Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 23
Текст из файла (страница 23)
Сеп1пГодек апс$ Ко1огк Вес)сглал 5чч50. 7 гогог ог ес)ива)елг чч71Ь арргорг)а1е 1иЬех 5огчаП 55-34 гогог ог едиота)ел1 МЕТНО0 1. Меаанге йе чо!шпе оГйе р1аяпЫ ргерагаВоп. АсЫ 0.1 чо!шпе оГ 3 Ьг аойшп асе1а1е (РН 5.2) апй 2 чо!шпек оГ егЬапо!. 5!иге 1Ье пнхшге Гог 30 пнпшеа аг 4'С. 2. Кесочег йе ргеслрпаге оГпнс!ек асЫа Ьу сеп1ПГи8а1юп аг )10000ч (>9!00 гргп !и а 5огча11 55-34 гогог) Гог 15 пнин!ее аг 4'С. Ресапг аа пнлсЬ оГ 1Ье ялрегпа1ап1 аа роаа)Ые, апс1 1Ьеп а!иге 1Ье ореп гнЬе оп 1Ье ЬепсЬ Гог а Геныч ш!ингеа 1о а11огч 1Ье егЬапо! го ечарогаге. 3.
Р)аао!че йе г)ашр ре11ег !и 0.5 — 1.0 гп1 оГ ТЕ (РН 8.0). ТЬе сопсепггаВоп о! гЬе р!ааплЫ 777ЧА аЬоп!Й Ье >100 )л87пл!. 4. АсЫ РХаае-Ггее КЫаае го а Епа1 сопсепггаг!оп Го !О )л87гп!. 1пснЬаге 1Ье пнхгнге Гог ! Ьонг аг гоош!егпрега1нге. 5. АсЫ 4 ш1 оГ 1 Ьг ЫаС! !и ТЕ (РН 8.0) го а Весйпап Я1750.! сепгпй8е гнЬе (ог Ьа ес!шча1епг). !)ае ап ангошаг)с р)регге лч!1Ь а с)!ароааЫе 1!р го 1ауег нр го ! гп1 оГ1Ье р1аяпЫ ргерагагюп оп гор оГйе ! м ХаС! ао1нг!оп. !Гпесеааагу, 611 йе гнЬе н4й ТЕ (РН 8.0). 6.
СепгНЬл8е 1Ье ао1нпоп а1 150,000ч (40,000 грш ш а Весйпап Яч'50.! гогог) Гог 6 Ьонга аг 20 С. СагеГн11у Йасагг) йе анрегпа1ап1. ТЬе р!аагпЫ 7ЛЬ7А аег7!плепга го гЬе Ьоного оГ гЬе гпЪе лчЫ!е йе о!!8ог1Ьоппс!еогЫеа апл! япа!1 Ггарпепга о! 7ЛЬ7А геена!п Ы гЬе апрегпасапг. 7. Р!аао!че йе ре!1ег оГР1аяпЫ РЬ)А !и 0.5 ш1 оГТЕ (РН 8.0). АсЫ 50 )л! оГ 3 М аос)!шп асегаге (РН 5.2), апс1 ггапаГег 1Ье РЬ)А ао1нЕоп 1о а пнсгоГн8е 1нЪе.
8. Ргес)рнаге йе РЬГА Ьу ас1сВгюп оГ 2 чо1шпеа оГ егЬапо1, апд агоге 1Ье ейапо1к ао1нг!оп Гог 10 ш!пнгеа аг 4'С. Йесочег йе РХА Ъу сеп1НЫ8апоп а1 гпаяпппп ареег! 1ог 15 ш)пнгеа а1 4'С !и а ш!сгоГн8е. Ресапг аа пшсЬ оГ 1Ье анрегпагап1 аа роаа)Ые аист йеп а!иге йе ореп гнЪе оп 1Ье ЬепсЬ !ог а Геъч пнин!ее го а11олч 1Ье егЬапо1 го ечарога1е. 9. РгяоЬе йе г)ашр ре!1егоГРХА !п ТЕ (РН 8.0).
Рго1осо! 15 Кегпо~а! о1 5гпа!! Ггаупеп1ь ог Мыс!е!с Асс! ггогп Ргерага6опь о1 Р!аттис! 0МА Ьу СЬгогпа1оцгарйу йгоицЬ Ьерйасгу! 5-1000 с нкомлтосклрнч тнкоисн 5в нлскч. 5-1000 !а йе гпегЬос) оЕ сЬоке (о аерага!е р1аяиЫ РЬ(А !тоги яиа1!ег арес!еь оЕ пис1еЫ асЫ (ЬогЬ РХА апс( КЬ(А). ТЬ~а ргоседиге Еог геточа! оЕ яиа1! пис!е!с аскЬ, ог!В!па!!у оЬга!пес! Егот В РеЬ!ого апс1 Н. боойиаи аг йе МаааасЬиаегга бепега! Ноарпа1 !и Воагоп, га !исогрогагес! !пго а рарег риЫ!аЬес) Ъу Согпег-Мап!иег ег а1. ! ! 987).
Весаиае и !а ипроаа!Ые го геточе а1! ггасеа оЕ р!аяпЫ РХА (гоги йе со1 шип оЕ 5ерЬасгу! 5-1000, рагг!си!аг!у !и РСК, йасагс! еасЬ со1шии а(гег иае. МАТЕК!Ас$ САРТ1ОХ: Р1еаае аее Аррепг))х 12 Еог арргорг)а!е Ьапг)!!пк о( тагес)а1а тагхег) чч!!Ь <1). ВоЕЕегк апд йо1о6опь Р1еаае атее Лррепе)!х ! Еог сотропеп!а оЕ а!оса ао)и!1опа, Ьи((его, апе1 геацепси Р1!иГе агосК ьо!иоопа го гЬе арргорнаге сопсеп!гапопа. ВготорЬепо( Ь(ие с(уе ьисгоае ао(ипоп Ейапо| РЬепо! <!) 5ерЬасгу! ег(и(!(Ьга((оп Ьи((ег 5осоигп асегаге (3 м, рН 5.2) ТЕ (рН В.О) соп(а!п!пе 20 !аВ(т! КЛ(аае А Се15 АВагоае де! (О. 7%) саа( т ТВЕ йос1е1с Асп15 апд О11еопос!ео6де5 РЕ4А иматр!е, рип((ес( йгоидЬ СаСI дгасоепГ Оае гоагеиа! (гого еЬЬег Бгер 14 о( Ргогосо! 12 ог 5гер !! о( Ргогосо1 !3 о( гЬ14 сЬаргег.
СепЕг1Еще5 апс1 КоЕог5 5огчаП 55-34 го!ос ог ес)и(ча!епг Ргогосо! 15: Кеточа! о~ 5та(! Рга8тепя ог')чгис1етсАси~ ог' Р!агттс( Р)чгА Ьу СЬ отагоу арЬу 881 прес!а! Ег!гл!ргглеп1 Со!иплп (7 х 70 ст) (ог 5ерЬасгу) геяп 5ерЬасгу) 5-7000 Ке! 77!!та!гоп геял (РЬагтасга) МЕТНО0 1. Ргераге а ! х 10-сгп со1шпп ол 5ерЬасту! 5-1000, ес!и!1!Ьгагес! !и 5ерЬасгу1 ес!ш1!Ьгаг!оп Ьий:ег. А со!шип ог' ЙЬ яге сап ассошгпоггаге >2 ш8 о! р1агшЫ РГЛА и а чо!шпе от 0.5 гп).
2. Меаюге гЬе чо!шпе оГ гЬе р!аяпЫ ргерага6оп. АсЫ 0.1 чо1шпе от 3 м юс)!шп асегаге (РН 5.2) апс1 2 чо1ишее ол егЬапо1. 5гоге йе тплхгиге лог 30 пипи!ее ас 4'С. 3. Кесочет гЬе ргеслр!гаге от" пис1е!с асЫа Ьу сепгт)ти8аг(оп аг >10,0008 (>9!00 грш !и а 5отча11 55-34 гогот) лог 15 ш!питера аг 4" С. Ргаш о(Т аь ппкЬ ол' йе ялрегпагапс аа роьяЫе, апс( гЬеп а!иге гЬе ореп гиЬе оп йе ЬепсЬ Гог а теле пипи!ее го а!!олч гЬе егЬапо1 го ечарогаге.
4. Р!аю1че гЬе с1алпр ре!1ег ол пис!ек аснЬ лп а ьгпа!1 чо)ише ((400 (л1) ол" ТЕ (рН 8.0) сопсалшп8 К)ч(аде А аг а 6па1 Р)ч)А сопсепггалюп ог" аг 1еая 100 )л8)ш1. 5. 1псиЬаге ГЬе ипхшге 1ог 1 Ьош аг гоогп гегпреташге. 6. Ехггасг йе ю1игюп опсе лч!гЬ ап ес!иа! чо1шпе ол рЬепо1 ег!и!1(Ъгагес! ш ТЕ (рН 8.0). 7. Кесочег гЬе ас(иеоиг 1ауег, апс( асЫ 100 )л! от' ЬгогпорЬепо1 Ыие с(уе юсгоае ю1и6оп. Ьауег ГЬе Ыие аг)пеона рЬаее оп ГЬе со1шпп оу 5ерЬасгу1 5-1000. 8. ЧгаьЬ гЬе РХА шсо гЬе со1шпп, апс1 арр1у а теъетчо!т ол 5ерЬасгу1 ес!ш!лЪга6оп ЪитТег. 1шгпес!(аге!у Ье8!п со!!ест(п8 0.5-ш1 (гастюпя 9. ллгЬеп 15 стас!!опа Ьаче Ъееп со1!естес!, с1аплр отТ йе Ъоиолп оГ йе со!шпп. Ас гЬ!а ага8е, гЬе Ыие с1уе аЬои18 Ьаче ггаче1ес1 аЪоиг Ьа1г гЬе 1еп87Ь от" йе со1шпп.
10. Апа1уке 10 )л! ог" еасЬ стас!!оп Ъу е!ессгорЬогее!к гЬгои8Ь а 0.79о а8агоье 8е! ог Ьу ейЫштп ЬгошЫе йиогегсепсе (р1еаае атее Аррепйх 9) го Ыеп6(у йе лгасг!опа сопгашш8 р1аяпЫ РХА. 11. Роо1 йе угас!!опт сопла!шп8 р1аяпЫ РХА, апс( гесочег гЬе РХА Ьу ргес!рКа8оп чч!гЬ 2 чо1- шпеа о(егЬапо1 (ог 10 ш!потел аг 4"С апс) сепгт((и8аг!оп аг 10,0008 (9200 гргп (и а 5отча11 55-34 го!от) (ог 15 ш!пи!ел ат 4'С.
12. Ресапг аь ишсЬ ол гЬе юрегпагапг аа роеяЫе, апс! йеп а!иге гЬе ореп гиЪе оп гЬе ЬепсЬ тот а леле пипи!ее го а!1очч йе егЬапо1 го ечарогаге. 13. Р!аю!че гЬе с(ашр ре11ег !и ТЕ (рН 8.0). Рго1осо~ 1б Кегпо~а! о1 5гпа!! Ггацгпеп1~ ог Мыс!е!с Асс! ггогп Ргерага6опь ог Р!аттис! ВМА Ьу Ргес~рйа6оп Ый ИЬ~игп СЫогМе | н тн!5 аотосог, тне ьерлаат!он ог Ргльмю !)ХА Тгош япа!1ег арес!еа оТ пис1егс асЫ (ЬогЬ Т)ХА апс1 КХА) )а Ьааес) оп йе е!!Т(егеп6а! ао1иЫ1!гу оГгЬе гтчо пис1егс асиЬ 1п ю1игюпа оу1(й)- шп сЫопс1е (ЫС1).
1!С! 14 а аггопа г1еЬуе!гаг!па геааепг йас 1отеега гЬе ао1иЫ1!гу оТ К!хА (Неагаг апс1 %поугас! 1961а,Ь) ап6 ппра ргогеша Тгош сЬгогпа6п (Копс!о ег а1. 1979). Сопгапипа6пе Ь!аЬ-шо!еси1аг-тее)аЬг КМА апд ргоге!па сап гЬегеГоге Ъе ргес)р!гасее! Тгош сгис!е р1аяп!с) ргерагаггопя Ъу Ь!аЬ сопсепггаггопк о( 1лС! апс1 гешоче6 Ъу !оге-ареег) сепгг)Еиааг!оп (е.а., р!еаае нее Кепс)о ес а1.
1991). ТЬе иае о( ЫС! ая а ае1есг!че ргес)р!гагог оЕ Ь!аЬ-гпо1еси1аг-тее!аЬт КЬ)А мчав Вгаг герогсес! ш 1963 Ьу ВоЬ ЪЯ!1(агпаоп апс1 со!1еааиеа (Ваг1оте ег а1. 1963). МАТЕ В! АЕ5 Войегь апд Ьо166опь Р1еаье аее Аррепс!1х 1 Еог согпропепра о! а!ос)с ао!ит!опа, Ьийега, апс) геааеппи сг1!иге атос!с ао!иг)опа !о !Ье арргориате сопсептга6опа. Е!)гапо! !юргорапо! Е)С! (4 ло 5ос))ит асегате (3 М, рН 5.2) ТЕ (рН 8.0) ТЕ (рН 8.0) сопта!п(па 20 ра)т! )с)с)аде А Мос1е>с АснЬ ап41 О1фопос!ео641еь 0)4А иматр)е, рипВес! 1ИгоиаЬ СыС! агас))епг т)ае п1агепа1 !гого еаЬег бгер 14 о! Ргогосо! 12 ог бгер н о! Ргогосо1 )3 о! га)а сЬаргес Сепггй!одев апс1 Во1огь 5огча)! 55-34 гоГог ог едигга)еп! 1.82 Ргососо! !6; Яеточа! оЕ5та!! Ргаетепгг оЕ)Час!ессАе!г! Егот Р!агтЫ Р)чА Ьу РгесЕР!гаг!оп 1.83 МЕТНО0 Меаапге сЬе чо1шпе оЕ сЬе р1аяпЫ ргерагасюп.
АсЫ 0.1 чо!шпе оЕ 3 счс аогйшп асесасе (РН 5.2) апг! 2 чо1шпеа оЕ есЬапо!. 5соге сЬе ппхспге Еог 30 пиписез ас 4"С. Кесочег йе ргесгрйасе оЕ ппс1ек аснЬ Ъу сепспйл8айоп ас >10,000е !>9100 грш ш а 5огчаП 55-34 госог) Еог! 5 ш!ппсеа аС 4'С. Ргагп оЕЕаа пшсЬ оЕйе апрегпасапс аа роаа!Ые, апг! сЬеп асоге сЬе ореп спЪе оп сЬе ЪепсЬ Еог а Еесч ш)ппсеь со аПон йе ейапо! со ечарогасе.
Рьзо1че сЬе г)ашр реПес ш 1 ш1 оЕ ТЕ (РН 8.0) сопса!и!пц КЫаае А ас а сопсепсгайоп оЕ >100 )г8)ш!. АсЫ 3 ш1 оЕ 4 хс 1лС! ао!пс!оп. 1псиЬасе йе ппхсше оп ке Еог 30 ппписея 5ерагасе сЬе р1аяпЫ РЫА Егош йе ргес!р!сасег) ппс1ек аснЬ Ьу сешпйп8айоп ас 12,000е (10,000 гргп ш а 5огчаП 55-34 госог) Еог 15 ппппсеа ас 4"С. ТгапаЕег сЬе апрегпасапс со а ЕгеаЬ сепсг!йл8е спЬе апгс асЫ 6 ш! оЕ !аоргорапо1.
АПотч сЬе р!аяпЫ РЫА со ргес!рйаСе Еог 30 ш!писеа ас гоогп сегпрегаспге. Кесочег сЬе ргес)р!сасег! р1аяпЫ РХА Ьу сепспйг8асюп ас 12,000е (10,000 грш ш а 5огчаП 55-34 госог) Еог! 5 ш!посев ас 4 С. СагеЕоПу гепюче сЬе ягрегпасапс апс! асЫ 5 — 10 пг1 оЕ 70% есЬапо! со йе спЪе. Чогсех йе шЬе Ъпейу, апг) сЬеп гесепспйс8е ас 12,000е Еог 10 ппписеа ас 4 С.
Саге6лПу гегпоче сЬе ягрегпасапс, апс1 асоге сЬе ореп сне оп сЬе ЪепсЬ сор Еог а Еесч ппписеа ипй1 йе есЬапо1 Ьаа ечарогасес1. РЬао!че сЬе с1агпр реПес оЕ Р)ч)А ш ТЕ (рН 8.0). 10. Рго1осо! 17 01гес6опа! С!огппц 1гйо Р!аятпс1 Чес1огь М о5т рсА5м|о често85 |тс соммом с|5е соятл|сс пш16р1е с!ошп8 а1сеа |Ьас Ьаче гесо8п1- 6оп ьет!иепсев Еог |папу сИЕегепс геасгксюп епхушея б1чеп сЬе 1аг8е чаПесу оЕ пш16р1е с1ошп8 ясеь сшгепс1у а| а11аЫе !ай |папу аь 46 ипн1це ясеа аге ргекепс ш ьотпе ро!у!!и!сетя е.8., р56280 6ош 1пн1сго8еп; ап|1 а6!1!оп8ег ро1у11п1сегь Ьа|е Ьееп аааешЫей Вгояиа 19926 Ь 1а а1шоьс аЬнауь роаа1Ые со Етпт! а чессог саггу1и8 геа|Пс6оп ясеа йас аге согпра6Ые счссЬ йе сегииш оЕ а раг6си1аг Ега8шепС оЕ Еоге18п Р!н!А. РЬес6опа1 с1ошп8 иаиа!1у тес!исгеыпсошра6Ые сегпиш ас йе орроясе ептЬ оЕ Ъой чеесот апт! саг8ес РХАя Но|нечет, |п сегса1п спкшпяапсея ебгессюпа1 с1ошп8 сап Ъе асЬ1ече<Е ннЬеп ЬосЬ сЬе саг8ес апс! р1аяпЫ Р!чсАа саггу 1|Еепс1са! сегшсп1 ас ЬосЬ епс!я рог ехашр1е, йе геь|Пс6оп епхушез ВатН! апт! ВфИ, ччЬ1сЬ гесо8п|хе т!1ЕЕегепс Ьехапис1еос1|Ее ьет!иепсеь 1ССАТСС ап|Е АСАТСТ, гезрес6че1у1, 8епегасе геяпссюп Ега8шепсх чч1|Ь Ыеп6са1 3' ргосгитс|п8 сегшсш.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
