Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 41
Текст из файла (страница 41)
ТЬе со|пр!е|пептаПоп рер|Ые а1ао атаЬ~!ьеа ап 1птегЕас|а! Еоиг-ЬеПх Ьипй!е сошроаей оЕ |ъчо Ье!кеа Еготп еасЬ оЕ тъчо вюпошегы Ману оЕ |Ье р1аяпЫ честите сапу а аЬог| ае8шевт оЕ П. соП Р)ъ!А соп|а|шп8 |Ье ге8и!аготу лет)иепсел ап|1 |Ье сосПп8 н|Еогшайоп Еог |Ье Пгат 146 апнпо ас)йа оЕ |Ье 8-Па1астоыйаае деве. ЕшЬеййей ш |Ье со|1- ш8 ге8)оп ь а ро1ус!ошп8 я|е |Ьа| ша)пташа |Ье геасПп8 Егатпе апй геш!ь ш |Ье Ьагш1ея штегро1а|юп оЕ а япаП вшпЬег оЕ а|п|по ас)йа |п|о |Ье анино-тегпнпа1 Ега8шепт оЕ)З-8а!астояйаае. ътестога оЕ |ЬЬ суре аге |пей ш Ьолт сеП| |Ьат ехргея |Ье сагЬоху-тетю)па1 рог|юп оЕ !)-Па1астоыйаае. А!|Ьои8Ь пеПЬег |Ье Ьоы-епсойей пот |Ье р!аыпЫ-епсойей Ета8шепта оЕ ))-Па!астоаЫаае аге |Ьетпае!чеа аст)че, |Ьеу сап аяос1- 1.150 СЬаргет 1| Р1аяпиЬ апгЕ ТЬе)т 1Ле(и1пем т ЕчГо!еси!аг С(оиспд асс со Еопп ап епхута6са1!у ас6че ргосе)п.
ТЬЬ суре оЕ согпр1етепсасюп, ш лчЫсЬ с)е!ес)оп пилсапь оЕ сЬе орегасог-ргохипа1 аедшепс оГ йе 1асУ депе аге сошр!етепсес) Ьу В-да1ассоаЫаае-педас)че тисапь йас Ьаче йе орегасог-ргохипа! гед)оп 1псасс, Ь са!!ес) а-сотр1егпепса6оп (()1!тапп ес а1. 1967). ТЬе )ас Ьассепа йас геяй (гоп| и-сотр1еп|епсасюп аге еаы1у гесодпье|1 Ьесасье йеу Еопп Ыие со!оп(еа ш |Ье ргея епсе оЕ сЬе сЬго|подепк Х-да1 (Ногсч(сх ес а1.
1964; Райев апс) )асоЬ 1968; р!еаае аее |Ье шЕоппасюп рапе1 оп Х-САЕ). Нолчечег, шаегсюп оГ а бадтепс оЕ Гоге(дп Р14А )псо йе ро1ус(оп(пд ясе оЕ сЬе р1аатЫ а1тоя |пчаПаЫу геяйа ш рго|Ьлссюп оГ ап апипо-сегпипа1 Егадтепс сЬас Ь по 1опдег сараЫе оЕ а-согпр!етепса6оп. Вассепа саггу|пд гесоп|Ь~папс р1аяпкЬ сЬегеГоге Еопп |чЬлсе со!ошея ТЬе с!ече!орп|епс оГ |ЬЬ яп|- р!е со!ог сеас Ьаа дгеа6у ятр11Е|ес) сЬе Ыеп66сасюп оЕ гесотЫпапса сопасгиссес) ш р!аяпЫ чессогя 1| Ь еаау со асгееп гпапу сЬоивапсЬ оЕ !сапа(естес) со!оп)еа ап|1 со гесодпье Егот |Ье)г |чЬпе арреагапсе сЬоае йас саггу рисасье гесотЬшапс р!аяп)й. ТЬе ягиссиге оЕ сЬеае гесогпЬ|папь сап сЬеп Ье чеПЕед Ьу геасПс6оп апа!уяа оЕ т)п)ргерагасюпа оЕ чессог Р)4А ог Ьу ойег йадпо|6с спсепа.
Еог ргосес!игеа Еог асгеешпд гесо|пЬ(папь сыпд а-сошр!ешесасюп, р1еаае аее Ргососо! 27 ап|1 |Ье рапе) оп АЕТЕККСАТ!чЕ РКОТОСОР О)|С Р!ВЕСТ АРРЕ!САТ!ОЫ ОЕ Х-САЕ АЬСР !РТС ТО АСАК РЕАТЕ5. 5сгеешпд Ьу а-сотр!етепса6оп Ь Ь~ВЫу с)ерепл)аЫе Ьис пос согпр!есе!у |пЕа11)Ые: ° 1плегсюп оЕ Еоге)дп РЫА с)оеа пос аЬчауа шас6часе сЬе согпр!етеп6пд ас6чКу оЕ |Ье а-Егадтепс оЕ (1- да!ассоядаае. 1Е йе Гоге(дп Р)4А ь япа1! (<100 Ьр), апс) 11 |Ье |паег6оп пеКЬег с)ьгирса йе геайпд Егате пог аЕЕесса йе ягиссиге оГ |Ье а-Ггадтепс, а-сотр!етепсаиоп плау пос Ье леПоих!у аГГессе|!. Ехашр1еа оГ сЬ12 РЬепогпепоп Ьаче Ьееп с)оситепсес) Ьш |Ьеу аге чегу гаге апс) оЕ ядп|6сапсе оп!у со сЬе шче|ьдасог ъчЬо епсоипсега йь ргоЫеп|.
° Нос а)! |чЬ|се со!оп(еа саггу гесоп|Ь~папс р1аяпкЬ. Мшасюп ог 1о|ь оЕ 1ас вес)иепсеа тау ршде |Ье р!ая тЫ оЕ |ь аЬ|16у со ехрге|ь йе и-Егадтепс. Но|чечег, йЬ ь пос а ргоЫеп| ш ргасбсе Ьесаше сЬе Егес)иепсу оЕ (ас шисапса |и сЬе р1аатЫ рори1а6оп ь и|ша1!у Гаг 1о|чег |Ьап йе питЬег оГгесогпЬ~папь депегасес) ш а!)дабоп геассюп. 1п шозс ЪассеПа! асса)па илес) Гог а-согпр!еп|епсасюп, сЬе ал-Ьадшепс Ь епсос)ес) Ьу |Ле |1е!ебоп коллапс 1асЕАМ15, |чЫсЬ 1ас)са сос)опа ! 1 — 41 оЕ |Ье В-821ассояйаае депе (П1тапп ап|1 Регпп 1970). ТЬЬ пшсапс депе Ь и|ша1!у сагг)ес) оп ап Р' р!аяпЫ.
5сга)па оГ Ьассепа сопипоп! у |ье6 Еог а-сотр!етепсасюп с)о пос аупсЬеяхе ядш6сапс циапш|6еа оГ 1ас гергесьог. Сопле|)иепбд |Ьеге ь и|ша1!у по пее|Г со шс)исе аупсЬеяа оЕ ал апс! и Ггадшепса Еог Ь(асосЬеписа1 апа1уяа оЕ ЬассеПа! со!ошея 1Е песе|ьагу, аупсЬеаь оЕ ЬосЬ Егадспепса сап Ье 6лПу шс)исес) Ьу 1РТС, а поп(егшепсаЫе !ассоае апа!од |Ьас |пасс|ха|ел йе )асЕ гергеыог (ВагИеу апс) Вошдеоь 1978). ЕТН101Е)М ВВОМЮЕ Е|Ыйшп ЬготЫе (3,8-йапппо-б-ейу1-5-РЬепу1рЬепасЬгЫш|п Ьгогпк)е) |чаа аупсЬеяхес) ш |Ье 1950сйп ап ейогс со Вече!ор рЬепапсЬпйпе со|проипсЬ аа еЕЕесс)че сгурапосЫа1 адепся йе асгиссиге ь 2Ьосчп ш Бдиге 1-17. ЕйЫ|шп ешегдес! Егош йе асгееп)пд ргодгап| сч(сЬ Яушд со1огя 1| и ах 10 — 50-Ео16 гпоге еЕЕессье адашас сгурапоаотеа йап йе рагепс согпроипй |чаа по п|оге сох)с со кисе, апй ип11)се еаг1(ег рЬепапсЬПйпея ЙЫ пос шс)исе рЬосоаепя62а6оп |и сасбе (Ч|ас)с)па апс) '2чо!Ее 1952).
ЕйЫшгп Ьгоп|Ые Ь 2611 и Ые!у илес) Еог сЬе сгеасгпепс апс( ргорЬу1ахЬ оЕ сгурапош)аль ш сая!е |и сгорка1 апс) шЬсгорка1 соип|Пея С4Н2 Ней Е!СГ)КЕ 1-17 51гисСиге оГ ЕСЬлйип| Вгоп|Ые 1пуогтаз!оп Рапе1з 1.153 сз'йОе.УМЕЙ А Нгоругот йе позе о~р)ет!п~, м Ьо ЬаН а со!Н, Ее!! оп|о ап ачагр!аге |чЬеге )аде уе!!ом со1отез оЕ а сопгаттапг ЬаН ггозчп, апН )узогуте м аз Н!зсочегеН. Не таНе гЬ!з |троггапг НЕзсочегу Ьесаизе |чЬеп Ье зам Йаг Йе со!отез оЕ гЬе сопгаттап | м еге ~аН!щ Ь!з т|пН |чепг згга!фг го Йе щЬг саизе ау йе рЬепотепоп Ье м аз оЬзегч!п~ — йаг Йе Нгор ! сот Ь!з позе соп|атеН а )уг!с зиЬзгапсе.
Апй а!зо !ттеНЕаге!у, Ье гЬоиеЬ| йаг ЙЬ зиЬзгапсе тггЬ| Ье ргезепг т тапу зесгег!опз апН г)ззиез о)' йе ЬоНу. АпН Ье ЕоипН йаг й|з зчаз зо — |Ье зиЬзгапсе м аз т геагз, за11ча, !еисосугез, й|п, 1| п~егпа!!з, тойег з т!!)с — Йиз чесу зч!Не!у Н!згг!ЬигеН |и атоипзз апН а1зо |и р1ап|з, браду Агпе1|а Р1е|п!пц (Регзопа! Кесо11ес11опз оЕ Ьузокугпе апд Р)егп!па) 1 Ьаче Ьееп ггу!пц го рот| ои| Йаг т оиг 1!чез сЬапсе тау Ьаче ап азгопузЬ|пд Еп))иепсе апН, 1Е' 1 тау офес аНгНсе го йе уоипч !аЬогагогу мойег, !г |чаи!Н Ье й|з — печет го пефесг ап ехггаогНтагу арреагапсе ог Ьарретпд. Ег тау Ье — изиаПу !з, т )асг — а ~а!зе а!агт йа| 1еай |о погЬ!щ, Ьиг !г тау оп Йе огЬег ЬапН Ье йе с1ие ргочЫеН Ьу)аге |о 1еаН уои |о зоте ппрогии| ай а псе.
А)ехапНег Р)епппц (Егогп Ь)з!есгпге аг Нагчагд 1)п!чегягу) ° Ьузокушез аге а Еапп!у оЕ епгушез |Ьаг сага!ухе |Ье асЫ Ьазе Ьудго!уз!з оЕ 13-11,4) 1ш1|а8ез Ьеьчееп А|- асегу18!псозапппе ап|1 Х-асесу!пшгаш)с асЫ гезЫпез ш |Ье ргогео81усап оЕ Ьасгепа! се!! зча!!з 1В1а)се ег а1. 1967; рпгзЬ| 1985). ТЬеу зчеге с))зсочегег) Ьу А1ехапг!ег р!еппп8, |чЬо Ыепг)Е|еН ап епкуше ас|Ь Ь гу |Ьа| гарЫ1у 1узе|1 зпзрепяопз оЕ Ъасгепа (р!еппп8 1922). ТЬе рго|Ьзсь оЕ й8езг!оп Ьу чегсеЬгаге 1узокушез оЕ |Ье се11 ъча11з оЕ Ъасгепа зчеге Ыепг!Е|ег! ш |Ье!аге 1950з, ъчйсЬ а!!отче|1 йе зггпсгпге ап|1 сошроягюп оЕ йе я|Ьзггаге го Ье |Еейкес) (Еог геч!ечг, р!сазе зее )о!16з 1960).
° Ьузогушез аге мпЫе1у г!)згг)Ъигег) ш па|иге апг! аге ехргеззед и Ьегечег йеге Ь а пее|1 го 1узе Ьасгепа! се11з, Еог ехашр1е, дог)п8 ге!сазе оЕ ЬасгегюрЬа8ез Егош )пуесгес) се!!з, оп |Ье зогЕасе оЕ чеггеЬга|е пшсоза, апг! |п а цгеаг пшпЬег оЕ зесгегюпз оЕ ЙЕЕегепг апппа!з, Ьо|Ь чеггеЬгасе ап|1 шчег|еЬгаге. 14о ягпсгпга! япп!агЬу ехЬЬ Ъепчееп чеггеЬгаге апг! Ьасгег)орЬа8е-епсодег! !узокугпез зпсЬ аз ЬасгепорЬа8е ). епс!о1уяп апг! ЬасгепорЬа8е Т4 епс)оасегу1пшгашЫазе. ° !п пю!есп1аг с!оп)п8, чеггеЪга|е!узокушез 1е.8., е88-зч1нге !узокуше) аге ыеН аг рН 8.0 ш сошЬшаг)оп зч)гЬ ЕРТА ам|1 г!егег8епгз го 1|Ъегаге сояпЫ ам|1 р!аяпЫ РМАз ггош йе|г Ьасгепа! Ьозь 1бо<)зоп ап|1 'чарпе)с ! 973). 1.154 СЬарсег 1: Р1аяииЬ аиг$ ТЬесг $8еуи1пея т Мо1еси!аг С!отис РОЕУЕТНИ.ЕЬ]Е СЕЛгСОЕ РЕС и а яга]ВЬс сЬаш ро1угпег оЕ а япср!е гереа6п8 ишс НЕОСН, СН,) „ОН, апс] П и ачаПаЫе ш а гап8е оЕ шо1еси1аг сче]ВЬса счЬоае пашеа гейесс сЬе пшиЬег Еи) оЕ гереасш8 ипгь ш еасЬ сио1еси!е.
1и РЕС 400, Еог ехашр!е, и = 8-9, счЬегеаа сп РЕС 4000, и гап8еа Егош 68 со 84. РЕС шс1исеа шасгопю1еси1аг сгосчйп8 оЕ ао1Шеа ш ас!иеоиа ао1игюп Я]шшеппап апс] М]и!оп 1993) апс1 Ьаа а гап8е оЕ иаеа ш гпо1еси1аг с!опш8, шс1ийп8: ° Ргес]РПас1оп оЕ Р)4А пю1еси1еа ассогйп8 со сЬесг ассе. ТЬе сопсепсгасюп оЕ РЕС гес)и]гес] Сог ргессрссаПоп ы си шчегае ргорогсюп со сЬе яхе оЕ сЬе Р$4А Ега8шепса ЕЫа апс1 5сЫе]Е 1975а,Ь; 08аса апс$ СПЬегс 1977; 1.ь 1980).
ТЬе ргес]РЬасюп оЕ РЬ)А Ьу РЕС В свое! еЕВссепс ш сЬе ргеаепсе оЕ 10 шм МВС! ас гоош сеисрегасиге Ера]сЬап)саг апс] Ргааас]1991). Упссег йеае сопй6опа, йе еЕПссепсу оЕРЕС ргес]рьаПоп арргоасЬеа сЬас оЬсашаЫе сч]сЬ ейапо1. Вой!оп8!шеаг апс1 ссгси1аг Еогша оЕ РЬ)Аа аге еЕ6с]епс!у ргес]рбасес$; Ьосчечег,!шеаг РС4Аа оЕ !ея йап 150 Ьр аге пос с)паис]сас]че1у ргес]рссасес$ Ъу РЕСЕМВС1с. ° Ргессрьасюп апс1 рипйсаиоп оЕ ЬассепорЬа8е рагск!еа (Уашапюсо ес а1. 1970). ° 1псгеаяп8 сЬе еЕПс]епсу оЕ геаыоссасюп оЕ сошр! епсепсагу сЬаша оЕ пис! есс ассс]а с$ипп8 ЬуЬгйгеасюп, Ыипс-епс] 68асюп оЕ Р$4А псо1еси1еа, апс1 епд-!аЬе!ш8 оЕ РЬЕА сч]сЬ ЬассепорЬа8е Т4 ро!упис!еосЫе ]ипаае $7лпгпегшап апс] Мсвсоп 1993).
° Рияоп оЕ си1сигес) сеПа сч]сЬ Ьассепа! Ргосор1ааса $5сЬаЕЕпег 1980; Ваааои!гас]е8ап ес а!. 1982). СЕЯ$1М СНЕОК10Е АЬ]0 СЕЯ$3М СНЕОК!0Е ЕОШЕ!ВКШМ 0Ей]й1ТТ СКА01ЕВ]Тй Сеяши, йе 55й е1еспепс, счаа Гжсочегег$ ш 1855 Ьу СчПЬе!ш Випаеп, а беппап сЬеш]ас Ьеиег )спосчп Еог Ьь Ьигпег. Весаиае сеяшп асопь аге ао Ьеачу, сопсепсгасес] ао1шюпа оЕ СаС1 $опп с]еиясу Вгайепь абег оп!у а Еевич Ьоига оЕ Ь]ВЬ-ареес$ сепспЕи8асюп ЕМеае1аоп ес а!. 1957).
ТЬе Ьиоуапс с)епясу оЕ а шасгоспо!еси1е В ссеЕспес] аа йе сопсепсга6оп оЕ СаС! $]и Вlсгп') ас йас ехасс рошс сп йе с]епа]су Вгайеис ас счЬ]сЬ сЬе псасгопю1еси1е Поаь. ТЬе ссепясу оЕ сЬе ]пПса1 ао1исюп оЕ СаС1 ш йе сепсп6с8е шЬе В иаиаПу ас$]иасес$ ао сЬас Ь соггеаропсса со сЬе ссепа]су оЕ сЬе пю1еси!еа ог рагск1еа ипдег шчеа68аПоп. Рог ехашр1е, Ьесаиае сЬе Ьиоуапс с1епясу оЕ пюас с]оиЫе-а!гипс)ес]1шеаг РНАа сп СаС1 Ь -1.70 81ш1, Вгайепь аге иаиа]!у Еогшес]6огп а СаС! ао!исюп счЬоае ш]Па1 с)епясу В а1ао $.70 Всси1. РоиЫе-51гапс]ес$06]Ах ТЬе с1епясу оЕ с)оиЫе-асгапссес$ Ппеаг Р$4А ш СаС! Ь а 6спсПоп оЕ ]ь Ьаае соспроясюп $5сЬс1сПсгаис ес а1. 1962). р = $0.098) ]С+С] + 1.660 Вlсгпс счЬеге р = Ьиоуапс с]епа]су оЕ РХА ]беС] = пю!е Егассюп оЕ б+С ш с]оиЫе-асгапйес$ РЬЕА !п ао!исюпа оЕ Са 5Ое сЬе с1епяСу оЕ с)оиЫе-асгапс]ес] Рв)А В шаепяВче со Ьаае сошроясюп. Еп)оггпаг)оп Рапе!» 1.155 5!щ!е-»Егаог)ег! РМА» 1п С»С1 ьо1игюпь, йе лепя!у оЕ яп81е-ьггапс)ег) РМА 1» -0.015 — 0.020 8)сгпь 8геагег йап ЕЬаг оЕ с1оиЫеьггапг)ес) РМА оЕ йе ьапге Ьаье сошроя6оп.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
