Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 36
Текст из файла (страница 36)
Ме(Ьос1 1, Айег гегиоч!иц йе Ез!сега Егот сЬе сор а5агоае (5сер 5), р!асе йези, СЗМА а)с!е ир, ои рарег сосне!а Еог 5 — з 0 зп|иисея 2, НЧЬеи йе!г ес)Вес Ье5!и со сиг!, р!асе йе Ез!се|а зи асас)са оЕ сеи )игег!еачес( нч!ЕЬ сзгси!аг СЧЬасгиаи ЗММ рарегя Р!асе а Еесч ЗММ рарега ои йе сор аис! Ьоиоги о( йе яас1|. 3, Р)асе сЬе ссас)сс ои а агиаИ р!ас(огги (е.5., аи !ичеггес! Ругех сЫз) зи аи аисос!ане. Ехрохе йе Ез!Еега со аасгеаиз|и5 асеан" Еог 3 ги!пасах И.е,, 100'С; аноЫ хорог-Ьеасес! ссеаги). 4. угала(ег сЬе агас)с о(ЕИсег рарега аис) и!сгосеИи!осе ЕЯега со а часииги очеи.
Ва!се Еог 2 Ьоига ас 80'С ъчЬИе с)ганн!и5 а часииги сои|!ииоиа!у. Кегиоче аиу ЗММ рарег йас а6сИа со |Ье и!сгосеИи!осе ИИега Ьу аоа)с)иц зи 2х 55РЕ Ье(оге ргеЬуЬпсИЯзиа. Рго1осо! 30 5сгееп~пд Вас1епа! Со!оп~еь оу НуЬпйлабоп: магде Мыгпоегь н!5 мстнов !5 с45св то Рсатс Ассв сивссОс1ссстсч ксрпсатс 1аг8е пцшЪегв оу со1ошес оп!о шсгосе!10!осе ог пу!оп 6!сегы ТЬе ргосес1цге ь с!епчес! Ггосп НапаЬап апс! Мезе!зол (1980, 1983) апс! 14 сЬсейу цсес! счЬеп р1а6п8 оцс Ьассепа сгапФоппес! Ъу а р1аяп1с! с1)ХА 14Ъгагу.
ТЬе Ьассепа аге р!аСес! 06гесбу угош а !галс!оппа6оп ш1хгцге ог ап ашр146ес! а!14)цог ос СЬе ст)ХА 11Ьгагу оп!о 41есег8епс-ггее пЬгосе1101оье 61сегя апс1 гер!сса 6!сега аге ргерагес! Ъу 61сег-со-61сег сопсасс. с)яп8 сЬ14 сесЬшс!це, ас псапу ас 2 Х 104 со1ошес рег 150-ппп р1асе ог 104 со!оп!ее рег 90-спш р1асе сап Ье гер1ссасес1 апс! шЪсесрсепс1у асгеепес! Ьу ЬуЪг!с!!гас!оп. Рог сцгсЬег 1пКогшас1оп оп 6!сетя р1еасе гегег со сЬе 1псгос!цсс1оп со Ргососо! 28. МАТЕсс!АЕ6 САС)т!ОЫ: Р1еасе сее Аррепс!1х 12 1ог арргорпаСе Ьапс!!1пе о1 та!ее!а!с гпаг$сес! сч1СЬ <!>. Мес1са СВ ос 5ОВ аВас р1асеь солсат108 арргорласе алс1Ъ)ос)сс Р1асес сЬас аге 2 — 3 с)аус о!41 81че сЬе Ьеы гею!са 1ц сЫс ргососо! Ьесаюе сЬеу аЬюсЬ Яшс) Гсош сЬе Ьассепа! сцосц!цш цюге геай!у.
С.В ог 5ОВ аВаг р1асеь солса!0108 арргорласе алс161011сь алс) 25;4 1ч)ч) В)усего1 С.В ог 5ОВ р1асеь солсат108 сЫогатрйел)со1 <1> Ореюца1, р1еасе сее 5сер 12. СЫогашрЬешсо! Ь сцрр1ешецсесС ас 170 — 200 Ссс)ш!. прес!а! Есссссрпсеп1 В)илг-еле)ес) 1огсерь 1е.В., Мс)1!роге Согсерь) Нурос)ест!с леес11еа П В ВаиВе) Н)!сисе))и)осе 1М1111роге НАТГ, ог ес)и1ча!елг) ог Ху!ол 1111егь, сгег1)е алс) с)егегВелг-1сее 5уг)лВе Ъагге1 13 сс) САсЬагтал ЗММ ссссо)ас ВВес рарегс Ргераге а ссас)с оСССъасшап ЗММ рарегс 1п а0чацсе !оце 1ог еасЬ шсгосе!1ц1осе ос пу!оп 61сег, р!ца а тесе срагес) сцс со а ыге 4118Ьс!у 1аг8ег сЬац сЬе В!сега.
ТЬеае аге соцццегсса11у ачас!аЫе ас ргеецс епс1ес сгош аечега1 шапцуаесцсегс. Сугар сЬе пассе от СуЬасшац ЗММ рареп ш а1шцшшц уоа ацсс ыегс!пе сЬесц Ьу ацсос1айц8 Сог 10 цссццсеа ас 15 ры 11.05 Ь81сшс) оп 1141шс! сус1е. 1.152 Ртосото! 30; 5стеетп6 Вастет(а! Со1огбет Ьу НуЬт(т((тат(оп: Е.атбе 74итЬеть 1.133 АсЫсг!опа! КеацепЕВ 5|ер 74 оЕ сЬ)а ртососо) тес)и!теь сЬе теаВепсь )всег7 |и РтососоЬ 37 апс( 32 оЕ 7675 сЬарсет. Чесгог5 апс! Васгегса! Ягаспь Е, со6 ята|п, стапа5оттег7 сч!76 тесотЬ(паис р)авт)г)я аз си!сите Усе Ьассепа сгапс(от|пес) Ьу опе ос йе |песЬоба е)еьсг!Ьеа )и Ргососо!ь 25 сЬгопВЬ 26 оЕ йи сЬарсег.
от Атр)!утес) а!к)иог аусОА)А !|Ьтату, Втомтп ав сипите Р)еасе еее СЬар|ет ! с, Ргососо1 !. МЕТНОЕ) Р!а6щ ОссЕ Е!се ТгапВЕоггпаг!оп М!х 1. ХцшЪег сЬе г(гу Ес!сета сч)сЬ а аой-!еаг( реис|! ог а Ъа11-рошс реп, |чес сЬеш |чЬЬ ччасег, апе( шгег!еаче СЬегп Ъеичееп г!гу |А|Ьагшап 3ММ 61|егя 'чСтгар СЬе ьгас)с оЕ Е|1Сега 1ооье1у |п а!пгпшцш Ео)1, апг( а(еп112е сЬегп Ьу апсос!ачша (15 ря [ !.05 )сВ)сшс] Еог 10 ппппсеа оп !п)пЫ сус1е).
Ргераге епопаЬ Е|!сета со |па1|е опе ог с|то тер1|са| |тоси сЬе ьсагс)па аааг р1асея А)сЬопВЬ ссегае 6)сеть аге ргеуеггее) Еот сЬ)с ргосеапге, поп|!стае Ес!сеть и|ау Ье псе|) !Е по пюге гербеае ате со Ъе |паае Ьо|п |Ье |паяег р!асе. 2. |Ле асеп1е, Ыппс-епс1ег( Еогсерь со!ау а асеп1е 66ег, ппшЪегег! ьЫе г!осчп, оп а 2 — 3-|1ау-оЫ ЬВ (ог 5ОВ) абаг р1асе соисайшд |Ье арргорпасе апВЬ|оск. ЮЬеи сЬе 61сег (а |ЬогопцЫу ччес, рее! 6 Егогп сЬе р!асе ап|1 гер1асе 11, ппшЬегес! 5Ые пр, оп |Ье я|гЕасе оЕ сЬе аВаг.
3. Арр1у сЬе Ъассепа, )и а япа!1 чо!шпе оЕ1щшд, со |Ье сепсег оЕ |Ье 61|ег оп сЬе |шгЕасе оЕсЬе аВаг р1асе. Оае а асеп1е 61ааа аргеас!ег со е!)аресте сЬе Вшд ечеп1у, 1еач(п6 а Ъогг!ег 2-3 ппп счЫе агоппд сЬе с)гсшиЕегепсе оЕ |Ье 61сег Егее оЕ Ъассепа. А )атее 61|ег (! 57-|п|п йа|пе|ег) |ча! асса| пгпобасе пр со 0 5 тп1 оЕ Ве)п)6 сои!а!п)п6 2 х ! 0' ч)аЫе Ьассепа. А япа)! 6!сег (82-пип спап|есег) сча! ассою|по|)асе пр со 0.2 |и! оЕ !)0п)6 сои!а)п)па а — )04 Ьассепа. 4. 1пспЬасе йе р!асе (попшчегсее() сч(сЬ сЬе 1Ы а)аг Еог а Еевич пипи!а 1и а 1апппаг Воъч Ьоо|1 со а!1оьч сЬе |посп1ши со ечарогасе. ТЬеп с!оье |Ье!Ы, шчегс сЬе р1асе, ап|1 шспЬасе ас 37"С пи!1! япа!1 со!оп(еь (0.1 — 0.2-пип сбашесег) арреаг (-8-!О Ьопгь).
5. 1Е г!еа)ге|1, гер!ка Е|1сега гпау Ъе ргераге|1 ас сЬса асаВе (ргосеег) ъч(сЬ 5сер 6). ОсЬегсч(ае, ргераге |Ье Ъассепа! со!оп)еь Еог а(огаВе аС -20'С: а. ТгапьЕег |Ье 6!сег со!опу ьЫе пр со а!аЪе1е|1 ЬВ (ог ВОВ) айаг р1асе соисаш(пВ |Ье арргорпасе ап6Ъ|опс апг! 25ето 61усего1. Ь. 1пспЬасе сЬе р1асе Еог 2 Ьопгь аС 37'С. СЧЬеп стог)е)па |ч)сЬ а еП)4А !!Ьгагу, 6 Ь Ьея со (сеете |Ье |па|сег р)асе. Ртеебпд аестеаьес сЬе ром|Ь|)|су оЕ сопсапнпасюп чай |по!сЬ апс) 6|пр3 апе! Ргеьегчеь сЬе |пас!ее р!асе Еог |папу пюпйя А1сегпас)че!у, сЬе п|аасег Еасег| сап Ъе |гоге|С Еот пр со 2 |чее)е| а| 4'С оп 1В от 5ОВ р)асе| соп|аиппВ аппЬюис апе) по а!уеего!. с.
5еа1 |Ье р1асе сче1! сч)сЬ Рага61ш, апе! а!иге и 1и ап 1пчегсе|1 рояпоп ш а аеа1ес! р!агапе Ьаб ас — 20'С. Кер!)саь сап Ье |па|)е айег сЬаъч!па |Ье |пас!ее р!асе а| гооп| сеп|регаште (аса! |и |Ье |пчег|- ее! Рояиоп). )уапц Со!оп!еь апд В!пс~!пц о1 0МА 1о Гйегь Нтв РКОтОСОЕ ОВ5СИВЕ5 тНЕ ОВЕВЛттстН ОЕ О!~А Егогп Ьастепа1 со!оп!еа тгапауогшес! тч1тЬ гесошЪтпапт р1аяптсЬ, апт! йе аиЪаес!иепт 6х!пВ оГ йе пис1ек асЫ то йе ппгосе11и1оае ог пу1оп Вт1тега ш яти. ТЬе тпетЬос! 1а Ъааес! оп йе опрпа! Ргосес1иге оГ Сгиппеш апс! Ноапеаа (19756 ТЬе ЬуЪг!с!!хат!оп оу гас!1о!аЪе!ес! РгоЬеа то пис1ек асЫа 1штпоЪ11!гет! оп Вт1тега 1а ргеаепсес1 ш Рготосо1 32. ВотЬ Ъа!с!па апс! сгоаа-11и!с!па аегче то 6х йе Ьастепа! 13Ъ!А то тЬе пу1оп ог ппгосе!1и1оае 6!тетя ТЬе сЬотсе Ъеттчееп тЬе ттчо шетЬосЬ с1ерепсЬ оп тЬе ес!шршепт ат Ьапс! апс! тЬе тчау ш тчЬтсЬ йе Вт!тета тч!1! Ье иаей 1Е тЬе Вт1тега аге со Ье ЬуЪгЫ1хес! тч1тЬ аечега! с!!6егепт ргоЪеа апс1 атг1ррес! Ъеттчееп ргоЪ!па геаспопя тЬеп 6 !а Ъеттег го сгоаа-1!п1с йе 13ЫА то тЬе Вт1тега чч!тЬ !Лт 1!аЬт, Рог а!па!е ЬуЪг1с!!хат!оп геаспопя тче Ьаче пот Ъееп аЫе то с!1асегп а сбйегепсе Ъеттчееп гЬе тъчо 6хатюп тпетЬосЬ геВагсбпц йе ейк!епс!еа тч!тЬ тчЬ!сЫЭЪ!А !а Втхес! то тЬе 61тег, тЬе ашоипс оу попарес66с Ъас!сВгоипс! ЬуЪгЫ!хат!оп, ог тЬе штепяту ог сг1арпеаа оу йе аитогас!1оцгарЬ1с яапа! Егош а роя!иве со1опу.
Сгоаа-1тпЫпВ 1а Еаатег йап ЪаЫпа, тес!и!г1па 20 — 30 аесопсЬ рег 61- гег, сошрагес! го а 1-2-Ьоиг Ьа1се. Ночтечег, сгоы-1!пЫпв 1а иаиа!!у сагг1ес! оит !п а шасЫпе тЬат !а ас!1иатет! то с1е1!чег а ает аптоипт оу епегау то еасЬ 6!тег. ТЬеае 1Лт 1!цЬт сгоаа-1ш1сега аге ехрепяче апс! Вепега!1у Ьат е а Ие оЕ -1 уеаг !п ап аспче 1аЪогаГогу. ттасииш ЪаЫпц очепа соат аЬоит тЬе ааше агпоипг Ьит 1аат 1О уеага ог тпоге !п чегу аспче с!ерагггпепта.
МАТЕК!АЕ5 СА11Т!О!ч1: Р1еаае аее Аррепт1!х 12 1ог арргорна1е Ьапт!!1пв о1 тпагегта!а гпаг!сег! чч11Ь <! >. Войегв апс! Бо!обопв Р1еаае аее Аррепт1!х 1 1ог сошропеп!а о1 а!ос!с ао1ипопя Ъи11егя апс! геавепть. Ет1!иге атос!с ао1ипопа 1о 1Ье арргорнате сопсеп1гапопя Оепатигтц ьо1ипоп 1с1еитга|тх1пд ьо1ипол 5О5 110;4 тч1ч1 Орттопа1, р!еаае аее яера 1 апа 3.
2х 55РЕ прес!а! Ес!о!рптеп$ С1аьа ог р1ааттс тгауа Еог ргосеьяпд Ятега Сауетегта тгауа аге Ыеа! тот тЪЬ рпгроае, аа твеу сап ассоптптос!ате Ьатсвеа оу пр то 25 6!тета о! 9 — твспт Йаптетет. 1ЛЗ5 1.136 СЬартет 1| Р!алтсдл алд ТЬест й1леуи!пея |и Мо!ети!ат С1олЕлч М|тто|чаче очел, затаит Ьа)сслд очел, ртезет то 80 С, от (Л' 1)фт<! > етояпбл)с)лд с)еч)се Р!еасе сее Зоысе Ьоо)с Еот а 1Ьс оЕ шапиЕасситесь оЕ стоя-!|пЫпц дечтсел.
СС|Ьаттал ЗММ рарег Чессогь аптек Вассегса! Яга!пь Ет)теть еагту)лд ео)ол)еь оЕ Е. со1! ттальуогталсь Уле стаыЕоппаиь ргератед Ьу опе оЕсЬе шесЬодл делос!Ъед ш Ртососо!ь 28 сЬ|онаЬ 30 оЕ сЬ!л сЬарсег. МЕТНО0 1. Сис Еоиг р)есеа оЕ'|АЬасшап ЗММ рарег (ог ап ес)исча1епс) со ап арргорпасе юге апд аЬаре апд 6с йетп пеас1у опто сЬе Ьопотпь оЕ Еоит д1ааа ог рсааск сгауя 5асигасе еасЬ оЕ йе рсесеа оЕ ЗММ рарег лчссЬ опе оЕ сЬе Ео!1осчшц ьо1идопя ! 09 а Я>5 сорсюпа1) дена!от)па ло1ис!оп неисга!!т!на го!одоп 2х 55РЕ 2. Роиг оЕЕ апу ехсеаа 1нрлсд апс1 гоН а 10-тп1 р|ретте а!оп6 йе аЬеет Со япооСЬ оит апу а|г ЪиЪЫеа сЬас оссиг Ъессчееп сЬе ЗММ рарег апд |Ье Ьоссош оЕ сЬе солта!пег. !Е йе ЗММ рарет !л соо лчес, йе Ьассепа! со!оп!ез яче1! аид таЕ6лле днт!иа 1у|Ь.
ТЬе ЬуЬптатасюп яапа!л йеп Ьесоше Ыигтед апд апениасей апд и Ь лету сайки!с со !денс!Еу |пса| Ыиа! со1оп|ел |Ьат сдче т)ле со йе яана!. 3. с)ае Ыипс-епдед Еогсерз со рее1 сЬе ос!тосе!1и!оае ог пу1оп 6!сета Егош сЬе|г р1асеа апд р!асе йеш со)опу яде ир оп сЬе Я:б-1шргедпасед ЗММ рарег Еог 3 пиписея ТЬЬ сгеастпепс 1ип|ь сЬе йКняоп оЕ йе р!аяпЫ Е|Ь)А дит!па лиЬ|ес)иенс депаситасюп апд пеиста!|аадоп апд гели!сл !о а лЬатрет ЬуЬпсбтасюп л!аиа!. 4. Айег сЬе Елгас Исег Ьаь Ъееп ехроаед со йе Ю5 ьо!исюп Еог 3 пнписея сгапаЕег |с со йе весопд кеес оЕ ЗММ рарег аасигасед члсЬ дела!пппб ьо106оп.
ТгапаЕег сЬе гешаспдег оЕ сЬе Ет!сета 1п йе аагпе огдег ш |чЬ|сЬ |Ьеу |чете гешочед Еготп сЬесг ахат р)атея Ехроье еасЬ 61- сег со сЬе депасипп6 тю1исюп Еог 5 пиписея реп стаплуетт!па Ес!сегл Етоп| опе стау со апойег, иле сЬе едае оЕ |Ье Ест|с сгау ал а |старел со тешоче аь пшсЬ 6шд ал роы|Ые Ьо|п сЬе нпдегл!де оЕ |Ье 61|ет. А)сесна 6 те) у, теп|оче ехсея 1||1- иЫ Ьу стапьсегт!на |Ье 61|ет Ьлебу со а дгу рарет |отче!. Тту со ачо|д аесс!па 6иЫ оп сЬе яде оЕ |Ье 61сет сатту)на сЬе Ьассела! со!оп!ел.
5. ТгапьЕег СЬе Ес!Сета Со СЬе й|гд аЬеет оЕ ЗММ рарег, счЬ1сЬ Ьаь Ьееп аатигатед счсСЬ пеиСга1- )гспд ьосипоп. Ьеаче сЬе 6!сета Еог 5 пиписея Ордопа!т Кереас |Ы| стер носе. 6. ТгапаЕег сЬе Ес!сеть со сЬе 1аьс аЬеес оЕ ЗММ рарег, |чЫсЬ Ьаа Ьееп аасигасед счссЬ 2х 55РЕ. 1.еаче йе Ел!сеть Еог 5 пиписея '|Че ртеЕег то 611 а стау от сиЬ ЕялсЬ ал йас илед ш лчалЬ!па 61|егл айег ЬуЬтЫЬас|оп) лч!|Ь а чо1- шпе оЕ 2х 55РЕ апд |Ьеи со 6оас йе Ет!сета |голл Зсер 5 оп йе титсасе оЕ сЬ)ь ю!одоп тот чечота! ш|писея ТЬесеайег, |Ье сои|а|нет Ь аа!сасед со ян)с сЬе 61сет Ье1о|ч йе сит!асс оЕ йе ло!нс!оп апс! !ей ин61 сЬе !асс 6!сег со Ье |тот!|ед ир Ь япп1ат!у стеасед. ТЬЬ лсер ассотпр1ЬЬел с|то Воа1я ппя !па |Ье 61сет оЕ пеистаатаиоп то1исюп анс1 !пнпдадпд |Ье 6!сег |чЬЬ ЕСЭТА со сЬе1асе сача)епс сасюпышсЬ ал Малс апд йетеЬу со |иЬ|Ь|с тЬе ассюп оЕ апу теядиа1 пис!сале| йас деатаде ОЬ)А.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
