Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 31
Текст из файла (страница 31)
1О. Ггеелщ о1 Сотттре(еп$ СеИ8 Кеяырепг! сЬе сеПа Вепс!у ти 20 гп1 оЕ ке-со!6 1попе сгапаЕогшасюп Ьп((ег. АЫ 1.5 ш1 оЕ !3М5О. М(х йе ЬассеПа1 апареияоп Ьу аъч(г1ш8 апт( сЬеп асоге П (и ке Еог 10 шсписеа. 12. 13. 'ъ'ътЬеп пеет(ет(, гегпоче а сиЬе оЕ сотпресепс сеПь !тоти сЬе — 70'С Егеехег. ТЬаъч сЬе сеПа Ьу Ьо!еПп8 сЬе спЬе ш сЬе ра1тп оЕ сЬе Ьапй )пас аа сЬе сеПз сЬаъч, !тапа(ег сЬе спЬе со ап ке Ьай. 5соге сЬе сеПа оп ке Еог 1О ииппсеа. 14. 'ъ'ътогЫпВ грткИу, т)(арепае а1нрюса оЕ йе ьпарепяопа тисо сЬП1ет1, ьсеН!е писгойВе шЬея 1пппегПасе1у тиар-Егеете сЬе сотпресеис сеПа Ьу ппшегяи8 йе ВВЬс1у с!пает( шЬеа 1и а ЬасЬ оЕ 1и(шг( пЬгодеп, 5соге йе спЬеа ас -70'С ппП1 пеег1ет1.
ргеег!и8 ти 1стсшеС и!сго8еп еиЬапсеа сгапаЕоииастоп еЕЕтесеису Ьу -5-Ео!й рог шоас с!оитп8 рогроаеа, 56-р! а11грлоь оНЬе соптресепс-ее!1 аоареияоп ъч111 Ъе тоге сЬап аг)ее!пате. Ноъчечег, ъчЬеп 1аг8е пшиЪел оЕ тгапаЕогшетС со1ои!еа аге гетСо!гетС (е.8., ъчЬеи еопатгоесси8 сРС4А 1!Ьгапеа),! аг8ег а11грюса гпау Ье иеееааагу. Ргогосо! 24С ТЬе 1поие МеСЬог)~ог Ргератаиоп апг) Тгапфогтаг!оп оу'Сотрегепг Е. со1с 1.115 Узе а сЬ111ес), згег11е р)репе С)р Со Сгапзгег йе согпрегепс се115 Со сЬ111ес1, яеп1е 17 х 100-пип ро1ургору!епе СиЬез. 5гоге йе се!)з оп ке. 61ая СцЬез зЬон!8 пог Ье цзеъС ыпсе йеу 1оъчег йе е111<1епсу оГ сгашуоппагюп Ъу -10-го!0 15. Тгап5гогспа6ои АСЫ йе Сгапзуогш)пВ РЬ!А (ир Со 25 пн рег 50 Сс! ог сосирегепс се11з) 1и а чо1шпе пог ехсеес)!па 598 ог" СЬаг ог" йе со! ирегепг се115.
5ъч!г1 йе СнЬез аепг1у зечега) С!шез Со иих йеи сопсепся 5ес нр ас 1еазс пчо сопсго1 шЪез гог еасЬ сгапзЕоггпасюп ехрег4гпеп, 1пс1нйпВ а СнЬе ог" сошреСеШ Ьасгепа СЬа Г гесегчез а 1споъчп агпоипг ог а згапс)агс) ргерагаг)оп ог знрегЬе1ка1 р1аяпЫ Р!ъ)А апс) а СнЪе ос се11з СЬаг гесс!чез по р1аяпЫ РЬ)А ас а11. 5гоге СЬе СнЪез оп ке Гог 30 пипнСез. Тгапзсег СЬе СиЬез Со а гас)с р1асед сп а ргеЬеасес) 42'С с)гси1аг)пд ъчагег ЬаСЬ. 5гоге йе шЪез сп СЬе гасЬ гог ехасг!у 90 зесопс)з. Ро пог зЬа)се СЬе СнЪез.
Неаг зЬос)с ь а сгнсса1 Ыер. 1С ь чесу цпропапг СЬаг СЬе се!1з Ье гаьед Со ехасг!у СЬе г18ЬС Сешрегасцге ас йе соггесс гасе. ТЬе шснЬасюп снпез апг) сенсрегаснгез 8!чеп Ьеге Ьаче Ьееп ъчог)сед онг няи8 Ра1соп 2059 СцЬез. ОСЬег сурез ог СнЬез ъчс!1 пог песеяап1у у1е!СС еин1ча!епг гезц!Сз. 17. КарЫ1у Сгапзгег СЬе СнЬез Со ап ке ЬаСЬ.
АПоъч йе се11з Со соо1 гог 1 — 2 иипнгез. АсЫ 800 )л! ог" 5ОС шейшп Со еасЬ СнЬе. Ъ5гаггп СЬе си1илгез Со 37'С сп а ъчагег ЪаСЬ, апс1 йеп сгапзсег йе снЬез со а зЬа)с!пн шснЬасог зес ас 37"С. 1пснЪасе йе си1снгез сог 45 пипнгез Со а11оъч йе Ьасгег!а Со гесочег апс! Со ехргезз йе апг!Ъ!ог)с геяяапсе шаг1<ег епсос1ес1 Ьу СЬе р1аяиЫ. То ияхнпие СЬе еГ6с1епсу ог" сгапзбогшаиоп, 8епг1у ахигаге 1<225 сус1ез!гп1ицъе) йе се11з 4нг1п8 СЬе гесочегу регюй 11 зсгеешп8 Ьу а-сошр!ешепгаиоп, ргосееъ) Со Ргогосо! 27 Сог р! аг1и8.
19. Тгапзгег йе арргорпаге чо1шпе (нр Со 200 )с! рег 90-иип р1аге) ог" Сгапзгоггпес) согпрегепг се115 оп!о аВаг 5ОВ гпес)!нш сопга)п!пн 20 шМ Мн50, апс) йе арргорг)аге апг)Ьюг!с. ЪЪгЬеп зе!есии8 Рог геязсапсе со сесгасус1спе, йе епиге сгапзгогшас1оп пцхшге гпау Ье зргеаъг оп а яп81е р1аге 1ог р!агеь) Си Сор а8аг).! и йЬ сазе, со!1есг йе Ьасгепа Ьу сепгпйхип8 гог 20 зесопъСз аг гоош Сегирегагше Си а ш!сгогц8е, апгС сЬеп 8епг1у гезцзрепъС йе сеБ ре1!ес сп 100 Сс! оу 5ОС шеъ11цш Ьу Саррш8 СЬе ыъСез оЕ СЬе СцЬе. А СМРОССГА!НГ 5гег01хе а ЬеиС 81азз госС Ьу с!1 РРСи8 1С 1иСо ейаио! апъС йеп 1и йе Яагие о! а Внпзеи Ьцгпег.
ЪЧЬеп СЬе госС Ьаз соо1егС Со гооги Сегпрегаюге, зргеагС СЬе СгапзгоггпегС сеПз 8епИу очег СЬе знг!асе о! СЬе ахаг р1асе. СЧЬеп зе!есгсп8 Гог геяыапсе со анср1с11!Си, Сгапзуогшеь! се1!з зЬоц!4 Ъе р!агеъ1 аг!оъч ъ1епзну 1<10" со1опсез рег 90-пнп р! аге), апъС СЬе р!агез зЬоц1ъг пос Ье 1иснЬагегС Сог пюге СЬап 20 Ьонгз ас 57'С. ТЬе епхугпе !5-1асгашазе Ь зесгегед шсо СЬе шейши Ггогп ашргсс11сп-геяыапг Сгапзгогшапгз апс1 сап гарЫ1у спасичасе сЬе апиЬюис ш ге81опз зцггонпнТп8 сЬе со1ошез. ТЬш, р)анп8 се11з ас Ь18Ь ъ!енсу ог спсцЬаип8 сЬепс Рог 1оп8 репоъЬ ог" снпе геял1сз ш сЬе арреагапсе ог" агпрксПсп-зепых ссче засеНссе со!опсез.
ТЬгз ргоЫеги Ь агпе!югасей Ьцс пос сошр1есе!у е!сннпасей Ьу няп8 сагЬешсс1!сп гайег йап агпр!с11!Си гп зе1есс1че пъеаТа апъ1 !псгеаяп8 СЬе сопсепггаиоп ог апг1Ьюгк !гоги 60 сс8/ш! со 100 сс8!гп1. ТЬе пшпЬег оу апсркс1!сп-геяыапс со1ошез йоез пос шсгеазе ш 1спеаг ргорогиоп Со йе ншпЪег ог се11з арр1сеъ1 со йе р!аге, регЬарз Ьесацзе оЕ 8гоъчСЬ-СпЬСЬСС1п8 зцЬыапсез ге1еазег) !тош СЬе се!1з )ъ111ег) Ьу йе апИЬсогк. 20. 5соге йе р1асез ас гооги сесирегасше нпс!1 сЬе 1крлЫ Ьаз Ьееп аЬзогЬед. 21.
1пчегг СЬе р1агез апс1 спснЬаге СЬегп аг 37'С. Тгапзуоггпес! со1оп)ез зЬонЫ арреаг 1и 12 — 16 Ьоигз. Тгапзуогшеъг со1ошез гпау Ье зсгеепе4 Гог СЬе ргезепсе оу гесогпЬСпапг р!аыпнЬ цяи8 опе ог йе шеСЬоъСз ъгезсгСЬеъг гп Ргогосо!з 27, 28, 51, апгС 52 о! СЬЬ сЬаргег ог Ргогосо1 12 сп СЬаргег 8. 22.
1пс1ис1е а!1 ог йе арргорг)аге роя!!че апс1 пена!сне сопсго1з (р1еазе зее СЬе рапе1 оп 0АСТЕРСАЕ ТКАЬС5ГОСС!ЪСАТ!ОМ 1и Ргогосо1 23). Рго1осо~ 25 Ргерагабоп апс1 ТгапМоггпабоп от Согпре1еп1 Г. сой иыпц Са!с~игп СЫопде т не гоггоиу!нс 5!мрге лно кар!О чзлк!Ат!Он Ог тне теснн!ООе риЫ!аЬег! Ъу СоЬеп ег а1. (1972) !а /гег!иепг1у иаег/ го ргераге ЬагсЬеа ог" согпре!еп! Ьассег/а йас у/е1д 5 х 10" со 2 х 10г ггапагоггпег! со!оп/еа//гВ ог" аирегсо11ег1 р!аяпЫ ВЬ/А.
ТЬ!а е/Вс/епсу о/ ггапаУоггпапоп 14 Ь/ВЬ епоицЬ !о а!1оге а!! гои!1пе с!оп/пц 1п р!аяпЫа го Ъе реггоггпег! иг11Ь еаае. Согпресеп! се!14 гпаг!е Ьу гЬ!а ргосег!иге гпау Ъе ргеаегче0 аг — 70'С, а1!ЬоиВЬ гЬеге тау Ье аогпе г1егепогагюп гп гЬе ейк/епсу ог !гала!оггпаг!оп г/иг)пВ рго/опВег! агогаае. МАТЕК!АЕ$ Впйегь апг! йо106оп5 Р1еаае аее Аррепг!!х 1 /ог согпропеп!а о/ а!осЬ ьо1ипопа, Ьи!/его, апг/ геааеп!я О!1и!е а!осЬ ао!ипопа !о йе арргорг!а!е сопсеп!га!!опа. СаС1 2Н О /т М) ЪгЬеп ргераг!па согорегепг се!1а, гЬа~ч а !0-ш! а!!оиог о/ гЬе а!ос!г ао!ибап апг! гп!иге !г со !00 пг1 и/гЬ 90 гп! о/риге Н,О.
В!ел!гае гЬе ао1игюп Ъу 01сгагюп гЬгоиаЬ а ргег!паег! Ха!депе 6!гег /0А5-!гш роге яае), апг! гЬеп сЬ!!! и го 0"С. ог 5/апг/агг/ /гала/огта/гоп Ьи//ег /ТРВ) /рlеаье аее Рго/ого/ 23, 5/ер т) рог гоапу аггагпа о/Е. со/1, агапе!агг! ТВВ /НапаЬап !903) гпау Ье иаег! !пагеаг! о/СаС! еагЬ ег!шга)епг ог Ьеиег геаи!га. МВС/,-СаС/ ао/и//оп, /се со/г/ Мейа ВВ ог 5ОВ тегВит /ог /папаl егоги/И о/ еи/Гиге 5ОВ айаг Р/а/еа сол/а/л/лВ 20 гпМ МВ5Оа алг/ Яе аРРгоРг/а/е апВЬгобе 5гапг/аго ВОВ сопсаии ! 0 шм МаВО . 5ОС тегпит Арргох!шаге!у ! го! о/ гЬга шегпшп Ь геои!гег! /ог еасЬ !гала/огшаг!оп геасгюп. Мпс!е!с АснЬ апг! О!коппс!ео6г!еь Р/аьт/г/ /)/0А /гееотЬ/пап/ р/аьт/г/) Сопаггисс иа!па опе о/гЬе гпегЬог!а г!еасг!Ьег) ш ргососо!а !7 гЬгоиаЬ 22 о/гЬЬ сЬаргег. Ргососо! 25: Ргерагапои аи)Е ТгаиьуогтаВои оу" Сотрегеиг Е.
соП иь)ич Са1сгат СЬ!отсс)е !.117 СепТг!Епде5 апг! ссоЕог8 5отчаП С5А госог ог ес)исча)елг прес!а! Ес!осрпсеп$ Ро!ургору)еле сиЬе Е50 т0, сЬ)Пес! т тсе Ро!ургору!епе СиЬеь Е)7 х 700 гпгп; Еа!соп 2059), сЬПЕес! тп ке Сстагег ЬаСЬ ргеьег Со 42'С МЕТНО0 А сМРОЕСТАЫТ АП ьгерь !п СЬ!ь ргосег)иге ьЬои!д Ье сагт!ес) оиг аьергкаПу. Ргерага6оп оЕ Сец8 С. Рк1с а ь!пц!е Ьассепа1 со1опу Е2 — 3 пии ш йатиесег) Еготп а р1асе сЬас Ьаь Ъееп !псиЬасес1 Еог !6-20 Ьоигь ас 37'С. Тгапьуег сЬе со1опу тисо !00 ш1 оЕЬВ ЪгосЬ ог 5ОВ шейши ш а 1-1Пег Паь)с.
1псиЬасе сЬе си1сиге Еог 3 Ьоигь ас 37"С и ЕЕЬ ч)Вогоиь аВ!сас!оп, шои!сот!пц сЬе ВготчсЬ оЕЕЬе си1сиге. Аь а Вше!еПпе, ! ОР оЕ а си1сиге оЕ Е. соП ягаш РН! сопса!пь -10' Ьасгепаутп1. рот еЕВстенс ианьсопнаион, Ь 6 еяенпа! сЬас сЬе нннтЬет оЕ ЫаЫе се!!ь нос ехсеетг С()ь се)!ь)шс, тчЫсЬ Еот нюьс ьстаснь оЕЕ. соВ 6 еонсча!енг со ан ОР оЕ -0.4. То еньите с!гас )Ье сн!сите с)оеь нос Втотчсо а ЫВЬет с)еньсгу, тнеаьые сЬе ОР оЕсЬе сн!соте ечету )5 — 20 ннннсеь.
Р!ос а 8гарЬ оЕ сЬе с)аса ьо сЬас сЬе сине тчЬен сЬе ОР оЕ йе си!сше арртоасЬеь 0.4 сан Ье ртес)!стет! тчссЬ ьоше асснтасу. Ве8!н со Ьатчеьс сЬе сн!сше тчЬен йе ОР теасЬеь 0.55. Весанье сЬе те!асюньЬтр Ьестчеен сЬе ОР ч антг сЬе ншнЬет осч!аЫе се!!ь)ш! чапеь ьнЪьсаниа!!у Ьонт яташ со ьстатн, сЬе ьрессгорЬосошесет ншьс Ъе са!!Ьтасет)Ьу шеаьнт!н8 сЬе ОР оЕа 8тотчтн8 сн!сне оЕ сЬе рапкн1ат ьсташ оЕ Е. соП ас сгсЕЕетенс сонет сн нь ВтотчсЬ сус!е ансг йесетшсн!н8 йе ншнЬет оЕчсаЫе се!!ь ас еасЬ оЕ йеье снись Ьу р)астн8 й!нсюнь ог йе сн!соте он ! В а8ат р)асеь сн йе аЬьенсе оЕ аниЬюгкь. 2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
