Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Р1асе ГЬе тпчегтед, ореп Ьотт! е оп а рад оЕ рарег тоъче! а Еог а Ееъч ш(потех ас гоош тегпрегатше то а1!оъч ГЬе ейапо! Го ечарогате. !Е йс рс!!с| оЕ 0МА Ь дпсд ш а дса!ссатог ог шн1сг часишп, и Ьссотпса д|Ейси!т то д!аао!чс ипдсг ютпс с!гсшпвтапсса апд шау с1спашгс (3чагсп ст а!. 1987). 0гу!п8 тйс рсБст Еог 10-15 пнпшса ат гоош тсп|- рсгатигс й ишачку виЕЕтс!спт Еог тйс сйапо! то счарога|с ъчЫюит 0тътА Ьссопип8 дсйудгатсд, 17. 01|ьо1че йе т1агпр ре11ет оЕ пис!ек асЫ |п 3 гп1 оЕТЕ (РН 8 О).
18. Риг(Еу йе сгиде р1аяпЫ 0ХА еиЬег Ьу со1шпп сЬготпато8гарЬу (Рготосо1 9), ргес(р(тат(оп ъч)ГЬ ро1уетЬу!епе 81усо1 (Рготосо! 8), ог ет!ш!1Ьг(шп септг(Еи8аГ(оп ш СаС1-етЬ!д(шп ЪготЫе 8гад(епта (Рготосо!а 10 апд 11). 19. СЬес1т йе аттис!иге оЕ ГЬе р!аяпЫ Ьу геатг!сГ(оп еплутпе д!8еат(оп ЕоПоъчет1 Ьу 8е! е!ест горЬогеяя рог гссошшспдат!опа оп тгоиЬ!сайоот|п8, р!саас асс ТаЫс 1-5. ТЬе тур|са! у|еЫ оГ Ь!8Ь-сору-пи|пЬег р!аяп!д честить ог оГ а|пр1!йед !оъч-сору-пи|пЬег честога ргерагед Ьу йь птейот1 'ь — 3 — 5 р8 от' О!ъ|Атгп! оГ ог!8!па! Ьастепа! си!Гиге.
тйе у|е!д оГ гесо|пЬ1- лапт р!аю|Ыа сопта|п!п8 !паегта оГ Гоге!8п 0)ъ|А !а иаиа!!у а!!8ЬГ!у !оъчег, дерепйп8 оп йе а!ге апд па!иге оГ йе с!опед 0ГГА Гга8гпепт. у!е!да оГ <10 Гт8Г|п! !пд!саге йат ГЬе р!аяп!д О!ъ)А !а тохк то Е. со)Ь ГЬе согпр!ете аЬаепсе оГ О!ъ)А !пд!сатеа йат йе р!аяп!д Ьаа Ьееп !оат т!ипп8 ехтгастюп апд риг!Г!сат!оп. ТЬе Г!тат ргоцетп сап ойеп Ье ао!чед Ьу аъч|тсЫп8 со а !оъч-сору-пип|Ьег честит апд!ог то а честит йат сагг!еа ргойагуойс тгапасг!рт!опа! тегпнпайоп я8па!я ТЬе аесопд ргоцепт 'ь ойеп ГЬе ген!т оГ ассЫепта! !о|ь оГ ЕЬе р1аяпЫ 0|ъГА ререт айег етЬапо! Ргес!р!тадоп.
й а1ю оссига ъчЬеп ГЬе гесоп|Ь!папт р!ааптк! ь !аг8е епои8Ь то Ье ргес!рйатет! Го8ейег ъч!ГЬ ГЬе сйгопюю|па! 0МА айег адд!т!оп оГ ротатыи|п асетате. 3исЬ а !аг8е р!аяпЫ чд!! а!ю Ье аиасерт!Ые то ~ Ьгеа1|а8е дипп8 ехтгаст!оп апд рипйсайоп. ТЬ!а д!й!си!ту сап Ье ао!чед Ьу ияп8 а пюге 8епт1е ргосет!иге оГ се1! !уаь, юсЬ аа ГЬат деасг!Ьед ш рготосо! 7. 1.42 Сйарсет 1г РЕаяпги)я апт) ТЬе)т Еуяе~и1пеяя сп Мо!еси!ат С!оп)пП ТАВЬЕ 1-5 ТтоьЫВВЬооЕ!пВ РО55сВЕЕ СА05Е5 КЕМЕОСЕ5 РВОВЕЕМ РИА Ь геяяапс со с1еачаПе сч)сЬ геяспссюв епгутпея.
Стегу Псйе ог по Р)я)А и чсяЪ!е оп Пе! еиЬег ЬеЕоге ог айег геяпсиоп 6!Пеясюп. Р!аяпЫ Рся)А Ь ргеяепс ЬеЕоге 615ея6оп сч)сЬ геягк6ов епхупсея Ьис Ь сопчетсеа )псо а ягиеаг дит)пц ЙПеяс!оп. !пяийксепс саге счая са1теп со гепюче ай оЕ йе Писд ас евер 3 от Бсср 1! оЕяпаП-яса1е ог Бсеря 6 апй 7 ог Бсер !б оЕ 1агПе-яса1е ргерагайоп. Боте ягашя оЕ Е.
сой (е.ц., НВ101 ап6 1ь с!его'ась ея) яЬей сей-счаП сопсропевь Йас регяяс сЬгоиПЬ рипйсасюп оЕ сЬе р!аяпЫ РЕСА апт) сп1иЬсс йе ас6оп оЕ геяспсс!оп епгусиея. Рейес оЕ пис! есс асЫ стая спайчегсепс1у Йя- сагдей айег ейапо) ргессрйасюп. ТЬе РХА опоя! П)те!у сашсе6 члй а Ьассепа1 Р)я)аяе Ее.ц., епИА), счЬ)сЬ Ь асс)часед ирои ехрояиге со МПст ргеяепс ш сЬе геяг!с6оп Ьийег. ТЬе тиос!!Йе1у яоигсе оЕ сЬе !35)аяе ь сЬе я!ос)с оЕ ТЕ ияе6 со Пгя яоЪе сЬе р!аяпЫ РЕСА.
Рп!еы саге ь са1теп, ТЕ сап Ьесоте сопсатшасе6 Ьу Ъассепа. Ееяпс6оп Ьийегя аге а!еы 1Йе!у рояяЬт1йу. Ехсгасс Йе Ппа1 РЕСА ргерагасюп члсЬ РЬепоЬсЫогогопп; гесочег Ъу ясапйагд есЬапо! Ргесср!сасюп ап6 яиЬяециепс счаяЬ)пП !п 70ЯА ейапо!. А1гегпа6че1у, саггу оис сЬе геяпсиоп ЙПеяс ш а 1агПег чо1шпе Е!00 — 200 )с1), ия)пП ПчегоЫ пюге епсупсе. Ас сЬе епс) оЕ сЬе 615еяс!оп, гесочег йе Р)я)А Ьу ясапс)агс) ейапо1 ргес!Рйа6оп.
Ееясьрепй сЬе Ьассейа! Рейес )и !се-соЫ 5ТЕ (0.25х чо)итие оЕ йе от)5)па! Ьассепа! си1сше) ап6 гесепст)Евое. Р)ясагй ечегу 1аяс Втор оЕ сЬе БТЕ, ап6 геяияреп6 йе Ъассегса! Рейс! си АПта!ше 1уяя ю1шюп 1 ая деяспЬей аЬоче. Кетпоче йе есЬапо! Ьу Пепбе аярсга6оп (Е)Поте 1-7, р. 1.33) ая яооп ая рояяЫе айег сйе теист)Еицас!оп ясер. 1Е сЬе сепст)Евое шЬе тя 1ей со ясапй Еог соо 1опц, сЬе рейес оЕ РХА чПП Ьесопсе ПесасЬе6 Егот Йе счаП. Бсетй)хе еасЬ ЬассЬ оЕ ТЕ Ъу аисос1ач)вП ап6 Йярепяе 1-т! а!и1иоЬ )пео яСеп1е т)сгойсПе шЬея Еог яепйте ТЕ )и япаП а)н)иося).
1)яе а ЕгеяЬ а! сПиос счету с1ау. Тгу со тпаспсасп ясеп1е сесЬпв1ие ъчЬеп ия)п5 ясос1т яо!и6опя, !Е Ъассепа1 Р)я)аяе сорипх Пея чйсЬ йе р1аяпЫ РЫА, ехсгасс сЬе РХА ь)сЬ РЬепоЬсЫогоЕопп, гесочег Ьу ясапйагй ейаво! ргессрйасюп, ап6 геяиярепй ш ЕгеяЬ ТЕ. Ргогосо1 4: Ргерагаг|оп о)' Р1аяи ||1 РИА Ьу 5таИ-яса!е Во|1|иК Еуяся 1.45 МЕТНО0 РгерагаЕ1оп ог Се!15 1. 1поси1асе 2 ш! оЕпсЬ шес)1иш (ЕВ, УТ, ог Тегпбс ВгосЬ) сопсашшц сЬе арргорпасе ап6Ь1- о6с сч)сЬ а я)пд1е со!опу оЕ сгапяуогшес! Ъассепа. 1псиЬасе сЬе си1сиге очегп1цЬс ас 37"С ъч)сЬ ч1|3огоия яЬаЬбпц. То епянге сЬас |Ье сн1|нге ь абе|снасе1у аегасе|Ь ° ТЬе чо!шие оЕ йе сн!шге шЪе яЬон16 Ье ас 1еаяс Еонг синея Кгеасег сЬаи |Ье чо1шие оЕ |Ье Ьассепа! сн!шге.
° ТЬе шЬе зЬонЫ Ье!оозе1у саррей ° ТЬе си1сиге зьон16 Ье шсиЬасе|1 счссЬ ч)аогонз аа)са6ои. 2. Роиг 1.5 гп! оЕ сЬе си1сиге шсо а ппсгоЕице сиЬе. Сепспблце сЬе сиЬе ас шахппшп яреес! Еог 30 яесопс)я ас 4'С |п а ш)сгоблпе. 5соге сЬе ипсьед рог6оп оЕ йе си1сиге ас 4'С. 3. ЪЧЬеп сепсг)Еииас!оп 1я согпр1есе, гегпоче сЬе лопес)1иш Ъу цепс!е аяр|га6оп, 1еачбпц сЬе Ьассепа! Ре11ес ая 6гу ая рояяЫе.
ТЫя ясер саи Ье соичешеис1у ассогир1|яЬес! |ч||Ь а йярояаЫе р|репе ьр ог раяеш р|реие ассасЬе6 со а часнши 1|не апсс а я16е апи Лаз)с Ер)саяе яее Рсдьге 1-7). С)зе а Кеис1е часнши асса сонсЬ |Ье с|р со сЬе ялггасе оЕ сЬе 1и!иЫ. Кеер сЬе ьр ая Еаг Егои| |Ье Ьассепа1 ре11ес аз рояяЫе ая сЬе Ян)6 и чайага|чи Егои| сЬе снЬе. ТЬ)я иипип|гея |Ье пя1| |Ьас |Ье ре!1ес ъч|11 Ье янс)сей 1исо сЬе яЫе апи йазк А1сегпаьче1у, гешоче |Ье шрегиасаис нз)иа а р|рессог ог раяенг р)рессе аи6 Ьи1Ь. С)яе сЬе р|рессе 6р со часннги |Ье |ча1!я оЕ йе снЬе со геишче аиу адЬегепс |)гор!еь оЕ 0н)й ТЬе реиа1|у Еог Еа)!1иК со гепшче а!1 сгасея оЕ и|есбшп Егои| йе Ьассепа! ре11ес Ь а ргерагабои оЕ р1аяиЫ Е|ЬСА йас Ь гез|яаис со с)сача яе Ъу геясгкьои еигуи|ея. ТЫя и Ьесасье се!1-сча!1 согироиеиь ш |Ье п|ейнш ш)ВЬ~с сЬе ас6ои оЕ шаиу геяпсьои еигушез. 4.
Веяиярепб йе Ьассепа1 ре!1ес ш 350 )с! оЕ 5ТЕТ. Массе яше сЬас |Ье Ьассепа1 ре1!ес |я йярегяе|! согир1есе!у аи6 с)нссЫу ш 5ТЕТ. Чогсехшц ьчо шссгогнае шдез яипн!саиеогь1у часЬ сЬе|г Ьазея сонсЬ)иц |чог!ь счеП. Еу5!5 о! Се115 5. А|Ы 25 р1 оЕ а ЕгеяЬ)у ргерагес1 яо!исюп оЕ 1уяогуше. С1ояе йе сор оЕ сЬе сиЬе апд пих сЬе сопсепся Ъу цепс!у чогсехшп Еог 3 яесопс!я. б. Р1асе сЬе сиЪе 1п а Ь011шц счасег ЬасЬ Еог ехасг)у 40 яесопбя.
Рго1оиае6 ехроянге оЕ янрегЬе! ка! Е|ЫА со Ьеас геян1ыи |ггечегяЫе 6еиаснга6ои ЕЧшоага6 аиа ЕеЬо|ч|сг !9ао). ТЬе гезн1сшд сус1к со11е6 Е|ХА саппос Ье с!еаче6 |ч|й геяспсьои еигушез, аис! и пидгасея сьгонКЬ ааагояе це1я ас аЬош счасе йе гасе оЕ янрегЬе1ка! ЕЛЬ!А аи6 |саша роог!у |ч)сЬ есЬ)саши Ьго|иЫе. Тгасез оЕ йь со1!арзе6 со!!ей Еогш оЕ ЕЛКА саи нана!!у Ье яееи |и р1аяиЫя ргерагеи Ьу сьеппа! 1уяя ос Ьассепа. Носчечег, сье оиаи6су оЕ сус1к со|1ес! РЬСА саи Ье 1|ерс со а пни|инин Ьу еизнпиа сЬас йе 1уяасе сз )серс ас ! 00 С Еог ехасьу сЬе гесопппеидед 6спе.
7. Сепсг)Еипе йе Ьассепа!!уяасе ас шахипшп яреес! Еог 15 ппписея ас гоогп сешрегасиге ш а шкгоЕице. Роиг сЬе яирегпасапс шсо а ЕгеяЬ гпкгоЕиВе сиЪе. 1яесочегу о1 Р1а5гп!Е1 0МА 8. Ргес)р)саСе СЬе пис1ек асЫя !гоги СЬе яирегпаСапС Ъу ас)6!пи 40 Ес! оЕ 2.5 ЬС яос!1ипл асеяаСе (РН 5.2) ап|1 420 Ес! оЕ 1яоргорапо1. Мис йе яо1исюп Ьу чогсех)пи, апд сЬеп а11осч сЬе пихсиге со ясап6 Еог 5 пиписея ас гоогп сеп|регасиге. 1.4б СЬартег 1: Р!аяптг(т апг( ТЬетг (Ле(и!пея т Мо!еси!аг С!отщ Песочег йе ргес(рПасег1 пис1ек асЫа Ьу септпуи8а6оп ас тпахиишп ареег) ЕЬт 10 ш(потех а! 4"С ш а ппсгойце. !г ь Ьеаг го 8ег !пго йе ЬаЫг оГ аЬчауа аггапЬПп8 йе пнсго(и8е гиЬеа гп йе аагпе тчау ш йе писгоуи8е гогот, Ее., ш огг(ег, тчиЬ (Ье)г р1ааис Ып8еа аЬчауа ро)пг)п8 оиичагг(.
ТЬе ргесгрпаге ааП соПесг оп йе шааПе аигЕасе Гигйеаг Егогп (Ье сепгег оГ гога((оп. Кпотч)п8 хЬеге го )оо)г пта)геа Ь еаыег то Ггпг) чаПЫе ргес(рггагеа апг) го гПаао)че "(пч)а(Ые*' ргес(р!гагеа еЕПс(епг)у. (А'Ьеп ргераг)п8 р)ааспб РЫЯ Егопт ап епг)А а(га)п о( Е. со!), ап ех(гасПоп ъи(Ь рЬ а!тои!г! Ье )пс!иг)ег) ат (Ыа ро)п!. )и Ьпе(: ° Кеюарепг! йе (аоргорапо(-ргес)р)татег) РЫЯ реПе! )п 100 р! о( ТЕ (рН 8.0). ° Яг)г) 100 р! ОГ рЬепоЬсЫого(опп (1:1, ч/)ч), апг( чогтех йе гпоаиге Гог 15 — 30 аесоп ° 5ерагате (Ье аг)иеоиа апг( ог8ап)с рЬааеа Ьу сеп(п(и8ат(оп а! шах)гпигп ареег) Еог 2 тегпрега(иге )и а ш)сто(и8е. ° Тгапа(ег йе аг)иеоиа !ауег со а ЕгеаЬ пнсго(и8е гиЬе, апг) аг)г) 03 чо(ише оГ 3 м аогПипз асе(а(е (рН 5.2) апг) 2.5 чо(игпеа о( ейапо!.
Песочег йе ргес)р(тагес) пис(ек ас(г(а Ьу сепспбл8атгоп ас гпах(шиш ареег) Гог 10 гп)потех )и а ш(его(и8е, апг( ге)о)п йе рготосо! ат 5(ер 10. решоче (Ье аирегпатапт Ъу Пеп(1е аартга6оп аа г!еаспЬег! ш 5тер 3 аЬоче. 5(апг! (Ье шЬе !п ап !пчегтег! роябоп оп а рарег (отче! то аПоиг аП оЕ (Ье ПОЫ то г)га)п аччау. ()ае а К)шчч(ре ог сПароааЫе ртретте 6р го гепточе апу г!гора оЕ Пшг! аг!Ьепп8 то йе ччаПа оЕ (Ье тиЬе. ТЬе реПег оЕ пис!ек асЫ Ь шиаПу чиПЫе аа а ашиг)8е оп гЬе тчаП оЕ йе сепгг)Еи8е шЬе, пеаг йе Ьаае. ЕПпае йе реПет оЕ пис1ек асЫ чч)(Ь 1 тп! оЕ 709о етЬапо! ат 4'С.
АПаш гешоче аП оЕ йе аирегпа(апт Ьу Пеп(1е аар)га6оп аа деаспЬег! !п 5(ер 3. Та)ге саге ъч!(Ь (Ыа агар, аа тЬе реПег юптегппеа г(оеа пот аг)Ьеге 6880у го (Ье шЬе. Петпоче апу Ьеаг!а оЕ е(Ьапо1 (Ьас Еопп оп (Ье аЫеа оГ тЬе тиЬе. 5(оге ГЬе ореп шЬе ат тоопт тетпретатиге ип61 (Ье е(Ьапо1 Ьаа ечарогасег! апг1 по ПиЫ га чбяЬПе )п (Ье тиЬе (2-5 пппитеа). !Г гЬе реПег оГ РХА ь Опек ш а г)еа(ссагог ог ипйег часишп, Ь Ьесоптеа гПЕЕгси)с ш йио1че ипг)ег аогпе сггсшпагапсеь апг) гпау г)епагиге (5чагеп ег а1. )987).
Ргуш8 йе реПег Гог )0 — ! 5 пипигеа аг гоогп гегпрегашге 'ь шиаПу юГПсгепг Еог йе ейапо! го ечарогате аагЬоиг (Ье РЫА Ъесопип8 ЙеЬуПгагей 13. Р(аао!че ГЬе пис!ек асЫа тп 50 р1 оЕТЕ (рН 8.0) сопташ!08 РЫаае-Егее П)ч)ааеА (рапсгеат- )с П)ч)аде). ЧотГех йе ю!и6оп Пеп6у Еог а ЪпеЕ репог1. 5(оге йе Р)ч)А а( — 20'С. 1АВ СЛаргег1: Р!агт)й аагЕ Т1сегг Юеуи!пея Еп Мо!еси!аг С!отой Сеп$гс1ссдеь апс! КоФогй Вес)гтап 5чр47 ТЕ го!ос ог едисча1епг 5огчаП С5А гогог ог едисча1епг 5огчаН 55-34 гогог ог еди1ча)епг Ьресса! Ес!осргпепФ Во1йп8 ччаСег Лай Випьеп Лигпег Саирме 14-р1у) Орсюпа1, р!еаье атее 5сер 15.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
