Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 18
Текст из файла (страница 18)
С1оае сЬе сор оусЬе сиЬев апд сЬеп ппх сЬегг сои!енса Ьу чогсехш8 Гог 30 хесопдя 6. Тгапхуег СЬе СиЪеа Со а 70'С тчаСег ЪаСЬ. 1псиЪаге СЬе СиЪех Сог 5 шшигех апд йеп а!!отч СЬегп со соо1 со гоош сешрегашге. 7. То еасЬ шЬе, адд 1.5 р1 оГа хо1и6оп о(4 М КС!.Чогсех сЬе шЪех Гог 30 хесопдя 8. 1псиЪасе сЬе сиЬеа сог 5 пшшсеа оп ке. 9. Кешоче ЬассеПа) деЪПа Ьу сепсПГЬИа6оп ас гпахипшп хреед Сот 3 ш(пи!ее ас 4"С )п а шкго(ице. Аоа1у515 ог Р!аыпсс15 Ьу Се1 Е!ес1горЬоге515 10.
ТгапхГег еасЬ оГ сЬе хирегпасапь ш шгп со ГгехЬ пнсгоГиИе сиЬея Адд со еасЬ сиЬе 05 Сс! оГ а ю1исгоп сопсагйп8 0.4% ЬгопшрЬепо1 Ыие 1Г йе хашр1ев аге со Ъе апа1ухед оп1у Ьу а8агоие Ие1 е1ессгорЬогеях ог 2 р1 оГ 10 шМ сгею! гед гТ сЬе хагпр1ех аге со Ъе апа1угед ЬосЬ Ьу РСК апд Ьу аиагохе Ие! е1есггорЬогеяя 1.оад 50 р! оГ йе хирегпаСапг шго а 31ог (5 гппл (п 1еп8(Ь х 2.5 пнп (п иийЬ) сая (п а 0.7% а8агохе Ие1 (5 пнп сЫс1с).
ТЬе аИагоге Ве! Ь роигед агЫ гии !и йе аЬлеисе иЕ есЬгйшп ЬгогиЫе Ьесаиле йе гасе иЕ ш(5гасюи иЕ гирегЬе!Ыа! Р)4А ш сЬе а!ьеисе иЕ есЬЫшги ЬгогпЫе гейессг !ь гпи1еси!аг лче(ИЬс игоге ЕагсЬЕиПу сЬаи гь гасе оЕ ш!Вгас!ии (и сЬе ргегеисе иЕ сЬе !игегса!ассиВ дуе. ТЫг ясир!гВег сЬе саа)с иГ йюицшзЬгиВ ашииц р!агш!дг оЕ ййегеис яхея 11. АГсег сЬе ЬгопгорЬепо! Ыие дуе Ьаа ш18гасед съчо-сЬ(где со сЬгее-ГоигсЬх сЬе 1епцсЬ оГ йе Ие!, ог сЬе сгехо! гед дуе аЬоис опе-Ьа1Г сЬе 1еписЬ оГ сЬе Ие1, хса(п йе Ие! Ьу хоа)с(п8 (с Гог 30 — 45 гпшисеа ш а ю1и6оп оГ есЫд)иш ЬгогпЫе (0.5 Сс8(гп! ш Н О) ас гоош сешрегасиге. Ехаш)пе апд РЬосо8гарЬ йе ие! ипдег (ЛЕ г11шпшасго.
Миге сегьигче дуел гисЬ аз 5УВК Си!д (Мо1еси1аг РгоЬел) саи Ье шед со яаш сЬе аИагозе це! айаг е!ессгорЬогеяз тчЬеи лчог)г(иВ иисЬ !очг-сиру-иишЬег р!аяпсдл (р!еаге лее СЬарсег 5, Ргисосо! Ц. Гиг гните !иГопиаиои, р!еаае гее сЬе йлсгьяои ои 5УВК дуеа ш АрреисВх 9. Со!ои(ех сЬас соиса!и а гесогпЫиаис р!ахпид ииИ у(еЫ Ьаида ос 0ЫА сЬас ги!агаси сЬгоииЬ йе ааагоае ае! гиоге а!гич!у сЬаи йе егор!у чессог 0(х(А. И ь |гирогсапс со ихе ах сои!го!и р!аятида ос Ииотчи яае сЬас Ьаче Ьееи ргерагег! Ьу сЬе соосЬР(с(с гиесЬог!.
Р!ахеи(дх ргерагед Ьу ойег гпесЬоди аге иос геИаЫе ах сои!го!и Ьесагье йеу сМИ Ье д(хю!чед (и Ьис(еь оГ д(ЕГегеис Ыи(с хсгеиасЬх аид соихбсибоия ТЬе гасе ос ги(дгасюи оГ юрегЬеИса! 0ЫАх саи Ье гиаг!сед!у а6естед Ьу йе (ои!с ягеицсЬ ос йе ю!идои !оадед (исо сЬе тчеИи ос сЬе це!. ТЬе раиеги ос Ьаида саи Ье г)и(се сотар!Ыасед, соиа(аииа ос хирегЬеИса(, ореи с(гси!аг, аис! Ииеаг Еог ть ос р!Иьгпк1 0ЫАх, (и асЫШои, регЬаря Со сгасех ос Ьассеиа! сЬгогиоюгиа! 0ЫА. 12. 1Г сгею! гед Ьах Ьееп иаед ас 5сер !О, апа1уге йе юрегпасапь Ьу регуогш(п8 РСК аа деаспЪед сп СЬарСег 8, РгоСосо! 1, ияп8 СЬе гешашдег оГ еасЬ хашр!е ах а Сегпр1асе.
Стасо! гед (Месс(г !идах) Ь огаице си агиЬег (и асЫ(с ги!ис!ииа (рН 2 — 3), уе!!олч ш ао!ис(иис оЕ рН 7.2, аид гед си аИсаИие ао!идоия си сои!галс си ЬгигиирЬеио! Ыие аид ху1еие суаио1, сгето! гед доел иис гиЬгЬи йе сЬегшоасаЫе 0ХА ро!ушегаге Егош Т)гегтил а4иаг(сил (Тад ро!ушегале) (Норре ес а1. 1992). ТЬия 014А зо!ис(ииг соила!и!иИ сгею! гед аге Ыайе сешр!алел |и шозс агар!гВсаиои геассюия ТЬе дуе ш!Вгасез Ьеичееи ху!еие суаио! аид ЬгогиорЬеио! Ыие диг(и5 ацагиге Ие! е!ессгорЬогеяя чдй а яхе оЕ -300 Ьр ги а 2% аВагоае це! (Нирре ес а!. !992).
Сгеги! гед доел иис ргидисе а хЬадоиг ои рЬисоцгарЬг оЕ аВагисе це!г лса(иед мисЬ ейЫшги ЬгогиЫе. Рго1осо! 7 Ргерагабоп о1 Р~аьтМ 0МА Ьу 1уяь мл'й 505 т нь сентее метноо (лоАРтео еаом Ооо5он лнв Члрнек 1973) Ьаа адчапгаае5 очег 1Ье а)!са1!пе 1уя5 апд Ьо)1ше гпегЬоеЬ тчЬеп деа11па 5ч!1Ь 1агае р1аяппЬ (>15 ЬЬ). Но5чечег, йе рггсе оЕ 1ешгу ш 1ЬЬ саае Ь 1отч у)е1д: А яап!Егсапг Егас6оп оЕ йе р1ааш!д Е7ЫА Ьесогпеа епше5Ьед ш 1Ье се1! деЬгЬ апд Ь 1о51 ас ап еаг1у агапе оЕ йе ргогосо!.
МАТЕК!АЕ5 СА1)т1ОХ: Р1еаае аее Аррепд)х 72 Еог арргорпа1е Ьапд11па оЕ гпа1епа!5 таг!Гед чч11Ь <1>. ВиЕЕег5 апе! йо!иЕгопь Р)еаае аее Аррепд!х ! Еог сотропеп15 о( 51осЬ ао!пиопа, ЬпЕЕега, апд геаееп15. О11п1е 5!ос!е ао!п6опа 1о йе арргорг)аге сопсепгга6опа. Ап(ГЬГоггс (ог р1аат(д ае)есггоп СЫогатрЬеп(со) (34 те)т)) <1> Ордопа!, р1еаае аее Яер 4. Р)еаае аее ГЬе Гп(оппадоп рапе1 оп СНЕО!ГАМРНЕЫ!СОЬ СЫого(огт <! > ЕЕ7ТА (0.5 м, рН 8.0) Е(Ьапо! ХаС) (5 54) РЬепо1:сЫого(огт (7г7, ч)ч) <! > 5О5 (70% ач)ч) 5ТЕ, Гсе соЫ ТЕ (рН 8.
О) Тг!5-5осго5е Епкугпе5 апгЕ ВиЕЕег5 Еуаогуте (70 те)т)) Р!еаае аее ГЬе штоппадоп рапе1 оп РГ5О2УМЕ5. Кеагг(сГ(оп епдопис1еаае5 Се!5 Аеагоае ее)5 Р!еаае аее 5гера 8 апд 22. 1.55 1.56 СЬаргег !| Р/а|та/г алг/ ТБе/г /7ге/и!лея т Мо/еси!аг С!оп/лсг Мес1!а ЕВ, УТ; ог Теглпс Вго/И Сеп1г11пдеь апс! Ко1ог5 Вес/сгпал Суре-50 и/Сгаселгг!Еиде го|ог ог еди|ча/ел| чи/Ь Оа/с Юс/Ве р/агапе сел!с/ЕиВе ЯЬеь /30-гл/ асгеи сар, /с/а/Веле) 5олаП С5А гогог ог ес!и|на/ел| $рес1а1 Ес1п1ргпеп1 5/иге/у В/ааа гос/ АсЫ111опа! Кеадеп15 5|ер В о/ ЯВ рго|осо! геди!геыЬе геаВель //асес/ |л Рго|осо/ 7 ог 4 о/ /Ь/а сЬар|ег. 5|ер 27 о/ Яь ргогосо! гедспгеь Яе геаВелгь /!асес/ |л Ргогосо/ 9 ог 70 о/ ЕЬ/а сЬар|ег.
МЕТНО0 Ргерага11оп о1 Се115 1. 1поси1аге 30 п|1 о/ псЬ гпейшп !1.В, г'Т, ог Тегпйс Вгой) солса!пшВ |Ье арргорпа|е апВЪ|- опс нч/гЬ а япВ!е ггапауостед Ъас|епа1 со1опу ог счпЬ 0.1 — 1.0 т1 оЕ а 1асе-1оВ-рЬаае си1|иге Вгончп 1гот а а!пц1е !гала/осте|! со1опу. 2. 1псиЬасе |Ье си1|ше чч)гЬ ч)Вогоиа ьЬа)с)пц ипп1 йе Ьассепа епсега |Ье!а|е 1оВ рЬаае оЕ Вгонч|Ь (Ье., ап О/7 оЕ -0.6). То ел|иге |Ьа| |Ье си!|иге В адедиаге!у аега|ей ° ТЬе чо1игпе оЕ |Ье си!шге Вай йои14 Ъе а| 1еая Еоиг йпе| а|саге| йап йе чо/тк оЕ |Ье Ъас|ел|1 си!|иге.
° ТЬе Наг/с ьЬосг!4 Ье 1ооье!у саррей ° ТЬе сиииге йои!4 Ье !псиЬаге|7 чай ч|аогоиг аа|гаг|оп. 3. 1поси1а|е 500 |п! оЕ ЬВ, г'Т, ог Тегпйс Вгой (ргенчагтес! |о 37'С) солса!и!пВ |Ье арргорп'- а|е апг!Ъюг/с 1п а 2-1пег Вас)с нч!ЕЬ 25 т1 оЕ |Ье 1асе-1оц-рЬаае си!сиге. 1псиЪасе йе си1|ше Еог -2.5 Ьоига а| 37 С ъч)ЕЬ ч/цогоиа аЬа!с|пВ !250 сус!еа/т/лисе оп а го|агу зЬа)сег). ТЬе О!|я оЕ |Ье ге|и!7|па си1|иге ьЬои1|7 Ье -0.4. ТЬе агочгсЬ гасе| оЕчаг|ои| Ьас|ела! ьгга/пь ог оса япа1е ига|о солса/пэпа д/ЕЕегепг р!аяп/й ча1! чагу.
ТЬия Еп готе са|ея |Ле сапоге тау Ьаче |о Ье |псцЬаге|7 |1/аЬссу 1опаег ог |Ьоггег |Ьап 2.5 Ьоиг| |о геасЬ гЬе г)саге|7 ориса! |)спасу. 4. Рог ге1ахес) р!амп)с)а ъч1|Ь 1о|ч ог пгодегасе сору пшпЬегя ас/д 2.5 п|1 оЕ 34 те/т! сЫогап|- рЬешсо!. ТЬе Впа1 сопсеп|гапоп оЕ сЫога|прЬешсо! !п йе си1|иге аЬои1д Ье 170 С|В/т1. ~ 7МРОКТАЬ/Т Рог ЫеЬ-сору-литЬег р)аяп1|Ь, с/о ло| ас/с/ сЫогаглрЬел1со). 5. 1псиЬа|е |Ье си!|иге Еог а ЕигсЬег 12-16 Ьоига а| 37"С нч!ГЬ ч/цогоиа аЬа!с!пВ (250 сус1еа/т!лиге оп а го|агу кЬа)сег) 6.
ретине ап а1ирюг (1 — 2 гп1) оЕ |Ье Ьас|епа1 синге со а Еге|Ь т!сгоЬ|Ве шЬе апс! зсоге || а| 4'С. Нагчея |Ье гетаин)ег оЕ |Ье Ъассепа1 се!1а Егот |Ье 500-т! си1|иге Ъу сепсг/ЕиВаг!оп а| 27005 !4100 грт ш а 5огна1! СВА го|ог) 1ог 15 т!писеа а| 4 С. 17!|саге! йе аирегпа|апг. 5|апс) |Ье орел сеп|пй|Ве Ьоп1е ш ап шчег|е|1 рояиоп |о а11онч аП оЕ |Ье трегпасапс го г!га!и аччау. Ргогосо! 7: Ргерагпггоп оЕ Р!алтге! Р!чА Ьу Еуггл гч!1Ь 5Р5 !.57 7. Кеяырепг) 1Ье ЬасгеПа1 ре!1е! )и 200 т1 оЕ !се-со!й ВТЕ. Со!1ес! 1Ье ЬасгеПа! се!1а Ьу сеп1ПЫ8аОоп аа г!еьсг)Ьес! )и 5!ер 6. 51оге 1Ье ре1!е! оЕ ЪасгеПа ш йе сепгПЙВе Ьог!)е аг -20'С.
8. 1)ае опе оЕ йе те!ЬогЬ деасг!Ьес) !и Ргогосо1 1 ог 4 го ргераге р1аяпЫ РХА Егот 1Ье 1 — 2- т1 а!!г!по! оЕ ЬасгеПа1 си!гиге аег аиде !и 51ер 6. Апа1уге 1Ье ипгпргерагайоп р!аяпЫ РХА Ьу с!18еаг!оп лч)1Ь 1Ье арргорПаге геагПсгюп епхуте(а) апг! а8агоье Ве1 е1есггорЬогеяа 1о епаиге 1Ьаг 1Ье соггесг р!аяпЫ Ьаа Ьееп ргора8а!ег) ш йе 1аг8е-аса!е си11иге. ТЬь )г)па оу сои!го) гпау аееш а Пп!е очег1у сошри1ыче.
Ноччечег, и ргоч!г)еа ча!иаЫе )пшгапсе а8а!паг епога гЬаг шау Ье ййки11 ш ге!нече апг) пгау саиае сопяг)егаЫе )оя оу липе. !.у5!ь оЕ СеПь 9. А1!огч йе Егохеи Ьас!еПа1 се1! ре!1ег 1гот 5гер 7 1о ЕЬалч аг гоогп 1елпрегагпге Еог 5 — 10 иппшея Кеяырепс! 1Ье ре!!ег !и 10 гп! оЕ !се-со!8 ТПяапстае ао!иг!оп. ТгапаЕег 1Ье аиарепа!оп го а 30-т1 р1ааОс асгечч-сар гиЪе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
