Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 159
Текст из файла (страница 159)
ТаЫе 7-! ргехепзх зЬе апюцпь о(5о1цзюп Р тес(шгез( зо ехзгасз КХА Ггош чагюиь хоцгсех. Ь ЧЧАКХ!ХС 5о!цгюп Р 'ь чету сапа(!с, 'ччеаг арргорпазе 8!очем а !аЬогатогу соаз, апс! еуе ргогес- 6оп зчЬеп ргерапп8, Ьагкйзп8, ог ччог(с!п8 ъч((Ь (Ье ю!и6оп. ТАВЕЕ 7-1 Авпоипта оЕ 5о1и(зоп Р Кег(и!гегГ Го Ех(гас( КХА Егопз Се(!9 апзГ Т(ааиеа Амоият от ТЕ5юе оа Сема Амоият ог 5оштшх Р !00 зп5 цЕ(1хюе Т-75 Е(ах(с оЕ се1(х 60-пцп р1азе оГ се1(х 90-пцп 1азе оГ се!!х 3 гп! 3 зп1 ! гп( 2 ш( тззг ашццць о( 5о(цзюп Р гяшципзяз!ча Ьеи агг хггазгг йац изоте цзгд Ьу СЬоюсхуцзМ аца 5ассЬ! ((987).
Оцг чхргаепсг апц изаз о! озхег зцчгзз(разогз (чр„го!ЕахЬагз гз а!. 1993; 5рапцапп ез а!. 1997) зпйсазг ЕЬаз ЕЬг згсЬц(ацг ь цзцгг гчрго6цсз хвз( йч АМ о(И!А ь сецязззяз!у Ь(5Ьгг юхзя ЕЬг азпоцпз о Ею!цзюц Р и !цсггам4 зо йг ха!цех ххазхп ш йе ТаЫс Войет5 апд Бо!06оп5 Р!еаае хее Аррепс!1х 1 Еог сопзропеп!9 оЕ 9(осЬ ао!и6опа, ЬиЕГегь, апд геаВеппц РЕ1и(е 9(ос(с 901ибопа Го !Ье арргорпа(е сопсеп(гапопа. 76 СЬарсег 7: Ехсгаспоп, рссгфсасЕол, апгЕАпа!уев оу тКЕсЕА Егот ЕиЕгагуосгс Се!!в 5саЬг!!гесс Еогтатсссе ЕОр0ола0 <1> ВсаЬ11!хегС ЕоппапсЫе !в ивегС Еог сЬе всогаце оЕ КХА; р!еаве вее сЬе рапес оп 5ТОКАСЕ ОГ КЙА Ео1- 1овчспа Вгер 11. Се!15 апг! Т!55ссе5 Се!!в ог Ьввие ватр!ев Еог КАСА !сю!абол СепЕгсЕщеь агсс$ сео1ог5 5огча!! 55-34 госог ог ессисча!елг 5огча!! Н1000 гогог ог ессисча!елг прес!!а! Ее!сссрсстегсЕ Сичеггев Еог теавигслд аЬвогЬалсе аС 260 лгп ТЬе сичеиев вЬои!0 Ье е!СЬег йвроваЫе СЛг-Сгапврагепг шесЬу1асгу!аге ог гСиагса.
Весоге апсС аЕСег иве, воа1с сгиагсг сиге лев !и сопеепсгасе0 НС1 шесЬапо1 11:1, чсч ! Еог ас 1еавс 30 пшшсев апсС сЬеп вчавЬ сЬегп ехсепв!че!у ш виюс1е Н О. Нотона!гег Ее.ц., Тгввитсгег Егот Те!стас-РоЬгталл ог Ро!у!гол Егот Вгслссталл! АЕоггаг алс! реМе ччавЬесЕ т ЕЗЕРС-СгеаСегЕ Н О, ргесЬЕ!!есЕ Р1еаве вее СЬарсег 6, Ргососо! 1. Росургору!еле впар-сар СиЬе Ее.д., Га!сол1 Яагег ЬасЬ ргевег Со 65 С Орсюпа!, р1еаве вее 5сер 10. МЕТНОО 1. Ргераге се11в ог с!ввие вагпр1ев Еог Ево!асюп оЕ КЬЕА ав арргорПасе Еог сЬе шасеПа1 ипг!ег в!ис1у.
'гОК Т!55ССЕ5 СасЬеп вчогСг!пВ сч!ЕЬ !!аваев висЬ ав рапсгеав ог Вис сЬас аге гкЬ сп ссеВгагсассче епаугпев, сс Ь Ьевс со сис сЬе йввессегС сЬвие шсо япаИ рсесев 1100 шф апсс сЬеп с!гор сЬе ЕгаВшепсв ипшейасе1у гасо 1!0иЫ пКгоВеп, ГгаВшепи оЕ впар-Егохеп с!ввие сап Ье сгапвуеггегС со — 70"С Еог в!осаде ог овес! ипгпейасе!у Еог ехсгасбоп оЕ КНА ав гСевсг!ЪегС Ье1овч. Тивиев сап Ье всогегС ас — 70'С Еог вечега1 пгопсЬв вч!ЕЬоис асуесбпВ сЬе усе!0 ог !псеВгссу оЕ сЬе КНА.
Бпар-Егеег!пВ апгс ри!чепгасюп !в пос аЬчаув песеввагу. ТЬвиев сЬас аге пос ав псЬ гп КЬСавев гоау Ъе гарЫ!у ш!пеегс гпсо вша!1 ргееев апгС сгапвсеггеВ йгесбу гпсо ро!ургору!епе впар-сар сиЬев солса!и!пВ сЬе арргорпасе апсоипс оЕ Во1иКоп Ес 15сер сс Ье1осч, а. 1во!асе ЕЬе г1евсгес! с!ввиев Ьу с!Еввесссоп апс! р1асе сЬеш ппшейасе1у ш 1сс!и!с! шсгоцеп. Ь. ТгапвЕег -100 шВ оЕ сЬе Егохеп Нввие со а гпогсаг сои!а!и!пВ 1!гсисЫ шсгоВеп апгс расчес!хе сЬе 1!хвое ив1пц а ревс!е. ТЬе Нввие сап Ье 1серс Егохеп с!ос!па ри1чеПгаНоп Ьу ЕЬе асЫ!сюп оЕ 1н!шг1 шсгоаеп, с.
ТгапвЕег сЬе роигсЕегес! ссввие со а ро!ургору!епе впар-сар сиЬе солса!и!од 3 ш1 оЕ 5о!шюп 13. г!. Ногпоуешге сЬе 1!хвое Еог 15 — 30 весопс!в ас гоош Сегпрегасиге счссЬ а ро1усгоп ЬошоК- еп!хег. !пвсеасС оЕ ег!пйпВ ш а пюгсаг, Когеп Кввие гпау Ье р1асег1 швЫе а Ьоспегпаг1е ЬаВ оЕ р!авЬс ЙЬп апсС ри1чег!аесС чг!ЕЬ а Ыипс спвспипепс Ее.В., а Ьапипег1 ЕОгапиа ес а1. 1993Ь Оп1у сегсасп сурев оЕ р!авск К!гп аге соиВЬ епоиВЬ со чгссЬвсапсС Ьапипег!пВ ас 1овч сегпрегасиге Ее.В., ССггссе-Оп Тгапврагепсу РКгп Егогп ЗМ1.
Рготосо! !г Риг!)гсатгоп о~рс!с!А!тот Се!Ь апг! Т!ггиег 7.7 ГОК МАММАЕ!АЬС СЕП.5 СКОген!Ч !!9 5135РЕ!ч5!О!9 а. Нагчеа йе се!18 Ъу сепспйцасюп ас 200 — !9005 (!000-3000 грт !и а 5огс а11 КТ600 па!пВ сЬе Н1000 госог) Тот 5-!О т!тппеа ас гоот сетрегасше !и а ЬепсЫор сепст!йлВе. Ь. Кетоне йе тпейшп Ьу аарка6оп апс! геапарепс) сЬе се!1 ре11еса !и 1 — 2 т1 оу яеп1е кесо1д РВВ. с. Нагчеас сЬе се!18 Ьу сепспбсцас!оп, тетпоче йе РВ5 соптр1есе!у Ьу аар!гас!оп, апс1 асЫ 2 т! оу Во1тюп Р рет !Ое се11я д.
НопюВепсхе сЬе се!18 сч!сЬ а ро1усгоп ЬотоВеи!тег !от 15-30 аесопсЬ ас гоот сетрегатге. ГОк мАммАЬ!А!9 сеее5 скОъсг!сс !ьс мОХОЕАуек5 а. Кепюче йе гпейши апс1 ппае йе се!18 опсе сч!сЬ 5-10 т1 оу яеп1е ке-соЫ РВ5. Ь. Кепюче РВ5 апс! 1уае СЬе се!!а !п 2 т1 оу 5о!и6оп Р рег 90-ппп си1Спге с!!8Ь (! ти! рег 60 ипп с!!8Ь). с. Тгапауег йе се11 1уаасев со а ро1ургору1епе апар-сар сиЪе. д. НотоВеп!те йе 1уаатеа чч!СЬ а ро1уСгоп ЬогпоВеи!хег !ог 15 — 30 ьесопс!а ат гооти Сетирегатше.
2. Тгапауег сЬе ЬотпоВепасе со а )геьЬ ро!ургору!епе сиЬе апс! тес!пепс!а11у асЫ 0.1 тп1 оу 2 М аойшп асесасе (РН 4.0), 1 тп1 оу РЬепо1, апс1 0.2 ти1 оу сЫого!огт-!аоату! а1соЬо1 рег пи1- ЬТЬег оу Во1и6оп Р. Айет асЫиюп оу еасЬ геаВепс, сар сЬе сиЬе апс! ппх йе сопсепса сЬогопВЫу Ьу шчегяоп. 3. сЬтгех сЬе ЬотоВепасе ч!Китопа!у Тот 10 аесопс!я 1пспЬасе сЬе спЬе Еог 15 т!посев оп ке со рептс сотр1есе йааос!ас!оп оу пис1еоргосе!п соптр1ехея 4. Сепсп6лВе сЬе сиЬе ас !0,0005 (9000 грит ш а Вогча11 55-34 гогот) !ог 20 т!ппсеа ас 4"С, апс! йеп Сгапауег СЬе пррег ас)пеопа РЬаае сопСа!и!иВ СЬе ехтгасгес! КЬ!А Со а ЕгеаЬ СиЪе. То пшшп!те сопсапииасгои Ьу ЕгЬтА сгаррес! ас сЬе госегуасе, ачоЫ са!с!о8 сЬе !осчеас рагс о! сЬе а9оеош рЬаае. 5.
АсЫ ап ес)иа! но1шпе оу !аоргорапо! со сЬе ехсгассес! КЬ!А. Мгх сЬе ао1и6оп ъче11 апс! а11осч йе К!с)А со ргес!РЬасе )ог 1 Ьоиг ог тоге ас — 20'С. 6. Со11есс сЬе ргестрЬасес1 К!с!А Ъусепсп!цдаВоп ас !00005 (9000 грт !и а 5огча!1 55-34 гогот) !ог 30 т!пасса ас 4'С. 7. Сатен!!у с!есапс сЬе гаоргорапо1 апс! йаао!че йе ВХА ре!!ес !и 0.3 сп1 оу 5о!ц6оп Р !ог енегу 1 т! оу сЬ!а сю1исюп иаес! !и 5сер 1.
А !МРОКТАЙТ РеПеса аге еая!у !оас. Ресаит йе аирегиатаит !иго а !геаЬ сиЬе. Оо иот йасагс! Ь иис!! йе ре!!ес Ьаа Ьееи сЬес!сес!. В. Тгапауег йе сю!пСюп Со а т!сгоуиВе СпЬе, чотгех Ь сне!1, апс! РгестрЬате СЬе КХА сч!СЬ 1 чо1- шпе оу !аоргорапо! )ог 1 Ьош ог пюге ас -20"С. !! ссе8гас!ас!оп оХ КЬсА согиа ош со Ъе а ргоЫего !е.8., счЬеп Ьо!аип8 К!4А Стоги се!!а ог сьюеа !сиосчи со сопсаги !аг8е агооипсь о! КЬтаае, ансЬ аа гпасгорЬахеа, рапсгеаа, аос! атоа!! !исаа!!ие), гереас 5сера 7 аис! 8 опсе гпоге.
78 СЬаргег 7: Ехсгасгсол, Ригфсас(ол, алс) Ала)ус(з оу' тЯХА Егот Еи1сагуойс Се)13 9. СоПесс сЬе ргессрКасес1 КМА Ьу сеиспЕиПабоп ас гпахпиши зрее6 Еог 10 ппписес ас 4'С ги а ппссоуиае. ЪЧасЬ 1Ье ре1!ес пч(се ъч(й 7558 еСЬаио1, сеиспЕиПе аПа)п, аис1 гегиоче аиу геша)шиП ейаио1 ъч)й а 6)сросаЫе р)рессе 6р. 5)осе йе ореи сиЬе оп сЬе ЬеисЬ Еог а Ееъч пппшес со а)1оъч йе ейапо1 со ечаригасе. Ро иос а!1оьч йе ре!1ес 10 с)гу согпр1есе1у.
10. АИ 50-100 р1 оЕ )3ЕРС-сгеасес) Н О. 5(оге йе КМА гю1исюи ас — 70'С. Ас)П)боп оЕ 51)5 со 0.595 ЕоПоъчеП Ьу Ьеас)иП со 05'С гпау амьс йсю!исюп оЕ сЬе реПес. 11. Есбшасе йе сопсепсса6оп оЕ йе КЯА Ьу шеасипиП йе аЬсогЪаисе ас 260 ши оуап а1)с)иос оЕ йе 6па! рсерага6оп, ас ПесспЬес) (и Аррепб)х 8. Риг)усес) КЫА и иос пппшпе со с)еПгас)абоп Ьу КХасе айег гесисреияоп (и йе 0.595 505 ю1иИои.
5оспе шчес65асогспЬегеЕоге рге1ег со сПссо)че йе реПес оЕ К)4А сп 50-100 и1 оЕ ссаЪс16ес) ЕоггпагпЫе апс) ссоге йе соЬпшп ас — 20'С (СЬогпсгупсЕ) !992). РЫА сап Ъе гесочегес( Егот согсиагпЫе Ьу ргес1ргсабоп ъйй 4 чо!шпес оЕ есЬапо1. Рог ЕпгсЬег Песаг!я р)еасе сее сЬе раис! оп 5ТОКАСЕ ОГ КМА. 5Е)5 сЬои!д Ье геточес( Ьу сЫогосогт ехсгасбоп апс) ейапо) ргес!Р(сас)оп Ье(оге епгупгабс сгеасгпепс оЕ йе КЫА (е.П., Рптег ехсепяоп, гечегсе сгапссг!Риоп, апП )и чПго сгапс!ас)оп).
ТЬе гесПьо1чеП КЫА сап сЬеп Ье исес) Еог тКМА рипбсабоп Ьу оППо(с)Т)-сеПи1осе сЬгогпасо5гарЬу (Ргососо1 3) ог апа!ухес) Ьу ссапс)агс( сесЬпгПиес сисЬ ас Ыос ЬуЬпсПгаиоп (РгососоЬ 7 апс) 8) ог таррш5 (Ргососо!с !О, 11, апс) !2). КХА ргерагес) )тот ситес )с ПепегаПу пос сопсагп!пасес) со а яПшйсапс ехсепс ъчКЬ РХА. Ноъчечег, КЫА ргерагес) !гоги сеП Пиес ипПегПош5 сропсапеось ог )пс)исеП арорсояс Ь ойеп сопсат)пагег) ъч(1Ь ЕгаПтеисс оЕ с)еПгас)ес) Пепит!с )3ХА. КХА ргерагед 1гот сгапс(ессес) се)Ь Ь аЬпоя а!ъчаус сопсапппасес( Ьу ЕгаПтепсс оЕ сЬе Г))ъ)А сьес) 1ог сгапс(ессюп. 5опге (инесс!Пасоса йегеЕоге сгеас сЬе Ппа) КХА ргерагабоп чбй КХасе-Егее РЫасе (СпПо апс) МагПоПс 1990; 5(пппс ес а).
1993). А)сегпабче1у, ЕгаПтеисс оЕ (3)ъ)А тау Ье геточес) Ьу ргераг!п5 ро!у(А)' К)(А Ьу оПцо(ПТ) сЬготасо5гаРЬу. 5ТОКАСЕ ОЕ КХА Айег ргес!р!(асюи и4й е(Ьаио1, 51оге 1Ье К(ъ)А ас ЕоПоъъь: ° О(гсо)че йе ргесгргсасе т с(еюл(аесЕ Еогтат(с)е алсЕ йоге ас -20'С (СЬогпсгуиаЫ 1992). ГоггпатЫе ргочЫес а сЬеипсаПу йаЫе еийгоигиеис йа1 а!яг ргосессс К)ъ)А аПа)иас с)еПгас)ас!ои Ьу К(ъ)ахея Риг)бес), са)1-Егее КХА с!еьо)чес ци!с)с!у !и Еоииагик)е ир со а соисеисгасюи о( 4 гпфгп1. Ас аисЬ соисеи1гас)оис, загир1ез о( сЬе КЫА саи Ье аиа!ухес) сйгесС!у Ьу це) е!ессгорЬогеяс, КТ-РСК, ог К(ъ)сье ргосессюи, сач!иП Пиъе аис) ачокПиП ро1еиПа! с)ецгас)а1юи.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
