Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 170
Текст из файла (страница 170)
А реррегей ЪасЕВгоцпй Ь сце со ьтр ргеьеп1 аь тпог8апк РЬоьрЬасе ог руго- РЬоьрЬасе ьбсЫп8 со 1Ье итеспЬгапе. ТЬЬ ргоЫесп Ь Егеъ)цепйу епсоцп- сегед ъчЬеп цьш8 5ц1аЬе1ей ргоЪеь. Ро пос ше о16 гайа1аЪе1 сп ъчЬссЬ гайо!уяь Ьаь оссиггес$. Рцгйу йе ргоЬе Ьу арии-со!игпи сЬготпасо8гарЬу, ргейрцаиоп, ог Ве! е!ессгорЬогеьЬ Ьеуоге ые. 1пс!цс$е 0.5айя $ъч)ч) юйцгп ругорЬоьрЬасе ш ргеЬуЬг)Атас!оп)ЬТЬг)йтассоп ьо1шюы. Р$о1осо~ 9 0о1 апд Яо1 НуЬпйла6оп о1 Рипйед КМА р От ЛЧЭ ЬЮт ВСОттПСС (КЛЕЛтОК Гт ЛС $979) ЛВИ тГСНН$С)иЕК Еог шппоЫПх(п8 кечега1 ргерагаПопк оЕ ппс1егс аси(к оп гЬе кате ко!(с$ кпррогв пкпаПу а сЬаг8ег$ пу1оп тетЬгапе. ТЬе сопсепггагюпк оЕ гЬе гаг8ег кег)пепсе оЕ !пгегекг сап Ье екгппагес1 Ъу ЬуЬг)с$(х!п8 гЬе ппгпоЬ(Пхес1 катр1ек го ап арргорПаге ргоЪе.
ТЬе агпоппгк оЕ саг8ег кес)пепсе аге екгппагес$ Ьу согпраНщ гЬе шгепк!гу оЕ я8па1к епппес1 Ьу с(огк сап!а(п(п8 гЬе гекг кагпр!ек чч(гЬ кгапс(агс(к сопга(п)пц $спокчп сопсепггапопк оЕ гЬе гаг8ег кес)пепсе. Рог кечега1 уеагк, с(ос Ыогг(пц апс1 к!ос Ыопш8 ъчеге ч(екчес$ чч(гЬ с$(кЕачог Ъу гпапу шчекП8асогк сЬгейу Ьесапке оЕ чаПаЬг!Ьу ш йе ЬуЪНсПхагюп я8па1 оЪга(пей Егот (с)епг(са! катр1ек аррПес$ го йе кате тетЪгапе, екрес!аПу ччЬеп апа!ухш8 сотр1ех рори1аПопк оЕ К)к)А ог Р)к)А. АЫюи8Ь гЬгк ргоЫегп Ьак по! Ьееп епьге1у ко1чес1 (АпсЬогг$овпу ес а1.
1996), йе асЬепг оЕ рокгПче!у сЬаг8ег( тогППес1 пу1оп тетЪгапек Ьак 1ег$ го а шпаг)сег$ ппргочетепг ш йе катр1е-гокатр1е чаНаПоп (СЬогпсхупк)с( апг$ ОакЪа 1984). 1п гЬе саке оЕ Р)к)А, рог(Егег$ ргерагаг)опк ог аПса1ше 1укагек оЕ сеПк апг$ г(ккпе катр1ек сап Ье 1оас(ес( оп!о гЬе тегпЪгапе ппг)ег аПсаПпе сопсПгюпк (Кеес( апг$ МапЬаег 1990). Рог-Ыог апа!уяк оЕ К)к)А (к кППЬг!у сг(с(с(ег йап г(ог-Ыогг!п8 оЕ Р)к)А.
Аг опе кга8е, гпчек$$8агогк ехрегппепсес$ чч(гЬ с1ог- апс1 к!ог-Ыогк оЕ сгцс(е сугор1акт ргерагес1 !гого ЕгекЫу Ьагчекгег$ ог Егохеп си!гоге<1 сеПк ог апппа! г(ккиек (е.ц„р1еаке кее чйпге апг$ $$апсгоЕг 1982). Ноччечег, йе гекп!гк оЪга(пес1 Егот г)ог Ыогг!п8 оЕ сгцс)е ргерагаПопк оЕ К)к)А с(Ы пог а1ъчаук тассЬ гЬоке оЬга(пег! Егот поггЬегп Ыогк оЕ рпг)Егес$ К)к)А (Тку)с(п ес а1. 1990).
Рог гЬгк геакоп, г(ог-Ыошп8 аг1с( к1ог-Ыошп8 аге 8епегаПу сагг(ей ош чч(гЬ рпг(Егег$ ргерагабопк оЕ К)к)А гЬас Ьаче Ьееп с)епагпгес( гч(гЬ 81уоха1 (МсМаяег апг$ СагппсЬае1 1977; Сагт(сЬае! апс$ МсМакгег 1980) ог Еогта!с(еЬуг)е (ТЬотак 1980) ппгпесПаге1у Ье(оге гЬеу аге арр!$ег$ го гЬе тетЪгапе (е.8., р1еаке кее Чгеус)егг ег а1. 1983). АРР$Лг$$ЧС ТНЕ ЬАМРЕЕ5 ТО ТНЕ МЕМВКА)л(Е А)гЬоп8Ь катр1ек оЕ К)к)А сап Ье аррПес1 го йе гпегпЪгапе гпаппаПу чч(гЬ ап аиготаПс р(ресПп8 с)еч(се, гЬе крас(п8 апс( яге оЕ гЬе гекп1$!п8 г(огк аге оЕгеп чапаЫе.
ТЬе гекп16п8 ппа8ек тау Ье т(ккЬареп, Ыиггес1, апг$ оЕ кпсЬ ипечеп сЬагасгег ак го с(еЕу с)иапг(гаг)оп. ТЬе ргеЕеггес1 тегЬог$ оЕ арр!угп8 катр1ек го а тетЬгапе !к Ьу часппгп татЕо1д. Мапу оЕ гЬе сопппегс)аПу ачаг1аЫе тап!Ео1сЬ аге кпррПег$ кч(гЬ а сЬогсе оЕ пю!с(к гЬаг г(ероыг гЬе кагпр!ек оп йе тетЬгапе ак с$огк ог к!о!к ш чагюок 8еогпегнек. ТЬгк епкпгек гЬаг гЬе !тгпоЫПгег$ кагпр1ек аП Ьаче йе кате кЬаре, агеа, апс1 крас(п8, ччЬ(сЬ ЕасгПгагек согпраНкоп оЕ йе $пгепк)гу оЕ ЬуЬг)с($хагюп. 7.4б Ргососо! 9: Гсос аа6 Яос Ну!ггЫггаг!оп оу Рагфег) КХА 7.47 ЬТАМОМВЬ То оЬсапс с)паис!сас!че гехи!ся П ь еахеп6а! со !пс1ибе роя6че апс1 пе8а6че сопсго!а сЬас Ьане РЬуяса1 ргорегс!еа япи!аг со сЬоае оГ сЬе пис!ек асЫ побег сеас.
Рог ехаспр!е, реп апа1уг!и8 тагпгпа1сап К)ъ)Ая сЬе пе8а6че сопсго1 аЬои16 сопа)хс оГ КХА Ггоги а сеП ог 6яие сЬас !х )споъчи пос со ехргесь йе саг8ес хег)иепсея Роябне сопсго!а аЬои16 сопяхс оГ ргерагас!опх оГ КХА т!хе6 ън!сЬ )споънп с)иапс!с!ех оГ К)ъ)А асапдагсЬ йас аге согир1етепсагу со йе ргоЪе. ТЬеае всап- с1агсЬ ап6 га6!о1аЬе!е6 ргоЪех аге ЬеЯ аупСЬеяге6 ш и!Сго !гот 13)ь)А Сетр1агеа йаС Ьаче Ьееп с1опес1 !исо р!аяпЫ нес!оса !и ънЫсЬ сЬе с1опш8 ясе ь Пап)ъесс Ъу съно ййегепс ЬассепорЬа8е рготосега си орроясе опепса6опя 5епае-асгапд КХА Гог ихе ах а ЬуЪпйгасюп хсапъ)агс) сап Ъе аупсЬеяге6 ысп8 опе рготосег; га6!о!аЬе!е6 Гапс!аепхе) ргоЪе саи Ъе хупсЬеягес1 ияп8 сЬе осЬег рготосег.
'ъъгЬеп сгеа6п8 хсап6агбя сЬе аупсЬеск аепае-хсгапд КХА ь т!хе6 ън!сЬ ап ггге1ечапс К)ъ)А ао йас йе гехи!с!п8 запаха !а ес)иа! со сЬас оГ йе сеас аатр!ея ТЬе ите1ечапс КХА хЬои!д Ъе ргераге6 ги сЬе хате псаппег ах сЬе сеас К)ъ)А. ТЬеае ргесаис!опв аге песеааагу со сопсго1 Гог сЬе ргеаепсе оГ !трипс!еа сп сусор!аяпк КХА сЬас Песгеаае йе шсепясу оГ сЬе ЬуЬпйгабоп я8па1 ап6 со сопсго1 Гог бесгеахес) ЬуЪпйга6оп еГПс!епсу !и хатр1ех сопсасши8 !аг8е атоипса оГ рипПес1 КХА. МОКМАЕ1УАТ1О!ъ) То ачоЫ очег1оайп8 йе гиегпЬгаие, пог тоге йап 5 )с8 оГ СоСа! К)ъ)А аЬои16 Ье ыес1 ш а а1ог оГ асапс1аг6 яге.
Ах а гпапег оГ соигае, йе хате атоипс оГ К)ъ)А ь !падем шсо еасЬ х1ос. Ноънечег, сЬеге ь а1ъчаух готе ипсегсашсу аЪоис йе ассиа! атоипса оГ КХА йас аге геса!пей оп сЬе псетЬгапе. ТЫх ргоЫеги сап Ъе ао!чей Ьу хса)псп8 сЬе гпетЪгапе ъч!сЬ тесЬу1епе Ыие аГсег сЬе КХА Ьах Ъееп сгоаяПп)се6 со йе роя6че1у сЬаг8ес1 гиегпЬгапе Ьу ъ)'ъг гггайабоп !Р!еахе аее Ргососо1 7 апс1 ТаЫе 7-5 !и Ргососо! 8). А!сегпа6че1у, йе апюипс оГ ро!у(А)' КХА геса!иед оп йе тегиЬгапе сап Ье теахигес) Ъу ЬуЪпйгасюп ън)сЬ гас!!о1аЬе1е6 оП8о(6Т) !Наг!еу 1987, 1988). ТЬь гпесЬо6 !а еарес)аПу иаеГи! ъчЬеп 1оайп8 япаП апюипь оГ рипйед ро1у!А) КХА Ги еасЬ а!ос.
МЕАЯЗсс1МС ТНЕ!)ъ)ТЕ!Чй!ТУ ОЕ ТНЕ $1С!ЧАЕ Рог гпапу ригрохея чьиа! аааеххтепс оГ йе !псепясу оГ ЬуЬгЫггабоп са аиГПссепс. Ноънечег, пюге ассигасе еас!тасеа оГ сЬе агиоипс оГ саг8ес аес)иепсе сп еасЬ аагпр1е сап Ье оЬса!иед Ъу 6епясотеспс асапп!и8 !Бгоъчп ес а1.
1983; СЬаргиап ес а!. 1983; Коха ес а1. 1989), йгесс РЬохрЬог!та81и8, ог 1ипипотеггу (ънЬеп ияп8 сЬепи1итспехсепг ргоЬеа) !МаССЬеъна ег а1. 1985). Ен)шд асш6Па6оп соипсш8 а1ао ргоч!6еа йгесс с)иап6сас!оп оГ сЬе сопсепсга6оп оГ саг8ес Г))ь)А. Ноънечег, сЫх тесЬо6 гецшгеа сЬас сЬе аатр1е Ъе сис шсо рсесеа апъс р!асес) ш а ас!прас!оп Пиог, сЬегеЬу еПиипа6п8 апу рохяЬППу оГ гергоЬ!п8 йе с!ос Ыося ТЬь ргососо1 бехспЪех йе Ыоп!п8 апгс аиЪхег!иепс ЬуЬпйгасюп оГ К!ъ)А рипйес1 Ггот сеПа ог с!ааиеа Ьу опе оГ сЬе тесЬосса ргеч!оийу бехспЪед ш Ргососо!х 1 сЬгоиКЬ 4. 748 СЬар(ег 7: Ех(гасгюи, Риггугсаггоп, аидАпа1угЬ оЕтЕ)я(А)гот ЕиЕагуодс Се1Ь МАТЕЮАЕ$ аг !МРОКТАХТ Ргераге аН геааепгь иьед й йЬ ргогосо! чМЕЬ ОЕРС-ггеагед Н О (р!еаье ьее йе !п(ог.
гпаПоп рапе! оп НО(АГ ТО ИГ!Х ТНЕ ВАТП.Е )АГ)ТН КХЛ58 0 СА()Т1ОХП Р!еаье ьее Аррепйх 12 Еог арргорпа1е Ьапг!!1пе оЕ та(епа15 таг(сед и4й <! >. Войегя апд Бо!цбопя Р!еаье ьее Аррепйх 1 Еог сопгропеп(ь оЕ ь(осЬ ьо1ипопь, Ьи(Еегь, апг! геаееп(ь. 01!иге ьгосЬ ьо1ипопь Ео йе арргорпа1е сопсеп!гапопь. АЕаОН (70 и) <!> РгеЬуЬггдгха((ол ьо!идол ВЧА депагигадоп ьо!идол 660 и( оЕ Еоппатгае <! > 210 и! оЕ 37оуо (чч)ч) Еоппа!с1еЬуг(е <1> 130 и) оЕ 1Ох МОРЯ е!еспорЬогеяя Ьиу(ег (РН 7.0) <! > Рог ЬгггЬег г(егаг1я оп МОРЯ е1еспорЬогеяя Ьи(уег, р!еаье яее Аррепйх 1.
РогпяаИеЬуг!е Ь яирраег( аь а 37 — 40оуо чг)ч (12.3 м) яо1шюп ЕЬаг гпау сопгагп а ьгаЬйхег ьисЬ ая пгегЬапо( (10 — 15оуо). Раппа)аеЬуг(е охЫ!хеь геай(у го Еогпис асса гчЬеп ехроьег! го а(г. 1Е гЬе РН оЕ гЬе ЕоппаЫеЬуг(е яо)шюп Ь асгак (<РН 4.0) ог гНЬе ьо!тюп Ь уеаогч, йе ьгос)с яо!одоп яЬои!г( Ье г(еюпЬеа Ьу ггеагшепг гчгй а тиег( Ьег( геяп, ьисЬ аь В!о-Маг( АС-501-Х8 ог Егогчех ХС8 ЬеЕоге ияе. РигсЬаье а йяППег( г1еюпаег1 ргерагагюп оу Еоппапгк!е геа8епг апг! ьгоге гп япаП аПоиогь и по(ег пагоЯеп аг — 20'С. АЬегпаг(че)у, геа8епг-Ягаг(е Еоггпагпгае сап Ье г(е(оп!хег( аь г(еьспЪес( (п Аррепйх 1. О.!х 55С яи(Ь 0.7о4 (иг)ч) 5О5 Р1еаье ьее поТе Го спер 18.
О.гх 55С М 17 ( Еч) 5О5 Оргюпа1, р1еаяе ьее упер 18. 0.5х 55С ът(Ь О. 7;4 (чгг)ч) 5О5 7х 55С иг(ЕЬ О. 7;4 (чч)ч) 5Е35 2х 55С Ордопа!, р1еаье яее упер 18. 20х 55С (ь(ос!еьс Ас!(Ь апд О!коппс!ео6дея К(я(А (еь( ьагпр1еь, ь(апдагдь апд пееа(ве сопегоЬ Ргераге ьапгр)еь Ьу опе оЕ гЬе тегЬой г(еяспЬег( ш Ргососо1я 1 гЬгоиВЬ 4 оЕ гЬ1ь сЬаргег. АП яатр1ея ьЬои16 сопгаш йе яагпе апюипг оЕ КХА г(аю!чег! гп 10 и1 оЕ ягеп)е, ОЕРС-ггеасег( Н О. Ягапс(агг(я аге 8епегагег) Ъу пихш8 чагугп8 циапйгея оЕ ип)аЪе!ег) яепяе-ьггапг( КХА яупгЬея(гег( гп чаго (р!еаье яее СЬаргег 9) го ааг)иогь оЕ а "пе8агпе" КХА ргерага6оп гЬаг 1ас(ся ьес)иепсеь сотр(егпепгагу го ЕЬе гайо(аЬе)ег1 ргоЬе.
РГОЬеЯ РгоЬе, гад!о)аЬе(ед апд депагигед Егепагиге )ия ЬеЕоге ияе ая г(еьспЬег) гп Ягор 2 оЕ Ргогосо1 8. Н(8Ь-ярос!Его-асг(ч!гу (>5 х 10" срт((г8) ьггапг)-ьресгйс ргоЪеь (е(йег ЕгХА ог КХА) сап еая!у г(егесг тКХАя йаг аге ргеяепг аг пгейшп го ЬгЕЬ аЬипг!апсе игЬеп 5 08 ойога1 сеаи!аг КХА Ь !оаг(ег) рег ь1ог, КХАь оЕ ЕЬе 1оигеьх аЬипг!апсе (1-5 сор(еь)сеП) аге ййки!г со г(егесг (п г(ос Ыоп оЕ гога( тапипа1гап сеаи!аг КХА. ЯисЬ КХАя аге Ьеьг г(егесгег( Ьу )оайп8 >1 и8 оЕ рипугег( ро!у(А)' ПХА рег ь!ог апг( ЬуЬпйх(п8 кЬЬ ьггапйьресгас ргоЬеь оЕ Ь(8Ь яресгас аспч(гу (>5 х 10я срт(и8). прес!а! Ецо!ргпеп1 В)о(1(пе гпапг!о(д МапгЕо!гЬ аге ачаг)аЫе !тот яечега! сопипегсга( юигсеь. Оейсеь Еог с(ог Ыогпп8 аге тоге рори1аг ЕЬап гЬоье Еог я1ог Ыогдп8, регЛаря Ъесаияе, иигЬ а г!ог-Ыопег, йе ьапгр!е Ь арраег( очес а )аг8ег агеа, геьи11- ш8 (п а гпоге ит(опп ЬуЪпйгаПоп я8па1.
Ргогосо! 9: Рог аиг! 5!ос НуБг)г!!гаг!оп о! Рису!ее! ЛХА 7.49 Сгоаа-!!п)сто с)ен!се !е.В., 5сгаса!т)сег, 5ггага&епе; С5 Сепе !.!п)гег, В!о-Вагу! ог Масиит онеп ог Мгсгоснане онеп РояПне!у сЬаг&ес! Оу!оп тетЬгапе Р1еаае аее сЬе 1псгос!пссюп со ХогсЬегп НуЬгссСсгассоп !МеюЬгапеа с!аес! !ог ЬСогсЬегп НуЬгссСсгассоп). УЬ!с)с Ыосс!Од рарег !е.&., ИгЬагтал ЗММ, 5сЫегсЬег & 5сЬиеП СВ004, ог 5!ета Ои!с)сРганн! %а!ее Ьай ргезес Го 6В С МЕТНО0 ЬеЖщ !.)р 1!1е В!011!пд Мап!1о!г! 1. Сис а рсесе ог' рояпче!у сЬаг8ес! пу1оп гпегпЪгапе со а аи!саЫе яге.
Маг!с сЬе шешЬгапе счпЬ а хо!с репе!1 ог Ьа!!ро)пс реп со !пс)!саге йе оНепсапоп. Чгес йе шешЪгапе Ьпейу ш Н О апс! сюаЬ Ь !и 20х%С гог 1 Ьоиг ас гоогп сегпрегасиге. 2. сгчЬ!!е йе шегпЬгапе !а аоаЬ!П8, с!еап йе ЫосНп8 гпап!го!о сагеЕЫ1у нн)сЬ 0.1 Н ХаОН апс1 сЬеп Нпае Ь нне!1 чг!сЬ асеп!е Н„О. 3. Хес съно ЬЬееь ог сЬРО1с Ыоспп8 рарег нч!сЬ 20х %С, апс1 р!асе сЬеш оп сор ог сЬе часшгш ипЬ ос СЬе аррагагпя 4.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
