Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 38
Текст из файла (страница 38)
Вой чесс!опа ос 1Ьесе ят!ис!опс а!не ехсеПеп1 гаси!са апс1 пе|йег Ьаь с!еаг-си1 аднапсааес ~ очег СЬе ойег. Ноиенег, ЬуЬг(д!хатюп |п 503б Еоппалиде ат 42'С 'ь !еаа ЬагеЬ оп пПгосеПи|оае 6!Сета йал 'ь ЬуЬг!д!хат!оп а1 б0'С !п ациеоиа со(ит!оп. ОЕ(сеи!пд йь ай алтайце В йе Ьчо- 1о 1Ьгее(оЫ с!отчет гасе о( Ьубг)д!гас!оп |п ао(ис(опс солсяп)па !оплати|де. Ыу!оп ЕПсега аге )треп(оис со 1Ье сне!есег(оис е6ессс о( аг)иеоис Ьубг!д!гас(оп ас Ь!ВЬ 1етрегасигея То гпая|гп!те йе гасе о( аппеаПпд о( 1Ье ргоЬе чиСЫПВ Сигает, ЬуЬгЫсеабопс аге иаиаПу сагпед ои1 ! (п ао!ис)опс о( ЫВЬ !оп!с ссгепасЬ (бх 55С ог бх 55РЕ) ас а 1егпрегасиге йа1 В 20-25'С Ье|ои Т (р!еасе ! 5ее 1Ье |п(оппа1юп рале| оп МЕЕТПч(С ТЕМРЕКАТС)КЕ5 !п СЬар1ег 10).
Вой 5О!ит(ол5 иог|с ег(иаПу ( иеП снЬеп Ьубг(д(гас(оп В сагпес| оис |п ас(пепит ею|челси Нонченег, и Ьеп ЕоггпагпЫе 'ь !пс!ос|ее| !п 1Ье ЬуЬгЫаабоп Ьийег, бх 55РЕ ь рте(еггег! Ьесаиае о( Па цгеатег Ьийег!пц роигег. гоолг сегпрегатиге, сгапссег йе ргоЬе со |се гчасег апг! агЫ 0.05 чо1шпе оЕ | |и ТгВ-С! (РН 7.2) апг! О. | чо1шпе оЕ 3 гт НС!. 5соге йе ргоЬе сп ке гчасег ипд! и В леедед. 5!п8!е-ссгапдед ргоЬес пеед лог Ье г1епашгед. 6. Адд 1Ье ргоЬе со йе ргеЬуЬпйтадои сю!исти сонет!ии йе 61сегя 1исиЬасе ас йе арргорп'- а1е сетрегасиге ии6! 1 — 3 С,ття 18 асИечед. 13ит!иВ 1Ье ЬуЬпйхасюи, )сеер сЬе солса!лета Ьо!ЙиВ СЬе Итегс 1|иЬС!у с!оаед Со ргечеиС СЬе 1088 оЕ 6шд Ьу ечарогатюи.
~Ле Ъелчееп 2 х |О' апд | х !Ое српг ос ттр-1аЬе!ед ргоЬе (грег|бе асьчЬу -5 х |От ерш/р8) рег ли1|П|сег ос ргебубг|д!сас!ол со1идоп. Ус)лб люге ргоЬе чдП саше сЬе Ьас!сбгоипд оЕ лопсрес|Е|с бубе|6|гас!ол со |псгеаье, гчЬегеас ияп8 |ея ъчП! гедисе |Ье гаге ос ЬуЪгЫыасюл, !Е о68опис!еосЫе ргоЬес аге исед, йеп р!еасе сее СЬарсег |О, Ргососо! 8, Еог о68опис!еосЫе ЬуЬгЫиасюл алд игасЬ|л8 солд!1|опт. НуЬпйсадоп лихшгес солса!п!п8 гаеПо!аЬе!ед яп8!е-ссгалдед ргобес глау Ье яогед ас 4'С Еог сечега! даус апд геисед гч|сЬоис Еигйег сгеасгпепс. 1п гоше сасея ЬуЬпйгасюп ргобес ргерагед Егогп доиЫе-ссгапдед ЕстчА сешр!асес сап Ье геисед айег Егеес|пб сЬе со!шюп, сЬаиг|п8, апд Ьот!- !л8 Еог 5 ш|писес тп а сЬеписа1 битле Ьоог|. 7.
'г)(Ьеи йе ЬуЬпйхадои са сотир!есе, телюне йе ЬуЬпйаасюи |ю1идои аид иитесбасе!у !ттегае тЬе 6|!Сета ти а!агре чо!шие (300-500 т!) оЕ )сгасЬ со!Шюи 1 ас гоот сегирегашге. Аи|сасе йе 6т1сегс иеис1у аид сиги 1Ьеги очег ас!еасС оисе дипиВ счасИид. Айег 5 ииии1ея Сгаиауег СЬе 6!Сета Со а ЕгесЬ ЬаСсЬ оЕ счааЬ тю1иСюи аид соидиие Со аВ!Саге СЬети цеи11у. Кереат СЬе игасЬ!ии ргоседиге 1и ке тоге. Ас по ьсабе диппП сЬе игасЬ|п8 ргосег|иге сЬои!д сЬе Ет!сегс Ье аПоъчед со г!гу.
8. )АгаьЬ СЬе И1ега гипсе Еог 0.5 — 1.5 Ьоигь ш 300 — 500 ти1 оЕ с)гасЬ ьо1ибоп 2 ас б8 С. Ас йВ рошс, сЬе Ьас1гбгоипд тс ияга11у )огч епои8Ь со рис сЬе Ес!сегс оп 61пт. 1Е сЬе Ъас1гбгоипг! В с611 |68Ь ог тЕ сЬе ехрепгпепс детали гчаь!Впб аг |ППЬ ссппбепс|ея тлипегье сЬе Ет!сегс Еог бО ш!пасет й 300 — 500 ш| оЕЪасЬ со1идоп 3 ас 68'С.
9. )Згу1Ье 6!сета !и 1Ье атг а1 топит сетрегасиге ои ЗММ рарег. 5сгеа|с1Ье иидегяс1е оС йе И- Сета ъчКЬ а ъча(ег-ьо!иЫе В!ие 86с1с аис1 аггаиае СЬе 6т)тета (ишиЬегед сиде ир) ои а с1еаи, с1гу, ВаС 8Ьеет оЕ ЗММ рарег. Ргеаа 1Ье 6т11егс бпи1у аиа!иат йе ЗММ рарег Со еигшге 81!с)с- |иВ. 10. Арр!у адЬеяче дос !аЬеЬ тат)сед сч!1Ь еКЬег гайоасссче !и)с ог сЬет!1ит|иеасеис тат)сета со сечега! аауттесгк!оса!юла ои йе ЗММ рарег.
Сочег йе 66егь аит1 1аЬе!с гч!1Ь 5агаи Чггар. 1)ае саре со аесиге 1Ье итар 1о СЬе Ьас)с оЕ йе ЗММ рарег аид ягессЬ йе итар очег йе рарег 1о тетлоче ит)и)дея ТЬесе шаг)гесс четче со а!|8п сЬе аисогаеПобгарЬ гч!сЬ йе 61|егя 1.142 СЬартег 1т Р!аятиЬ апй ТЬеп ссзеуи!петя т Мо!еси!аг С!отп8 Апа!у515 о1 НуЬгтйкабоп 6тцпа! апт! Иепббса1топ о1 Ро5!бсге Со!опте5 Апа!ухе йе 61сегз Ьу РЬоярЬогсша81п8 ог ехрояп8 сЬегп со Х-гау 6!ш (Койа)с ХАй-2, ХАтс- 5, ог сЬе)г ес!шуа!ептя) Еог 12 — 16 Ьоигя ас — 70"С су)тЬ ап 1пгепя1!усп8 зсгееп. ТЬе орсипшп ехрозиге гиии Ъе егпрсгка1! у йесегпипей апй ейП йерепй оп йе ыхе о! сЬе со1опу, сЬе сору пшиЪег о! сЬе р!аыптй чессог, сЬе зрест6с асс1чау оу сЬе ргоЬе, апй сЬе туре ау 61сег ияей. Ттеуе!ор сЬе 61ш апй а!18п Ь су)й сЬе 61тегя ия)пц йе шаг)сз 1е6 Ьу сЬе тай!паст!уе ш1с.
()зе а попгас1юасстуе 6Ьег-6р реп 1п а попЫас1с со1ог то тпаг1с сЬе 61ш су)сЬ сЬе роясюпз 01 йе азупппеспса1!у 1осатес1 йоо оп йе пшпЬегес1 61сегя. 12. Таре а рсесе 01 с1еаг Му1аг ог осЬег 6пп сгапярагепс зЬеес со йе 6! ш. Маг!с оп сЬе с1еаг яЬеес йе рояйопя оу рояпче ЬуЬг)й!хатюп я18па1з.
А)яо псаг1с (1п а йНегепт со1ог) СЬе рояСюпз оу сЬе аяупнпеспса!1у 1осатей йота. Вешоуе сЬе с1еаг йеес !гош йе 61тп. 1йепт!Ту сЬе рояссие со1ошез Ьу а!18шп8 сЬе йоса оп сЬе с!еаг зЬеет ссЬЬ йояе оп сЬе аааг р1ате. А1сегпассге!у, р!асе йе 6!ш оп а 118Ьс Ьох апй а1!8п сЬе ахат р1асе сопсашсп8 сЬе спаыег со!опгез ог 61сег гйй йе зсаЬ шаг!гз !п йе ахат/тпазсег 6!сег. 1йепсс(у роыпге со1ошез Ьу а118псп8 сЬе ЬуЬпспгапоп ыхпа1з кйсЬ со1оптез оп йе тпаыег р1асе. СсгЬеп зсгеепш8 со1ошез ас М8Ь ссепысу, сс Ь яошейгпез еаыезс со гешоче сЬе гпазсег 61сег !гоги йе а8аг р!асе апй со р1асе сс йгесс1у оп сЬе ашогайохгарЬ. 16пе ир сЬе 61сег сессЬ сЬе 61тп ейа сЛе пеей1е!реп тпагЬз.
расегз 8! ией со 3ММ рарег аге геай!у гепючей тп ргерагапоп Сот зспрртп8 (р1еазе зее СЬарсег 6, ргососо1 1О) Ьу р!ассп8 сЬе ЗММ рарег ълй ассасЬей 6Иегз ш а сиЬ о! Зх 55С. ТЬе счасег-ю!иЫе 81ие тпяо)чез геай!у ш сЬсз зо1исюп, ге1еаып8 сЬе 6Ьегз !от !гааз!ее со а зспррш8 зо!ийоп. Т)зе а зсеп!е соосЬрк(с ог шоси1апп8 пеей!е то тгапзГег еасЬ рояпче Ьассепа! со1опу тисо 1 — 2 тп1 оу псЬ тпейшп (е.8., 1.В, т'Т, ог Тегпбс Втой) сопсаш(п8 йе арргорпате ап6Ьюпс. Ойеп, сЬе а118пшепс оЕ сЬе 6!сегз сгссЬ сЬе р!асе с!оса пос репин тйеппбсасюп оЕ ап тпйлссиа! ЬуЬпйтйп8 со!опу. !п йсз сазе, зегега1 айсасепс со1ошез зЬои1й Ье роосей.
ТЬе си1сиге Ь 8готгп Сот зачета! Ьоигз, й! осей, апй гер)асей оп ахат р!асез ю аз со оЬсаш -500 со1ошез рег рсасе. ТЬезе со1ошез аге сЬеп зсгеепей а зесопс! сппе Ьу ЬуЬпйгасюп. А ып81е, яае11-сзо!асей, роыйге со!опу зЬои1й Ъе рк1гей угогп сЬе зесопйагу зсгееп апй мей !от тагсЬег апа1уыз.
14. 15. Айаг а репой оу 8гозасЬ, р1аяпсй Тт!я)А сап Ье !хо!атей тготп сЬе си!сиге Ьу опе оу йе пншргерагасюп шесЬойз йезспЬей сп Ргососо!я 1 апй 4 апй сап Ье Ьсгйег апа1ухей Ьу геятгксюп епс1опис1еаяе й8еяпоп ог Ьу РСй (р1еаяе яее СЬарсег 8, Ргососо1 12). 1п)огтаг(оп РапеЬ 1.143 СНЕОКАМРНЕВ(!СОЬ СЫогагпрЬешсо) шЫЬ~ь ргосеш аувсЬеж ап|Е Ыос)са Ьоас (3НА аупсйеяа Ьш Ьаа по енес! оп гер1касюп оЕ ге!ахей р1аяпЫя ТЬе сору пшпЬег оЕ ге1ахес( р!аяпЫа йегеЕоге шсгеааеа с(ипп8 шсиЬайоп оЕ йе Ьассепа) си1сиге ш сЬе с)ги8.
Агпрййсасюп ь песеыагу со асЬ|ече Ь|8Ь у|е!|Ь оЕ ге1ахес( р1аяпкЬ, счЫсЬ воггпайу гер1касе со оп1у шос)егасе пип|Ьеь ш сЬе(г Ьоас Ьассепа. Р1аяш|Ь оЕ а !асег Вепегаиов (е.8., р()С р!ааш)сь) сапу а шоеййей со1Е1 герйсоп апс) герйсасе со аисЬ Ь18Ь сору пшпЬеь |Ьас ашрй6сасюп Ь иппесеыагу. ТЬеае Ь18Ь-сору-пишЬег р!аяпЫа сап Ье рипусес( |и !агйе у!е16 Егош Ьассепа! си1сигеа |Ьас аге айо|чей со Вго|ч со аасигайоп и| сйе аЬ|епсе оЕ сЫогаспрЬепко1.
Ночгечег, сгеасп|епс чдй сЫогагпрЬепко1 ||61 Ьаа |оспе а|(чапсайеа ечеп Еог йеае р1аяш|Ь. Весасье й Ыос1|а Ьассепа! гер1касюп, |Ье Ьий| апй чьсоясу оЕ йе Ъассепа!!уаасе аге гейисей |чЬьсЬ Вгеас!у яшрй6еа рипйсайоп оЕ сЬе р!аяпЫ. 1п Вепега1, йе Ьепейь оЕ сЫогагпрЬешсо1 сгеасгпепс оиссче(8Ь |Ье япаП шсопчешепсе |пчо!че|1 |и а|Ыш8 йе с)ги8 со сЬе Вгосч(п8 Ьассепа1 си1сиге. Ргорегс!е н он о н ~ х 'хс — с — сн он н нн о снс|, Р!С()КЕ 1-13 5ггисгиге оЕ СЫогаш Ьепко( СЬеписа! Ьоп|Ь с1ер!сгес( Ьу ййед аггосча арреаг аЬоче йе р1апе оЕ СЬе Е!Виге; Ьоп|Ь гергеаепСед Ьу даайег! Ппеа арреаг Ье1о|ч йе р!апе о( СЬе Е!Виге.
а апд Моде оЕ Ас1|оп оЕ СЬ!огагпрЬеп(со! ° СЫогашрЬепко! шЫЬ|ь Ьассепа! ргосеш аупсйеяа Ьу |1есгеааш8 йе саса!ус(с гасе сопасапс оЕ рер|Ыу! !сапа(егаае,!осасе|Е оп 705 пЬоюшеа ()3га(паа ес а!. 1987). ° СЫогашрЬепко1 |чаа йьс (ао1асе|Е Егогп а юй асйпо|пусесе ш !947 (ЕЬг!кЬ ес а1. 1947), ап|1 Ьу 1930, (с счаа ачайаЫе ш а аупйейс Еопв |Ьас Ьесагпе ъчЫе1у иге|1 аа а Ьгоа|1-арессгшп апйЬюйс (р1еаае аее уййиге 1-13). Но|чечег, (ь с1шка1 сье Ьаа япсе Ъееп сигсайе|Е Ьеса|ье оЕ |Егий-шс)исес( Ьопе-гпагго|ч сох|с1су апй Ьесаые геаьсапсе со сЫогашрЬешсо! дечдор| геасй1у ш Ьассепа (Еог гесйеи; р1еаае аее Я|а|ч 1983).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
