Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 166
Текст из файла (страница 166)
с0Ь)А яуп(Ьея)хед (гога гпапыпа))ап гпКХА яЬоиИ гип ая а сопдпиоия ыпеаг (гогп — 600 Ьаяея (о >5 )еЬ. ТЬе Ьи)(е о( йе гайоасди(у яЬоиИ $)е ЬеМееп С5 (еЬ апд 2 )еЬ, апд по Ьапдя о( с0НА яЬои1д Ье ИиЫе ип|еяя (Ье гпКЬ)А ячая ргерагед (гогп ЫеЫу д)((егеп()а(ед се))я (е.ц., гедси|осу|ея апе! В |утрЬосу(ея) (Ьа( ехргеяя )агВе г!иапддея о( а рагдси|аг яе( о( рго(евя. ° Няе оГ гад)о)аЛе)ед ро)уГд0 ая а ргоЛе!п а р|)ог пог(Легп ЛуЛг)д)ха()оп (Гогпасе апд )ч($(сЬе)! 1986; Но|1апдег апд Гогпасе 1990). Ро$у(А) е КЬ)А ид)! Вепега(е ап аи(огад)оВгат идй а сопдпиоия ягпеаг (гогп 600 Ьаяея Со >5 Их ТЬе Ьи))е о( (Ье гад)оас()ч)(у яЬои1д $|е Ье(ъчееп $.5 )еЬ апе! 2 )еЬ, апс|, опсе ааа)п, по ярес)8с Ьапдя о( гпКЬ)А яЬоиИ Ье МвЫе ип1еяя (Ье гпКЬ)А ячая ргерагед (гот се))я йа( ехргеяя )агре е(иап($((ея о( яресйс тКЬ)Ая.
° Е)яе аупог(Лего ЛуЛпйгадоп го дегес( тК)ЧА оГ)тово я(ге ехргеяиед Рот а ЛоияеЛеер(пе деле. С)усега)деЬуде 3-рЬоярЬа(е деЬудгодепаяе (САРОН) тКНА, ячЬояе я)ке |п гпоя( гпагпта)(ап се))я 'ь — ) З )еЬ, (я сопипоп|у ияед (о топ)(ог йе е)иа)$(у оНЬе КЬ)А. 5)ип)6сап( ягпеаг)пе о((Ье Ьапд )п(о )оячег-гпо)еси)аг-ъче)КЬ( геи)опя аепега)(у Ийса(ея (Ьас я(Вп)6сапс деегада()оп о( йе гпКЬ)А рори|а(юпя Ьая оссиггед. Гихх)пеяя, оп (Ье о|Ьег Ьапс1, 'ь а я)ип о( ргоЫегпя едй йе аеагояе ие! яуя(егп (е.В., йе ргеяепсе о) 'юпя )п йе а)уоха!). Рго1осо! 6 Ьерагабоп о1 КМА Ассогйпц 1о Яке: Е!ес1горпогеыь о1 КМА ЙгоицЬ Ацагоье Се! ь Соп1а~п~пц ГоггпаЫейуде лмесеь ое КНА млч ве с|енлтикео вч ткелтмент ъч|тн еокмлмсое апд аерагасед Ьу е1ессгорЬогеяа |Ьгои8Ь а8агоае Ве1а сои|а!шп8 Еогша!деЬуде, 1п |Ь!а гпейод, адар|ед 1гош 1еЬгасЬ е| а1.
(1977), Со!дЬег8 (1980), Веед (1982а), апс1 Коаеп ес а!. (1990), КМА )а Егас|юпа|ед Ъу е1ес|горЬогеяа йгоиВЬ ап а8агоке Ве! соп|аш|п8 2.2 м Еогша1деЬуде. Еоппайейуде (огспь ипьсаЫе 5сЬ16 Ьаъеь ъч!СЬ йе яп81е 1|и|по 8гоир о( 8иап|пе геядиея ТЬеье аддис|а и|а!пса!п кол |п |Ье с(епаюгед агасе Ьу ргечепвп8 |п|гаягапс( |лсагаоп-Спс!с Ьаае ра|пп8. весаиае все 8сЬ!(( Ьааеа аге ипа|аЬ!е апд еая1у геп|очед Ьу д1!одоп, КМА сап Ье |паиса!пед |п йе с(епа|игед яа|е оп!у ъчЬеп (оппа1с)ейуде 1а ргеьепг |п йе Ьи((ег ог 8е!.
Еогп|аЫеЬус(е, а сега|о8еп, 'ь Ь|8Ыу |охгс Ьу |пЬа1акоп апс) соп|ас| ъч!|Ь все а!с1п апд Ьаь Ьееп с!ааявед ач а сагс|покеп Ьу йе Оссирадопа! ва(есу апд Неа1|Ь Аьас|с|асюп (Овнл). 8о1исюпь сои|а|п|п8 ЕоппаИеЬус(е ейоиЫ Ье Ьагк(!ед ъп!СЬ 8геа| саге апс) оп!у |п а сйе|п|са1 (ипъе Ьоод.
А8агоае Ве!а сопсашшц Еогша!деЬуде аге а!!ппег, 1еаа е1ааск, апс1 пюге Егап8)Ые йап попдепа|идп8 а8агоае Ве!я Сгеас саге !а гес!шгед )и пючш8 йеш !гоп| опе гесер|ас!е |о апойег, Хечег|Ье1еы, Еогша!деЬуде-а8агоае 8е!з гегпа!п а рори!аг шейод оЕ аерагабп8 КХАа диПп8 погйегп апа!уа!а Ьесаиае |Ье депа|игап| ыпоге еая!у д(ааос!асед йап Ь 81уоха( Егош КХА айег е1ес|горЬогеяя Ноъчечег, |Ье Ьапдь оЕ КХА !и Еогша!деЬуде-а8агоае ВеЬ аге ойеп Еихху апд до по| ша|сЬ йе сдар Ьеаи|у оЕ Ъапда !и 8!уоха1-а8агоае Ве!я ТЬе ог)8!па! ргососо1а Еог пог|Ьегп апа1уа!а паем Ве1а чдй а Еоппа!деЬус)е соп|епс оЕ 698 ог 2.2 М (Воедс)сег 1971; ЬеЬгасЬ е| а!.
1977; Каче е| а!. 1979). ТЬ)а Ь!8Ь сопсеп|га|юп оЕ депа|- игап| сошрепаасеа Еог!оаа оЕ Еогша!с1еЬус1е Ьу д)йиа!оп йош |Ье 8е1 !п|о йе Ъи(Еег дидп8 е1ес|горЬогеяя Ноъчечег, |Ь(а ргоЫеш сап а1ао Ъе ачоЫед Ъу гиппш8 ке1а Еог ейогсег сипев а| Ь!8Ь- ег чойа8еь (7 — 10 Чссш, !пасеад оЕ |Ье гпоге иаиа! 2 — 3 Ч/сш), ъчЬкЬ а11оъча йе сопсеп|гадоп оЕ Еогша!деЬуде ш йе 8е1а |о Ъе гедисед |о 1.198 ог 0.66 м Яач(х е| а1. 1986). Ас опе |ппе, |Ье ргеаепсе оЕ е|ЬЫшш ЬгогпЫе ъчаа йои8Ьс |о сошргоппае |сапа(ег оЕ К)ъ)А Егош (отша!деЬус1е Ве!а |о шегпЪгапеа апдс'ог |о аирргеаа аиЬаес)иепс ЬуЪг!д!хат(оп (е.8., р1еаае аее ТЬошаа 1980). ТЬезе еЕЕесся !Е йеу ех(ас а| а!1, аге поъч Ъе1)ечед |о Ье япа11 !и гпа8пйиде (Кгосхе)с апд 8!еЬегс 1990), апд гиапу шчеьй8а|огь гоийпе!у !пс1ис1е ейЫ|шп Ьгоп|Ые ш Ве!а сопсашш8 0.66 м Еогша1деЬус1е.
Ноъчечег, ейЫшгп ЬгогпЫе айои1д по| Ье (пс1ис(ед ш Ве!а гип !и |Ье о1д асу1е, ъчЫсЬ сои|а|и Ь!8Ьег сопсеп|гайопа оЕ Еогша!деЬуде. ЪЧЬеп (ггад!асед Ьу ()Ч 7.31 7.32 СЬаргег 7: Ехсгасс(оп, Ригфсапоп, апг( Апа!ук(к оЕтКЖА ~от БиИагуопс Се!1к ]18Ьс, йеу еппс ап еепе р]пЫЯЬ-ригр1е 8!оъч сЬас къчагпрк сЬе ЫВпа1 Егот япа1! апюипь ОЕК)ь]А. Вессег ксана]п8 сап Ъе ОЪса]пес] ъчЬЬ чегу 1Ьс!е Ьас]с8гоипс] Е]иогексепсе Ьу Ьеас(08 сЬе катр]ек оЕ К]ъ]А ъч]сЬ 1оъч сопсепсгас]опк оЕ есЬсйшп ЬготЫе ЪеЕоге 1оайп8 спсо йе Ве1 (роигпеу ес а!.
1988; Кокеп апс] Ч]!!а-КоспагоЕЕ 1990). Ак 1оп8 ак йе сопсеп(гасюп оЕ есЬЫшт ЬготЫе с]оек пос ехсеес] 50 )с8П и! сп (Ье каки!1, сЬе ейю]енсу оЕ сгапкЕег апс] ЬуЬгЫ]гаВоп оЕ сЬе К]ъ]А Ь пос к(8п!Е!сап!]у айессес! (Кгосге1с 1989; Кгосге]с апс! Я]еЪегс 1990; 08гестеп ес а1. 1993). МАТЕКЕАЕ5 ,Въ !МРОКТАМТ Ргераге а!! геа8епгк икес( (п СЫк рго(осо! ъч!СЬ РЕРС-Сгеагес( Н О (р!еаке кее СЬе )п(оггпасюп ране! оп НО)АГ ТО ЪМ(ъ) ТНЕ ВАТТЕЕ )АГ!ТН КНАЯЕ).
СА()Т!ОЫ: Р!еаке кее Аррепйх 12 Еог арргориа(е Ьапс!1!од оЕ та(ейа18 таг(сес! ъч!СЬ <!>. ВоЕЕегЯ апета 50!оЕ!опЯ Р(еаке кее Аррепс!!х 1 Еог сопсропеп(к оЕ к(ос(с ко!01!опк, Ьийегк, апс! геа8епск. 01!исе к(ос(с ко!исюпк со СЬе арргориа(е сопсепсга(юпк. Е(Ь(г((ит Ьготйе (200 и8(т!) <! > Ргераге ш РЕРС-сгеасег1 Н О <1>. Роста]с(еЬуг(е <1> Рогша18еЬуде Ь корр!)ег( ак а 37-40а ъч(ч (12.3 м) ко1нпоп сЬас шау сон!а(п а ксаЬ)!Нег яссЬ ак гпейапо! (!Π— !Якга).
Еогша1деЬуъ)е охЫиек геаг)11у со Еоппк асЫ ъчЬеп ехрокег1 со а(г.1(сЬе РН оЕйе Гогша1деЬуг(е ю1ипоп Ь асЫЫ (<РН 4 0) ог сЕ сЬе ю1шюп и уе1!оъч йе яос1г ко1нсюп кЬон18 Ье г(еюп)сег( Ьу Сгеаггпепг ъчсй а пнхеь) Ьег( геяп, юсЬ ак Вю-Каг( Аб-501-Х8 ог Роъчех ХО8 ЬеЕоге ые. Еогтат(с(е <! > РнгсЬаке а Жкс(!!еъ(-г(еюп(геъ( ргерага6оп о( сЬск геа8епс апг) ксоге ш япа!1 а((ъ)носк нпг)ег паго8еп ас -20'С А1сегпас(че1у, геа8епс-Егаг(е ЕоппапсЫе сап Ье г)еюп(гег( ак г(ексг]Ъеъ) ш Аррепйх 1.
70х Еогта!с(еЬус(е 8е1-1оас(т8 Ьийег 5098 81усего! (й1нсег( (п РЕРС-сгеасеь( Н,О) ! 0 шм ЕРТА (РН 8.0) 0.25к (ъч(ч) ЬгопюрЬепо1 Ыне 0.25а (чг(ч) ху!епе суапо1 ЕР 70х МОРЯ е1ес(горПогек(к Ьийег 0.2 м МОРЯ (РН 7.0) <1> 20 шм койшп асегаге !О псМ ЕРТА (РН 8.0) Рию!че 41.8 8 оЕ МОРЯ (3-!)ЪГ-пюгрЬо!!по]ргорапекн!Гоп(с асЫ) (п 700 пъ1 о( кгеп1е РЕРС-Сгеагег) Н,О, Аг1)ыС СЬе РН Со 7.0 ъчЬЬ 2 СС ЫаОН. АгЫ 20 гп! о( РЕРС-Сгеагег) 1 М койшп асегаге апд 20 гп1 оГ РЕРС-сгеасес) 0.5 м ЕРТА (РН 8.0).
Ас(]нас сЬе чо1шпе о( сЬе ко!иКоп со 1 1пег ай РЕРС-сгеасеь) Н О. Ясен!гге сЬе ю!и6оп Ьу ВЬгасюп сЬгон8Ь а 0.45-(ъгп Мс!!(роге 81сег, апъ( яоге и ас гоош сегпрегаплге ргосессег) йош!с8ЬЬ ТЬе Ьнйег уе1!оъчк ъч(сЬ ахе й Ь ск ехрокес( со 1с8Ьс ог Ь аисос!ачег(. Ясгаъчсо1огег( Ьийег мог)гк ъче11, Ьнс г(аг(гег Ьийег г(оек пос. Се!я А8агоке 8е! сопсат(л8 2.2 м Еогта!с(еПус(е То ргераге !00 ш! оЕ а 1.598 а8агоке Яе! соиса(псп8 2.2 м Гогша1оеЬуйе, агЫ 1.5 8 оЕ а8агоке со 72 гп1 оГ ксеп!е Н О. Р)моЬе сЬе а8агоке Ьу Ьос!сп8 (п а пнсгоъчаче очеп.
Соо! сЬе ю1шюп со 55'С апг) агЫ 10 гп! оЕ !Ох МОРЯ е1есиорЬогеык Ънйег аиг1 !8 гп! оГ с)еюп(гег) Гогша1деЬуде. 1п а сЬепнса1 Сшпе Ьоой сакс ап а8агоке Ее! ълсЬ к)оск Еогшег( Ьу а 3-гпш сошЪ лай ас (еакс Еоог псоге сеей сЬап сЬе пшпЬег оЕ КНА капср1ек нпг(ег секс. ТЬеке ехсга!апек аге нкег) Еог КНА кие шаг)гегк апг( гнппш8 г)уек (р1еаке кее Ясер 4).
АВоъч сЬе Яе! со кес Гог ас 1еакс 1 Ьонг ас гоогп сегпрегасиге. Ак юоп ак сЬе а8агоке Ьак кес, сочег сЬе Яе! ъчиЬ Яагап съггар нпсВ сЬе кагпр1ек аге гека со Ье 1оаг(ег(. А !.Яа а8агоке Яе1 ь кшсаЫе Гог геко!чсп8 К)ъ)Ак ш сЬе 0.5-8.0-(гЬ яхе гап8е. Еаг8ег КС4Ак кЬон18 Ье керагасеь) оп Ее!к сакс ъч(сЬ !.Ок ог !.296 а8агоке (1.еЬгасЬ ес а(. !977; М)!1ег 1987). Ргососо! б: Яерагаг!ои оу' КИА Ассогг(гпе го Ягае: Е!есггорЬогев(в оу' КЫА 7ЗЗ Ь!с)с!ек АспЬ апг! О!фопссс!ео$Ые5 КА(А ватр)ев Яагир1ев о(соса! ог ро!у(А) г КХЛ вЬои!6 сопявс о(ир со 20 ЕЕ о( КХА ш а чо!шпе о(1 — 2 01.
Ег)и)ча!епс агпоипсв о( Йе КХА вап|р1ев со Ье аиа)усе6 аге шточ|Ы (гогп всогаЕе (р!еаза вес сЬе рапе) оп ЯТОКАСЕ ОГ КХА (и Ргососо1 Ц, Ргес|р|сасе Йе КХА |чиЬ ейапо) апд йяо1че и ш ап арргорпасе чо)шпе о( всеп!е, РЕРС-сгеасег) Н О. ТЬе ргевепсе о( ва1п ог ЯРЯ ш |Ье ваги р1ев ог 1оайпЕ о( >20 )сц ог КХА рег 1апе сап сааза япеаг!пЕ о( |Ье КХА 6иппЕ е1ессгорЬогеяв. КЛ(А яхе таг(сегв РХА апс( КХА гп(Егасе ас 61((егепс гасев сЬ|оиЕЬ аЕагове Ее!в спаса(шпЕ (огшаЫеЬубе, |чиЬ КХА т(цга6пЕ (авсег Йап РХА о( ег)и(ча!еис ясе (Чгк)св 1986).
А1|ЬоицЬ РХА гиаг1|егв аге ргеуегаЫе Ъесаые йеу гип ав вЬагр Ьапдв, йеу саппос геай1у Ье иве6 со и|еавиге йе аЬво1исе яае о( ип)гпоъчп КХАв. ЪЧе сЬеге(оге гесотшеп6 ы|пЕ КХЛ 1а|Ыегв (е.Е., (гот Ы(е ТесЬпо!оЕ(ев) Йас сои|а|и КХАв о( 949, 746, 440, 237, 1.35, апг) 024 )гЬ!п 1епасЬ. ТЬи а11очгв |Ье гпаг(сел со Ье шее ав веп6пе!в со де!асс КХаве сопсапппасюп ог ойег ргоЫегпв Йас гпау оссиг диппЕ е!ессгорЬогеыв. Р1еаве вес йе 1псгог)иссюп со Хог|Ьегп НуЬ|Ы!гас(оп ргесейпц Ргососо1 5.
прес!а! Ег!4)1ргпепЕ Ег)и(ртепг (ог Ьог(гоп(а! е1есггорЬогеяв А рагски!аг е!ессгорЬогевп аррагаи|в вЬои!6 Ье гевегче|1 врес!Еса11у (ог КХА апа1уяв. С!еап е(ессгорЬогеяв сап1|в ап6 сотЪв ые6 (ог е!ессгорЬогеяв о( КХА (Ргососо!в 5 ап|! 6) члсЬ бесегЕепс во1ииоп, пиве (и Н О, с!гу иисЬ есЬапо1, агн1 Йеп 611 чг)сЬ а во1и6оп о(3вйв Н Ог Айаг 10 ппписев ас гооги сегирегасиге, пиве Йе е!ессгорЬогеяв сап(гв ап6 согпЬв сЬогоиЕЫу |чКЬ Й О сгеасед чАЙ 0.196 РЕРС. Весаиве йе РН оу Йе е1ессгорЬогеяв Ьи((ег сЬаиЕев диг(пЕ Йе гип, вес ир сЬе е!ессгорЬогеяв сап)г ю сЬас Йе Ьп((ег с|гси!асев соп6пиоы1у Сгот опе сЬагпЬег со Йе ойег ч|а а репвса16с ритр.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
