Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 34
Текст из файла (страница 34)
Кешоче сЬе р1асеь Егош сЬе шсиЪасог апд а(иге сЬеш Еог ьечега! Ьоигв ас 4'С, со а11очч йе Ыие со!ог со дече1ор. 8. 1депс(Еу со!ошеа саггу(пц гесошЬ|папс р1аяп!дя ° Со!ишь йаг саггу чч!!д-Суре р!аяп)дь сопга|п асс|Хе 33-Ва!асгоядаье. ТЬеве со!ишь аге ра1е Ыие (п сЬе сепсег апд депре Ыие ас йе|г репрЬегу. ° Со1ошеа СЬаС саггу гесошЬ|папС р!аяшда с1о поС сопга|п асдче !)-Ва1асСоядаье. ТЬеве со!ишь аге сгеашу-ччЬ|се ог е8уЬе11 Ыие, югпес(шее чч)сЬ а Еашс Ыие арос ш сЬе сепсег. Ч)ечг(п5 сЬе р1асеь аракс а сапагу уе11огч Ьас)сцгоипд сап епЬапсе сЬе еуеь аЬ|1!|у со йхсппдпасе Ьес|чееп Ыие апд |часе со1ошея 9.
5е1есс апд си1(иге со1ошеа саггу)п8 гесошЫпапс р1аяп(дя В1ие ог |чу|Ее со)оп!ез сап дече(ор |и сечега) д(ЕЕегепс ог(епсас)опа ш |Ье юсс айаг, ойеп геьешЫшц Еаг оЕЕ 01сед ца!ах|ее Кецагд1ем оЕ |Ье опепсадоп, |Ьеу аге геай!у ри Еед Ъу хсаЬЬ(п5 |псо йе сЬгп 1ауег оЕ ю(с аВаг чдсЬ а ьсег(1е (поги!а|(пц пеед!е ог ьсеп1е соосЬР(с)г апд сгапс(егг(п5 сЬе (поси1шп со а сиЬе оЕ п|ейшп сопса(п(п5 сЬе арргорпасе апс(Ьшдс. АЕТЕКЬ(АТ1ЧЕ РКОТОСОЕ: 01КЕСТ АРРЕЕСАТ)ОЬ( ОГ Х-САЕ А(ч(0!РТС ТО АСАК РЕАТЕ5 Ап а(1егпасве Со ргераг!пц Сор аут сап Ье асЫечед Ьу аргеайпц а сопсепсгасед ю!мюп о1 Х-аа) оп йе я|г1асе о1 а ргеп|аде аааг р1а1е, га(Ьег |Ьап )псогрогад па йе Ьа)оаепасед аа(ассоа(де й гоп аЬои1 (Ье епс|ге чо1- ише о( СЬе аааг шед!игп. Та1|е саге |чЬеп аргеад!пц йе Хца) ао!и((оп. Со)оп!еа (п йе сеп(ег о1 йе р(а(е шау Ье а деерег Ыие дие со чапа((опа (п йе согкепсгадоп о1 Х-Ва) асгоаа |Ье р!асе. МесЬод 1.
Р|ре(Се 40 р! о1 2ОА Хаа) ю!одоп апд, 8 песеахагу, 7 р! о1 20 4 )РТС ао!и(!оп оп(о йе сепСег о1 а ргегпас(е 90-пап аааг р1асе (е.а., СВ ог УТ) соп(агнпц йе арргорпа(е апдЬюск. Рог а 15-сгп йагпесег аааг р!асе, (сапа(ег 100 р! ос' Х-аа( ап|1, 8 песеааагу, 20 р! о1 1РТС Со йе сепсег о1 |Ье р!асе.
2. Охе а асеп(е аргеадег (ог а Ьепс Рачсеиг р)рессе |чЬоае с)р Ьах Ьееп аеа)ед !п а Е)агпе) со аргеад йе ао(одопа очег йе епдге юг(асе о1 йе р(а1е. !псиЬаге йе р(аСе а( 37'С ипЯ а)! о1 йе Ви!д Ьаа д!аарреагед. Васечке оЕ |Ье !огч чо!ас(!(су о( йгпе|Ьу! Еогшапиде, |Ы| ргоседиге сап са(|е ир со 3-4 Ьоигь )Е |Ье р(асе 'ь (геш(у гпаде. 3. 1поси)асе (Ье р(асе едй йе Ьассепа со Ье сеасед Ьу ьсгеа)с!па чч!(Ь а Ьассепа! 1оор, Ьу аггапа!па с(опеа чм(Ь соойрк)|я ог Ьу аргеайпц ир со 100 р! о1 а Ьассепа( аиарепа(оп (50,000 се))Ып)) оп йе я|г(асе оЕ а 90- гпгп айаг р(асе ог 200 р( оп а 15-сгп р!асе.
4. АЕ(ег йе (поси1ип| Ьаа Ьееп аЬюгЬед, !псиЬасе йе р!а1е |и ап шчеггед роя1юп 1ог 12 — 1 9 Ьоига а1 37"С. 5. Кеточе йе р!а(е 1гоп| йе 1псиЬаСог апд Яоге Ь а( 4'С Еог аечега( Ьоига, диппд ъчЫсЬ йе Ыие со3ог дече1ора со |Ы Еи)1 ехсепс. 6. !депс)(у со)оп(еь саггу(па гесоп|Ыпап1 р1аяпкЬ. Рго1осо~ 28 5сгееп~щ Вас1епа! Со!опте~ Ьу НуЬпй~айоп: ЬгпаИ МигпЬегь т нь ввостстствв ь ствво то всаввн л вмлтг нстмввв оГ !тапа(огшет! Ъассепа1 со!ошеа (100-200) сЬас аге т!(ареста очег аечега! а8аг р1асеа апт1 аге со Ье ткгеепет! Ъу ЬуЬг)т!(хасюп со СЬе ааше гат!то!аЬе1ет! РгоЬе (РгоСосо!а 29 апт! 30 т!еа! тч!СЬ йе Сгапа(ег от (птегшет!(ате апт! 1аг8е пшпЬег оЕ со1ошеы геарес6че1у).
ТЬе со!оп!еа аге сопао1Ыасет) (Пг!гЫет() опто а шаасег а8аг р!асе апт( опто а пЬгосеПи1оае ог пу1оп 61сег 1аЫ оп йе аиг(асе от" а аесопт) а8аг р!асе. Айег а реНог1 от 8готчй, йе со!оп(еа сЬас Ьаче Пготчп оп йе 61сег аге 1уает( ш яси апт1 ргосеаает( тот ЬуЬг(т!(гас!оп, аа т1егкНЪес1 ш Ргососо1а 31 апт( 32. МеаптчЬПе, йе тпаасег р1асе Ь асогет( ас 4'С ипсП йе геаи1са оГ йе ткгеешп8 ргосес)иге Ьесотпе ачат1аЫе. Очег сЬе уеагы йгее суреа оГ гю1Ы аиррогса Ьаче Ьееп пает( 1ог ит яси ЬуЬг)тПгасюп от 1уает( Ьастепа1 со1ошеы пЬгосеПи!оае 6!Сетя пу1оп 6!Сегы апт! 'тттЬаттпап 541 61тег рарегы Ху!оп 6!Сета аге сЬе пюас т!игаЫе оЕ йе йгее апд тчП! тч!сЬасапс( аечега! гоипг(а оГ ЬуЪгЫгхасюп апт1 тчааЬ(п8 ас е!ечасет) сешрегасигеы ТЬеу аге сЬеге(оге рте(еггед тчЬеп со!оп(еа аге со Ье гкгеепет! ает)иепПаПу тчтсЬ а пшпЪег о(о66егепс ргоЬеы 1п аЫе-Ъу-аЫе сотпрапаопы пу1оп Пт1сега у!е16 епЬапсет! ЬуЪг(т!!гас(оп ы8па1а ге1а6че со пПгосеПи1оае 6!сетя Ноъчечег, тчЬеп гкгеегбп8 Ьассепа1 со1оп(еы йе ЬуЬпйгасюп я8па! (а иаиаПу ао асгоп8 сЬас сЬЬ г1Негепсе Ъестчееп сЬе стчо ао1Ы ытррогь Ь пос а я8п16тсапс Гассог.
ЪттЬеп йеу тчеге 6гы !псгот)исес1, т)!суегепс сгеасшепь тчеге гет!шгет! со 6х ейк!епс1у 13ЫА со пу1оп сПсега ао16 Ьу т(Негепс шапитассигегы А1сЬоиПЬ аа6аЕассогу геаи!са сап Ье оЬса(пег) Ьу сгеа6п8 сиггепс1у ачат!аЫе пу1оп 6!сета аа тТ сЬеу счете шсгосеПи!оае, орсипа1 регСогтпапсе аПП гет!и(геа адЬегепсе со сЬе шапи(ассигега' шасгиссюпы "тЛтЬасшап 541 6!сег рарег, тчЬтсЬ Ьаа а Ь!8Ь ъчес-асгеп8сЬ, тчаа Птгзс пает) со гкгееп Ьассепа! со!оп(еа Ьу бег8еп еС а!.
(1979). 1С та подач гьет1 сЬ)е6у Со ткгееп аггаует! 1тЬгапеа йат аге атогет! аа си1сигеа от (пгПчЫиа! сгапасогшет( со!ишь (п аерагасе тчеПа от" писго6сег р1асеа (1(пЬго 5степ66с). ТЬезе огт(егет! 1тЬгапеа аге г(ир1касет( оп йе аигсасе ос а8аг тпегПшп (иаиаПу !п ат)иаге Ресб т!)аЬеа), апт! сЬе геаи1с!п8 со1ошеа аге йеп сгапагеггет1 со т'ттЬасшап 541 рарег апт! 1уает) еПЬег Ьу аПтаП ог Ьу а сошЪ)пасюп от" аПтаП апт) Ьеас (Мааа 1983). Сопе66опа Гог ЬуЬг(т!(гасюп о( йе итипоЬПсхет1 РХА аге еааепс(аПу Ыепска1 со сЬоае еыаЫьЬет! тот и!сгосе1- 1и1оае 6!сетя 1ЛтЬасшап 541 рарег Ьаа аоше ат)чапса8еа очес пьгосеПи1оае 61сегы 1с ь 1еаа ехрепыче, тоге т!игаЫе т!иг(п8 ЬуЪг(т!(гасюп, апд 1еаа ргопе со т)(асогс!оп апт! стас!т(п8 т(иг(п8 т(гутпц.
Нотчечег, ип1еаа саге ь са)теп т!иг!п8 йе т)епасигасюп ыер (Мааа 1983), йе атгеп8сЬ от сЬе ЬуЬг(тПгасюп ы8па1 (а ы8шбтсапс!у !отчет йап сЬас оЬса(пег( тгош пПгосеПи1оае 61сегы Рог гоисше ткгеешп8 оК Ъассепа! со1ошеы сЬеге(оге, пьгосеПи1оае ог пу1оп 6!сета гетпатп сЬе рте(еггег( сЬоке аа ао1Ы аиррогсы Ргососо! 28: 5сгееп!пе Вассепа1 Со!опгег Ьу НуЬНсйеа6оп: 5таП ЬуитЬегь 1.127 МАТЕК1А15 САС3Т!О!чС: рсеаье аее Аррепс!!х 12 гог арргорпаСе Ьапс)1!па ог таСег!а1а таг)сес) ъч!СЬ < ! >.
Мес1!а ЕВ ог 5ОВ айаг Р!асеь спаса!и!08 йе арргорпасе апВЬсобс сВ ог 5ОВ аВаг р!асеь спаса!и!08 сЬ!огатрЬеп!со! < 1> Орссопа1, р1еаье сее 5сер 3. СЫогаспрЬешсо1 Ь сарр!ешепсесС ас ! 70 — 200 Сс871П1. Бресса! Ес!ос ргпепГ Н!!гасе)!и!оае ВМ!!Вроге НАИ7Р, ог ес)и!ча!епг) ог Ху/оп 6!Сегь рспел пеесС поС Ъе сСегег8епг-Сгее ог сгегае. 5угт8е (3 сс), Нурос!егтсс пеесПеь (78 ВаиВе), апс! Яагегргоо! Ь!ас!с с)гаьэт8 сп!с Впсба !п)с) ТЪесе шасег!а!с аге псесС со опепс йе 61сегв оп йе шассег р!асея Рог ап а!сегпапче спейосс, р!еаье сее посс со Яер б.
ИгоосСеп СооСЬрсс)са ог спаси!апп8 )пои АсЫсбопа! Кеацеп$6 5гер 8 о!СЬ!а ргогосо! гес)и!геь Яе геаВепга !!агес! т РгогосоЬ 31 апс! 32 о!СЬ!а сЬаргег. Чес1ог8 апд Вас$егса! Ягаспь Е. со!! асгат, !сапа!огтес) счссЬ гесотЬспапс р!аьт!г)ь С!се Ъассепа сгапсгоппед Ъу опе ог сЬе шесЬосСс сСесспЪесС ш Ргососо!с 23 йгопаЬ 26 ог йа сЪарсег. Е. со11 агга!и, Сгапагогтес! сч!СЬ попгесотЬ!пап! р!аьт!с! !е.8., РС7С, пьес) аз а пеВаСгае сап!гор МЕТНО0 1.
Р!асс а ппгосе!101озе ог пу1оп 61сег оп ап аВаг р1асе (сеас р!асе) сопса)п!08 сЬе зе1еспче ап6Ьюск. Напа!е сЬе 6!сег тчссЬ 8!оче6 ЬапгСс ас 6паег о!1с ргечепс месс!п8 ог йе 6!сег апсС ргечепс СЗЪСА сгапсуег. 2. Ргасч а ппшЬегес) агсЫ оп а р)есе оу агарЬ рарег (1-сш-я)пасе цг)8). ХшпЬег йе Ьаье оу еасЬ аааг шазсег р1асе апс) р1асе йе р1асе оп йе аг)й Ргасч а шагЬ оп сЬе а)де оГ сЬе р1асе аС СЬе 6 о'с1ос1с роягюп. ТЪыпагСгспа а1!ож сЬе таяег р!асе со Ъе ог!епсасеа часЪ йе цпй 3. )3се яеп1е соосЬр!с)са ог пюсп1аппц !пора со сгапсЕег Ьассепа1 со!ошеа опе Ьу опе опсо сЬе 61сег оп йе сеас р1асе апс) сЬеп опсо сЬе шаьсег аааг р!асе йас сопса)пь йе зе1еспче ап6Ьсо6с Ьпс по 61сег.
Ма1се япаБ ьсгеа)сь 2 — 3 шш сп 1епасЬ (ог с)оса) аггапаес) ассог8)пц со сЬе ВгЫ рассегп ппс)ег йе 8!аЬ. 5сгеа)с еасЬ со1опу 1п ап Ыепска1 рояссоп оп Ьой р1асея СУр со С00 со1ошес сап Ъе ссгеа!геа опсо а с|па!с 90-ппп р!асе. 4. Р)паБу, зсгеа)с а со1опу сап!а!шп6 а попгесопсЬ)пап! р1аяпЫ (е.8., рРС) опсо сЬе 61сег апс) сЬе шаьсег р1асе. ТЬЬ перайче сопсго1 !с песеыагу со сЪоя сЬас сЬе гаспо1аЪе!е6 ргоЪе сап йьсппппасе Ъепчееп епсрсу р!аяп!й ап6 гесошЪ!пап!я 17ЪСА баашепсс Ьо1асеа Ьош гесопсЪспапс р1аяп!8с Ъу гезсг!ссюп епауспе с!еачаае апсС ааагосе ае! е!ессгорЪогеяь аге ойеп сопсапппасегС гасЬ р!аяпЫ ЕсЪСЛ ьецпепсея счЪ!сЪ сап сгеасе ргоЫешс реп сЪеье 6 аашепсс аге пьес! ас ЬуЪпйсапоп ргоЪес гог бгппссе!и-Ноцпея ссгееп!п8 (Сгппссе!и апсС Ноцпеы ! 976) оГ сгаыгоппед Ъассепа1 сосошея 1Ы28 СЬартег Ег Р(атттг(т аптЕ ТЬегг (Ете)ги!петт тп Мо!еси!аг С!оптпе 5.
1пчегт йе р!атеа апс1 тпспЬате (Ьетп аг 37'С ип61 (Ье Ьастегйа1 атгеа)са Ьаче аготчп то а чч(й(Ь оЕ 0.5-1.0 ппп (турка11у 6-16 Ьоига). Ат тЬь яа8е, тчЬеп йе Ьастепа аге агт1! 8готч(п8 гарЫ1у, тЬе Ейсег птау Ье сгапаЕеггей го ап а8аг р!асс сопташтп8 сЫогаптрЬешсо! апй шсоЬатей Еог а Еогйег 12 Ьопга ат 37'С (НапаЬап апс1 МеаеЬоп 1980, 1983). ТЬь ашр!т6сагюп яер Ь песеяагу оп!у тчЬеп тЬе сору пшпЬег оЕ Йе гесотпЬшапт р!аяпЫ Ь ехрестей со Ье 1отч (е 8., !Е а!аг8е ае8шепт оЕ Еогет8п ЕтХА Ьаа Ьееп шаегсей) ог тчЬеп Ы8Ыу йе8епегате о118оппс!еотЫеа аге чьей аа ргоЬеа.
Спйег поппа1 с(гсшпяапсеа, с!опес1 ЕтЬ(А ает(цепсеа сап Ье с1етестей чету еая!у Ъу ЬуЬпспгатюп чг(тЬопт рпог ашр!гбсагюп оЕ тЬе гесошЬтпапт р!аяпЫ. Аптр!тбсапоп сап оп1у Ье сагпес( оот тч1ЕЬ честога тЬат гер1кате тп ге1ахей ЕааЬюп (р!еаае аее тптгойпсйоп то тЬта сЬартег). 6. тМаг)с йе 6!тег ш йгее ог тоге ааупнпетг(с 1оса6опа Ьу атаЪЫпц тЬгопаЬ 6 апд што (Ье аааг оЕ йе техт р1ате чл(Ь ап 18-рапи пеей(е, апасЬей то а аут(пае, й(рред тп ччатегргооЕ Ыас1с йгатч(п8 ш1с (1пгба 1п1с).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
