Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 15
Текст из файла (страница 15)
Еу515 оЕ СеПВ 4. Кеацарепг! сЬе Ъассепа1 реПес 1п 200 )г! оЕ ке-соЫ АПсаПпе 1уа15 во1цсюп 1 Ьу ч)иогоца чогсех)пВ, апг! сгапхЕег йе аырепяоп со а ш)сгоЕцВе сиЬе. Ма)се виго йас йе Ьассепа! РеПес Ь согпр!есе1у сС!арегьеб ш АПсаПпе !уа!а ю!ибоп !, 'чогсех!пВ пчо ппсгоуихе сиЬеа ягпи1сапеош!у мчсЬ йе!г Ьааех соисЬ!пВ !псгеаьех йе гасе апсС еЕПс!епсу ипсЬ счЫсЬ йе Ьассепа! РеПесь аге гехиарепдей ТЬе ог!В!па! ргососо! !ВппЬоип апс) 17о!у 1979) саПед Еог сЬе иае оЕ 1уюхупге ас й!а ро!пс со аы!хс ш ймо1ибоп оЕ йе Ьассепа! сеП паПя ТЬ!а хсер сап Ъе ваЬПу опипес1 счЬеп г1еаПпВ чбй Ьассепа! си!сигех оЕ !ея сЬап со го! гп чо1шпе. 5.
АсЫ 400 )с! оЕ ЕгеаЫу ргерагес) АПса1спе!уяа ао!исюп !! со еасЬ Ъассепа! хырепяоп, С!ове сЬе сиЬе с)иЬс1у, апс) пцх йе сопсепса Ъу !пчегсшд сЬе сиЬе гарЫ1у Егче сппея Оо пог гоггех! 5соге сЬе сиЪе оп 1се. Массе сиге йас сЬе епбге юггасе оЕ йе сиЬе согпех ш сопсасс млсЬ АПса11пе !уа!ь ю!ибоп !!. 6. АгЫ 300 )с! оЕ 1се-со!а АПса1ше 1уяа ао1иПоп 11!. С1оае йе сиЪе апс) йьрегае АПсаПпе 1уяа сю!шюп П1 сЬгоиВЬ сЬе чгасоиа Ьассепа1 1уаасе Ьу спчегПпВ йе сиЬе ьечега1 сцпея 5соге йе сиЬе оп ке Еог 3-5 пиписея 7. СепспЕцие йе Ьассепа! 1уаасе ас шахипшп ареес) Еог 5 ш)писеа ас 4'С сп а шкгоЕцВе.
ТгапаЕег б00 )с1 оЕ йе сшрегпасапс со а !гехЬ сиЬе. Рготосо! 2. Ргерагатгоп о( Р!овтгг( ВЕЕА Ьу А1Ка1гпе Еувгв тчгтЬ 5Р5: М(г((ргерага6оп 1.37 АсЫ ап ег)иа! чо!шпе оЕ рЬепоЬсЫогоуогш. Миг йе остап(с апг( ас!иеоив рЬавев Ьу чогсех- шц апг1 йеп сепспуиае йе епш1вюп ас тахнпшп вреед Еог 2 пипшев ас 4'С (и а шкгоуиПе. Тгапв(ет сЬе аг)иеоив иррег 1ауег со а ЕгевЬ сиЬе. ссесочегу о1 Р!аяссЫ ГНЧА Ргестрйасе пис!ек асЫв Егош сЬе вирегпасаш Ьу асЫ)пц 600 )т! оЕ (воргорапо1 ас гоогп сеш- регасиге.
Миг йе во!ос!ои Ьу чогсех(па апг) йеп а11очч сЬе ш!хсиге со всапг! 1ог 2 пиписев ас гоотп Септрегатиге. Со!1есс сЬе ргес)р(сасег( иис1ек асЫв Ъу сепсг!Еиаасюп ас гпахтпшпт вреес) Еот 5 ииписев ас гоош сетретасиге ш а т(сгоуице. 10. Кетпоче сЬе вирегпасапс Ъу Пепс1е авр(гас(оп ав с(евспЬет( (и 5сер 3 аЬоче.
5сапс) сЬе сиЬе ш ап (пчегсес1 ров(сюп оп а рарег сосче! со а!1очч а11 о( сЬе Е)шг1 со т(га(п аъчау. Кешоче апу г1горв оЕ Е)иЫ аг(Ьеппд со сЬе сча1!в оЕ сЬе сиЪе. АсЫ 1 гп1 оЕ 70% есЬапо! со йе ре!!ес аиг( гесочет йе РХА Ьу сепсп(иПас(ои ас шахипшп вреег( Сот 2 пипитев аС гоопс СетрегаСиге ш а т(сгоуице. Ацаш гепюче а11 оЕ йе вирегпасапс Ъу Пепс1е аврттасюп ав с(евспЪег) 1и 5сер 3. Та!ге саге тч!сЬ сЬЬ втер, ав сЬе реаес вогиеиизев гСоев пос аг(Ьеге гсаЬс!у со йе соЬе. 13. (11вво1че сЬе пис1ек асЫв (и 100 )т1 оЕ ТЕ (рН 8.0) сопса(и(пц 20 (тц/ш! т111аве-Егее КЫаве А (рапсгеаСк Клаве). ЪЪгтех йе во1ипоп иепт1у Еог а Еечч весопт(в. 5Соге СЬе ТРА во!ит!оп ат — 20"С.
Рог гесоппиеиааиоив оп сгоиЫевЬоопиц, р1еаве вее ТаЫе 1-5 !и Ргососо! 3. 15. Кеточе апу Ьеаг(в оЕ ейапо1 йас сопи оп сЬе вЫев о( сЬе сиЪе. 5соге йе ореп сиЪе ас гооти сешрегасше пи!11 сЬе ейапо! Ьав ечаротасег) апд по Е)шс1 !в ч(в(ые ти йе сиЬе (2 — 5 иипШев). 1Е йе реПес оЕ ВС4А !в г(г!егС ш а гсев1ссасог ог иигСег а аеиши, и Ьесотев гПЕПеи1с со гавю1ее ипгсег ЮГИЕ С1ГСШИВСапсев аигС гиау г(епагоге (5чагеи ес а1.
1987). 11гу!иа сЬе реаес Еог 10-15 пиииеев аС гооис сеигрегасше Ь июаПу ютукгеиг Еог сЬе ейапо! со ечарогасе тч!1Ьоис сЬе ВЬЕА Ьесогп!па ЙеЬудгасей Ргогосо! 3: Ргерагаг!оп о!' Р!аттЫ Р)чгА Ьу А!)са!!пе Луг)т ипй 5Р5: Матргерагатуоп !.39 Мег1|а |В, Л; ог ТегпВс Втой Сео|г|Еще5 апд Ко|огь 5ог аИ С5А гогог ог едшча1епт 5огча11 55-34 гогот ог едигча1епт Адй6опа! Кеацеп45 5терь 8 апг7 79 оЕ йЬ ргогосо! гедшге геаВепь 1Ьгес1 и Сйаргег 5, Рготосо1 7. 5тер 78 оЕ йЬ рготосо1 геди!ген геаВептг 1!атее) и Рготосо| 8, 9, 70, ог 7 7 оЕ йЬ сЬартег. МЕТНО0 Ргерага6оп оЕ Се11 С01Еттге 7.
1поси1ате 30 ш1 оЕ псЬ тпет|!иш (1В, УТ, ог Тегпйс Вго|Ь) сопташш8 тЬе арргорпате апВЬ|- огк еЬЬет тчтй а яп81е со|опу оЕ тгапаЕоппег| Ьасгепа ог лч!1Ь 0.1 — 1.0 тп1 оЕ а япа11-аса1е 1!диЫ си1!иге Вготчп Еготп а яп8!е со!опу. То епснте тЬаг тЬе сн1ыте Ь адеднате!у нега!ей: ° ТЬе чо!шне о1 гас сн1тнге Лай тЬон18 Ье ат!еая Еоиг Вгоег цгеатег тЬап тЬе чо1шне о1 тЬе Ьастепа1 сн1тнге. ° ТЬе снЬнге Вал!т зЬон1т! Ье !ноте|у саррЫ.
° ТЬе са!шге гЬон18 Ье |пснЬатет| тч|тЬ тнаогош арпа!гоп. 2. 1псиЬате !Ье си!шге ат тЬе арргорпате тешрегаште тчЬЬ ч!Вогоиа зЬаЬ|п8 ип61 тЬе Ьассепа геасЬ |ате 108 РЬаае (ОРооо = -0.б). 3. 1поси!ате 500 ш| оЕ 1.В, т'Т, ог ТегпВс ВготЬ тпегВшп (ргетчаппег) со 37"С) сиота!и!п8 гЬе арргорпате апг!Ъ!от!с !и а 2-!пег йааЬ ъч|тЬ 25 пт1 оЕ |Ье 1ате-108-рЬаае си1тиге. 1псиЬате тЬе си|тите Еог -2.5 Ьоить аг 37 С нг|тЬ ч|8огоиа аЬаЫп8 (300 сус1еа1пипите оп а го!агу аЬа)сег). ТЬе Отт „оу тЬе геан!т|нВ сн1шге ьЬон!8 Ъе -0.4.
Весаые тЬе ВгогчтЬ галет оЕ т!171егепт Ьастепа1 ягашт нн!! чагу, гас сн1тнге гнау Ьаче со Ье !нснЬатеа т1!ВЬт!у !опадет ог тЬоттег тЬап 2 5 Ьонгь со геасЬ ап 017 о! 0.4. 4. Рог ге1ахет! р!аяпЫа тч|тЬ 1отч ог шос|егате сору пшпЪегя асЫ 2.5 ш| оЕ 34 ш8йп| сЫогашРЬепко! ао1игюп. ТЬе Впа| сопсептга6оп оЕ сИогашрЬепко| ш тЬе си1шге аЬои18 Ье 170 )л8йп1. ~ !МРО77ТАЬ!Т гог ЫеЬ-сору-пнтЬег р!аягнгЬ, т)о пот атЫ сЫогагпрЬеп!со!. 5. 1псиЬате тЬе си1гиге Еог а 6лгйег 12-1б Ьоигь ат 37"С мг|тЬ ч|догоиа ьЬаЫпд (300 сус1еа1пппиге оп а то!агу ьЬа1сег). б.
алешине ап а1п|иот (! — 2 гп|) оЕ тЬе Ьас!епа1 си|тите то а ЕгеаЬ ппсго6л8е тиЪе апт! а!ого Ь аг 4"С. Нагнет! тЬе геша|ил!ег оЕ !Ье Ьастепа1 се!!а Еготп тЬе 500-пт1 си1тше Ьу септпЕнаагюп ат 27005 (4100 грпт тп а 5огча11 С5А гогот) Еог 15 ш|пигеь ат 4'С. РЬсаЫ йе ялрегпатапт. 5!апд йе ореп сепгт!6л8е Ьотт|е ш ап !пчег!ет| роятюп го а1|отч аП оЕ тЬе аирегпа!апт то г!га!и атчау. 7. Кеаиарепт! 1Ье Ъасгепа1 ре1|ет ш 200 ш1 оЕ ке-соЫ 5ТЕ. Со1|ест йе Ъастепа1 се|Ь Ьу септпЕи8ат!оп аь деаспЪед тп Втер б.
5тоге йе ре11ет оЕ Ьастепа |п тЬе сепгп6лВе Ьотт!е ас -20'С. 8. |Ле опе оЕ йе шеГЬог)ь т!еаст!Ъед ш Рготосо1 1 ог Рготосо1 4 то ргераге р1аяпЫ РХА Егош йе 1 — 2-ш1 а1!диос оЕ Ъастепа| си|гиге вес аят!е тп 5гер б. Апа1ухе йе пишргерагаВоп р|ая 1.40 СЬаргег 1: Р1аят!г)я апгЕ ТЬеп. Еуяе)и1пеяя Еп Мо1еси!аг С!отпч гпЫ Р)ъ)А Ьу сППеяг)оп ъч)ЕЬ гЬе арргорг)аге геяпсПоп епхуше(я) апс) а8агояе Пе! е!ессгорЬогеяя го епюге гЬа! 4Ье соггес! р1аяиЫ Ьая Ъееп ргора8агес) )п гЬе 1аг8е-яса1е си1гиге. ТЬ!я ЫпП оЕ сопгго! гиау яееги а !!гс!е очаг!у сотри!яче.
Ноъчечег, !г ргочЫея ча1иаЫе шяигапсе аха!пяг еггогя йаг гпау Ъе сПЕ6си!с го гегпече апс1 шау саше сопяс!егаЫе 1оя оЕ шпе. Ьу5!5 о1 Се!!8 АПоъч йе Егогеп Ъасгег)а! сеП реПе! Егогп 5гер 7 го гЬаъч аг гоош гегпрегагиге Еог 5-10 пипигея. Кеягьрепс1 йе реПег иъ 18 ш1 (!О гп1) оЕ АПсаПпе!уяЬ яо100оп 1. ТЬе чо!шпея 8!чеп !и рагепйеяея !и йе гегпа!пбег оЕ ГЬЬ ргогосо1 яЬои!д Ье ияед оп!у ъч)ГЬ си)- сигея ЕЬаг Ьаче Ьееп ггеагее! ъч)й сЫогапърЬешсо1 аг 5гер 4. АсЫ 2 гп1 (! ш!) оЕ а ЕгеяЫу ргерагес1 яо106оп оЕ ! О тпПЕгп! 1уюхугпе.
10. АсЫ 40 ш! (20 гп1) оЕ ЕгеяЫу ргерагег) АПсаПпе 1уяя ю!шюп!1. С!ояе гЬе гор оЕ гЬе сепсг)Еи8е Ьосс!е апг$ пих йе сопгепь гЬогоиПЫу Ъу Пепс1у гпчегНп8 йе Ъо! Пе яечега1 Ппгея, !псиЪаге йе Ьогг!е Еог 5 — 10 пипигея аг гоопг сегпрегагиге. Рго!опхеП ехрояиге оЕ яирегЬе!ка! РИА со аПъа!! геяи1гя !и гггечегя)Ые с1епагигаиоп Е'ч!по8гае) апе! ЬеЬоъчих )966). ТЬе ген!гш8 сус!к соПеП РХА саппос Ье с!еачеь) чаъЬ геягпсгюп епхупзея, апд !г пи8гасея йгоиПЬ а8агояе Пе!я аг аЬонс гъчке йе гасе оЕ яирегЬе1ка! Р)4А апъ) яа!пя роог!у ъч!й егЬ!йшп ЬгопяЫе. Тгасея оЕ гЬ!я Еопп оЕ Р)4А сап Ье яееп !и р1аяпнЬ ргерагея) Ьу аПса!ше !уяя оЕ Ьасгепа. 12. Сепгг)Е08е йе Ьасгепа1 1уяале а! >20,0008 (11,000 грш ш а 5огчаП С5А гогог) Еог 30 пипигея аг 4'С )п а гпес))иш-яреед сепспй8е.
АПоъч йе госог го ягор ъч)гЬоиг ЪгаЫп8, А! йе ей! оЕ гЬе сепгг)Еи8аг)оп ягер, с)есапг йе с!еаг яирегпагап! )пго а Пгас)иагес) суПпс!ег. Р)ясагс) гЬе реПег гегпагпш8 )п йе сепсг!ЕиПе Ьо01е. ТЬе ЕаПиге го йпп а согпрас! РеПег айаг сепгпй8аиоп Ь ияиаПу а сопяее)иепсе оЕ !пая)еоиасе пихш8 оЕ йе Ьасгепа! !уяаге ъч!й АПъаПпе !уя)я яо!ш!оп !1 18гер ! )). !Е йе Ьасгепа! с!еЬпя с!оея пог Еопп а г!ПЬг!у рас)ъее) реПег, сепгпри8е аха!и аг 20,0008 1! ),000 грш )и а 5огчаП 65А гогог) Еог а Еигйег )5 пипигея, апд йеп ггапяЕег ая шисЬ оЕ ЕЬе яирегпасапг ая рояяЫе го а 6еяЬ гиЬе. Ресапип8 йе ырегпасапг гЬгоиПЬ Еоиг-р1у Паоле ас гЫя ягер Ье1ря го гегпоче пасся оЕ часоия Пепопис Р!4А апи ргоге!и ргес!Риаге. Кесочегу о1 Р!ахи!г! 01ЧА Меаяиге йе чо1ише оЕ гЬе яирегпагапг.
Тгапяуег йе яирегпагапг 108егЬег ъч!ЕЬ 0.6 чо1ише оЕ ьоргорапо1 го а ЕгеяЬ сепгг)6л8е Ьогг1е. М)х гЬе сопгепь ъчеП апс1 ягоге гЬе Ьогг)е Еог 10 пипилея а! гоогп гегпрегагиге. 14. Кесочег йе ргеслрПагес1 пис!ек аснЬ Ъу сепгг!6л8аг)оп а! !2,000ч (8000 гргп )п а 5огчаП С5А госог) Еог 15 пппшея а! гоот гетрегагиге. 5а!г пъау ргес!р!гаге 1Е сепгпуи8агюп Ь сагг!ед оиг аъ 4 С. 15. Ресап! йе ырегпасапс сагеуиПу, апс1 гпнег! гЬе ореп Ьогг1е оп а рарег гоъче! го аПоъч гЬе 1ая! с1горя оЕ ялрегпагапг со е)га!и аъчау. ЬПпяе йе реПег апе! 1Ье ъчаПя оЕ гЬе Ьо01е ъчПЬ 70% елЬапо1 аг гоопл гегпрегагиге. Рга!и оЕЕ гЬе ейапо1, апс) гье а Раягеиг ргреье аггасЬег) со а АсЫ 20 пъ1 ( ! 5 пъ1) оЕ ке-со!6 АПса1лпе 1уяя яо!иг)оп 111.
С1ояе йе гор оЕ гЬе сепгг!Еице Ъос11е апс) пих гЬе сопгепгя Пепг1у Ьиг ъчеП Ъу яъпгПп8 гЬе Ъосг1е яечега! г!гпея (гЬеге яЬои16 по 1оп8ег Ье гъчо г!)яг!08шяЬайе 1н)шс1 рЬаяея). Р1асе йе Ьо01е оп ке Еог 10 пипигея. А Посси1епг ъчЬне ргес!Рягаге соипяии8 оЕ сЬгошояогоа1 РЫА, Ь!ПЬ-гпо!еси1аг-же)8Ьг Йг)А, аоъ) рогаяя!шпЕПРЯргосе!и!сеП ъчаП согор!ехея ъчП! Еогги е1ипп8 гЬ!я !псиЪагюп. Росаышпь асегаге Ь ияед !и ргеЕегепсе го яое!шпъ асегаге !и АПъаПпе !уяя яо1ииоп !П Ъесаше йе рогаяяштя яа!г оЕ ПоПесу! яи!Еаге Ь Еаг !ем яо1иЫе йап йе яосПшп яа1г. Рготосо! 3| Ргерагат|оп оГ." Р1аяп(д РЖА Ьу АГ)та!тие Аут(а ъч(тй Я35| Мах)ргерагат(оп 1.41 часишп 1ите то гетпоче апу Ьеада оЕ !н)иЫ тЬат адЬеге то ГЬе ъча1!а оЕ ГЬе Ьотт!е.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
