Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 26
Текст из файла (страница 26)
!псиЬасе сЬе геасбоп гшхсигея очегп18Ьс ас 16"С ог Еог 4 Ьоигя ас 20'С. 7. ТгапяЕопп сотресепс Е, со6 ъчссЬ й1исюпя оЕ еасЬ оЕ сЬе 118асюп геас6опя, ие4п8 опе оЕ сЬе гпесЬос!я г!еяспЪес! 1п Ргососо!я 23 сЬгоиВЬ 26. Ая сопсго18, 1пс!и|1е 1|пои п агпоипся оЕ а ясапс!агс! ргерага6оп оЕ яирегЬе1ка! р!аяпЫ Р1ч!А со сЬес1| йе еЕВс|епсу оЕ сгапяЕоппасюп. ТиЬе РЬ!А Ы аяе Ех ессес! пшпЪег оЕ сгапяЕоппапь А ||ее|от' + В |пяегС С чессог' апс! тяегс + Р чессог' Е чессогс р чесгог' апс! тяегс б зирегЬе!Ыа1 чессог 'РерЬозрЬогу1асей с!со| ЙерЬоярЬогу1асей 'ТгапяЕоппаиь апяи8 йоги 1|8аиои оЕ |СерЬозрЬогу!асяс! чессог РЪСА а1опе аге сСие со !а|!- иге со гегиоче 5' геяЫиея с!ипи8 сгеасшепс и сй аПса!ше рЬоярЬасаяе. 1.92 СЬарсет 1: Р1азт|й ап|1 ТЬе1т Еуяеси1иеяя ш Мо!еси!ат С!ои1и8 -Оз 0 -5-Ео1|1 тоге сЬап ТиЬе р -0 -50-Ео16 пюге сЬап ТиЬе Р -50-Ео18 пюге йап ТиЪе Р 2 х 105 Рго1осо! 20 Оерйоьрйогу!акоп о1 Р!аьтМ УМА вмочат от тввм!нлт 5'-внов нлтв свои'5 мач вв клвнл то аирргея хе1г"-ПВат!оп апт| с|гси1ат|хатюп оГ р!аяпЫ РХА.
РинпВ ПВатюп ш члтто, РХА ПВаае ъч11 сага!ухе йе |оппатюп оГ а рЬохрЬосПеатег Ьопт| Ъетччееп ас))асепс пис1еотЫех оп1у 11опе пис1еотЫе сагк!ех а 5'-рЬохрЬате геыдие апс1 тЬе ойег сатнех а 3'-Ьус|гоху! тегпипия Пес!гси1ат!хат!оп оу р1аяпЫ РХА сап тЬегеЕоте Ъе ш!и!ппхес) Ъу геплоЫпВ йе 5'-рЬоарЬате геядиех |гош Ъой сетш|п! оГ йе р!аяпЫ РХА чч|тЬ аПса!ше рЬоарЬатахе (ВееЪигд ет а1.! 977; Н1т!сЬ ет а1, |977). Но мечет, а Гоге|пи Р)ч)А аеВгпепс лч!тЬ лпсасс 5'-тегпппа! рЬолрЬате геяс1иех сап Ье 1фагет| е|6с|епПу |п чиго то кЬе с|ерЬозрЬогу!асес) р1аяпЫ РХА то Вепегате ап ореп слгси!ат кпо1еси|е сопка!и!пВ тлчо и!с|сх !р1еахе хее В|Вите 1-1|). Весаихе тЬеае ореп слгси1аг РХА пю1еси1ех ггаплЕотш Е, соП пюге е|Плс|епс1у тЬап с)ерЬолрЬоку1атет|!шеаг РМА, пюат ог" тЬе ггапхуокшаптх аЬои1д, ш тЬеогу, сопталп гесошЬ|папт р1аяпЫя РеарЬе гь !оВ!са! арреа1, кпапу !пчел!!Вагита соппгпле то Ьаче с1оиЪь аЬоик тЬе ча1ие оЕ т|ерЬоарЬогу!аг!оп.
ТЬеге 1х по т|иеат!оп йат гекпоча1 оЕ тЬе 5'-рЬолрЬате гехЫиех хирргеяех гес|гси1анхатюп ок" 1лпеаг р1аяпЫ РХА апП тЬегеуоге сПпппьЬеа йе Ъас)сцгоипс) оЕ тгапа|отшес) Ьастет!а! со!оп!ех тЬат саггу "ешрту" р1аапйЬ. АП тоо утециепт1у, Ьолчечег, тЬеге |х а рагаПе1 десПпе |п йе пшпЬег ол со!оп!ех тЬат саггу тЬе с)еягет| гесогпЬ|папт. 1п асЫ!т!оп, аоше шчеа6- Васогх ЬеПече тЬат тЬе ргеаепсе оГ 5'-Ьут|гоху! Вгоира гпау 1еал! то ап !псгеаае лп тЬе лтес)иепсу оК геагтапВес) ог де1етет! с!опея Рог тЬеле геахопя гПгесПопа! с!оп!пц ь |Ье ргелеггес| шетЬос| ог с!оп)пВ ш р1ааш|сЬ лчЬепечег |Ье аррторпаге геяНсьоп ягех аге ачаПаЪ|е. РерЬохрЬогу1аПоп оГ |Ье честог ь полч гесопипепс1ес| оп!у ччЬеп: ° ТБе РХА тлетт то Ье с1опеИ Ь оп1у ача!!а|л|е т хта11 атоиитя 1п тЫх ятиатюп, тЬе тье ог а теп|о14 пю1аг ехсея ог" л!ерЬоарЬогу!атес| честог очег шхегт ччП! епялге йат аП ачаПаЪ|е !паегг |л ПВатес| то тЬе честог.
° И"тлеи йе ттапл~оттаптл ате то Ье лстеепет| Ьу теяПспоп епхуте л|!техт|оп оу" т!итртератат|оть о7р1тьтиЫ РХА. Весаихе ргерат!па р1аяпЫ РМА лтош пюке йап а дотеп ог тлчо япаП-аса!е си1тигеа оу Ьассепа ь тесПоия |Ье иле ол а с|ерЬохрЬогу1атед чессот ччП! епхиге а Ь|ВЬ лгет|иепсу оГ тЬе т|еыгед кесошЪ!паптл ш а япаП лашр!е ог тгапх|оппаптя ° ИтЬеп с1оптпц Ь|ипт-епт|ейЯа~тепь о7 РМА !р!еаае хее ртогосо1 |9). ° 17" а честит т)лат Бах Ьееп ртератет| Ьу с1еачаее лч|Й тлчо Ифетепт епгутеь депетател а 1ауе пят Ьет о| ттапфоттет! со1отея ТЬ|л лпсПсатеа е|йет тЬат опе ог тЬе тлчо епхушех ивет| то ргераке тЬе честог лаПес| то с1еаче йе РХА то солпр!етюп от тЬат тЬе ыпаП лтаВшепт ог' РЬ)А ге1еазес) |кош кЬе пилар!е с!оп|пВ яге Ьаа пот Ъееп гепючет! |гош йе честог ргерагаПоп Ъит 1.93 гддев1 чл1П геа1псеоп епгугпе (е.д., Вагпнд !Паг с1вачвв !ч~гйп Гне гпо!11р1е с!оп~од яге 5'р 5 он Тон 5'р ггеа1 чгао а1!га1!пв рноврнагавв 5'он 5'он вр вон Е!а ОКЕ 1-1! Ое Ьоа Ьог !а!!оп ! Пе гйаагагп 5Ьо!ча ГЬе иаЕ О! рЬоарЬа!аае !о ргЕчЕпг гес!гсц1аггаагюп о! чес!ог О!нА.
!пагеаг! !5!!пагад !пго !Ье чесгог. 1п ЬогЬ сааеа, йерЬоврЬогу!аг!оп о! гЬе чесгог сап Ъе ог' пае япсе гегпоча1 ог" 1Ье 5'-гегпипа1 рЬоарЬаге геаЫпеа ргечепга гесопаг!гпгюп оу с!паем с!гсп!аг р!аяпЫ !.!ХА5. РерЬоарЬогу1аг!оп !5, Ьогчечег, по! пее11ес1 ччЬеп с!оп!па РЬ1А Ггаупепга чч!!Ь согпр1егпепгагу ргосгпйпа епг15 ргочЫей гесогпЬ1пап15 аге 5сгеепе!1 Ьу и-согпр1егпепгаг!оп аког Ыепг16ей Ьу со1опу ЬуЬг!йкаг!оп !Ргогосо15 27 апг! 28). Весацае 1агае ппгпЬега о! со!оп!е5 гпау 1.94 СЬарсег Ь Р!агти15 апг! ТЬе!г с!геуи1пе55 ги Мо!еси!аг С1отпе ода!в гне Оерповрпогг!агеб р1авппе чвс1ог 1о Гпе гагре! ОНа сод апб р1а1в ие гпееягп Пе арргорпа!е ТАВЕЕ 1-8 Сопг86опь Еог 13ерЬоьрЬогу)а6оп оГ 5'-рЬоьрЬаге КеьЫиеь Егога ЕЗЬГА Еихуме/Амооиг Рек моек РЬГА Еиоь ЕисовАУГои Темеекатоке/ТГме ТУРЕ ОГ Т е ам 1Г9 о 5 0.01 иик С!Р' О,! иии 5АР 37"С!30 пипи!ел 37'С!60 пиишеь 5сргоггиг1108 О,! — 0.5 иип С!Рь ЗсрголплгВи8 0.5 иии 5АР 0.1-0.5 ипи С!Р ь В!ииг 0.2 иип 5АР 'Ааег ГЬе Ги1г~а! 30-ил!пиле ГпсиЬагюп, аьд а ьееопа а1влиог оГ С!Р еагугае апа соиОаие шеиЬаиоп Гог апойег 30 ишшгеь ал 37 "С.
ьА66 а ьесоад а!19иос оГ СГР Лиаг ЬеГоге Ье51ишиь Оле ГисиЬапои аг 55 С. 3. )АГЬеп г!!Веьг!Оп гь сошр1еге, ехггасг ЕЬе ьаплр1е опсе лчКЬ РЬепоЬсЫогоЕопп апс) гесочег йе Р)ч)А Ьу агапе)агг! ргеслрКа6оп ьч11Ь егЬапо1. 51оге ЕЬе еГЬапо1к 501шюп оп ке Еог 15 пппШЕ5. 4. Кесочег йе РХА Ъу сепгг!Е08аГ!оп аГ гпахппшп ьреег! Еог 10 ппппГеь аг 4'С ш а гпкгобл8е, апс1 г)1550!Уе ЕЬе РЬ)А гп 110 р1 оЕ 10 ш54 Тг)5-С! (РН 8.3).
Кеьегче 20 р! оЕ йе ЕГЫА ргерага6оп Еог 1агег ые аь а сапего! Ер!еаье ьее Ргогосо! 19). 5. То ЕЬе геша!п)п8 90 р! оЕ ЕЬе 1!пеапхес1 р1аьш!6 РЬ)А, асЫ 10 )л! оЕ 10х С!Р ог 10х 5АР Ьийег ап6 йе арргорпасе апюппг оЕ са1Е шгеь6па1 РЬоьрЬагаье (С1Р) ог 5Ьпгпр а))га11пе РЬоьРЬагаье (5АР) апг) ЕпсиЪаге аь с1еьсг)Ьег! Гп ТаЫе 1-8. 6. !пасбчаге йе РЬоьрЬагаье ас6чйу: То шас6чаге С!Р аг ЕЬе епс1 оЕ 1Ье шсиЬабоп репосЬ АГЫ 5Р5 апс1 ЕРТА (рН 8.0) со Епа1 сопсепггагюпь оЕ 0.5оЬ апг) 5 шм, геьрес6че)у. Млх лче11, апг) асЫ ргосегпаье К го а Впа1 сопсепГгагюп оЕ 100 )л8)ш!. 1пспЬаге !ог 30 пшшгеь аг 55'С. А!Гегпаг1че!у, С1Р сап Ье лиас6чагег1 Ьу Ьеаг1и8 го 65'С Еог 30 шлпшеь Гог 75 С Еог 10 шшигеь) ли ГЬе ргеьепсе оЕ 5 гпм ЕЕЗТА ог 1О плм ЕСТА ЕЪой аг РН 5.0).
То лпасггчаге 5АР: 1псиЬаге ЕЬе геас6оп ппхшге Еог 15 ппппгеь аг 65'С ш 1Ье с)ерЬоьрЬО- гу!абоп ЬпЕЕег. Аг ГЬе еигЕ оГ ГЬе г1ерЬоьрЬогу!аиоп геасиоп, лг ы сгис1а! го геилоче ог солар!еге1у лпас6чаге ГЬе а11га11ие РЬоьрЬагаье ЬеГоге ьепГи8 ир йе!18агюп геаспоиь. А1ГЬоиВЬ Ьой С1Р аил) 5АР сап Ье лиас6чаге8 Ьу Ьеаг108 аь г)еьсгГЪегг аЬоче, лче гесогшллепй ГЬаг йе ВерЬоьрЬогу!а6ои геасгюи Ье ехггасгегГ лчГГЬ РЬепо1/сЫогоГогги ЬеЕоге алик ГЬе г)ерЬоьрЬогу!алел! ГлмлА лп а!18агюи геасгюп.
7. Соо1 ГЬе геас6оп ппхгпге го гоогп гешрегагиге, апс) ГЬеп ехггасг 11 опсе лч!ЕЬ РЬепо1 апг! опсе к61Ь РЬепоЬсЫогоуопп. 8. Кесочег йе РХА Ьу ьгапбагг1 ргес!РКа6оп лчпЬ егЬапо1. М!х 1Ье 501и6оп а8аш апс1 ьгоге Ь Еог 15 пппигеь аГ 0'С. 1.96 СЬаргег 1: Р1аьтиЬ апг) ТЬегг 'с1ьеуи)пеьь т М01еси!аг С!опЕп8 37"С!15 ииишеь йеп 55"С/45 ш1пшеь 37 С/60 пиишеь 37'С! 15 ишшгеь йеи 55'С!45 пиишеь 37'О60 гпшшеь Рго1осо! 21 | !ыкекь лке ьамлаг жр-сомргемеб!ТАВЧ р!ЕСь оГ бупГЬепс РХА, папа!!у 8 — 16 ппс1еогп1ед гП 1епагЬ, ГЬас аппеа! го 1опп Ыппг-епг!ег1, с1ООЫе-дггапйег! пю!есп1ед сопга!Ыпд а гесодп!г!Оп яге Гог а гедгпсгюп епгугпе (р1еаде дее р!Ваге 1-12Ь 1!п1сегд аге пбес! со ег!Ыр Ыппг-епг!ее! сеппгп! оГ РЬ!А тч!ТЬ гедгг!сг!Оп ягед ад ап а!г! То с!оп!па (ЯСЬе1!ег ег а1.
1977Ь А !агае чапе!у оГ 1гп1гегд ача!1аЫе Ггогп сопппегсза1 бпрр11егд сап Есоа! бп!гегз ВР СС ТАТТЕ 6 'ОН з'огз 66 .тТАА с ар 99аге бпаегз зо гаг9е! ОНА овпд Вдб сопсепзгабапз а! Та ОЙА З9азе сс тс ас ТО 6 66СТТАА 666ОТТАА С ар г-: —,.; —, з А АТ'Т' 6 зсг! 6СС Е!С1!ЙЕ 1.12 С!Оп!па Ьу Аз!г!!Г1оп ОГ Езп1зегд Го В!ООГ-епз!ег! ТагВеГ 0р!А АсЫ~6оп о1 Ьупйе6с Бп1егь 1о В!ип1-епс1ед 0МА С ААТ О 6СС АТ С 6 6 СТТАА Се СТТАА С б!дез! авпд Есор! С зоб 6 ТТАА зР г г Здаге вгя Зпеапзеб р!авп!б зеагаг сапу!пд Есор! зепп и! Ртгосо! 219 Ас!с)(гйп ог" ЕупгЬег!с Е!п)сега го В!ипг-епс!ес( Р)ъсА !.99 ТА!И.Е 1-9 !.1и)сег 5ес(иеисеа Мое)10ед еотп репоа поп, Се9 ! 999 Ясеъацеое.
Ье рпгсЬазес( (и гъчо уоггпь гЬа! саггу еЬЬег а рЬоьрЬаге цгоир ог а Ьус(соху! цгоир оп !Ье 5' !египт (р1еаае аее ТаЫе 1-9). Оп!у рЬоьрЬогу!агес( то!ест!ее аге аиЪаггасеа !ог Т4 Р)ъ)А 1!ааъе, апс1 попрЬоарЬогу1агес( 1(п)сега тиа! 1Ьегегоге Ье ггеа!ес1 ъчгй Ьас!ег(орЬаае Т4 ро1упис1еогЫе Ыпазе апс1 АТР Ьегоге !Ьеу сап Ье )ошес1 го Р)ъ)А. 1п а !урка1 ехреПгпепг, рЬоърЬогу1агес( 1(п1сега аге 1(ааСес( (и 75 — 100-го!о пю1аг ехсеае ш ГЬе ргеаепсе ог" а Ыипъ-епс(ес) гагае! гпо1есп!е. ТЬ(9 Ьеач(1у 9)сеъчес) ьгокЬютесгу с1Пчеь епс1-го-епс1 1(аагюп оу!(п)сега апс1 ро!утес(гагюп ог 1!пЬега го еасЬ епс1 ог' гЬе гагце! РЬ)А.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
