Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 24
Текст из файла (страница 24)
1Е а Р!н!А Ега8шепс саггуш8 ВатН! апт! ВфП сегпиш 1а 118асет! 1псо а чеесог йас Ьаа Ьееп с!еаче|Е нн1|Ь йе залпе ссчо епхушея йеи йе Еоге18п РХА сап Ъе 1пьегсет! 1и еаЬег огсепсасюп. Нонтечег, 1Е опе оЕ|Ье стчо геа|Пссюп епхушеь 1а 1пс1итсе|1 1и |Ье 118ассоп пихсиге, ог 1Е |Ье епхугпе 1а пает! со е68еьс сЬе 118асет! РХА Ьесоге сгапьЕопиа6оп, |Ьеп оп1у сЬоье 118асюп ечепса |и ннЬ1сЬ йе ВатН! епт! 1а !о1пе|Е со сЬе Вч111 еп|Е апт$ чссе чегьа (счЬ1еЬ ссевсгоуа |Ье гесо8пбюп ясеа оЕ Ьой епхушеь) сч111 81че Пае со гесошЪ|папс рготсисып Е.
го!6 ТЬ1а ьсгасе8у са!сев атсчапса8е оЕ |Ье оЬьегнас|ои йас с1оае|Е ссгси1аг РЫАь сгапьЕогш Ьассепа1 се!!а сч1|Ь а пшсЬ Ь|8Ьет 6ес!иепсу сЬап 11пеаг РХАя 'ттагсасюпа оп сЬ1з |Ьеше сап а1|ю Ье пает! со 1шрточе сЬе ейксепсу оЕ с1опсп8 Ыипс-епт!ет! Р!ч!Аз (р1еаье атее Ргососо! 196 Оссаяопа!!у, Ь Еа 1шроя1Ые Етпт! а яиссаЫе сошЬ1пасюп оЕ чессог, саг8ес РЫА, апт! геьспс6оп епхушеь йас нн111 а1!очч |Вгессюпа! с!ойп8.
ТЬеге аге ьечега1 ао!шюпа со сЬ1а ргоЫеш: ° 5упсЬес!с!!и!сеть ог а|!аргоса сап Ъе 1!Васе|! со йе сегпиш оЕ сЬе 1|пеапхе|1 р!аяп1|! апт!1ог Ега8шепс оЕ Еоге18п РХА (Еог ЕигсЬег |1еса11я р1еаье атее Ргососо1а 18 апт! 21 ап|1 йе 1пЕогшаСюп рапе! оп АРАРТО85Ь ° ТЬе Ега8шепс оЕ Еоге18п Рт !А сап Ье акр!1Е|ет! Ьу РСК ияп8 о118опис1еосстсе ргсшега йас а|Ы сЬе т1еягет! геясгксюп ясез со опе ог Ьой сегш1ш (р1еаье аее СЬарсег 8Ь ° РХА Ега8шепса тч1|Ь гесеааетЕ 3' сепи|ш сап Ье раг6аПу Ет!1ет! ш сопсго!1еС! геас6опз ияп8 йе К1епонн 6а8шепс оЕ Е.
го11 РХА ро1ушегаье! (р1еаае атее р18иге 1-1ОЬ Аь т!1|киаает! ш СЬарсег 9, СЬ|х ргосет!иге ойеп 8епетатеь сошр!ешептагу Сегш1ш Егош геа|Пс6оп ятеа СЬа| аге оСЬетчн1ае 1псошра6Ые, сЬиа Еас|!Ьа6п8 118асюп оЕ сЬе чессог апт! Еоге18п РХАя Весаиае раг6а1 6111п8 е1!шспасек |Ье аЬ|!иу оЕ сегш!п1 оп сЬе ааше пю1еси!е со раи сч1|Ь опе апойег, |Ье 6е- 1.86 СЬаргет 1: Р!аятгсБ апс! ТБетт 1Ле!и!петя !и Мо!еси(ат С1опгпе Мис!е)с АспЬ апе! О!фопис!ео6деь Месгот РХА (р!аят(с() роге(8п от !аг8е! РА!А Ета8теп! Ас1арсогя гпау Ъе асЫесс со йе саг8ес РХА ая с(еясг!Ъеб ш ргососо! 18 оЕ сЬЬ сЬарсег.
прес!а! Ее!о!ргпеп1 Ес)о(ртеп! Еот хрип-со!итп сЬтотасоцгарЬу Ся!а!ег ЪаГЬ ргеяес Го 76 С Ае!е!!6опа! РеацепЬ 61ер 7 оЕ Я(я рго!осо! тег)шгея СЬе геадепся !!я!ее! гп Ргогосо! 23, 24, 25, ог 26 оЕ йгя сЬарсег. МЕТНО0 1. Р)8еяс ЕЬе чессог (10 )с8) апс) Еоге(8п РХА сч(сЬ йе сччо арргорпасе геяспссюп епхутея. С!очес! сггси1аг р1аягпЫ чессогя аге ргерагегс Еог йгессюпа! с1опш8 Ьу й8еясюп счссЬ ьчо геяспссюп епгупгея сЬас с!еаче ас йЕЕегепс яесСиепсея апс! Веиегасе ййегепс сеппсш.
гЧЬегечег рояяЫе, сгу со ачоЖ ия!п8 геяспсбоп епхупсея сЬас с!еаче яч!йш 12 Ър о! еасЬ ойег ш йе пси16р1е с1опсп8 ясе. АЕсег опе оЕ сЬеяе ясея Ьая Ъееп с1еачей сЬе яесопс1 ясе яч!11 Ъе !осасес) соо ссояе со сЬе епсС оЕ сЬе 1спеаг РХА со а)!ояч е66ссепс аеача8е Ьу сЬе яесопсс еп ауте. Ап ехсе11епс саЬисасюп о! йе еВЬ с!епсу чбсЬ мгЫсЬ ййегепс геясгкиоп епхушея с1еаче ясея !осасе8 пеаг йе епс)я оЕ РХА пю1еси1ея и ргеяепсесс !и сЬе Аррепйх ог' йе Хечч Еп81апс! Вю1аЬя сага1о8 (ятсен.пеЪ.сош(пеЫ Егаисе сесЛ.Ьсгп!). аеас! йе гпапиЕасшгег'я шягисбопя со с)есегшспе !Е сЬе сячо геяспсбоп епгупсея стог!с оршпа!1у ш сЬе яапге й8еяс1оп ЪиЕЕег.
1! ю, й8еяюп о! сЬе чессог РХА сап Ье саггсесС оис япш1сапеопя!у чч!сЬ ЬосЬ епхупгея. 1Е йе си о геяспсбои епгугпея гесса!ге 6!ЕЕегепс ЪиЕЕегя, сс Ь Ьеяс со саггу ош йе й8еяоопя яесСиепс!а1!у.!и йа саяе, йе епсуте сЬас ргеЕегя йе !оячег сопсепсгабоп оЕ яа1с яЬои1гс Ье ияесС Ягяс. Ас йе епсС о! сЬе геассюп, апа!уге ап а1к!пос оНЬе РХА Ьу Ве1 е1ессгорЬогея!я со сопйпп йас а11 оЕ йе р1аяпЫ РХА Ьая Ьееп сопчегсег! Егош с!гси1аг со !шеаг пю1еси1ея. ТЬеп айыС СЬе яа1С сопсепСгаеюп арргорпаге!у апсС адд йе яесопсС епгупге.
2. РппЕу йе йцеясес) Еоге)8п Р)ч)А Ьу ехсгасссоп сч(сЬ рЬепоЬсЫого(опп апс) ясапс)агс) ейапо1 ргесср!Сагюп. Ререпйп8 оп сЬе ехрегипепс, и пгау Ье песеяяагу ог г!ея!гаЫе ю сяо1асе йе саг8ес Ега8шепс(я) оЕ Еоге!Вп РХА Ьу пеисга! а8агояе от ро!уасгу!агптае Ве! е1ессгорЬогея!я ая сСеясг1ЪесС ш СЛарсег а. ТЫя рипйсасюп Ь Вепега!!у с)опе ччЬеп йеге аге тапу геяспссюп Ега8шепся сп сЬе ргератасюп оЕ Еоге!Вп РХА сЛас сап! !Васе со сЬе чессог.
КасЬег йап ясгееп!п8!аг8е пшпЬегя оЕ сгапя(оппапп Еог йе г!ея!гесС с1опе(я), зпапу спчея68асогя ргеЕег со еппсЬ Еог сЬе Согес8п яепиепсея оЕ ипегеяс Ье(оге 1!Вас!оп, е.8., Ьу а8агояе Ве1 е!ессгорЬогеяя. 3. РипЕу йе чессог РХА Ьу ярпп-со!шпп сЬготасо8гарЬу Ео1!осчес) Ьу ясапс)агс) ейапо! ргес)р)сас)оп. ТЫя ргосес!иге е1ип!пасся Егогп йе чессог ргерагабоп йе япа1! Ега8шепс оЕ РХА ВепегасесС Ьу й8еябп8 йе р!аяпта ас ско с!ояе1у ярасесС геясгкбоп яиея к!сЬ!п йе гпи16р!е с1ошп8 ясе.
4. ссесопяс)сисе ЕЬе ргес!р(сасес) РХАя яерагасе1у ш ТЕ (рН 8.0) ас а сопсепсгасюп оЕ -100 р8йп1. Са1сп!асе йе сопсепсгас!оп оЕ сЬе РХА (!п рпю1е(гп1), аяяпсп!п8 йас 1 Ър Ьая а таях оЕ 660 с1а1сопя. Сопйпп йе арргохипасе соисепсгасюп оЕ йе ско РХАя Ьу апа1ухгп8 а!био!я Ьу а8агояе Ве! е1ессорЬогеяя. 5. ТгапяЕег арргорПасе апюипся оЕ сЬе РМАя со ясеП1е 0.5-пс! гп!сгоЕиие ЕНЬея ая Ео!1осчя: ТиЬе РХА А агк1 Р чессог [30 6по1ея [-100 пи)) В спвегс [Еоге!ап) [30 6по!ея [- 10 пВ[) Сапс[ Е чессог [30 6по1ея) р!сь !пяегс (Еоге!ап) (30 6по1ев) Р яирегЬе!ка1 чессог (3 6по1ея [-10 пц[) ТЬе спо!аг гасю оЕ р1аяпЫ чеесог со !пяегс РХА 6а5шепс вЬоиЫ Ье -1:1 ш сЬе 65ас!оп геаесюп. ТЬе 6па) )3ХА сопсепсга6оп вЬои16 Ъе -10 пфН1.
а. ТоТиЬеяА,В,апс) С асЫ: 10х !диас!оп ЪиЕЕег Вассег!орЬаие Т4 РХА 1!паве 10 сп54 АТР НО Ь. ТоТиЬея Раис! Е,асЫ: 1 0 Н! 0.1 всге!вя ип6 1 0 Н) со 10 Н1 !ОН! !.О Н! Со 10 Н! 6. !псиЪаге СЬе геасС!оп ппхСигея очаги!ВЬС аС 1б'С ог Еог 4 Ьоигя аС 20 С. 7. ТгапяЕопп согпресепс Е. со!! ипсЬ сИис!опя оЕ еасЬ оЕ сЬе !!Вас!оп геас6опя ая с[еясг!Ъес[ ш Ргососо! 23, 24, 25, ог 26. Ая сои!го!я, !пс!ис[е [сповчп апюипь оЕ а агапе[асс[ ргерага6оп оЕ яирегЬе1ка! р1аяпЫ РХА со сЬес)с йе ейк!епсу оЕ сгапяЕогпсас!оп. ТиЬе РХА чессог спяегс чесгог апс[ шяегг чеегог нессог апс) шяегс я ярегЬе1ка1 чегго г 'ТгапвЕоппапь аг!в!па Егогп !!аеас!оп оЕ чессог РХА а!опе аге г)ие есйег со Еас1иге оЕ опе ог Ьой гевспссюп епс)опас!еавев со с)!аеас сЬе РХА со согпр!е6оп ог со 1!аас!оп оЕ сЬе чессог со геяЫиа1 апсоипь оЕсЬе япа1! Егадшепс оЕ йе пш!Ор1е е!оп!па вие.
А В С Р Е Р Ргосого! 17: Рсгегбопа! С!ои!пч тсо Р!аятЫ Сгегсогя 1.87 10х !айаг!оп Ъийег 10 псм АТР НО по РХА !!ааяе ТЬе РХА Егаашепсв сап Ье асЫео со сЬе шЪев соаесЬег сч!сЬ йе Н,О апс) йеп счаггпег) со 45'С Еог 5 гшпшев со гпе1с апу соЬеяче септпш йас Ьаче геаппеа1е6 диг!пц Егацгпепс ргера- гасюп. С!6!1 сЬе ТсХА во!и6оп со О'С Ьесоге йе гегпа!пбег оЕ йе 1!5ас!оп геацепсв аге асЫео.
То ас!Вече сЬе гпахипшп еЕ6ссепсу оЕ !!дас!оп, вес ир йе геассюпв !и ав япа11 а чо1ише ав рова!Ые 15-10 Н1). АгЫ!п5 АТР ав а сошропепс оЕ сЬе 1Ох 1!цас!оп ЪиКег 1еачев гпоге чо1шпе Еог чеесог ог Еоге!дп РХА ш сЬе геассюп ппхсиге. 5огпе сопппегсса! !!5аве Ъийегв сопса!и АТР. вУЬеп иыпа висЬ Ъийегв, йе адрбсюп оЕ АТР Ь по !опрев геои!гес). Рог а с)еуш!с!оп оЕ 'вуе!вв ишь, р!еаве все йе шсоппасюп рапе! оп РХА С.!СА5Е5. 1лцаяе Ехрессег[ пшпЬег оЕ сгапяЕогшес[ со!оп!ея -0 [-104 Еесчег сЬап ТиЪе Р) ' 0 -10-Ео!д пюге йап ТиЪе А ог Р -0 [-104 Еесчег сЬап ТиЪе Р) яогпе, Ъ|лс Ееъчег йап ТиЪе С )2 х 10Я РГО1ОСО~ 18 АйасЬ~пц Адар1огь 1о Рго1гис~~пд Тептпп> р котосос ! у !5 ельпл моо!пео то лссоммоолте гЬе асЫ/гюп о/ ап адар!от го а ЭЬ/А 6аВгпепг ъчгЬ ргоггид/па епда.
Адар!ого гпау Ье ригсЬааес1 ш Ъой рЬоарЬогу1агес1 апс1 ипрЬоарЬогу1агед Еогша /Ье., те)гЬ рЬоарЬаге геядиеа ог Ьудгоху! агоира аг гЬе/г 5' сегпип1; р1еаае аее гЬе /п/оппагюп рапе! оп АОАРТОа5 апс1 ТаЬ)е 1-13. Весаиае 0Ь/А 11Ваае гецшгеа 5-рЬоарЬогу1 геппшг, ипрЬоарЬогу!агед ас/аргоса пшаг Ъе гпод16ед Ъе/оге иае Ьу !тапа/егг/пд гЬе у-рЬоарЬаге 6 ого АТР го 1Ье 5'-Ьус1гоху! агоир. ТЬ/в геасбоп 1а сага!умед Ъу 1Ье Ьасгег)орЬаае-Т4-епсодед епкугпе ро1упис1еоггде Ыпаае. 11 рЬоарЬогу1агед адар!оп аге ршсЬааей огп/г 5гер 1 /рЬоарЬогу!а6оп егер) оу йе ргогосо1, апс1 Ъеа/п теЬЬ Вгер 2. МАТЕК!А15 САНТ/ОХ: Р!еаае аее Аррепд/х 12 /ог арргорпате Ьапд//па о! та1ег/а1а гпаг1сед ччтЬ <1>. Вобегь апс! ао!ц6опь Р1еаае аее Аррепд!х ! /ог сотропепаа о/ атос/с ьо!опоив, Ьи!/ега, апд геаееп/ь.
011иге к1ос/с ьо1и6опь го 1Ье арргорпа1е сопсеп/га6опа. АТР /10 тм) Ош/г АТР /гого йе 11аагюп геасгюп ш 5гер 2 1Т йе 11ааг/оп Ьо//ег сопга/ое АТР. Е/Ьапо! 10х Бп/сег /дпазе ЬиПег РЬепо/ссЬ!ого/огт /1:1, г/г) <! > 5од!ит асе/а/е /3 М, рН 5.2) ТЕ /рН В.О! Епкугпея апг! Войегь Вас/ег!орЬаае Т4 О/4А //ааае Р!еаее еее гЬе ш/оппадоо раое! оп 0МА 11СА5Е5.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
