Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 43
Текст из файла (страница 43)
1.158 СЬартег 1т Р1актптт(к апт( ТЬетг (758(и1песс тп Мо!еси!аг С!оптпК ТАВЕЕ 1-12 0ЯА Ь1какек 8085ТКАТЕ5а Сон851чт В!опт Е)(х(А"КВ(А ЙВ(А" кр(А СОЕАстОВ5 Ано Етслвт Тткмтн! Еноб Нчвшо5 Нчвкто5 Астсчаток5 ТВмртклтокб 8отснчокч! кеАОент5 РРХ м82+ Н вЂ” 3 пм) у„б пат гет)шге84 10-15чС Гог соЬектче Е. соП 1!Паке уек па по тегппп( 37 С Тот с!ояп8 шс)тк' уек! Т4 ППаке 4'С тот соЬеяче тепшшт 15 — 25 С Гаг Ыппт епт(кб 37 С Гог с!аяп8 шскк' ййюйгетта! ге90(тес(к АТР МПтч (10 шм) уек' уек' уек РР)4 ! М82' (10 птм) геПп(гет(х" 118акек оГ йеппорЫ! к Ьастена 24-37 С Гог соЬеяче тегппш 65 — 72'С Гог с! ояп8 п(с)такс" по па уек по ° Ак кЬоип (п ТаЫе 1-12, Т4 РЫА 1!Ваке сап сита!уте (Ье 1т8аооп оГ соЬеяче тегшш( (Нет(8ре(Ь ет а1. 1972; Мегтх апт1 Рачь 1972), о!18от(еохуппс1еотЫек, ог 0118ог(Ьоппс!еотЫек ш КЫА-Г)ЫА ЬуЬПтЬ (О!(чета апт) ЬеЬшап 1968; К1ерре ет а1.
1970; рагеет( ет а1, 1971). 1п атЫЬюп, йе епхугпе сап еГГтс(епт1у ргошоте (Ье епс1-то-епт1 )ошш8 оГ тио т1пр!ех шо1еси!ек и((Ь ЬтИу Ьаке-растет) тегшш( (58агаше!1а ет а!. 1970; ЕЬг1(сЬ ет а1. 1977). ° Т4 Г)ХА 1!Паке кЬоик а ктгоп8 (чбт(ат)ег)т(еикх апт( Кшх-СапПо 1987; !.апт(е8геп ет а!. 1988; чтгп апт( (Лта11асе 1989), Ьпт пот аЬко!пте, ачегктоп (СоГГтп ет а1.
1987) то )отшп8 0118оппс!ео(Ыек (Ьат аге ЬуЬГ(тхет( то а соптр!етпептагу тешр1ате апт( сап!а!и а ш(кра(гет) Ьаке а! еттЬег ЕЬе 3' ог 5')ппсооп оГ тЬе тио ктгаптЬ. ТЬь аЪт!Ьу то йксПпппате Ъетиееп регГест!у апт( ипрегЕест!у ра(гет( тегппш а1!оиет) йе т)ече!орптепт оГ о1т8аппс!ео(Ые 1т8атюп апт1 ашрИкаИоп куктешк то т(а!ест пштатюпк тп Пепек оГ гпейса! штегея. ° Н(8Ь сопсептгаоопк (>100 шм) оГ шопоча!епт сатюпк кпсЬ ак Ха апт( К (пЫЬтт (Ье асНЫту оГ Т4 РХА 1!Паке, (Ье ехтепт оГ йе тпЫЬЕНоп чагу(п8 ипЬ (Ье тегш(па! кесртепсек оГ (Ье кпЬктга!е Г)ХАк (НауакЫ ет а1. 1985а).
Ноччечег, 10 (Ье ргекепсе оГ сгоийп8 а8епо кпсЬ ак 1096 РЕС, шопоча1епт сатюгь Паче а ратас)охка! еГГест апт( к!поп!ате (Ье аснчку оГ (Ье епхупте. 'РХА Пвакеа чч10 пот )отп ранк оЕ РНЛк и Ьоке тегпиш сагту йе Еоваи шв Вгоирк а! ЕЬе рашт аЕ Пваиаи: 5'-Ьут)тоху! аит( 3аЬубгаху! 5хЬубгоху! ап6 3прЬокрЬате 5 хрЬокрЬате ап6 3т-Пмеохуппс)еокме 5хтпрЬаарЬате ап6 3'-Ьудтаху! кЕ. со!! РНЛ Пваке иак аг(8(паПу герогтев (5ив(по е! а), ! 977) та Ъе (пса!и ретеп! ат )о(шпв о( Ыипт-епбе6 РНА пто1еса1ек ехсер! ш тЬе ргекепсе оЕ саит)еиктпв авепь шсЬ ак РЕО ог ясов (2(шшетгпатт ап6 РЬе(ЕЕет 1983) ап6 итй гпапоча1еп! сапапк кпсЬ ак На (Науаем е! а1.
1985а Ъ). Моте тесепт- 1у, Ьоччечег, Вагппвег е! а1. (1990) Ьане кЬоип тЬа! Е. сей РНА Пваке Ь сараЫе от )ош(пв Ыипт-гойет( ап6 коше к(пв!е-кттапбе6 пас1етс асЫк и(й РПпет- кк йа! ате Переибеп! оп ептуше апб ыбатгате саисепьатюп Ноиечег, Еот гашше ЬваПап о( Ыипт-епбе6 РХЛк, ЪастетюрЬаве Т4 Пваке В тЬе епхутие о( сЬотсе.
Т4 РНА Пваке чНП Ьвате Ыапт-епбе6 пю!еси1ек (ЕЬгксЬ е! а1. ! 977; 58агатпеПа апб ЕЬг1тсЬ !978), Ьа! ЕЬе гаге о( геасПап ь пот 1шеат1у т)ереп- Пепт оп ептуше сопсепттаПоп ап6 иогрь еЕЕстепт1у ап!у (и ЬтВЬ сопсептгапапк оЕ РНА апт( ептугпе. (и адйтюп, сопПеияпв авепЬ шсЬ ак РЕО, НсоП, апд ЬехашштпесоЬак сЫогтве ассе1егате йе гасе оЕ Ыппт-еи6 Пвавоп Ьу Т4 РНА Пвакек Ьу а Еастог оЕ 1000 апд репшт Пвавоп ат 1оиег ептуше, АТР, ап6 РХА сапсепттатюпк (2ппптеппап апб РЬе)Пег 1983; КшсЬе ап6 Ноччагййапбетк 1985).
В)апт-еп6 Пвапоп ь (пЫЫтеб Ьу Ь|ВЬ сапсептгапапк от На (>50 птм) ап 1 РЬокрЬате (>25 птм) (Каае е! а1. ! 975). 'Рпвактук е! а1. (1975), аттеьк апб РПсЬамкоп (1967). "Г4 РНА Пваке сап )ош КХЛ пто1еси!ек аипеа!е6 то етйет сатир!егиептагу РНА от !!НА тетпр1атек, а)Ье1т ипЬ 1аи еЕЕстепсу (К1ерре ет а1. 1970). греттетв аи6 58агашеПа (1981).
к!Четка е! а!. (1968а,Ь). "58агашеПа ап6 ЕЬтПсЬ (1978). 'РаЫ е! а1. (1982). тА1птоя аП йегшорЬПк Пвакек, 1йе тпекорЬйс епЬастепа1 Пвакек, ике РРХ аа а соЕастаг. Нои ечег, опе тЬеппоктаЫе Пваке тЬа! ге9шгек АТР ак а соГастог Ьак Ъееп с!опет1 апт1 ке9пепсе6 (К!с!пи 1992). ТЬе ргорегПек о( тЬ)к ептуше Ьаче по! Ьееп (пчееквате6 (и Петав. "Та1таЬакЬ! е! а).
(1984). чтаааЬакЫ апд УсЬтва (1986), "'Ватапу (199!а,Ъ). Еп~оттас(оп Рапей 1.!59 Е. соИ !31ЧА Ьфаае Е. сой' РХА! 18аае ь епсодед Ьу сЬе йч Вене |Ьас! )еа ас 52 ишшсеа оп |Ье Е, сой Вене|к |нар (бопеыпап ес а1. 1973; ВасЬшапп 1990). ТЬе 68 Вене (боссеынап 1976) апд 1ор!1 йг (Сап|егоп ес а!. 1975), а ге8н1асогу ни|санс очегргодисш8 сЬе епгуи|е, Ьаче Ьееп с1опед шсо ЬассепорЬа8е ) чессога, |Ьиа Еас|1|сабп8 !аг8е-аса1е рипбсабоп оЕ сЬе сигу|не (Рапааеп)со ес а1. 197?, 1978). ТЬе пис1еосЫе аеонепсе оЕ |Ье йч Вене (1аЫпо ес а1. 1986) лЬолча |Ьас Е, сой РХА 118аае сопяаса оЕ 671 анино ас)да чд|Ь а пю!есн1аг сче)ВЬ| оЕ 73,690.
Рог аечега) усата, 6 |чаа Ье1)ечед |Вас Е. сой РХА 118аае леон!д пос 1!Васе Ыипс-епдед донЫе-асгапдед РХА. Ночлечег, Ео!!о|чш8 с!ои)п8 апд ехргемюп оЕ сЬе 1|Вале Вене, ЫВЬ!у асс|хе ргерагайопа оЕ сЬе епгуше Ьесагпе ача)1аЫе сйас |чете аЫе со саса1уге Ыипс-епд !|Вайоп чдсЬ шо|1егасе еЕ6с|епсу (Вагпп8ег ес а!.
1990). В!нпс-епд 1|Вайоп )а абню!асед аЬонс сепЕо!д |чЬеп |Ье геасбоп пш|сиге сопса(па 10-1596 РЕб апд Ь)ВЬ сопсепсгас!опа оЕ К (Науаайь ес а!. 1985Ь). Хечег|Ье1еая Е. сой РХА 118- аае |а пос инде!у иаед )и шо1еси! аг с1ошп8 ргоседигеа, япсе Т4 РХА 118аае Ь сараЫе оЕ ебйс)епс1у)о|пш8 Ыипс-епдед РХА| ш сЬе аЬ|епсе оЕ сго|чйп8 а8епсы Рп!Рае Т4 РХА 118аае, Е. сой РХА 118аае |ч)11 пос е6)с)епс1у )о(п ВХА со РХА апд ь |Ьеге(оге нпаЫе со )ош ад)асепс ВХА апд РХА ле8шепса сЬас апае дипп8 гер!асешепс аупсЬеыа оЕ аесопд-асгапд сРХА (0)сауаша апд Вег8 1982).
ТЬе Ьассепа! епгуше сап |ЬегеЕоге Ье иаед со Вепегасе 1оп8 асгапда оЕ сРХА |Ьас аге ипшсеггирсед Ьу ае8шепса оЕ ВХА. ТЬеггпоа(аЫе 0ХА Ь!нааеа ТЬе Вене| епсойп8 |ЬеппоасаЫе 118ааеа Сгош аечега1 сЬепиорЬ|1к Ъассепа Ьаче Ьееп с1опед, ае|рлепсед, апд ехргеыед со ЫВЬ !ече!а ш Е, сой (е.8., р1еаае аее Та1|аЬааЬ~ ес а1. 1984; Вагану апд бе!Еапд 1991; Еаиег ес а1.
1991; )бпыоп ес а1. 1994). 5ечега1 оЕ |Ьеае епгушеа аге ача)!аЫе Егош соп|- шегс)а1 аоигсеы Е1)се сЬе Е. сой енгуше, а!и|о|с а11 сЬегшовсаЫе 68ааеа иле ХАР аа а соЕассог апд счог)с рте(егепс|айу ас пк1|а ш доиЫе-асгаидед РХА. 1п а|И|Поп, сйепиоасаЫе!18ааеы 1рхе сЬе)г гпеаорЫ1)с Ьоспо1о8, сап сага!уге Ыипс-епд 118асюп |п сЬе ргеаепсе оЕ сго|чйп8 а8епсы ечеп ас е1ечасед сешрегасигеа (Та1|аЬааЫ апд РсЬ)да 1986).
Весалое сЬепиоыаЫе 118ааеа геса)п асдчиу айег пю!6р!е гоипда оЕ сйеппа! сус1ш8, |Ьеу аге иаед ехсепыче1у |п сйе 118аае ашр116сасюи геассюп со десесс шисас)опа ш гпаиниа!(ап РХАы 'х)и!48 оЕ Ь!цаае Ас(!ч!Еу ТЬе асапдагйгас|оп оЕ!|Вале асспдсу |п ипьа сЬас аге шеапш86л! со Ьо|Ь ЬюсЬеш(аса аид гпо!еси1аг с!опега Ьаа ргочеп со Ье ап е1няче Воа!.
Рог |Ье 1аас 20 уеага, ас 1еаы сЬгее дй Еегепс ншь Ьаче Ьееп иаед со гиеа|шге 118аае асйч|су: А С|те)лл ннй ( ||ге)аа ес а1. 1968Ь) Ь де6пед аа сЬе аиюипс оЕ 118аае |Ьас сага!угеа сЬе ехсЬап8е оЕ 1 пшо1е оЕ ллр Егош )иог8аи(с ругорЬоарЬасе со АТР ш 20 ш)писеа ас 37 С. ТЬе Модпсй-Еейтан ншс (МодпсЬ апд ЕеЬшап 1971), по|ч гаге1у шед, ь Ьааед оп сЬе сопчегыоп оЕ гайо!аЬе!е|1 йА-Т)„соро1уи|ег сч)сЬ 3'-Ьудгоху! апд э'-РЬоарЬогу! сегинш со а Еопп геыасапс со й8еасюи чдсЬ ехонис1еаае П!.
Оие МодгссЫ.еЬшаи ипй Ь дебпед аз |Ье аиюипс оЕ епгунк ге|!Ыгед со сопчегс 100 пию1еа оЕ д(А-Т)„со ап ехопис!еаае-П1-геяасапс Еопп |п 30 инписеа шн)ег асапдаг|1 аааау сопййопы Ат)л(|тату ни ил, дебпед Ьу соинпегс! а1 аирр1|егя аге Ъааед оп |Ье аЫ16у оЕ 1!Вале со 1!Васе соЬеяче епда оЕ РХА. ТЬеае ии)са аге ойеп нюте мЬ)есс|че сЬап |!иапйсас|че ап|1 ргоч|де!|и1е дл)дапсе со ап шчеы 68асог |чЬо чаЫеа ргес)яоп. 1и сЬе аЬаепсе оЕ шеашпВЕи! шсоппайоп, июы шчеа68асога аесбп8 ир 118- асюи геасбопа шшс геаогс со Виеаычог)с, |чЬ|сЬ |не|6|аЫу шеапа |Ьас нюте 118аае |ч(11 Ъе иаед сЬап ь песеыагу.
ТЬ(я оЕ соигае, ь ехасс1у |чЬас сйе соиннегс|а1 сошраи(еа аее)с. Аа а гоиВЬ Вийе, 1 Ълсе(аа ишс ь арргох(шасе1у ес!шча!епс со 60 соЬеяче епд ншь (аа дейпед Ъу Хе|ч Еп81апд Вю1аЬа). ТЬиы )и 30 инписеа ас 16'С, 0.015 Ъ|ге)аа ишь оЕ Т4 РХА 118аае аЬон1д!|Васе 509а оЕ Ега8шепса дегьед Ьу й8еы сюп оЕ 5 РВ оЕ ЪассегюрЬа8е ). РХА лч)сЬ НтйП.
1.162 СБартег 1: Р!акт|дк апд ТБе(г 'ъ!кеуи!пекк гп Мо!еси!аг С!оп(пП ЕЕЕСТКОРОКАТ! О1Ч ТЬе арр1Ыатюп оЕ а йагр ри1ке оЕ е1естдсду ь |Ьои8Ь| то сивке сПшр1ш8 оЕ птешЬгапек ЕоПоъчет1 Ьу Еогтпадоп оЕ тгапяепс ЬудгорЬоЬтс рогек ъчЬоке гПашетег Пистиатек Егош а ш(в|шиш оЕ 2 шп то а шахнпшп оЕ кечега1 пгп. 5опте оЕ йе 1аг8ег ЬудгорЬоЬтс рогек аге сопчегтед то ЬудгорЫ1Ы рогек Ьесаике йе епег8у пеедед то сгеате апд тпаштатп а ЬудгорЬт1тс роге ь гес|исет$ ак |Ье тгапяпептЬгапе чо1|а8е Ь тпсгеакес1 (ЪЧеачег 1993).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
