Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 163
Текст из файла (страница 163)
В|псйпц ос йцапд сакеь оп|у а сечн пипи(ее, апд гпацпейс яерагаИоп сайеь ьесопдю НуаеЫпц ог е!ийоп сап |п тояс саьее Ье согпр(е(ед |п С 5 т!посек ог )еек Номенег, сЬе иве о1 1Ьеве ЬеасЬ Ьаче Ьно виопц дгамЬас)сь: А гиахптвп| ос 1 ц о1 си кие ог сейь сап Ье м огйед ир а1 апу опе Йпе апд 1Ье Ьеаде аге чесу ехрепе)че. lпЕуос1исЕ)оп Ео РеоЕосоЬ 5, б, 7, 8, аль 9 Могйегп НуЬпйга6оп овтнввн нчвяв|ъпон |в ссввст то мвлвссвв йе апюипс апсс х)хе оЕ КЫАа сгапаег!Ьег! Его|и еи1|агуо6с Вепеь апд со ех6гпаСе СЬе|г аЬип|1апсе.
Мо оСЬег шеСЬогс Ь сараЫе оЕ оЪСаш)п8 СЬеае р)есех оЕ шЕоппа6оп яши1сапеоиа!у Его|и а!аг8е пшпЪег оЕ КЯА ргерагасюпя пояЬегп апа!ух!а са |ЬегеЕоге Еипдашепса! со ашебеа оЕ Кепе ехргеьяоп ш еи1|агуо6е се!1я Хог|Ьегп ЬуЪг161хас)оп Ъесаше рагс оЕ |Ье агап|!асс! герегсо)ге оЕ пю1еси1аг Ъю1о8у а1п|оя ипгпербасе!у айег йе 6гя |1еасПр6опа оЕ сЬе шейо|1 счеге риЪ|1хЬег! (А)сч)пе ес а!. 1977, 1979). А!йюпКЬ |папу чаПа6опа аиг! ипргочешеисх (е.8., р1еахе аее Кгосхе)г 1993) Ьаче Ъееп риЫ)аЬегс |1пг)и8 СЬе аиссеейп8 20 уеагя СЬе Ьаяс |Серь !и погСЬегп апа1уяа ге|па!п ипсЬап8ей ° 1хо1асюп оЕ шсасс шКХА е аерагасюп оЕ КМА ассогйп8 со яхе йгоиВЬ а |1епасипп8 а8агоае Ве! ° сгапвЕег оЕ йе КХА со а ао!Ы апррогс !и а счау йас ргеаегчеа )са сори!о8)са! йхсг)Ьис!оп сч!|Ь|п |Ье Ве1 ° 6ха6оп оЕ сЬе КХА со сЬе ьо1Ы шасг|пх ° ЬуЬгЫ|ха6оп оЕ йе пп|поЪ!1!хег! КМА со ргоЬеа сошр!ешепсагу со йе аег)иепсеа оЕ !исегеьс ° гегпоча1 оЕ ргоЬе шо1еси1еь йас аге попьрес)Е|са11у Ьоипг! со |Ье |ю1Ы шаспх ° г)есесс!оп, сарсиге, апд апа1ух)а оЕ ап ипа8е оЕ йе врес16са1!у Ьоипг! ргоЬе ию1еси1ея ТЬеге аге сЬо)сеа ас ечегу асер |Ь|Пп8 сЬе ргосееа апг) пеъч а1|егпа6чеа соп6пиа11у арреаг 1и йе!Вега|иге.
К )а ппрояЕЫе со йхс111 Егогп сЬ)з Ееппепс йе "Ьея" согиЬ|па6оп оЕ шесЬог!ь |Ьас сап Ъе ип|чегаа11у арр!се|1 |п а11 ясиа6опя Но|чечег, йе гпесЬогЬ г)еысг!Ъег) |п |Ье пехс 6че ргососо1а аге ехсгеше1у гоЬихс ап|1 Ьаче ъчог)гег! ъче11 |п а счЫе чапесу оЕ сисшпяапсея БЕРАКАТ!ОМ ОГ ИЧА АССОК0!МС ТО А!ХЕ Е1еесгорЬогеяь сЬгои8Ь г!епасиг)п8 а8агоае Ке1а Еа иаег) со херагасе КХАа ассоггбп8 со яхе апг) ь йе Есгас аса8е |п пог|Ьегп ЬуЬг)йхас!оп. 1п еаг!|ег сипея шейу1гиегсигк Ьуг)гохЫе 1Вабеу апг) ЕтачЫаоп 1976) асЬ!ечегс гюше де8гее оЕ роро!аПсу, раг6си1аг!у агиоп8 |Ье Ьгаче апг) Еоо1Ьагг)у. А)сЬоиВЬ иирага1!е1ег! аь а |1епасиппц а8епс, шейу!шегсипс Ьу|1гохЫе 1а Ьой чо1ас1)е апг) ехсгегпе!у сохк (Сишшспх апг! )чехЬ!сс 1978) апд 1а сЬегеЕоге по 1оп8ег гесогишепдей ТЬе Ео1- !оъч!п8 аге СЬе Ссчо шеСЬогЬ пюх| сопииоп!у иаег) Сог!ау Со херагаге г)епагигегс КХАх Еог пог|Ь- егп апа!уа)я 7.21 722 С)ларгег 7: Ехггасдоп, Риг(Е)саг(оп, апд Апа!уллЬ оу' тКАЕА Ггот Еи)гагуог(с Се1Ь ° Е1ессгорЬогеа!а оГ КХА депасшед лч(сЬ 81уохарцоппашЫе йгоицЬ ацагоае цеЬ (Ргососо1 5) (ВапС1е ег а!.
1976; МсМахгег апд СаппкЬае) 1977; Со!дЬегц 1980; ТЬошаа 1980, 1983). ° Ргесгеасшепс оЕ КХА чч!сЬ Еогша1деЬуде апд дппесЬу1аи1Еох!де, Ео11олчед Ьу е1ессгорЬогеяа сЬгоицЬ це1а сопса(п(пц ир со 2.2 М Гоппа1деЬус1е (Ргососо1 6) (ВоесЫсег 1971; 1.еЬгасЬ ес а1. 1977; Каче ес а1. 1979). ТЬе слчо ауасеша Ьаче арргохипасе1у сЬе хаше геао!ч(пц ролчег (Мл11ег 1987), апс1 йе сесЬ- пка1 ргоЫешх чч(сЬ ЬосЬ оЕ йегп Ьаче 1опц япсе Ъееп ао!чед. Рог ехашр!е, гесЬси1адоп оГ е1ессгорЬогеяа ЬиЕЕег Ь по 1опцег геишгед лчЬеп верагас!пц 81уоху!асед К!ч)А ш ацаголе це1а апд аса!п(иц оГ КХА лч(сЬ ей|д(шп ЪгогпЫе ь полч роаяЫе. Нолчечег, 81уоха! апс1 ехрес)а11у Соппа1деЬуде гесаш аоше ВЬадчапсацея шс1исцпц сохкду, ТЬе сЬоке Ъесччееп йе ьуасепь йегеЕоге дерепсЬ оп йе ге!адче лче(цЬс оГ сЬеае ЕЬадчапсацея лчЬ|сЬ лч!1! чагу Егогп опе 1аЬогагогу со йе пехг. Мапу сошроипсЬ ойег йап 81уоха1, Гоппа1деЬуде, апд шейу1шегсипс ЬудгохЫе Ьаче Ьееп ехр!огед аа депасиппц ацепь Гог К1МА диппц це1 е1ессгорЬогеяя Ъис Гелч оЕ сЬеле Ьаче ргочеп со Ье ге!лаЫе лп гоидпе 1аЬогасогу иле.
Сиап!д!ие йюсуапасе ь йе оп!у сошроипд сЬас гпау Ьаче адчапсацел очег Гоппа1деЬуде ог ц1уоха1 (Сода апд М(псоп 1995). лчЬеп !псогрогасед (псо ап ацагоае це! ас а Епа! сопсепсгасюп оЕ 10 шсчс, К ша(пса(пл КХА !и а с1епасигед Гопп. Е1ессгорЬогеяЬ плау Ье саге(ег1 ош !и лсапдагд ТВЕ Ьийег апд есЬЫшгп ЪгогпЫе плау Ъе !псогрогасед ш сЬе це!. Нолчечег, Еечг!аЬогасопел Ьаче адорсед сЬе шесЬод, апд ас ргеаепс, ехрепепсе чч!сЬ сЬЬ ауасеш ь соо!пппед Еог гь со гесопппепд йас циап!д!ие сЬюсуапасе Ъе иаед ли р1асе оЕ ц!уоха! апд Еогпа1деЬуде. Е(Г!)АЕ!Х!!ЧС АМО!)МТ$ ОЕ ШЧА!Х йОКТНЕКМ СЕ!Ц Ег)иа!(х(пц йе ашоипса оЕ КЯА 1оадед (псо !апел оЕ погсЬегп це1з Ь а сЬогпу ргоЫегп ччЬеп а пшпЬег оЕ д(ЕЕегепс аашр1ех аге со Ъе соплрагед.
5ечега! д!ЕЕегепс арргоасЬеа аге роаа(Ые апд попе оЕ сЬегп регЕесс: ° йоадупц ау ел!иа! атоипь оЕИХА (иаиа!1у 0.5 — 0.7 0(лл ип(са) (псо еасЬ |апе оЕ йе це1. гКХАа аге йе допипапс сошропепь ш ргерагасюпл оЕ соса! се11и1аг К!чА апд сопспЬисе >7596 оЕ йе (ЛгадлогЫпц шасепа!. ХогсЬегп апа1уяа оЕ егьа! грлапддех оЕ соса! КХА аЬолча Ьолч сЬе асеаду-асасе сопсепсгадоп оЕ сагцес шКХАа сЬапцеа чч!сЬ гелресс со гКЬ)А сопсепс оЕ сЬе се!1 (А)чл!пе ес а1. 1977; де 1ееичч ес а!. 1989). ()п11)се сЬе сгапаспрса оГ Ьоихе)сеер(пц цепеа (хее Ье1олч), йеге Ь по ечЫепсе сЬас сЬе 1ече!а оЕ 185 ог 285 гК!ч)А чагу яцшцсапс1у Егогп опе гпапипа!лап йьие ог се1!!ше со йе пехс (е.ц., р1еаае аее ВЬаВа ес а1. 1994).!п агЫКюп, гКИА сап еая1у Ъе десессед ш ацагоае це1а Ьу лса!и!иц лч(сЬ есЫд(шп ЬгоплЫе !ихсеад оЕ а хесопд гоипд оЕ ЬуЬпд!гас!оп чч!сЬ а лреслцс ргоЬе.
° )л(оппа!!атц латр!ел ассогдГпц го йеп сопгепг оЕ тКХАл оГ ап епдоцепоия сопас!сис!че1у ехргегьес1 Ьогье1сеер(пц цепе аисЬ аа сус1орЬл1!п, !З-асдп, ог 81усега1деЬуде-3-РЬоарЬасе деЬудгоцепаае (САРЕлН) (Ке11у ес а1. 1983). А!! сЬгее цепеа аге ехргеааед ас пюдегасе!у аЬип- с1апйечеЬ (-0.198 оЕ ро1у(А)' КМА ог 0.0039 о оГ соса! се!1и!аг КМА). лгапасюпа оЪхегчед (и йе шсепясу оЕ йе ЬуЪпд(хасюп яцпа! оЕ сЬе цепе оЕ !исегеас аге оГсеп ехргехаед ге1ас!че со опе оЕ сЬехе сЬгее Ьоиае)сеер(пц цепея Ноъчечег, К сигпа оис йас сЬе 1ече1л оЕ ехргеаяоп оЕ Ьоиве)сеер!иц цепеа аге пос сопвсапс Егогп опе гпашгпа1лап йьие со апосЬег пог Ггопл опе се11 Впе со апосЬег (е.ц., р1еахе лее 5рапаЫа 1993; ВЬада ес а1.
1994). А!сегал(опа ш йе ге1аиче !псепясу оЕ йе ЬуЬпд!гас(оп яцпа1а Ъеслчееп сЬе Ьоиае)сеер!иц цепе апд сЬе цепе оЕ (псегеас гпау сЬегеЕоге геял!с Егогп сЬапцеа ли сЬе 1ече1 оЕ сгаплспрс!оп оГ еКЬег цепе ог Ъой. Епггог)пег!оп |о РгогосоП 5, б, 7, 8, апг! 9 7.23 ° Еоа|ЕЕпдоЕегЕиа! атоипь оЕро!у(А) ' КХА. ТЬе ро1у(А)' сопгеп| оЕргерагаг!опт оЕ КЫА сап Ье со|праге|1 Ьу |!ог- ог |1о|-Ыо| ЬуЬНЕПга|юп го а гасПо!аЬе!е|1 ро1у(с)Т) ргоЪе (Наг1еу 1987, !988).
ЕииЬ а!епг агпоипь оЕ ро1уЕА)' КЫА сап |Ьеп Ье 1оа|)е|1 !пго еасЬ 1апе оЕ а погйегп Ве!. ТЬ1| ь ап а!!гас!)че орПоп Ьеса|ье П шеааиге| сЬап8е| ш сопсеп|гаПоп оЕ а хрес)Пс шКХА ге1апхе |о |Ье |ога1 ашоип| оЕ Вепе ггапасг!ргя |и йе сеП. ° ЕУ|Епд а аупгЕ|егЕс рхеи|Еоте|ьа8е ах а хгапгЕагИ. 5ечега1 8гоирх (е.8., р!еаае аее Тоасап! ес а1. 1987; РиВоь е| а1. 1993) Ьахе |ьес1 КХАх хупгЬех!гес) |и Ыто ая ех|егпаПу асЫес) ягапс)агй го саПЪгасе |Ье ехргеяяоп оЕ |Ье 8епе оЕ !псегеаг !п ййегепг ргерагагюпа оЕ сеПи!аг КХА. ТЬе аупйеПс р|еис!огпе|ьа8е, кЬкЬ Еа еп8!пееге|Е |о Ье с)1ЕЕегепг !п яге Егогп йе па|ига1 п|е|ьа8е, ь асЫе|Е |и )споъчп ашоипгх |о аашр1еа а| йе гипе оЕ сеП!уяя ТЬе ге!а!)че и|гепя|у оЕ |Ье ЬуЪгЫ|гагюп х!8па1к оЬга|пе|1 Его|п |Ье аи|ЬепПс ап|1 р|еис!огпе|ьа8еа 1а иае|1 со еаг!шаге йе ехргекяоп оЕ |Ье епс!о8епом 8епе оЕ )пгегеаг.
МАККЕК5 !35Е0!й СЕТЬ ТО ГКАСТ!О!ЧАТЕ КМА ТЬе яге оЕ ап КХА оЕ шгегеаг сап Ъе шеааигег) ассига|е1у оп1у |еЬеп шаг)сего оЕ )спогеп гпо1ес- и)аг гее|8Ьг аге !пс1ис)ес! ш |Ье 8е1. Еоиг суреа оЕ шаг)сега аге сопипоп1у |ьей ° КХА агап|ЕаггЕх ригсЕ|ахегЕ Егот а соттегс|а! хоигсе. ТЬеае агап|!агй аге ихиаПу 8епегагег! Ьу Еп ч)гго |гапасНрПоп оЕ с!опес1 РХА гешр1аге| оЕ Егпоип 1еп8|Ь. Аа а сопаециепсе, |Ье КЫА агап|!агй аге аоп|еП|пеа соп|апппасе|1 Ьу |е|пр1а|е РХА апс) Пх а|ьос)аге|Е р1аяпЫ ае|!иепсея Чесгог |ес!иепсеа ргеаепг |и йе ргоЬе иаес! 1п пог|Ьегп ЬуЬНсПгаПоп шау ЬуЬНсПге |о гЬезе гегппапь, ПепегаПп8 оп йе аигогайо8гаш еПЬег йасгеге Ьапй ог, гпоге сопипоп!у, а япеаг ыЬеге попе йои1и' Ье. ° РХА згап|ЕапБ риге!|ахегЕ Егот а соттегс|а! зоигсе.
01уоху!агес! депагиге|Е РХА| ап|Е КЫАх оЕ е|)иа1 1еп8й пн8гаге ас ес)иа1 ареей йгоиВЬ а8агоае Ве1я 5п|аП 1ЭХАа оЕ)спи|оп а|ге сап йегеЕоге Ье ихес! ах шаг)сего !п йь ху|гегп. Опсе а8а!и, Ьо|еегег, |Ьеге ь а сЬапсе |Ьаг хес|ог яег)иепсех ргеяепг |и йе ргоЬе |пау ЬуЬНгПге |е!|Ь гЬе агап|!агй. А| Ишея гЬ)х сап Ье ап аичапга8е Ьесаиае йе я8па!х Вепегагег) Ъу йе шаг)сег Ъапй оп йе аи|огасПо8гаш сап Ъе иае|Е сПгес|!у |о шеахиге йе яге оЕ йе КХЛ оЕ !гпегеа|. РЫА агапс!агй аЬои18 пог Ъе ихес! ах гпаг)сег| оп 8е1а соп|а!и!п8 Еогша1деЬус!е япсе КЫА ш18гагеыЬгои8Ь гЬеяе 8е1з а| а Еаяег гасе |Ьап РЫА оЕ ес!шча1епг яге (Ъг'к)са 1986).
° Н!8Ыу аЬипгЕапг тКХАх !285 ап|Е 188) пи!)|Еп ЕЕ|е КХА ргерагаЕЕогь ипгЕег гезп ТЬе ягех оЕ ГЬеае К)4Аа гагу |ПВЬГ1у Егогп опе шапипаПап прес)еа Го апо|Ьег. 185 гКХАа гап8е |п ыге Его|п 1.8 )сЬ го 2.0 !сЬ, и Ьегеах 285 КХЛа гап8е Ъегкееп 4.6 КЪ апс! 5.3 )сЪ |п 1еп8й. ° ТгасЕг!п8 |Еуея !п п|оаг |Еепагиг!п8 а8агоае 8е! аухгешя ЪгошорЬепо! Ыие пщгагеа яПВЬ|!у Еаяег |Ьап йе 55 гКХА, геЬегеах ху1епе суапо! ш18гагеа аПВЬ|!у а1о|гег йап |Ье 185 гКХА. МЕМВКАМЕЬ ЕЗЬЕ0 ГОК МОКТНЕК!Ч НУВК!О!ХАТ!О!Ч ТгапхЕег оЕ е1ес|горЬогеПсаПу аерагаге|1 РХА апс! КЫА Егоп| Ве!я со ггео-с!!шепяопа1 |ю1Ы аиррогь )а а 1|еу хгер ш пог|Ьегп ЬуЬгЫ!гаг!оп. 1п)г)аПу, ЬуЬНсПгаПоп чая сагНе|1 ош ехс1иа|че1у ичгЬ КХА ппшоЬП|ге|1 оп асгЬ"агес! сеПи1оае рарегх (ЛЬлпе е| а1.
1977; 5еес1 1982а,Ь). Ноыечег, и ъча| |топ геаПге|Е |Ьас КЫА с!епагиге|Е Ьу 8!уоха!, ЕогшаЫеЬус!е, ог |пейу!шегсигк Ьуг!гохЫе, П)се депагигегЕ !ЭХА, Ь~пй г!8ЬЕ1у го пПгосеПи!оае (ТЬошаа 1980, !983). Еог аеиега1 уеаь йегеайег, и!ггосеПи1ояе и а| |Ье хиррогг оЕ сЬоке Еог пог|Ьегп ЬуЬг)йга|1оп. 724 СЬартег 7: Ехиасйоп, Риг()лсат(оп, аидАпа1ув)в оуот)ъ)ъ)Атгоот Еи!сагуойс Се!!в (ТпЕогтипате1у, пдгосе!1и!ове Зв пот ап Ыеа1 гпатпх Еог во1Ы-РЬаве ЬуЬгЫ|хатюп Ьесаиве Кв сарасду то Ь|п|1 пис1ек асЫв Зв!оън (-50-100 З|8лсшт) апд напев ассогйп8 то йе в(хе оЕ йе КЬЗА. !и а|ЫКюп, йе КЬЗА Ьесошев аттасЬед то ш|госе11и1ове Ьу ЬудгорЬоЪ|с гайег |Ьап соча1еит штегасйопв апд |ЬегеЕоге 1еасЬев в1оъч1у Его|и |Ье во1Ы виррогт дипп8 ЬуЪг)д(хат(оп апд ънавЬ|п8 ат Ь|8Ь тетпрегатигев.
Рвиа!1у, п|тгосеПи1ове шешЬгапев Ъесоше Ъпт|1е дипп8 ЪаЫи8 ипдег часишп ат 80"С, ъчЫсЬ |в ап ште8га! Рагт оЕ |Ье ргосевв то иппюЬ|!гхе пис1ек асЫв. ТЬе ГпаЫе шегиЬгапев саппот виЪвет)иеп(1у вигч|че пюге йап тъно то |Ьгее сус1ев оГ ЬуЪпд(хат(оп апд ънавЫп8 ат ЬЗ8Ь тегирегашгев. ТЬеве ргоЫешв Ьаче Ьееп во!чед Ьу йе Зптгодисдоп оЕ нагюив |урев оЕ пу!оп гпешЪгаиев йат ЬЗпд пис!е(с асЫв ЗггенегяЫу, аге Еаг итоге дигаЫе йап пКгосе!1и!ове 61|егв (Кеед ап|1 Мапп 1985), ап|1 сап Ье герапед ЗЕ дагпа8ед (Рпав 1989).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
