Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 154
Текст из файла (страница 154)
Кегпоне сЬе ПЫд 1гогп сЬе Ьеа! апд адд 505 со а Ела| сопсепсгасюп о1 0.1% |чан|. 2. |гпгпегсе сЬе гпегпЬгапе |и сЬе Ьо1 е|ис|оп Ьийег 1ог 15 п||писе5. Кос|! ог го!аСе Фе сои!а|пег диг|пВ бч5 Йпе репод. 3. Кереа1 51ер 2 ъч|сЬ а 1гей Ьа1сЬ о1 Ьо|3|пВ е3исюп Ьийег. | А 15СРОВТАНТ Оо иоС авоч| |Ье гиел|Ьгаие со |$гу ъчвеп !гаидегпиц |! Ьесънееи Ьа1сПе5 О1 Ьо! евп|ои Ьийег. 4. К|псе Фе пъегпЬгапе Ьпейу |и 001 х 55С а1 гааги сегпрегаСиге.
8$ос то5! о1 сЬе |к|ас| йоги 1Ье гпегпЬгапе Ьу р|ас|пц |с оп а рас| о1 рарег соъче35, 5апдъч|сЬ йе дагпр п|ел|Ьгапе Ьеинееп Ьчо йее15 о1 5агап Ссггар, апс$ арр3у й !о Х-гау Я|гп 1о сЬес|! |Ьа1 а|3 о1 сЬе ргоЬе Ьаа Ьееп гелючед. 5. Огу |Ье л|егиЬгапе, итар |оо5е|у |п а$ипь!пит 1оП ог Ьелчееп 5Ьее!5 о1 Ыо|дпц рарег, апс$5Соге а! гоогп сегпрегасиге — рге1егаЫу ипс|ег насиит — ипЫ пеес$ес|. То геЬуЬг|дЫе 1Ье гпегпЬгапе, р|асе |1 |п ргеЬуЬпд|ха!|оп 5о|мюп апд сопдпие ъч|дь 5!ер 2 о1 Рю!осо! 10. Келсоча| о1 а НуЬг|д|аед РгоЬе 1гопс а СЬагцед ог МеиСга! Му|оп МетЬгапе Мот гпапЫас!игег5 о1 пу|оп пъетЬгапе5 ргочде 3исиисСюп5 дессг|ЫпВ |юън напои5 Сурес о1 ргоЬе5 гпау Ьесс Ье 5сирред 1гогп йей рагвси|аг суре о1 гпегпЬгапе.
31 'ь адн35аЫе !о Ел|Плъч !Весе |пасшсвоп5. А|сегпадче|у, сгеас 1Ье ЬуЬг|д|аед гиегиЬгапе ън31Ь опе о1 сЬе 6|гее 5спрр|пй 5о|ийоп5 деысг|Ьед |п 6|е !аЫе Ье|очч. 1. Ргераге 5ечега| $зипдгсд тПППСег5 о1 опе о1 |Ье гес|ре5 1ог 51г|рр|пВ 5о|ис|оп В|чеп |и сЬе саЫе Ье|оън, |гигпегае 6|е гиегпЬгапе, апд сгеас а5 с3есспЬед !о гегпоче 6|е ргоЬе апс| !о ъчай сйе п|епсЬгапе. 51прр|иВ ю|и!юп Тгеа1гиеи! НЧ55Ыив 50|идол 1 М Тгв-С| |РН В.О|, 1 тМ ПОТА |РН В.О|, 0.1х Оеивагд!'5 геавеи| 50% 1оппагп|де <|>, 2х 55РЕ 2 Ьоигс аС 75'С 0.1х 55РЕ ас гоогп 1егирегатге 1 Поиг ас 65'С 0.1х 55РЕ а! гааги сегирега1иге 0.4 М НаОН <!> 30 ги|ии1е5 а! 42'С 0.1х 55С, 0.1% 505, 0.2 ХС Тпс-С| |РН 7.6| 1ог 30 ичпи!е5 аС 42'С 2.
В|ос пъо51 о1 йе Пс|и|д 1гогп йе п|еиъЬгапе Ьу р|ас|пВ й оп а рад о1 рарег !инне!5, 5апдиг|сЬ сЬе дагпр | п|елъЬгапе Ье1ччееп ьно йееы о1 5агап Ну!ар, апд арр!у |с со Х-гау й|3т со епылге йас а|3 о1 йе ргоЬе Ьаъ ~ Ьееп гелючед. 3. Огу Фе тел|Ьгапе, итар |оо5е|у |и а$илипии| 1оП ог Ьелнееп йее|5 01 Ыо|дпй рарег, апд 5!оге а1 гсюгп сел|регасиге — ргесегаЫу ипдег часиит — ип63 пеес|ед. То геЬуЬпд|хе дъе псепъЬгапе, р|асе!с |п ргеЬуЬг|д|кас|оп 5о|исюп апс$ сопйпие ъч31Ь 51ер 2 о1 Рго!осо| 10. Ргогосо| $0| 5оийеги Нуйг|д|аасгоп о$гйад|о!айе|ед РгоЬел со Миг|его Ассдл!ттоЬ|3|аед ол Мепгйгапел 6.57 6.58 СЛарсег б: Ргератпоп апд Апа|удл о) Ди)сагуог!с шепот!с Рл )А А001Т1ОЬ)АЕ РРОТОСОЕп НУВР1014.АТ1ОЬ) АТ ЕОЪЧ 5ТР3(ъ)СЕЬ|СУ ТЬе с1есесбоп о1 депее сдас аге ге|асед Ьис пос Ыепбса| |и вес)иепсе со а рагбси|аг ргоЬе сап еотебгпеь Ь ассогпрдйед Ьу ЬуЬпйдпд ипс1ег сопдДюпе о1 гедисед егппдепсу.
5иссеее дерепсЬ сйеду оп (1) СЬе дедгее о( вес)иепсе (депс(су Ьесъчееп сЬе ЬуЬг(д(аас(оп ргоЬе апд (Ье сагдес апд (2) сЬе )ид)с(оие сЬоке о1 ЬТЬпд)га- ' Иоп сопд)Вопи. МетЬегь о1 а депе (апсИу (гогп а Ыпд|е ерес(ее ог опЬо)одоие депее 1гогп д(дегепс ерес(еь сап а(пюьс а)илауе Ье 'ьо3асед Ьу (оил-есппдепсу ЬуЬг(д(гас(оп И (Ьеу йаге 65% ог дгеасег еес)иепсе )депс)су.
ТЬе |с|епбдсасюп о1 депее сЬа1 йаге (85% )депс(су гел|йгее ьЫИ |и (Ье агс апс| еотес)гпее |ос|с. Сепее |и ЕЬе ' )аиег саседогу аге пюге 1гес)иепс(у )ео(асед Ьу 3оиеаппдепсу РСР (еее СЬарсег 8). ТЬе 1о3|ои|пд ЬуЬг(д)гас)оплъчаъЫпд сиада)опт сап Ье иеед со (депс((у депее сЬас еЬаге > 85% еег(иепсе (депс(су. ° юг 5оиСЛегп ЛуЬпдлеа6оп ог есгееп!пд оГ ЬасеегюрЛаде р!аг)иез апг! Ьас(ег!а! со!оп)еег 5еС ир ЬуЬг)д)аас)оп геасбопь (п а Ьийег соп(а|п)пд 30% (члч) деюпсеес1 1огтат)де, О.б м НаС(, 0.04 м ход)ит рЬоерЬасе (рН 7.4), 2.5 пъм ЕОТА (рН 8.0), 1% 505, апд гайо3аЬе3ед депаилгес! ргоЬе (1 х 10 со 2 х 10 српйп( о1 ЬуЬпдйагюп ьо(иС(оп).
НуЬг)д|ке 1ог 1 б Ьоигь аС 42'С. ° Гог погсЛегп ЛуЛглс!леа6опси НуЬг)д(ее |п 50% деюп|хес| 1оггпалп)де, 0.25 м ЬсаС), 0.10 м еод(ит рЬоьрЬа(е (РН 7.2), 2.5 псм ЕОТА (рН 8.0), 7% 505, апд гасИо|аЬе|ед депаилгед ргоЬе (1 х 10' Со 2 х 10', срт(т! о1 ЬуЬг)д(гас)оп ео(ис(оп). НуЬг(6|ее (ог 1б Ьоиге ас 42"С. АС СЬе епд о1 СЬе ЬуЬг(д(хас(оп геасбоп, ъчай йе тетЬгапеь Ьмсе ъч((Ь 2х 55С)0.1% 505 (ог 10 гп)посев еасЬ ас гоот сегпрегасиге, 1оИои ед Ьу а и ай (ог 1 Ьоиг ас 55'С |и 2х 55С/0.1% 505.
Оье |агде чо)отей о( ппее апд ъчай ео)исюпе; гпа3се ъиге сЬас сЬеу аге ас сде арргорпасе сегпрегасиге Ье1оге иее. ТЬе |с|епббсасюп о1 депеш сЬас йаге (85% вес)иепсе ь спсЫег Ьи( гпау Ье ассогпр3|йес| Ьу ияпд опе ог плоге о1 Фе (о()оил- 3 |пд арргоасЬеь. ° Ояе ап НЧА ргобе ргерагед Лу !и сдсго Сгапеспр(уоп (р)еаее атее СЬарсег 9, Ргоалсо! б). ТЬе )псгеаеед я(а- ~ Ь!33(у о1 РЬ|А-ОНА ЬуЬпсЬ очег ОЬ|А-ОНА ЬуЬг)де (Саееу апд Оач)депп 1977; уи1сег ес а!. 1985) сап еотес)теь гпа(ъе СЬе д(6егепсе Ьеси ееп еее)пд а е)дпа! апд по( атее)пд а е(дпа!. Ноъчечег, РНА ргоЬее гпау депегаСе ЫИЬ Ьас)ъд оипде СЬас аге сИИси|с со гегпоче иЛ(Ь Илъч-ыппдепсу ъчайек ТЬе иве о1 попсЬагдед пу|оп гпетЬгапеь гпау аИлмасе йь ргоЫегп.
° Е)яе а япд!е-е(гапдед ОА)А ргобе ргера сед Ггот а Лассег!орЛаде М13 сетр!асе аъ деясг(Ьед |и СЬарсег 9, Ргососо| 4 ог 5. 5)пд)е-есгапдед ОНА ргоЬеь депегасе 1еъчег Ьас1сдгоипд ргоЬ|епь йап РНА ргоЬеь. ° Оесгеаее ГЛе Гоппат)де сопсепсгасюп со 20% апс| ЬуЬпд)ке ас 34'С. Р(пее апд ъчаеЬ СЬе ЬуЬг)д(аед тетЬгапеь аь деьсг)Ьед аЬоне. ° !пс!иде "сгоъчд!пд адепт" !и сЛе ЛуЬг!дуеа6оп геассюп.
(4(Ьеп Ыс|идег3 ас арргорпасе сопсепсгабопд ЕЬеье адепсе сап есаЫИае пис)е(с ас)де ада(пес сЬеггпа| депасигабоп апд ассе|егасе (Ье гепа(игабоп о1 ОНА (1ог геиеи, р(еаее еее 2(тгпеппап апд М)псоп 1993). Рог а девсг(рс(оп о1 сЬе едесс о1 сгои й пд адепт оп с|епасигабоп о1 пис|е|с ас(дд р)еаье еее Ъсл)едег апд СА)есгпиг (1981) апд 53)лигач апс| СЬигсЬ (1991). 6 ие(пд О(ъ|А ргоЬед асЫ 10% с|ех|гап еи)(асе ог 5% ро)уе(Ьу)епе д|усо| (РЕС 8000) со йе ЬуЬг(д)гас)оп ео)иИопе. ТЬеее ро(утесе ассе3егасе сЬе гасе о1 ЬуЬгЫаабоп аЬот сеп(о3с| (ЪуаЬ( е( а|. 1979; Репе апс| Кисе 1984; Атаъ(по 1988; Кгосае)ь 1993).
Оехсгап еидасе ог РЕС 8000 сап еогпебгпее |еас| со Ь)дЬ Ьас)ъдгоипд, апс| ЬуЬг(диас)оп ео)ис)опт сопса|п|пд (Ьегп аге а)илауе д(Оси)с со ЬапсИе Ьесаиее о1 СЬе|г ч)есое)су. Оье ! |агде чоЫгпеь о1 ппее апд ъчаъЬ ео(ис(опе со очегсоте (Ьеяе ргоЫепь. ° Елее а соттегсла! "гарЫ ЛуЛг!д!еас!оп "ю|исюп (р)еаее атее Иле |пгоггпаиоп рапеЬ оп ВАР|0 НТВР3032А- ТЮН ВС)ГГЕР5 апд СТАВ) апд ъчаеЬ )Ье тетЬгапее ассогйпд со сЬе тапи(ассигег'е (пзсгиссюпи !н)огтаНоп Ране)ь 6.59 ГОКМАМ1ОЕ А)9)Р 1Та 1лаЕа!)Ч МОЕЕСЕ)ЕАК СЕО)ь)!)9)С роппашЫе Ь иьел) аь ап юшпп8 ьо!чепл ш аг)иеоиь Ьийегь. Ману ЬалсЬеь оЕ ЬПВЬ-Влас)е ЕоппашЫе аге ьийкгепг!у риге ло Ье иьел) к11Ьоил йгйег лгеаипепл.
Ночлечег, аь а ги1е оЕ лЬшпЬ, гЕ апу уеПолч со!ог Ь ргеьепл ог 1Е йеге и ечеп йе Ьшл оЕ а ыпеП оЕ апннопга, йе ЕоппапгЫе ьЬолг16 Ье рипбей А гпоге п8- огоиь леал оЕ рингу Ь ло гпеаьиге сонг)исл)ч)лу, лчЬкЬ пьеь аь йе ЕоппагпЫе Ьгеа)сь л!олчп ло апнношшп Еоппале. ТЬе сопдис6ч)лу оЕ риге ЕоппагпЫе Ь 1,7 (Саьеу апл) РамлЬоп 1977) апс) ЕЬе сопл)ислпблу оЕ а 10 ' М ьо!илюп оЕ апнпопшпл Еоппале Ь -650 рпйо. ТЬе сопл)ислпбгу оЕ ЕоппагпЫе илес) ш геаппеаПп8 ехрепгпепп ьЬои!д Ье <2,0 ргпЬо. роппашЫе сап Ье деюп)лег) Ьу ь6гпп8 Еог 1 Ьош оп а гпа8пенс ьгптег инлЬ а ш)хек Ьел) юпехсЬап8е геып Ее.8., Ролчех АС8, Вю-Кас) АС 501-Х8, 20-50 гпеьЬ ог Х81Р)).
ТЬе ьо1игюп Ь ЕЬеп Ег1легед лЬгоиВЬ 'гчЬалшап №! рарег апл1 ьлогел1 ш япаП а69иогь ал -20'С, ргеЕегаЫу ип<)ег пПго8еп, ЕасЬ геяп сап Ье геиьес) ьечега! лнпеь. ХВЕР) сопгагпь ап гпйсагог 1Лал сЬап8еь со!ог лчЬеп лЬе геяп Ь ехЬаияел). роппаплЫе Ь шее) ш ЬуЬпйхаг)оп геаслюпь, го геьоЪе согпр!ех согпргеьяопь лп ьег)иепсш8 Ве!ь, апг) ло с1епалиге РНА ЬеЕоге е!еслгорЬогеяь аь деьспЬел! Ье!олч. Кеьо1ч1пК Сопгргеьь)опь !и Бел!иенс)пК Се!8 1пс!ийп8 25-5098 ~,ч/ч) ЕоппаплЫе ш ро!уасгу!аплЫе ьес)иенс)п8 Ве1ь с)еьлаЬППхеь ьесопг)агу ьлгислигеь ш РНА апг) геьоЪеь ьопле луреь оЕ сошргеяюп саиьег) Ъу апогпа1оиь и~Вга6оп оЕ РНА ЬаплЬ (Вголчп 1984; Маг6п 1987). Се!ь соплашш8 ЕогплапгЫе плп ь!олчег апс1 соо1ег лЬап сопчеппопа) ро1уасгу)апгЫе Ве1ь ал йе ьагпе чо!са8е.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
