчЬ!сЬ соте !и сЬе Гост оГ а Ыс, ь а ге|паг1|аЫе рЬепогпепоп. АГсег а11, !ао1ас!оп апд риг|Т|сас?оп оГ р1аяпЫ РМАа Ъу сопчепсюпа1 сесЬи!ссиеа аге Ьаг|Пу шсеПессиа1 сЬа!!епВея апд йеге Ь по сопчшсшВ ечЫепсе йас о1д-Гайюпед р1аяпЫ ргерагас!оиа аге шГегюг со сЬоъе етегВ?пВ сгот йе Ъас1|епд оГ а Ыс. ъъЪу, сЬеп, Ьаче с1опега сигпед со ехрепяче 1аь, ъчЬоее сотропепь аге !агре!у ип1|поъчп со |Ьет, 1и ргеГегепсе со ъче11-сг?ед, риЬ1ЬЬе|1 гпе|Ьо|Ь |Ьас иае ягпр1е Гпцгед!епса? А япа11 рагс оГ сЬе апячег тиас 1!е !и сЬе !псеааапс адчегс!а!иВ Ьу тапиГасшгегя ъчЬоае аип и со регюа|1е йе Ви11!Ь!е йас йеу чг111 Ьесоте Ьеиег ас!епсьь Ьу ияпц Ыь со ри|дГу йе|г р1аяп!дя ТЬеае Ыь а1ю р1ау оп сЬе Геаг оГ Га|1иге.
!ъсо опе ъчапь со асгеъч ир а гоис!пе р1аяпЫ ргерагасюп — ю пшсЬ Ьеиег со ачоЫ етЬаггааатепс Ъу Ьиу!пд а Ыс апд Ыат?па сЬе |папиГассигег !Г ютесЬ!па аоее ъчгопц. Оп йе рояс?че яде, Ыь Ьаче сЬапдед Гог |Ье Ъессег сЬе ъчау с1ошпц ш р1аяпЫк и доие. 1п сЬе о1д дауя ъчЬеп д!гсу т!и!ргерагас!опа оГ р!оп!дъ ъчеге йе пост, чессога ъчеге гоис!ие!у рипйед Ьу Ьиоуапс депясу сеисг|ТиВас!оп !и СаС1-есЬ!д!ит Ъго|иЫе угад?епся ъчЬеп епкутеа со |пашри1асе Р!ъ?А ъчеге 1еаа ге1!аые сЬап |Ьеу поъч аге, сЬе аЬ!1!су со цепегасе ГгаВтепса оГ Рсъ?А ъч!|Ь деягед сепшш апд со 1ош йет ассигасе1у со р1аяпЫ чессоь ъчаа ап ипсегсаш Ъияпеъя ъчЬеп йе ргерагасюп оГ Ь!ВЬ?у сотресепс роро!ас!опа оГ Е.
соВ |чав а Гост оГ а1сЬету, Ь ъчае ап асЬ?ече|пепс со Вепегасе ечеп а пюдеас пшпЪег оГ риса!!че гесогпЪшапь. А11 соо Ггеср|еис1у, йеге ъчаа!ис1е д|ТГегепсе Ьесъчееп |Ье питЬега оГ сгапаГогтед со1ошеь цепегасед Ьу йе чессог а!опе апд сЬоае оЬсашед Ггот 1!иасюп геассюпя ТгапзГогтапса сопса!и!пи рисасЬе гесо|пЬ|- папс р1аяпнЬ ъчеге гоис!пе1у асгеепед еЬЬег Ьу ЬуЪ|!д!гас?оп ог Ъу 1аЬопо|ь тапиа1 апа!уяа оГ п|апу !пд!ч!диа! т?п?ргерагас!опя 1| ъчаа пос ипсопипоп |п сЬоее дауа со ргосеъе ап|1 апа1ухе ТЬеге Ь печег гоо егеаг а дьгспс|1оп таде Ьег|чееп |Боге ъчЬо Ьаче раЫ Гог йе ст|ея яер Гогсчагд апд Йоге, ГпсотрагаЫу тоге патегоия и4о Йаче гесегчед а сопчетепс, 1пдфегепг ?споъч1едче, а 1споъч1ефе ппгЬоиг оп1еа!х ТБе ТгоиЬ?е ппй Ве1г|е Вогп Ъу Е.М.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
