Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 22
Текст из файла (страница 22)
Ртгосо! 12г Веточа! о1'ЕсЬгг(!ит Вготгс(е)гот РсчА Ьу Ехггасг!оп ю(й Ог8ст!с Во!чепгз 1 73 МЕТНО0 Ех1гас11оп о1 0МА Ьо!с!1!оп Фо Кепсоче ЕФ1ссссспс ВгопсЫе 1. То сЬе ю!ипоп оу Р)ч(А т а 8!азз ог ро1ургору1епе шЪе, асЫ ап ег)иа! чо1шпе оу еПЬег ччасег-засигасег! п-Ъ|иапо! ог !зоату! а1соЬо!. С!озе сЬе сар ог" йе сиЪе НПЬс1у. 2. М!х йе ог8ап!с апг) аг)иеоиз рЬазез Ъу чогсехш8. 3. Сепсг!ги8е сЬе пихсше ас 4508 (1500 гргп !п а 5огчаП КТ-6000 сепсг!ги8е иПЬ ап Н1.-4 госог апг! 50-т! Ьис1геь) Гог 3 пиписез ас гоогп сетрегаСиге ог зсапг! (Ье зо1шюп ас гоогп сегпрегасиге ип01 сЬе ог8ашс апг! ациеоы рЬазез Ьаче зерагасег1. 4. ()зе а Разсеиг р(репе со сгапзУег сЬе иррег (ог8ашс) рЬазе, счЬ!сЬ гз посч а Ьеаипйл! г!еер р(п)г со!ог, со ап арргорпасе гчазсе сопсатег. 5.
Кереас йе ехсгассюп (5серз 1-4) уоиг со з(х игпез ипп1 аП сЬе р!п)г со1ог ТПзарреагз угогп Ьой сЬе аг!иеоиз рЬазе апг! ог8ашс рЬазез. Кепсосга! 01 С5С1 Йосп 1!се ОIЧА Яо!с!1!оп 6. Петоче сЬе СзС1 угот сЬе РХА ю1ипоп Ьу ейапо1 ргесгрпапоп (р1еазе СоПосч 5серз 7 сЬгоиПЬ 12), Ьу зр(п еПа!уяз сЬгоиПЬ а писгосопсепсгасог (Аписоп), ог Ъу ТПа1уяз очегшПЬс (16 Ьоигз) а8атзС 2!Пега ог ТЕ (рН 8.0) (сЬап8е Ьи(уег угег)иепг1у). 1г" опе оу СЬе 1аССег Сзчо тесЬог)з !з изег), йеп ргосеег1 со 5сер 13. 7.
То ргессргсасе сЬе РХА ггогп сЬе СзС!-РХА ю1шюп, теаыге сЬе чо1шпе оу сЬе СзС1 ю1исюп, агЫ сЬгее чо!итез оу Н О, апд ппх сЬе зо1ипоп счеП. ТЫз агЫ(сюп й!осез сЬе СзС! апд ргечеогз ргес(р(гаг(оп о(йе за1с Ьу егЬапо!. 8. АгЫ 8 чо1шпез оС есЬапо! (! чо!шпе )з ег(иа! со йас ог йе СзС1-РЫА ю1иПоп рпог со й1иПоп сч)сЬ Н,О т 5сер 7) со йе РЬСА зо!ипоп апг) пих счеП. 5соге йе гпгхсше гог ас 1еазс 15 пипшез ас 4 С. Н(8Ьег гесочепез о( РЫА сап Ье геа!(гег( !( йе ргесгргсасюп геаспоп ь апоччег! со оссш очегп(8Ьс ас4 С А са4РОКТА(з(Т СзС! ргес(рпагез П йе ейапо!к зо!ииоп о( РЧА !з згогег( аг -20оС.
9. СоПесс йе ргес)рпасе оу РХА Ьу сепспйл8апоп ас 20,0008 (13,000 гргп гп а 5огчаП 55-34 гоСог) Сог 15 пипиСез аС 4'С. 10. Ресапс йе зирегпасапс со а СгезЬ сепсг!Ти8е сиЪе. АгЫ ап ег!иа! чо1шпе оГ аЪю1исе ейапо1 со сЬе юрегпасапс. 5соге йе пихсиге сог ас 1еазс 15 пиписез ас 4'С апг1 сЬеп соПесс йе ргес!рпасе оу РХА Ьу сепсг!Си8ас!оп ас 20,0008 (13,000 гргп гп а 5огчаП 55-34 госог) 1ог 15 гспписез. Ссог а!! о( сЬе р!азгоЫ РЬСА (з гесочегег) ю йе 8гя ргесгргсасюп, Ьепсе йе агЫйоп о( а зесоог( ЪассЬ о( ейапо! (Н(!8егоап апг! Мо!1ег ! 997). 11.
ЧгазЬ сЬе сччо РХА ргесгриасез зч(сЬ 70агЬ ейапо1. Кеточе аз пшсЬ оу йе 7088 есЬапо1 аз розяЫе апг) йеп аПозч апу гегпашш8 Пи)д со ечарогасе ас гоогп сегпрегашге. 12. Рсзю1че сЬе ргес!рпасег1 Р)з(А !п 2 пс1 ог" Н О ог ТЕ (рН 8.0). рог РЫА зег(оепс(о8, сЬе РЬСА зЬоиЫ Ье г((ззо!чег( (о Н О. ТЕ (рН 8.0) ь а Ъессег ориоп с( гЬе РЫА Н со Ье згогег( (ог а!оп8 репой о( снпе. Кегпоча! о1 ЕЙМягп Вготйе ггогп 0МА Ьу! оп-ехсЬапце СЬгогпа1оцгарйу Е тнв3им вком3ое млч ве кемочго гком 3)ЬЗА РОК!к!го гЬгоикЬ а СаС! Кгайепг Ьу юпехсЬапде сЬготагокгарЬу.
ТЬе СхС1 35 хиЪае~)пепг1у геточес1 Ьу ргесгрпабоп ичгЬ ейапо!. Рог ап а1гегпа3гче гпегЬог3 Еог гегпоча1 оЕ СаС1 Ьу гереасес3 ехсгасгюп чч33Ь огкап)с хо1чепп, р1еахе хее РгоГосо1 12. МАТЕгс3А35 СА3)ТЗОМ: Р1еаяе хее Аррепг33х 72 3ог арргорпаге Ьапг313пе о3 та!ее!а!5 гпаг3гег3 гч33Ь <! >. Войегв апг3 Ьо!о6опв Р!еахе хее Аррепг33х 7 Гог сотропепгх о3 а!ос!с ао3ипопх, Ьо33егх, апг3 геакеп35. 373!иге а!ос!с ьо3опопх 3о 3Ье арргорпа3е сопсеп3гапопа.
Ейало! НС3 Г7 39) <3> 3'ч'аС! Г5 М) РЬело! <3> ОРГюпа1, р!саге гее 5Гер 9. РЬело3гсЬ)огоуогт 37:7, ч3ч) <3> Орвопа1, р3еаге атее 5гер 9. ТЕ ГРН В.0) ТЕЬ3 Ьи37ег ТЕЬ3 Ьи73ег солга3л)лк 0,2% хог33ит аг)с3е < ! > Зх3ос!е1с АсиЬ апс3 О!коппс!ео7Ыев Е753А ьатр)о, риг373ес3 ГЬгоиеЬ Сяс! Вгасвепс 3)ье гпагепа1 Ггою е3гвег 5гер 7 о3 Ргогосо! !О ог Веер 5 о3 Ргогосо! ! ! от гЬЬ сваргег. Сеп7г1йдев апг$ гсоФогв 5огча33 55-34 гогог ог ег3и3ча)елг прес!а! Е33о3рп7епт Егоччех АС50ЧМХВ 3700-200 с3гу теьЬ 5!ге) 3)огчех АС50ЪЧ-Х8, а сагюп ехсЬапае гевал, Ь ача3!аЫе Ггогп Вю-Каа 1.76 СЬаргег 1: Р!алт!г)л аплс ТЬегг 1!леуп!пелл ги Мо!ееи!аг С!отп8 С!аее иоо! )сесгасгоплеСег (орг!опа!) А!сЬопВЬ пос еееепба1, а ге!гассогпесег ь ехсгегпе!у пее001 !ог ееп|папп8 сЬе лСепелсу о! СеС! ео!шюпе, МЕТНО0 1.
Веуоге ияп8, есри!1Ъгасе йе Ролчех АС50 геяп: а. 5с)г -20 8 01 Елолчех АО50 1и -100 ш1 оу 1 м Ь!аС! Еог 5 пиписея А11олч йе геяп со еес- с1е, апг! гегпоче сЬе еирегпасапс Ъу аер)гас!оп. Ь. АоЫ -100 гп1 011 Сл НС1, апс! аЕг йе 91иггу 1ог а ЕлгСЬег 5 пипиСея АЕа)и а11олч йе геяп со еесс1е, апс1 гепюче йе ырегпасапс Ъу аерсгасюп.
с. СопЕпие йе ргосеке ъч)сЬ ичо ъчаеЬеь сч)сЬ Н О !100 пс) еасЬ), ГоПолчег1 Ьу опе лчаеЬ лч)СЬ 100 ги1 01 ТЕЬ! Ьи)уег. с1. 5соге сЬе ес)ш11Ьгасед геяп ас 4'С !и ТЕЬ! Ъийег сопла)п)и8 0.288 еос)1шп ахЫе. 2. Сопл!спас а 1-гп1 со1шпп 011Эолчех АО50 ш а Раесеиг рлрессе ае ьЬолчп ли Р18иге 1-9. 3. Кебиче СЬе Ьи)уег аЬоче йе геяп, апг) г!пее йе со!шип лч)СЬ 2 со1шпп чо1игиеа 01 ТЕ !РН 8.0). АРР1у йе ю106оп 01 )лс!А сои са)и)и8 есЬ!йшп ЬгогпЫе апс1 СеС! г)!гесс!у со йе геяп.
4. 1пипес!)асе!у Ье81п со1!есЕп8 сЬе ейиепс Сгош сЬе со1шпп. Айег а11 оусЬе 1!1)А ео106оп Ьае епсегес1 йе со1шпп, лчаеЬ йе геяп лч)сЬ 1.2 со1шпп чо!шпее оЕТЕ !РН 8.0) апд сопЕгпле со со1!есс йе е1иасе шсо а 30-ш! Согех шЬе. 5. Аусег сЬе со1шпп Ьае гип с1гу, гИисе сЬе е!пасе ъч)сЬ 2.5 со1шпп чо1шпее 01 Н,О. Ьоаег оопех АО50 егеп!е 9!еее воо! Е1СС!11Е 1-9 Кегпоча! о! ЕСЫйопл ВгогаЫе !гога 01ЧА Ьу СЬгоилаСо га Ьу СЬгои Ь Слоччех АС50 Р!еаее еее 5сер с !ог г)еса!!я Ргогосо! 13: Яеточа( оЕЕгЬ!г)(ат Вгот(г(еЕгот Рс)А Ьу 1оп-ехсЬап8е СБтотаго8гарЬу 1.77 6. Ргес!рЬасе сЬе РХА Ьу ае)йп8 е(8Ьс чо!шпее оЕ есЬапо1 Ео!!осев Ьу !псиЪасюп Еог 15 пипи!ее аг 4 С. Со11есг йе РЬ)А ЬУ сепгг)Еи8аС!оп аг 17,000ч (12,000 гРгп !и а 5огча11 55-34 госог) Еог 15 ш(пи!ее ас 4'С.
7. Ресапс сЬе аирегпасапс со а Егер сепсг!Еи8е сиЬе. АсЫ ап ее!иа! чо1шпе оЕ аЬао1исе ейапо1 со сЬе яирегпасапс. 5соге йе пихшге Еог ас 1еаяс 15 пипи!ее ас 4"С апе1 сЬеп со!1есс йе ргесгрЬасе оЕ РЬ)А Ьу сепспЕица6оп ас 20,000о (13,000 грш )и а 5огча1! 55-34 госог) Еог 15 пипигея. Ь)ос а1! оЕ сЬе р!аяпгЫ РЬСА Ь гесочегее! !п сЬе 0гес ргес!р!саиоп, Ьепсе сЬе айг)сс!оп ос а еесопй ЬассЬ ос есЬапо! (Н!!г)егоап апе! Мп!1ег 1997). 8. Ь'ааЬ сЬе съчо РЬ)А ргессрЬасея сч!сЬ 709'о есЬапо1. сеешоче ая пшсЬ ак рояе4Ые оЕ сЬе 709е есЬапо1 апе) йеп аПоъч апу геша!п(п8 6иЫ со ечарогасе ас гоогп сегпрегасиге.
9. Р(его!че сЬе ргес)р(!а!ее) РЬ)А ш 2 гп1 оЕ Н,О ог ТЕ (рН 8.0). рог РЬСА еецпепссп8, сЬе РЬСА ьЬоц!гС Ъе йеео!чей ю Н,О. ТЕ (рН 8.0) ь а Ъеиег орпоп !Е сЬе РЬСА ы со Ье есогед Еог а 1оп8 регсод оЕ снпе. 10. 1Е сЬе геяиарепс!ес) РсчА сопсашь а!ци(6сапс сргап66еа оЕ ейЫшш ЪгогпЫе, аь )ие)8ес! !гоги Ья со1ог ог (ся еш!ааюп оЕ 6иогеьсепсе счЬеп 111иш(пасес! Ьу 11Сг 118Ы, ехсгасс йе яо1и6оп опсе сч!сЬ рЬепо1 апе! опсе сч)сЬ рЬепоЬсЫогоЕопп, апс! йеп а8аш ргес)рбасе сЬе РХА сч!сЬ ейапо1. 11. Метисе сЬе ОР оЕ сЬе 6па! ао!и6оп оЕ РЬ)А апс! са1си!асе йе сопсепсга6оп оЕ РЫА.
5соге сЬе РЬ)А ш а119иоса ас — 20'С. Рго1осо! 14 Кегпоча! о1 5гпа!! Ггацгпепй~ ог Мыс!е!с Асс! 1гогп Ргерага6опь о1 Р!аьпиМ ЕИЧА Ьу Сеп1г~1ица6оп ЙгоицЬ МаС! опт!м РкЕРЛКЛт!О!чЬ ое РГЛЬмв РНЛ лке со(чтлм!гчлтео го чагу!пц г!еагееь Ьу япа11 Егадшепгь оЕ КХА апг! РХА, г!ег!чег! е!йег Егош йе Ьасгегга1 сЬгогпоьогпе ог й.огп ЬгоКеп р1аяпЫ гпо!есо1еь. АИЬонаЬ гЬе чче!ВЬг оЕ йеье сопгапнпапгь гь нана!1у !очч, гЬе!г пшпЪег сап Ъе !агае апг! сап сопгпЪнге ыВп!Егсапг1у го йе гога1 пнгпЬег оЕ 5' апг! 3' гегпнп! ш гЬе ргерагагюп. Рог ьоше рнгроьеь (е.д., г!!цеьг!оп чй(Ь ВА1. 31, !аЪе!!пд гЬе 5' гегпнш оЕ геыпсгюп епгугпе Егацгпепо оЕ р1аяпЫ Р)ч)А чч!ГЬ Ъас(епорЬаце Т4 ро!упнс1еоГЫе Рйпаье, апг) асЫ!пц Са!!ь Го гЬе 3' гегппп! ичгЬ гегпппа! 6апь(егаье), К !ь еььепба! го оЬсаш РМА ргерагагюпь гЬаг аге Егее о( 1оъчгпо!есн1аг-ьче!цЬ! сопгапнпапгь.
ТЬе аЪьепсе оЕ гЬеье согпропепгь !ь а1ьо г!еь!гап!е ьчЬеп йе РЕ4А !ь со Ье ньес1 Еог ьег!непс!пе апг! агпр11йсагюп Ъу РСК. Р1аяпЫь рнййег) Ъу сЬгошагодгарЬу оп сопппегс!а1 геыпь аге ньпа11у сопгаш!пасег! го а 1еььег ехсепг гЬап р1аьш!6ь ргерагес1 Ьу гЬе а!)са!!пе ог Ьо!1!па ше(Ьог!ь (е.В., р1еаье ьее 5сЫееЕ апг! Ненпапп 1993). Сопгапнпайоп Ьу Егарпепгь оЕ ппс1ек асЫь сап Ье гег!нсег! го ап ассергаЫе )ече! Ъу сепгг!Енцаг!оп гЬгонВЬ 1 м ьог!!шп сЫог!йе. ТЬ!ь шегЬог1, г!еыапег! го гешоче ыпа11 Егачгпепп оЕ КМА Егош р1аьш!д ргерагаг!опь, иаь г!еч!ьег! Ьу Впап 5еег! ьчЬеп Ье хаь а ьшг1епг аг Нагчагг! !)и!четы!у.
рог огЬег шегЬог!ь го ас)Вече йеье епйы р!еаье ьее Ргососо1ь !5 агн1 16. МАТЕВ!АЕБ ВиЕЕегь апг! Бо1и6опь Р1еаье ьее Аррепсйх ! Еог сошропепгь о( ьгос!г ьо1о6опь, Ьойегь, апд геадепгь. Р!1о!е ьгос)г ьо1о6опь !о !Ье арргорг!а!е сопсепгга!!опь. Ейапо! Л)аС! (т М) т ТЕ (рН 8. О) 5ог((игп асегаге (3 м, рН 5.2) ТЕ (рН Я. О) Епкугпеь апг! ВиЕЕегь Рмаье-Егее Рапсгеайс КЛ)аье Ргогосо! 74: Кеточа! 07 5таП Рго8телгл оГАГис!е!с АсЫГгот Р!штЫ РР7А Ьу Селгг!Ги8аг!ол 179 !ь)ос!е!с АсЫВ апс! О!коппс!еоГЫе5 РА7А хаглр)е, рис!Вес) йгоиВЬ СаС! Вгагоелг Оае гоагепа! Глот е!1Ьег 5гер 14 оГ ргогосо! ! 2 ог Веер 1 ! оГ ргососо! 13 ог гЬ!а сЬаргег.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
