Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 35
Текст из файла (страница 35)
Маг1с йе тпаатег р1ате ш арргохппате1у йе хате 1оса6опя 'гЧ(тЬ ргаспсе, и Ь роаяЫе то а го(й тЬе гье о( ш(г (чтЬ(сЬ сап Ье гиену) Ьу ропе!пп8 Ьо1еа тЬгоо8Ь ЕЬе 6!тег шсо тЬе опг1ег1уш8 а8аг тч11Ь ап ептрту 18-8ап8е пеесПе. Айег ЬуЬг(й(тат!оп, Ьас1с 118Ьтш8 чта а 118Ьт Ьох сап Ье чьей то а1т8п йе Ьо1еа тп йе 61тег тч(йт тЬе шаг(са ш йе а8аг. Мапу (пчеат(8агога ргеЕег то опепт тЬе 6!гег Ьу ояп8 аЬагр аспюга со спт япа11 потсЬеа ат чагюгь ротпь оп ть стгсшп(егепсе. Абег йе погсЬей апй пшпЬегег1 6!тег Ьаа Ъееп р!асег( оп тЬе ятг(асе о( тЬе а8аг, тЬе рояйопа оЕ йе аепаИопа аге шаг(сей оп йе Ьоттапт о( тЬе р!ате. ТЬе аЬареа оЕ йе аеггайопа апй йе(г рояпопа йебпе гЬе опепгатюп оЕ ЕЬе 6!тег оп тЬе р1ате.
7. 5еа! йе тпаатег р1ате тч(ГЬ Рага61тп апй атоге и аг 4 С !и ап шчеггей роятюп пп61 йе гехи!18 оЕйе ЬуЬг(й(катюп геастюп аге ачат!аЫе. 8. Ьуае йе Ъастепа айЬег(иа то !Ье 61(ег апт1 Ь!пт1 йе 1ЕЪегатес1 Р)ч(А со йе и(ггосе1!и!оае ог пу1оп 61(ег па!па йе ргосег1пгеа дехсг!Ъес1 (и Рготосо1 31. Ргосеей тч((Ь ЬуЬг(й!хабоп аа йехсгйЬей тп Рготосо1 32. Рго1осо! 29 5сгееп~пц Вас1епа! Со!опрея Ьу НуЬпйка6оп: ! п1еггпесйа1е Мигп'оегь В АСТЕХ1АС СОСОМРЬ СКОЪЧ1ГСС Оге ЛСЛК РСАТЕЬ сап Ье Сгапьгеггес) еп шаьье Со пбгосе!101оье 61- сеть. А ьсеп1е 61сег гь р1асес) сбгесс1у оп!о сЬе Ьассепа1 со1ошеь.
Айег а ьЬогс рег1ос) ау сппе со а11оъч сгапьуег оуЬассепа1 се11ь со сЬе 61сег, сЬе 61сег 1ь аепс1у гешочес) апс) ргерагес) сог ЬуЬгЫ)га6оп. Ноъчечег, !г" сЬе сору пшпЬег ос сЬе гесошЪ|папс р1аяпЫ 1ь ехрессес1 со Ье 1оъч (е.д., )с а !ага ьедпепс ог' Коге)дп !ЭХА Ьаь Ьееп 1пьегсес$) ог ъчЬеп Ь)аЬ)у с1еаепегасе обаоппс1еосЫеь аге пьед аь ргоЬеь, йе 61сег шау Ье р!асес) 1со1опу яде пр) оп сЬе ьпгУасе ау а УгеьЬ аааг р1асе сап!а!п)пц сЬе арргорпасе ап6Ью6с.
Агсег спспЪа6оп 1ог а геъч Ьопгь, йе 6)сег ъчсй Ьь сагао оу еп)аггее) со1ошеь 1ь ргерагес) гог ЬуЪг1йгасюп. Меапъчр61е, сЬе ог)а)па1 !шаьсег) р1асе 1ь шспЪасес) уог а сеъч Ьопгь со а1!оъч сЬе Ьассепа1 со1ошеь со геагоъч 1п сЬегг ог)а!па! роясюпь. ТЬеье ргосес1пгеь ъчог1с ъч)сЬ Ьассепа1 со1ошеь ог'апу яге, Ьпс япа11 со1ошеь а)че сЬе с1еагеьс геьп1сь аь йеу ргос1псе йагр ЬуЬпсбгапоп яапа!а апс1 с1о пос япеаг с!пг)п5 сгапьуег Ггош сЬе аааг р1асе со йе 6!сег. ТЬе гпесЬос1 ъчог1сь Ьеьс ъчсй 90-ппп р1асеь сопса)п)па пр со 2500 со!ошеь. 1агаег 61Сегь аге с)16!си!1 Со р!асе регуесг1у оп СЬе ьпггасе ог'150-ппп р1аСеь ъчсйопг а)г ЪпЬЫеь.
рог гпгсЬег гпуоппа6оп оп 61сегь, р1еаье геуег со сЬе 1псгодпс6оп со Ргососо1 28. МАТЕК1АЕ6 САС)Т!О)ъ): р!еаье ьее Аррепс!!х 12 !ог арргорпасе Ьапс)!!па от тасепа!ь шаг!сес! ъч!1Ь <! >. Мес1!а 1В ог 5ОВ аВаг р!агеь !90-тт) сопса)п)лВ арргорпаге апВЬсо6сь Р)асеь сЬас аге 2 — 3 с!ауь о10 асче сЬе Ьеьс геьп!п гп сйь ргососо! Ьесапье йеу аЬюгЬ ВаЫ Вопг сЬе Ьассепа1 !посо!апь гпаге геас!1!у. 1В ог 5ОВ р)агеь сопсатта сЫогатрЬетсо) <! > Орс)опа1, р)еаье ьее ьсер а.
СЫогапгрЬепссо! Ь пьес! ас 170-200 Сса)пь!. прес!а! Е41шрпъеп1 Ыссгосе))и)оье ГМ))1)роге НАТГ, ог едтча)епВ ог Му!оп 6)сегь, ьгеп)е алс) с)егегВепг-!гее 5уппде 13 сс), Нурос)ест!с пеес)!еь !2З ВаиВе), апс) Яагегргооу ЫасК г)гачч)пВ )п)с ВпсВа )п)с) ТЬеье псасепа1ь аге пьес) со опепс сЬе 6!сегь оп сЬе гааьсег р1асеь. Рог ап а1сегпассче псесЬосс, рсеаье ьее пасе со ьсер 4. ууЬагтап ЗММ сггси)аг Ясег рарегь Ргераге сп ас)чапае а ьсаса ог 'ъЧЬасгпап ЬММ рарегь 1опе тог еасЬ пагосе11а1оье ог пусоп, р1ы а сеъч ьрагеь) сас со а яге ь11аЬс!у!аггее йап сЬе 6!сегь. ТЬеье аге согпгпегссаПу ачаг1аые аь ргесас ссгс!еь !гого ьечега) псапасасспгегь.
1. 129 1.130 СЬаргег 1: Р)гсьт!й апсГ ТЬеп ЕуьеЕи!пеьь !и Мо!еси!аг С!оп!пе АГМс6опа! КеацепЕВ 5гер б оЕ йгь ргогосо! геди!геь Яе геаВепгь !!ьгесу сп Ргогосо!ь 37 апс! 32 оГ гЬ)ь сЬаргег. Чесуосб асчс! Вассер!а! Яра!)36 Е. со!! ьггат, сгапьуогтес) ячй гесогпЬспапг р!аьтсгуь, аь си)гиге Вье Ьаесепа сгапьуогше6 Ьу опе оГ йе шесЬос)ь с)еьсг!Ьес) ш Ргососо1ь 23 сЬгооВЬ 26 оГ сЬсь сЬарсег. )Ч!ЕТНО0 Р1асе онс йе сгапьЕоггпес) Е. со6 сн1снге оп!о 90-ини 1.В ог 5ОВ аааг р1асеь, ас г61нсюпь са1- сн!асес) со Вепегасе нр со 2500 сгапьЕоггиес) со1ошеь. ТАгЬеп йе со!опсеь геасЬ ап ачегаВе яхе оГ 1.5 пнп, сгапьЕег йе р1асеь Егош йе шснЬасог со а со!6 гоогп.
ХнгиЬег йе с1гу Исегь сччй а ьой-1еас) реис6 ог а ЬаБ-рошс реп, счес йеги ъч!сЬ счасег, апс1 шсег1еаче йеги Ъеичееи с!гуТАЪасшап ЗММ 6)сегь. Ъй ар сЬе ьсас1с оГ Ес!сегь 1ооье1у сп а1шииипи Еос!, аис1 ьгег!)1ге йеги Ьу ангос!ачша (15 ря !1.05 )сВ/сш'] Еог 10 пнинСеь ои!щн)с) сус!е). Ргераге епооВЬ 61сегь со ша)се опе ог ссчо гор!!саь Ьош йе ьсагс!пе аааг р1асеь. А!сЬооаЬ яеи1е 66сегь аге ргеуегге6 Гог сЬсь ргоеес)оге, пожсеп!е 6!сегь псау Ье шее сГ по псоге гер!!еаь аге ю Ье шас)е Ггопс сЬе псаьсег р!асе.
Р1асе а г!гу, ьсег1!е с1есегВепс-Егее шсгосе11н1оье 61сег, пнгпЬегес) яс1е с$осчп, ои сЬе ьнгЕасе оЕ йе 1В (ог 5ОВ) аВаг гиес!!шп, !и соисасс ъчсЬ йе Ьассег!а! со1ойеь (р1асес! !и 5сер 1), нп61 и !ь сошр1есе1у счес. Та!се саге со ргечепс а!г ЬоЬЫеь Ггош Ьесош!оа сгаррес) Ьеичееп йе 6!сег апс! йе айаг. ТЬЬ ы Ьея с)опе Ьу Ьепсйпц йе 6)сег ь!сцЬВу ьо йас сопсасс и бгя шас)е Ьепчееп йе сепсег оГ сЬе 61сег аос) сЬе аааг шеебшп. Ве саге66 пос со пюче йе Гбсег ге1аиче со йе айаг псейшп айаг сопсаес Ьаь Ьееп псас1е. Опсе СЬе 61гег 1ь нс р1асе, 1сеу СЬе 61гег Со йе нпс)ег1у!пВ гиесбшп Ьу ьСаЬЪспВ ш йгее ог гпоге аьуинпесггс 1осасюпь сЬгонаЬ сЬе 61сег сч)сЬ а 23-сансе иеес11е ассасЬед со а ьуг)пВе, 61ррес) ш счасегргооЕ Ыас1с с!гасу)па сп1с.
А 23ч3аоае пеесПе ог япа11ег ебрре6 ш ш1с счог)сь Ьея !гВР опсе рег р!асе, сЬгее Ьо!еь рег р!асе). ЧЧ!сЬ ргаес!се, 6 Ь роьяЫе со ачо! с! сЬе оье оГ !п)с (счЬ!еЬ сап Ье псеыу) Ьу ропеЬ!па Ьо!еь сЬгооаЬ сЬе 6!сег сосо сЬе опс)ег!у!иц аааг чч!сЬ ап епсрсу сь-ааосе пеес)!е. Абег ЬуЬпйааиоп, Ьас1с !!аЬс!пс ч!а а !!аЬс Ъох сап Ье тес! со аВВп йе Ьо!еь ш сЬе 61сег ъч!сЬ йе спаг!сь сп йе асаг.
Ману спчеьиаасогь ргеуег со опепс сЬе 6!сег Ъу ыспц ьЬагр ьеысогь со сос япа11 поссЬеь ас чапом росии оп си епешпуегеисе. Айег сЬе поссЬес! апс! ошиЬегес! 61сег Ьаь Ьеео р!асес) оп сЬе ьогуасе ос йе аааг, йе роысюпь оГ сЬе ьеггасюпь аге шаг)се6 оп сЬе Ьопош ос йе р1асе. ТЬе йареь ос сЬе ьеггасюпь апс) сЬесг роясюпь десше сЬе опепсасюп оГ йе 61сег оп йе р!асе. Опр сЬе ес!ае оЕ сЬе 61сег чч)сЬ Ынис-епс1ес! Еогсерь апй !и а яп61е яиоосЬ сиочегпеис, рее! сЬе 61сег !гоги сЬе ьнгГасе оГ сЬе аааг. С?ьоа!!у, сЬе со!ошеь аге сгапьуеггес) !и сЬе!г епигесу Ьогп сЬе аааг со сЬе 61сег !еач!па ЬеЫпс! яиа11 спс)епсас!опь ш сЬе ьш Гасе оГ сЬе спейшп.
СЧЬеп йе псаьсег р1асе и !псоЬасес) ас 37'С, йе гепса!и- !пВ Ьассепа агочч со 61! сЬе )пс)епсассопь Ьос с!о пос ехрапс! йгсЬег. Ргосеес1 сч)сЬ оие оГ гЬе Го11очч)па ор6опь аь арргорпасе: ° 1.уье сЬе Ъассег!а ас!Ьег)иа со сЬе 61сег аид Ъ!ис! йе ВЬегасес1 Е)ХА го йе шсгосе11 1оье ог пу!ои 6!сег няпВ сЬе ргосес!нгеь с!еьсг!Ъед ш Ргососо1 31. Ргосеес1 чч!сЬ ЬуЬг)йонас!оп аь с!еьсг!Ьег! ш Ргососо1 32. ° 1.уье йе Ьассег)а аис! нпгпоЬ!!!ге сЬе Е)!ч)А аь с!еьсг)Ьег! !и йе а1сегпа6че ргососо1 ас сЬе еис1 оЕ йсь ргососо1. Ргогосо! 29| 5сгеепзп5Вассеаа! Со!огбес Ьу НуЬгзс(|гас|оп: Епгегтеа5аге Хип|Бегх 1.131 ° Р1асе йе 61сег, со1опу яс)е ир, оп йе аигЕасе оЕ а ЕгеаЫ.В (ог 5ОВ) айаг р1асе сопсаш- !05 йе арргорпасе ап6Ью6с. Айег шсиЬа6оп 1ог а Ее|ч Ьоигя |чЬеп сЬе со!оп!еа Ьаче Вго|чп Со а ыае оЕ 2 — 3 шш, ге|ионе СЬе 61Сег апс1 ргосеес) зч(СЬ )уыил апс1 ЬуЬг!с(!ааг!оп аа с1еаспЬед (п РгоСосо18 31 апс) 32.
ТЬЬ орсюп вЬои!с$ Ъе са!сеи ои!у |чЬеи сЬе сгаиьЕег оЕ сЬе со!ошей со сЪе 61сег Ь роог ог ипечеи, чзспсЬ зЗ ио| п|шаИу йе сесе. ° АшрИу йе со!оп(еа оп йе 6!сег Ьу сгапаЕегпп5 сЬе 6!сег Со ап аВаг р1асе сопса!0105 сЫогагпрЬеп)со1 (170-200 )зд)ш!) апс( |псиЬа6пц Еог 12 Ьоига ас 37'С. Ргосеес1 сч!ЕЬ 1уяв апс1 ЬуЬг!с(!гас(оп (Ргососо!а 3! апс1 32). ТЬЯ апзр! сбсаиои |сер (НаиаЪаи аизс Ме|еЬоп 1980, ! 983) Ь иесеььагу ои1у зчЪеи |Ье сору пшпЪег оЕ сЬе гесозпЪ|иаи| р1аяпЫ Ь ехрессез) |о Ъе 1озч (е.8., )Е а 1аг8е зе8шеис ос Еоге|8и Е|ЪСА Ьаз Ъееи зисегсез)) ог зчЬеи ЫИЫу з(е8еиегасе о!|8оиис!еосЫеь аге мед аь ргоЪея Уиз)ег иоипа1 с|гсцшяапсея с!оиез) )ЗМ|А зез)цеисез саи Ъе з(есессес) чегу еая!у Ъу ЬуЪпсИхасюи чбсЬоис риог ашр1!6сасзои оЕ сЬе гесои|Ъ|паис р!аяпЫ. Аизр!|6сассоп саи ои1у Ъе саге!с|) ош чбсЬ чессогз сЬас гер1|са|е ш ге!ахез) Еа|Ьюп (р!сазе сее !и|го|сас|юи со ЕЪ|З сЪар|ег).
° 'с)хе йе 61сег со ргераге а сесопс) гер!ка: а. Р!асе сЬе 61сег со!опу 881е ир оп йе аигЕасе оЕ а ЕгевЬ ЬВ (ог 5ОВ) айаг р1асе сопса!п!05 сЬе арргорпасе ап6Ьюск. Ь. Ьау а с(гу п!Сгосе11и!осе 6!Сег сагеЕи11у оп Сор оЕ СЬе 6гЯ ап|1 1сеу Со К аа с)еасг(Ьес) |п 5сер 4 аЬоче. с. 1псиЬасе йе "61сег аапс)сч(сЬ" Еог аечега! Ьоигь ас 37'С. ТЬе р!аяпхЬ аге ашр!|6ей Я Иеягед, Ъу ЕпгсЬег шсиЪасюи ои аи а8аг р!асе сои|а|ши8 сшогагирЬеико1. й Ргосеес) сч!СЬ 1уа!в апс! ЬуЬг!с)1саг!оп (Ргогосо!ь 31 ап|1 32), )сеер(п5 йе 6|!гесс аь а аапс(зч!сЬ с)иг)пВ йе 1уых апс1 пеисга1!гас!оп яеря Ьис рее1!05 сЬегп арагс ЬеЕоге сЬе 6па! счааЬ (18Ь-Ногосчка апс( Виг1|е 1981). 7. 1псиЬаге СЬе шавгег р1аге Еог 5 — 7 Ьоига аС 37'С ип61 йе со!оп!еа Ьаче гедгосчп (р1еаве аее посе со 5сер 5).
5еа1 йе р!асе сч!ЕЬ Рага61|п, ап|1 асоге |с ас 4'С ш ап шчегсес1 роя6оп. АЕТЕКМАТ!ЧЕ РКОТОСО!а КАР!О ЕЧ5!5 ОЕ СОЕОМ!Е5 АМЮ В!МО!МС ОГ ОМА ТО МУЮМ НЕТЕК5 ТЬе ЕоИозч!иц ргосес(иге, Ьахес) ои а ргососо! г)ече!ораз) Ьу Сазу 5сгий )и | 983 ччЬИе Ье |час а росс-з)ос !и Тош Маизас!а' !аЬогасогу, еИгизиасеа сгеасгиеис оЕ иу!ои Ез!се|а сч!ЕЬ аИ|аИ аис! саи саче Игие |чЬеи с(еаИиц ччсЬ !агце иигиЪегх оЕ 6!|егя Мосе йас иИгосеИи!осе Ез!се|а гиау ои!у Ье исес! !и ЕЬ!а ргосес(иге 6 йеу Ьаче Ьееи аисос!ачес! Ргюг со со!оиу сгаиь(ег.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
