Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 32
Текст из файла (страница 32)
Тгапьуег сЬе Ъассепа1 сеПь со ьсеп1е, йьроьаые, !се-со!6 50-ш1 ро1ургору1епе сиЬеь. Соо! сЬе си1шгеь со 0"С Ьу ьсог!пц сЬе сиЬеь оп ке Еог 10 пиписеь. 3. Кесочег сЬе сеПь Ьу сепспЕиВас!оп ас 2700ч (4!00 грит ш а 5огчаП С5А гогот) Еог 10 пиписеь ас 4"С. 4. Ресапс сЬе тиейши Егош ЕЬе сеП реПеп. 5сапс! йе сиЪеь ш ап шчегсес1 роясюп оп а рас! ог' рарег сотче1ь Еог ! ишпие со аПоъч ЕЬе !ая сгасеь оЕ шейа со с1га!п а)чау. 5.
Кеьиьрепс! еасЬ реПес Ъу ьтч!г1шВ ог Вепс1е чогсех!иВ ш 30 ги1 оЕ !се-со!6 МВС!,— СаС1, ьо1иВоп (80 шм МВС1„20 шм СаС1)). 6. Кесочег ЕЬе сеПь Ъу сепсп628аВоп ас 27000 (4!00 грш ш а 5огчаП 05А гогот) Еог 10 ииписеь ас 4'С. 7. Ресапс ЕЬе шейши Еготи сЬе сеП реПеся 5саисс сЬе шЪеь !и ап !пчегсес! роя6оп оп а рас1 оЕ рарег сочче1ь Еог ! пииисе со аПочч сЬе 1аьс сгасеь оЕ шейа со с!га!и атчау.
8. Кеьиьрепс) сЬе реПес Ъу ыч!г!шВ ог депс1е чогсех!па ти 2 тп1 оЕ !се-со!6 О.! м СаС1 (ог ТГВ) Еог еасЬ 50 ш1 оЕ опВ!па! си!гиге. 9. Ас йЬ ро!пс, е!ЕЬег иье йе сеПь йгесс1у Еог сгапьуоппасюп аь с)еьспЪес! ти 5серь 10 сЬгоицЬ !6 Ье1очч ог йьрепье !исо а1к!иось апс! Егеехе ас — 70'С (р1еаье ьее Ргогосо1 23, 5сер 12). 1.11В СЬарсег 1: Р1аяпгг(х апг( ТЬе)г 1Ле(а!пея |и Мо1ееи!аг С1оптсг Рог шоас а!саша оЕ Е, соИ (ехсерс Еог МС1061), ТРВ гиау Ье |ье|1 ас сЬь асахе шхсеас) о( СаС1, чг!|Ь ег)шча!еис ог Ьессег геш1|я ТЬе сеП| шау Ье зсогег) ас 4"С !и СаС! го1исюи Еог 24 — 48 Ьоигх (Ега8егс аиг) ЕЬг!кЬ 1979).
ТЬе еЕЕ|ссеису оЕ сгаи|Еопиаиои сисгеавех Еоы- со х!х(о14 г)иг)и8 сЬе Пгя 12 — 24 Ьооь оЕ хсогахе аиг) сЬегеайег г)есгеахех со йе опЕПиа! 1ече1. Туап5гоппа(соп 1пс!и|!е аП оЕ сЬе арргорг(асе роя!(че апс! пеПапче сои!го!а (р1еаае аее |Ье рапе1 оп ВАСТРП!Ах ТПАР)5РОПМАТ!ОЬС ш Рго|осо! 23). 10. То сгапх(ос|и сЬе СаС1 -сгеасе|1 сеПа с((гесс!у, сгапарег 200 )с! оЕ еасЬ яларепяоп оЕ соспресепс сеПа со а асегПе, сЬ|Пе|1 17 х 100-ппп ро1ургору1епе шЬе пят а сЬ|11ег! спкгор|рессе Пр. А|Ы РЬ)А (по гпоге йап 50 пц ш а чо1шпе оЕ 10 )с! ог 1еаа) со еасЬ сиЪе. М|х йе сопсепь оЕ |Ье спЬез Ъу харч(гПпц Кепс!у.
5соге сЬе сиЬех оп ке Еог 30 ппписея Тгапа(ег сЬе сиЪеа со а гас)с р1асег( |и а ргеЬеасег! 42'С с|гси!аПпц |часег ЬасЬ. 5соге сЬе сиЬеа 1и |Ье гас(с Еог ехасС!у 90 аесопг!я Ро пос аЬа(се сЬе ыЪеа. Неас хЬос)г и а сгие!а! яер. 1с ы чегу иирогсаис сЬас |Ье сеП| Ье га)хег! со ехасс1у сЬе г)ВЬ| сешрегасше ас сЬе соггесс гасе. 12. КарЫ1у !сапа(ег сЬе сиЬех со ап ке ЬасЬ. АПо|ч |Ье сеПх со сЬ(П Еог 1 — 2 пппшея 13. АгЫ 800 р! оЕ 5ОС гпееПпгп со еасЬ спЪе.
1пспЪасе йе си1спгеа Еог 45 |и(ппсеа ш а ччасег Ьа|Ь аес ас 37'С со аПо|ч сЬе Ъассег(а со гееочег апг( со ехргеха |Ье апс|Ъ|оПс геяяапсе шаг)сег епсог!ег! Ъу |Ье р!аяпЫ. ТЬе сеП| и|ау Ье Веис!у а8!саге|) (50 сус!еяиииисе ог !ея !и а госагу зЬа)гег) ас 37'С г)игси8 йе гесочегу репо|1. !Е кгееи!и8 Ьу и-еошр!ешеисасюи, ргосеег) со Ргососо! 27 Еог р1ас)и8. Тгапа(ег СЬе арргорг(асе чо1шие (пр Со 200 р1 рег 90-ппп р1асе) оЕ сгапх(оггпес! со|пресепс сеПх оп|о айаг 5ОВ гпееПшп сои!а(п!пц 20 тм МцВО4 ап|1 йе арргорг(асе апПЬЫск.
СЧЬеи хе1есии8 сог геяхсаисе со сесгасусЬие, сЬе еииге сгаихсоггиаиои иихсиге и|ау Ье хргеа|С ои а ыи81е р1асе (ог р!асег) си сор ахаг). 1и сЬЬ сахе, соаесс сЬе Ьассег)а Ьу сеисг!Еих!и8 Еог 20 хесои|)х ас гооги сешрегасше |и а ш)сгоП|8е, аис) сЬеи Веис1у геаиареис) сЬе сеП реПес |и 100 )с! оЕ 50С |иегаши Ъу сарр|и8 |Ье яг)ех оЕ |Ье и|Ъе. А смРОВТА|91 5сег|8хе а Ьеис 8!аы го|1 Ьу г)|рр!и8 |с |исо ейаио| аи|1 сЬеи |и йе Яаи|е о1 а Виихеи Ьигиег. ЧЧЬеи сЬе гог) Ьаа соо!ег) со гооги сетрегашге, хргеаг) йе сгаихсоппег) сеах Веис|у очаг Фе ыгсасе ос СЬе ахаг р)а|е. ЪЧЬеи ае!есс!и8 Еог геяхсаисе со ага рссППи, сгаихуогшес) сеП| аЬои!г) Ье р!асе|! ас !осч г)еиа!су (<10| со!ои!ех рог 90-ш|и р!асе), аиг) йе р!асеа аЬои! П иос Ье сисиЬасес) Еог п|оге сЬаи 20 Ьоигх ас 37'С. ТЬе еихугие )1-1ассашаае Ь аесгесег) |исо |Ье гиегпши (гоги аи|ркППи-сея|сап| сгаиа(огшаиь аи|1 саи гарса!у !пасс)часе |Ье аиПЬюпс |и ге8)оиа я|ггоиигпи8 |Ье со!ошех ТЬия р!аПи8 сеП| ас 168Ь г)еих!су ог !исиЬаии8 йеи| Еог 1ои8 регсо|)х оЕ шие геш1ь ш |Ье арреагаисе оЕ ашркППи-аеияпче хасеП!се со!ои!ея ТЬь ргоыеш и ап|е!югасе|1, Ьш иос сошр1есе!у е!игииасей Ьу ияи8 сагЬеисППи гайег |Ьаи агир|сППи |и хе!есиче гиегПа аи|С шсгеаяи8 йе соисеисгасгои оЕ аиПЬюис (гоги 60 )|8/ш1 со !00 С|8/ш!.
ТЬе гнииЬег оЕ аи|р|сППи-геяяаис со!оисеа |Соех иос сисгеахе |и Пиеаг ргорогсюи со йе ишиЬег оЕ сеП| аррПег) со сЬе р1асе, регЬара Ьесаихе оЕ Вгик|В-!иЬ!Еас!и8 гаЪяаисеа ге!еахегс Сгои| |Ье сеах Ы1!ег) Ьу сЬе аис)ЪюПс. 5соге |Ье р!асеа ас гоо|п сегпрегаспге пп01 сЬе 1щшс1 Ьаа Ьееп аЪаогЬес(.
16. !пчеп |Ье р!асеа апс! |псиЬасе ас 37'С. ТгапаЕоггпес( со!оп(еа аЬои1Й арреаг !и 12 — 16 Ьоигя Тгаихуогшег) со!ои!ех шау Ъе кгееиед Сог йе ргеаеиее оЕ гесошЬ!паис р!аяиЫ| ияи8 оие оЕ сЬе шеСЬог)а г)егкг!Ъег) |и Ргососо!$27, 28, 31, аиг) 32 оЕ |ЬЬ сЬарсег. 1.120 СЬарсег !г Р1агппдг апд ТЬегг "с(ге)а!пега т Мо!еси1аг С!опте с(епс!у сЬап сЬе соггеяропсПпП с1оаес( ссгси1аг 13(х(А — регЬара Ьесаихе сЬе ехроаес( сепгиш оЕ 1(пеаг 13(х(А аге аиасерс(Ые со апас1с Ъу шсгасе1101аг пис1еаьеь. МАТЕЮАсй САОТ!ОЬ(: Р!еаае аее Аррепсс(х 12 Еог арргорпа(е Ьапс(!(па о( та(епа15 таг(гесс чч!СЬ <!>. Вийегх ап(! йо1и6оп5 Р1еаае аее Аррепс((х 1 Еог сотропеп(а о( а(ос(с ао!ииопа, Ьи(Еега, апд геааеп(а.
131(и(е а(ос(с ао1ииопа Со СЬе арргорпа(е сопсеп(гаС!опа. С!усего! (!ОУ ч(ч) (то!еси(аг Ьго(оау агаде), гсе со(д Риге НгО МП!схО ог ес(шча1епс, иеп1иеа Ъу 61сгаиоп сЬгоиВЬ ргег(паес( 0.45-ргп 61сега. 5соге ас 4'С. (х!ис1е1с АспЬ апс! О!фопис!еоЕс(!е5 Р(аьтЫ (3(чА (гесотЬтапс р!аьтгд) Сопасгисс ияпа опе оЕ йе шесЬос(а с(еасг!Ъес( (п Ргососо!а 17 сЬгооаЬ 22 о( сЬЬ сЬарсег. Мес!1а СУТ тед!ит, гсе соЫ 10аа (ч)ч а1усего1 0.125аа (ч(ч) уеаас ехсгасг 0.25аа (чс(ч) сгурсопе Тгаа гес(ре сопгеа 6 от Типа апс( СЬогч (1995). ЕВ тед(ит, ргесчагтед Со 37 С 5ОВ аВаг р!асеа солса!п(пд 20 тх( МВ5О„апд (Ье арргорпасе апВЬ!обе 5сапс(агс( 506 сопсаша 10 гпМ МВВОе 5ОС тесиит Арргохипасе!у 1 ш1 о( йа гпееишп Ь пеес(ес( Еог еасЬ !сапа(огшас(оп геас6оп.
прес!а! Еци1рпсепЕ Е(ессгорогассоп деч(се апд сичепеа Впед чч((Ь е!ессгодеь арасед О. ! — 0.2 ст арагс ТЬе ашаиег сЬе аар Ьессчееп сЬе е!ессгос(еа, сЬе Ь!аЬег сЬе асгепасЬ о( йе е!есспса1 Еге!6 аеоегасес( Ьу а В!чеп чо1саВе. Ногчечег, сЬе г(а(с о( агс(па шсгеааеа аа сЬе сипапсе Ьеьчееп сЬе е1ессгос(еа с(есгеааеа апс( аа сЬе аррПес( чо1саае ь гааей Сои аегчадче шчеас(аасога гч61 йегеЕоге сЬооае сочессеа ъчсЬ а аар оЕ 0 2 сгп, счЬегеаа сЬоае счЬо аге ь(ПшП со са1се па1са сч(сЬ сЬе!г ехрепшепь сч61 орс Еог сЬе япаиег аар.
(се счасег Ьа(Ь с(с(и!д п(сгоВеп <1> МЕТНОР А !МРОКТА(ЧТ АП егере (п СЬ!а рго(осо( йоиЫ Ье сагпес( ои( ааер(каПу. Ргерагайоп оЕ СеИ5 1. 1поси1асе а ыпВсе со1опу оЕЕ. соП Егош а Егей аВаг р1асе (псо а Паа)с сои(а(шпП 50 гп! оЕ ЬВ шес(1- шп. 1псиЬасе йе си!сиге очегп!цЬ( ас 37'С сч!(Ь ч(аогоиа аега6оп (250 гргп сп а го(агу йа1сег). 2. 1поси1асе сччо а1нрюь оЕ 500 ш! оЕ ргесчаппес( 1В шедппп ш аерагасе 2-1Ьег Пав)са сч!(Ь 25 гп1 оЕ сЬе очегшаЬс Ьассепа1 си!сиге. 1псиЪасе (Ье йаа!ся ас 37'С сч((Ь аВ(сас(оп (300 сус1еа(ш(писе ш а госагу йа1сег). Меааиге (Ье ОЕ! оЕ (Ье Вгоъч(па Ьассепа1 си1(игеа ечегу 20 ш(пи(ее. Ргососо! 2б: Тгапзгоггпагтоп о) Е.
со1| Ьу Е1естгорогабоп 1.121 Орсппшп гехи!сз Е>|0| сгапзуог|папсз/)лВ) аге оЬ|а!пег! май агап|!асс! зсгашз оЕ Е. соВ ЕЕ|Н|, РН5а, !М !03, !М |09, НВ !О|, апт! |Ье!г с!ел!чассчез) ъчЬеп |Ье ОР „оЕ сЬе сп!шге и 0 35 — 0 4. ТЬ~з слепа!су ь папа!!у асЬ|ече|! аусег -2.5 Ьоыз оЕ |пепЬабоп. рог еЬВс!епс сгап|Еоппаиоп, и ь емеца! |Ьас сЬе пшпЬег оЕ чтайе се!!з пос ехсеед тоз се!!|Еп|1, м!ПсЬ Еог то|сапа|па о(Е.
гоВ Ь е9шча!епс со ап ОР оЕ-0.4. То епзпге сЬас сЬе со!сиге|спет пос Вгоъч со а Ь!ВЬег с!епясу спеазпге |Ье ОР„„оЕ |Ье сп!шге сл егу |5 — 20 ппппсез. Р!ос а хгарЬ оЕ сЬе гласа зо сЬас сЬе шпе ъчЬеп |Ье ОР, оЕ сЬе со!сиге арргоасЬез 04 сап Ье рте|С!стет) |чЬЬ |опте асспгасу. Вез!п со Ьагчезс сЬе со!сше |чЬеп |Ье ОР „геасЬез 0.35. 3. 14|Ьеп йе ОР оЕ сЬе си1тгез геасЬез 0.4, гарЫ1у сгапзуег сЬе Паз)сз со ап ке-ъчасег ЪасЬ Еог !5-30 пипцсез.
5ъч)г! сЬе си1сиге оссаяопаПу со епзиге |Ьас сооПп8 оссигз ечеп!у. 1п ргерагасюп Еог йе пехс зсер, р!асе сЬе сеисг)Еи8е Ьо! Пез ш ап ке-ъчасег ЬасЬ. рог тахппшп еЕЕ|с!епсу оЕ сгап|Еоппапоп, и и стог|а! сЬас сЬе сетрега|пге оЕ йе Ьассепа пос гие аЬоче 4 О ас апу зсазе |п сЬе рго|осо!. 4. Тгапзуег сЬе си!шгез то !се-со!8 сепсНЫЕе Ьоя1ез. Нагчезс сЬе сеПз Ьу сепсг)Ецаас)оп ас !000е (2500 грт ш а 5огчаП С5А гогот) Еог !5 иипшез ас 4"С. Ресапс сЬе зирегпасапс ап|1 гезцзрепс) сЬе сеП реПес |и 500 т1 оЕ ке-со!а риге Н О. 5. Нагчея сЬе сеПз Ьу сепсг)Еи8ас!оп ас !000ч !2500 гртп !и а 5огчаП С5А гогот) Еог 20 ппп- исез ас 4"С.
Ресапс сЬе зирегпасапс ап|1 гезцзрепс) сЬе сеП реПес 1и 250 ти1 оЕ !се-со!8 !Оага 81усего!. 6. Нагчезс сЬе сеПз Ьу сепсгтуц8ас)оп ас 10000 (2500 гртп |п а 5огъаП С5А гогот) Еог 20 пшппез ас 4 С. Ресапс сЬе зирегпасапс апд гезцзрепб йе реПес )и !О пс) оЕ !се-со!8 !Оога 81усего1. Та)се саге ъчЬеп ссесапс!пз Ьесаме сЬе Ьассепа! ре!!есз !озе ассЬегепсе !п |09| В!усего!. 7. Нагчезс сеПз Ъу сеыНЫПаНоп ас 1000ч (2500 гртп ш а 5огчаП С5А гогот) Еог 20 пиписез ас 4 С. СагеуцПу с)есапс сЬе зирегпасапс апс) цзе а Раяеиг р|реие ассасЬес! со а часиши 1ше со геточе апу геша!иша с)гора оЕ ЪиЕЕег. Кезцзрепс! сЬе реПес ш ! т1 оЕ ке-со!а ОУТ тпейшп. ТЬЬ тз Ьез| |сапе Ьу Вепс!е зъч|г!ЫВ га|Ьег |Пап р!расс|из ог чопех!пВ.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
