Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 27
Текст из файла (страница 27)
ТЬе ехсеаа 1(п(сегз аге с!еачес( 6огп !Ье Р)ъ(А угаатепс Ьу йе арргорПаге геа!гЫ6оп епгуте, апс( гЬе(г гегппапга аге геточес( Ъу ае! 61(га6оп ог ае! е1есггорЬогеяя ТЬе риг!6!ее) Р)ъ)А (гаатепг, поъч а геъч пас!еогЫеа 1опаег апс( ес(шррес( ъч(гЬ сопчепгюпа1 соЬеяче гегпппг, тау Ъе 1(аасес( !иго а чес!ог саггу(пц согпра6Ые гегт(п( (р!еаье атее гааге 1-12). 1п !папу савела, раг6сп1аг!ш)сега аге сЬоееп Ьесаиае !Ьеу саггу а геа!гкбоп яге гЬа! 19 1споъчп го Ъе аЬьепг ггот йе Ьос(у ог" ап шобчЫпа1 гагае! Р)ъ(А.
Ноъчечег, а с(!(Уегеп! ь!га!еду 19 гес(шгес( ъчЬеп 1(п)сега аге иаес( !о с1опе роро)агюпа оу Р)ъ)А то1есп1ев ъчЬове ае!!пепсее аге пп(споъчп, е.а., а рорп1а6оп оъ сР)ъ)Ая ТЫх сап Ъе асЫечед аь Го11оъчя ° 1)ае !Ье соцпаге тегЬу1а6па епхугпе го гпос((гу шгегпа1 гесоап(гюп ягеа (и ГЬе сР(ъ(А9 апс1 йегеЬу ргогесс !Ьет ацашь! с1еачаае Ьу гЬе геаггЫ6оп епгутеа иаес( го 16т гЬе ро1утег(хес( !!п)сега (гот йе сегт(п( оуйе сР)ъ)Ая рог ехатр1е, ЕсоК! 1ш)сегъ сап Ъе асЫео со а Р!ъ)А 1гаотеп! йа! сои!а(па опе ог пюге (пгегпа! гесоап(гюп ягеа Ъу ггеа6па гЬе Р)ъ)А ъч(гЬ ЕсаК1 тегЬу1аае ш гЬе ргеаепсе ог 5-ас)епоау1те(Ьюп(пе (5АМ, а гпегЬу1 цгоир с1опог) Ъе!оге 1ш)сег асЫЬюп.
Мейу1а6оп оуйе 6ггь! ас(епоау! геяс1ие Ы гЬе СААТТС гесоап(6оп яге ргечепга аиЬьес)иеп! с!еачаае Ьу гЬе ЕсоИ геагПсгюп епхуте ъчЬеп ро1утег(хес( 1ш)сега аге геточе6 Ьот йе епсЬ ог !Ье пюе66ес1 Р!ъ)А. Рог гпоге с1е!а(1я р1еаае сипаи!1 Аррепебх 4. ВаепН! ВаспН! Вд!и ЕсаК1 ЕсоК) Есой! !си ос(1! ! Н!а<~1!! №о! 1ЪЪ!е! )ъае1 )Чаг1 реп 5ас! 5аВ 5еаа! 5ре! 5сЛ Х))а! Х)ъо! 4С666АТСССС) 4 ССС66АТСССС6) д(6ААСАТСТТС) 4(66ААТТСС) 4(С66ААТТСС6) 4СС66ААТТСС66) 4 ССААССТТ66) 4СССААССТТ666) 4(САТСССАТ66САТ6) 4ССАТАТ66) 4 СТАС СТАС СТА6) й(А6666ССССТ) с((6СТССАСС) 4С6А6СТС6) 4СССТС6АСС6) с((ТССССС66666А) 4(С66АСТАСТСС6) 4АСССС666СТ) 4СТА6ТСТАСАСТА6) с)(ССССТССА6666) 1.100 СЬарсег 1: Р1азт!й апд ТЬесг Ие!и!пея т Мо1еси!аг С!опт5 ° Раг6аПу П!1 гесеааед 3' сегппп! оу ап ХЬо1 с!оп!пВ ясе оп йе чессог апд 1фасе со сЬе сРМА саггу!пц рЬоарЬогу1асед адар!оса нч)сЬ 3-Ьаае ргосгигПпВ сепшш сошр1ешепсагу со йе рагбаПу ППес1 ХЬо1 ясе.
МепЬег йе чессог пот сЬе сЕ)МА шо1еси1еа сап аппеа! со йепье1нея Ьис сЬеу сап )о!и со опе апосЬег. Весаиае сЬе ХЬо! ясе !а гедепегасед, сЬе с1опес1 СЭМА сап Ъе гесочетед Ьу д!аеас!оп сч!сЬ ХЬо!. ТЬ)а а!та!еду дгеас1у ппргочеа йе еЕВс!епсу оГ сЬе 1фасюп атер ш сРМА с!оп!пц апд е1ип!пасеа сЬе пеед со шесЬу1асе сЬе сРМА ог со д!аеас П сч!сЬ геаспсс!оп епгушеа Ъеуоге !паегс!оп ппо сЬе нессот (Уапц ес а!.
!986; ЕПедее ес а1. !99!). Рог пюге шуоппа6оп, р!еаае аее йе сп!оппа6оп рапе1 оп АОАРТОсг5. ЕшаПу, ш аоше Ыипс-епс1ед РМА Пцасюпя Ь ь роаяЫе со шс1иде а геяпссюп епгуше !п сЬе Пца6оп геассюп ог со геаспсс сЬе Паасед РМА Ьеуоге сгапауоппас!оп, гп оп1ег со 1псгеаае йе ргорогбоп оу Ьассепа1 со!оп!еа саггу!пц сЬе с1еягед гесопсЪшапь. Рог ехашр1е, 5та1 апд НсисП аге ссчо геасг!сс)оп епгушеа йас с1еаче со у!е!д Ыипс епда апд нчЬоае гесоцшс!оп ясеа аге !пс1ис1ес1 !п шоас пш16р1е с!оп!па алея 1п ПВас!опа счЬеге сЬеае ссчо а!сеа ъчП! пос Ье геаепегасед счЬеп йе сагаес РМА ь 1фасед со сЬе чессог, апд !п счЬ!сЬ сЬе ссчо епгуспеа до пос деаче счиЫп сЬе РМА Ггарпепс со Ье ПВасед, сЬе 5та1 ог Нтй! епгутпе сап Ье гпс1ис1ес1 !п йе Паас!оп геассюп. А1сегпа6че1у, апд тпоге еГВс!епс1у, аусег Пуасюп, йе геас6оп сап Ье гП1исес1 спсо а Ппа! чо1- шпе 01 100 р! оГ !х геасг!сс!оп епгуше Ъи!Тег апд д)девсед чдй 5 — 10 ипгь оГ йе арргорпасе епгуше !ог ! — 3 Ьоигя Бйег оу сЬеае сгеасгпепь рпог со сгапауоппасюп снП1 геаи1с ш с1еача5е оу ае1ВПцасед чессог РМА, сЬегеЬу епг!сЬ)п5 рог гесотпЬспапь счЬоае 5та1 ог Нспс11 ясеа Ьаче Ъееп е1ипшасес1 Ьу Прас!оп оу йе шаегс.
Весаиае ссгси1аг РМАа ргодисе шапу!о1д пюге сгапя Гоппапса)!сд йап 1спеаг РМАя шоя Е. соБ со)оп!еа апа!05 аусег сгапауогшас!оп ииП сапу сЬе с1еягед гесошЬ!пап!я А япи!аг асгасецу сап Ъе сьес1 нчЬеп с!ишь Ыипс-епдед РМА ГгаВшепса цепегасед Ъу РСК. 5сгасацепе шаг!теса а !с!с, рСК-5спрс5К(+), Еог сЬ!а ригроае. МАТЕК!А15 СА!)Т!ОМс Р!еаае аее Аррепд!х 12 1ог арргорпасе Ьапдппи о1 гпасепа1а псаг1сед ис!!Ь <! >.
Впйег5 апс! Ьо!01!оп5 Р!еаае аее Аррепепх 1 Гог сопсропепЬ о1 а!ос!с ао!01!опа, Ьиг!ега, апс1 геаиепга. Рс!иге а!ос!с ао!06опа Со СЬе арргорпаге сопсепгга6опа. Аттоп)ит асетаге Г4 м, рН 4.8) АТР Г5 тм апд 10 тм) Ооссс 5 тм сгопс йе !с5асгоп геасссоп со 5сер 2 сТ йе !!5адоп Ьиггег сопса)па АТР Ейапо) 10х Рпдг )с)пахе Ьийег 600 том ТпяС! !рН 7.СС) !00 спм М5С! 100 псм сПСЬсойгепо! 2 гп500! Ьолпе сепии а!Ьиппо РЬепоЬсЫогоуогт Г1:1, ч)ч) <!> 5отйит асетасе ГЗ м, рН 5.2) ТЕ ГрН В.
О) Епгугпе5 апс! Впйег5 ВасгеиорЬаце Т4 РНА 1!Вазе Р!еаае аее СЬе шгопиадоп рапе! оп ЕНЧА С!ОА5Е5. 1.102 Отартег 1: Р!атитиЬ аид Т)те)г 17те701иетт ти Мо1еси1аг Оотиц чесгог ог Согетцп С)тсА тп йе геастюп пихгиге. 5огпе сопипегс)а! 3)цаае ЬиССега сопта)п АТР. СНЬеп иа)пц гисй ЬиССегп гйе аддсг)оп от АТР Ь по !опцег гатти)гед, ног а дейп)доп о!Сне)ь ип)18 р)еаае аее гйе )птогптатюп рапе! оп О)йА ИСА5Е5.
3. 1пасдчасе сЬе ЪассепорЬаце Т4 Р)н)А 1)цаае Ъу Ьеадпц 1Ье геасдоп ппхтиге то 65 С Гог 15 пппитеа. 4, Соо1 йе!1цадоп ппхтиге то гоогп 1егпрегаСиге апд 1Ьеп атЫ: 10Х геатг)ст)оп епгуте ЬиССег геттг)стюп епгупте реп!е Н,О )0 н! 50 ипт1а то а йпа! но)игпе оС 300 р! 1псиЪасе 1Ье геассюп Гог 1 — 3 Ьоигя ат 37'С.
Кесонегу о! ЬссКайес! 0МА 5. Рог!ту йе геасг)стед РХА Ьу ехтгасооп сч)й РЬепойсЫогоГопп. Ргессрдате сЬе РЬ)А тчсй 2 чо!игпеа о! ейапо! тп йе ргеаепсе оГ 2 )нс апппошшп асе1асе. 6. Со!1есС 1Ье ргестрКаСес1 РХА Ъу сеп1п6тца6оп ат тпахппшп ареед Кот 15 гп)питеа ат 4'С тп а тп)его)ице, апг1 дссьо1че СЬе реПет тп 50 р1 06 ТЕ (РН 8.0). 7. Рать сЬе геаиарепг1ег1 РХА 1ЬгоицЬ а арии со1шпп то гепюне ехсесь 1сп)гега (р1еасе аее Аррепдсх 8). С)аиайу, дте йцадоп апд геатг)сйоп епдопис)еасе геасйопа цо нчей апд йеге 'ь по пеед со сЬес)г 1Ье ргодиста Ье)оге ргосеегйпц. 6 песетьагу, Ьотнечег, йеае атера сап Ье сЬесйед ас Сойонча: ° Риппц йцатюп, рйоарЬогусасед йпйега аааегпЫе )пто росугпега (е.ц., д)спета, спптегк апд сетгагпега) Птас сап Ье детессед нн теп 1.0 р! оС сЬе геасйоп пах!иге 351ер 2) ь апа)угед Ьу е)естгорЬогеа)а йгоиф а пешга! 105' ро)уасту)агп)ссе це!.
А )аддег оС гпи)1)спета Фюи)д Ье неПЫе ннЬеп Фе це! ь аийпед Ьу етЫд)ипт Ьгогпк!е ог 5уВК Со)г!. ° 6 гадюсаЬе)ед йп)гига аге гьед апд й: 1Ье йцайоп ь аиссеаа)и), йе гагйоас6че йп)геь ндй Сопи а аепеа оС гагйоастве ЬапгЬ йат сап Ье геъо)нед Ьу есестгорйогеаса йгоиф а пеитга! 104 ро)уасгу)аптк3е це!. Нонненег, )патеад оС агаси)пц йе гадю)аЬесес! Пи!тета тпау Ье детестед Ьу аитогад)оцгарЬу ог рЬоарЬог)тпац)пц. СхтЬеп Фе йпйег 'ь саЬе)ед со Ыф арес)йс асйн)ту, 31 'ь рось)Ые то неп)у 6тат Пте гагйо)аЬе)ед 3)пйег Ьгь Ьесопте астасйес! со йе тагцет 0)н)А Ьесаиае аогпе от йе гад)оасбн)ту е)исеа пай йе сагцет РгтА диппц арии-со)итпп сЬгопта1оцгарЬу 351ер 7).
Ассегпайне)у, ап аск)иос оС Пте геасйоп птедиге сап Ье апа1угег! Ьу е)ессгорЬогеа)а йгоиф ап ацагоае це!. АСтег Пцайоп, а апай СгасСюп оС Фе гагсю1аЬе! 5Ьои)д сопт)цгасе ндй сце тагцеС Сгау'пепс. ° То чеп)у сцас сце геатпсйоп епгугпе Ьаа ссеачед йе росугпепгед йп$сега то согпр)ейоп, апа)ухе 10 р! оС йе геатг)сйоп д)цест Ьу ро)уасгу)атп)де це3 е)естгорЬогеык ТЬе йп)гег )аддег ейсал)д поти Ье гедисег! то пюпогпегк 8. Кесочег сЬе РХА Ьу асапдагд ейапо! ргессрпасюп апг1 дссьо1че сЬе ргестрКасе тп 10 — 20 р1 ос ТЕ (РН 8.0).
ТЬе гпод)6тед РХА Сгацтпепт сап подач Ье 11цатед ас деасг)Ьед ш Ргососо1 17 шсо а р1аяпсд 3ог ЬастепорЬаце) чессог тч)й рготгидспц епда сЬас аге сотпр1ешепсагу со 1Ьоае 1псгодисед Ьу сЬе 1ш1сег. Рго1осо! 22 Ыца6пц Р!аята апс1 Тагце1 ОМАМ ~и Еою-гпе11~пд-1егпрегаШге Адагоье т не 5)шуеьт ьтгр ))ь сюгг))4с ычАьмвь !ь )Ье е!есггорЬогегк рипВсагюп оГ йе г)еь!гег) геь)г!с))оп Ггаашеп) оГ Гоге)Вп Р)х)А апг1 йе арргорпа)е ьеагпеп) оГ р!аьгпЫ Р)х)А. 1п йе рго)осо1 В!уеп Ье!огх (аг)ар)ег) Ггош 5)гиЫ 1985), 1!Ва)юп оГ р1аяпЫ апг1 Гоге!Вп Р)х)Аь !ь сагг)ег) ои) )и йе ргеьепсе оГ 1огх-ше1))па-гешрегагнге аВагоье Ер!еаье ьее СЬарсег 5).
ТЬе ше)Ьог) гхог)сь Гог Ьо)Ь Ыипг-епг) !15аг)оп апг1 1)Ваг)оп оГ соЬеяче гегпип), Ъиг Ь гег!шгеь а 1агВе апюипг оГ 1)Ваье апс1 Ьь еГГк!епсу )ь аЪоиг опе )о гнго огг)егь оГ шадппиг)е !огхег йап 1)Ваг)оп ьу))Ь рпггТ)ег) РМА (Ргогосо!ь 17 апг1 19). Рог )Ь)ь геаьоп, ГЬе гпейог1 )ь пог ьш)аЫе Гог сонь)гпс)юп оГ 1)Ъгапеь апг) !ь иьег) сЫе))у Гог гарЫ ьпЬс1огппВ оГ ьеашеп)ь Ггогп 1агВе ГгаВшепгь оГ Р)х)А )и г)ерЬоьрЬогу1агег1 чесгогь апг) Гог аььегпЫ!п5 гесогпЬ)пап) сопьггисгь. МАТЕИАЕ5 СА)ЗТ)Р)х): Р1еаье ьее Аррепг)!х 12 )ог арргорпа)е Ьапг)!!па оЕ ша)ег!а)ь шаг)гег) хх))Ь <) >.
Епкуп)еь апс! ВоГГег5 2х Вас)епорааВе 14 РХА ЕЕцаье тЕх)иге ! мТпь-С1 )рН 7.6) ).0 Н! )0О гнМ МВС), 2.0 Н! 200 п1М г))йю)Ьге))о! ).0 Н! )0 гнМ АТР ).0 Н! 4.5 Н1 Васгег)орЬаье Т4 )7НА ))Ваье ) Ъе)ьь ншг ) 0 Н! Ь гецшгег) Еог еасЬ !)Ваг)он. Ргераге ЕгеьЬ Еог еасЬ нье )н а ннсгойье гнЬе сЫ))ед он )се. 5)оге йе геасгюн ннхгнге )н гсе ннп! пеей ей Рог деЕ1н)г)оп оЕ Хе)ьь ан)гь, р1еаье ьее йе )нЕопнагюн ране! он Р)ЧА Г)СА5Е5.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
