Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 153
Текст из файла (страница 153)
5еа1 йе ореп епт( от' йе Ъа8 хч(тЬ а Ьеат хеа1ег апт( тЬеп пташке а хесопс) хеа1. Техт тЬе хтгепатЬ апт1 !псеаг!ту о( тЬе яеа! Ъу Вепс1у хг)иеех!п8 йе Ъа8. 1псиЬате тЬе Ъац Еог ! — 2 Ьоиь хиЪшегВес) ш а тчатег ЬатЬ хет то тЬе арргорпате тешрегашге (68 С !ог ат)иеоих ко!чептга 42 С Еог ю1чепь соптатп!п8 5058 тогшашЫе; 65 С тот РЬохрЬате-5Р5 ю!- чептх). ГОК НУВЙ!О!ЛАТ!ОЫ !Ы А КОСТЕЙ ВОТТЕЕ а. С'епт1у го11 тЬе тчеттес! тпетпЬгапе што йе кЬаре от" а су1(пг)ег апс1 р1асе Ь ньЫе а ЬуЪг(т)!катюп го1!ег Ъотт)е тоВетЬег тч)тЬ тЬе р1аят(с шехЬ ргочЫед Ъу йе шатшуастигег.
Ат)0 0.1 ш1 оу ргеЬуЪг!т)1кат!оп хо!шюп тот еасЬ хт!иаге септипетег от тпешЪгапе. С!охе тЬе Ъотт)е т(ВЬт)у. Ь. Р1асе йе ЬуЪг!т)!катюп тиЪе !пхЫе а ргетчагшес( ЬуЪгЫ(хат)оп очеп ас йе арргорПате тешрегатиге (68'С Еог ас)иеоих хо1чепЬВ 42 С тот хо1чептх соптатпш8 5088 ЕогшашЫе; 65'С Еог РЬоярЬасе-5Р5 хо1чептх). ГОК НУВК!О!УАТ!ОХ !Н А Р!А5Т!С СОЫТА!ЫЕК а.
Р!асе йе тчеттед шешЪгапе 1п а р1ахт)с (е.8., Тиррегтчаге) солта!пег, апг) аг)0 0.2 ш1 от ргеЬуЪг!с(!хат!оп хо!и!!оп !ог еасЬ хт)иаге сепйпетег оУ шетпЪгапе. 6.54 СЬартег 6| Ргерагабоп опт) Апасуттт оС Еи)сагуоттс Сепоттс Е|ЫА Ь. 5еа1 сЬе Ьох ъчссЬ |Ье 1Ы ап|1 р!асе сЬе Ъох оп а госЫп8 р!айотш ш ап а|г шсиЬасог тес ас |Ье арргорпасе сешретасше (68'С сот ат)иеоиа ао1чепса; 42'С Тот ао1чепь сопсасп!п8 509о ГотшатпЫе; 65'С Сот РЬоарЬате-ЯЭ5 ао1чепп). 3. 1т |Ье гатсто1аЪе1ес) ргоЬе га тсоиЫе-асгапссес) 13ХА, |1епашге 6 Ьу Ьеа6пВ сот 5 ппписеа ас 100"С.
СЬ111 йе ргоЬе тарЫ1у |п ке ъчасег. А!|етпас|че!у, |Сапа|иге 0ХА ртоЬеа Ьу атСйп8 О. ! чо!ише о! 3 тт ттаОН. Ассе| 3 пипи|ел ас тооти септретасите, сЫ!! сЬе ргоЬе со О'С и| ап ссе-ъчатет Ьай, аи|С а|С|С О.О3 чоситие ос ! м Тты-С! (рН 7.2) апъС О. ! чо!итие о!3 тт НС!. 5соге |Ье ртоЬе |и тсе ъча|ет ипгВ и |а пеетСетС.
5|п8!е-а!таит!а|! ЕтттЛ апт! РХА ртоЬеа псе|С пос Ье тСепаситетС. 4. То ЬуЬпт!!ге сЬе ргоЬе со а Ыос сои!а|птиц Вепош!с 13ЬСА, саггу оис опе оу сЬе со11оъч!п8 тпесЬотЬ. т ОК НУВР10!УАТЮМ Въ! А НЕАТ-5ЕА1АВЕЕ ВАС а. ЪЧогЫОВ трлкИу, гетпоче сЬе Ьац сои!а!пшВ |Ье шешЪгапе 6.ош йе ъчасег Ьай. Ореп СЬе ЬаВ Ьу сиишВ оу! опе согпег ъчКЬ ас!агота апт) роиг ой СЬе ргеЬуЪптссгатсоп ао1исюп. Ь. Ат)6 сЬе тсепасигет! РгоЪе со ап арргорпасе апюипс ос 6еаЬ ргеЬуЪптссгас!оп тю!и6оп ап|1 с)е11чег сЬе тю!и6оп |псо |Ье ЬаВ. 5|рлееге аа пплсЬ а|г аа рота!Ые стою йе Ъа8. с. Реаеа! |Ье ЪаВ ъчссЬ йе Ьеас аеа1ег; ша)те тите сЬас аа Ееъч ЬОЪЫеа аа роаяЫе аге сгарретс ш сЬе Ъац.
То ачоЫ гат)!пасс!че сопсатшасюп о! йе ъчасег ЪасЬ, аеа1 |Ье геаеа)его ЬаВ шаЫе а яесоптс, попсопсапппасе|1 Ьа8. 1псиЪасе |Ье ЬаВ аиЬшег8ет) ш а ъчасег Ъай тес ас СЬе арргорпате Сетпрегатиге Сот йе тес!и!ге|С репот) оС ЬуЬпс)сгатюп. т-ОК НЪВР101УАТЮ!ъ! 1Ы А КОЕЕЕК ВОТТЕЕ а. Рош отТ |Ье ргеЬуЬпт!1гасюп ао1исюп Егош йе ЬуЬптссгассоп Ьоп!е апт) тер!асе ъчсй 6еаЬ ЬуЬпт)!гас!оп тю1и6оп сопсаспш8 ртоЬе. Ь. 5еа! Ьосс)е аптс гер1асе ш ЬуЬптс!гасюп очеп. 1псиЬасе !от тЬе гет)и!гесс репо|) о! ЬуЬпт)сгат!оп. т ОР НАР!01УАТЮМ ! ъ! А Р1А5Т1С СО!ъ|ТА! ъ!ЕК а. Тгапасег йе тпетпЬгапе 6отп |Ье сопсашег со а аеа!аЫе Ъа8 ог а ЬуЪ|!с!!гас!оп Ъосс)е.
Ь. 1пппетс!асе!у сгеас аа тсеаспЪетс аЪоче. 5. Айег ЬуЬ|!т)!гас!оп, ъчааЬ йе шетпЬ|апе. т ОК НЪ'ВК101УАТЮ!ъ! 1!ъ! А НЕАТ-5ЕАСАВСЕ ВАС а. ъСтеаг!п8 81онеа, гетпоъе |Ье Ьа8 Ггош |Ье ъчасег Ьа|Ь, гепюче |Ье оисет Ъа8, аптс ппшет)1- асе1у сис ОСТ опе согпег о! йе сппег Ъа8. Роиг оис сЬе ЬуЪпс)!гас!оп тю1иНоп |псо а сопсатпег аи!саЫе Сот с1гарояа1 о! гас!!пасс!чссу, апс1 сЬеп сш |Ье ЬаВ а1оп8 йе 1еп81Ь ОЕ йгее аЫеа, Ь. Репюче йе шешЬгапе апт! ппшетссасе!у сшЪ|пегВе 6 сп а сгау сои!а!пспу ьечета1 1шп|1ге|1 ш!11|1!сетя оГ 2х 58С ап|! 0.59о Я:б (!.е., -1 ш!!сш~ п|етпЬ|апе) ас тоош сетпрегасше. АВ)тасе сЬе с|ау Кепс!у оп а я1оъч1у госа6пц р1асСотш.
г ОК НЧВР!012АТ1ОМ ЕМ А КОПЕР ВОТТСЕ а. Кепюче йе гпептЪгапе 1гогп сЬе ЬуЪпйга6оп Ъосс)е, апг) Ъпебу г)га)п ехсехх ЬуЬпйгасюп хо!шюп Егогп сЬе гпептЪгапе Ьу Ьо1йпд сЬе согпег оЕ йе гпегпЬгапе 1о сЬе 1тр оЕ йе Ьоп!е ог сопсатпег. Ь. Р1асе сЬе гпептЬгапе !п а сгау сопса!и!пд хечега1 Ьипг1гег! ппПИсегх оЕ 2х 55С апг1 0.5% Я>5 (т.е., -! тп1Есгпг гпегпЬгапе) ас гоопс сетпрега1иге. АЕ6сасе сЬе 1гау цепс!у оп а х!осч1у го1а6пд р1асуогтп. СЧЬеп ЬуЬпйгбпд ш РЬоарЬаге-505 то!шюп, гепюче гЬе шешЬгапе Егогп йе ЬуЬпйгабоп сЬашЬег аа г)еасг!Ьег) ш дсер 5 апг) р1асе Ь ш хечега! Ьипг)гег) пи11т!Ьегх Ет.е., -1 ш1/сшг гпегпЬгапе) оЕ РЬохрЬате-5Р5 счахЫпд тю!шюп ! ас 65'С.
Ад!саге йе иау. Ререас ЕЬЬ пгие опсе. аг 1МРОРТАМТ Ро пот аНоа йе гпетЬгапе 1о г1гу оит аг апу стаде гсиппд СЬе гчахЫпд ргосег)иге. Айег 5 пппшеа, роиг ой сЬе В!гас г!псе хо1исюп тпсо а гайоассп61у йхроха1 сопсатпег апг) асЫ аечега! Ьипдгег) пп!ИЬега оЕ 2х 55С апг) 0.1% 505 со йе сгау. 1псиЪа1е Еог 15 ппписех ас гоогп сегпрегасше ъч!ЕЬ оссаяопа1 Вепс1е ацпа6оп. 1Е ЬуЬгЫаасюп сто сагг!егС оис !п а рЬохрЬате-505 ЬиЕЕег, г!пке йе птегпЬгапе а сога1 оЕ етдЬс гппег Еог 5 ш!потех еасЬ тп гетега! Ьипг)гегС пи!ЬТЬега оЕ РЬохрЬасе-505 гчагЬшд хо!шюп 2 ас 65'С. 51г!р со дсер 9 айег тЬе етдЬй ппае. Кер!асе йе похе во!и6оп сч!сЬ аечега1 Ьипг)гег) пп!ИКега оЕ ЕгехЬ О.
!х 55С сч!1Ь 0.1% Ю5. 1псиЬате йе тептЪгапе Сот 30 пппигех Со 4 Ьоига аС 65 С сч!СЬ Вепт!е ад)тат)оп. Риппд т!те чгааЬ!пд атер, репойса11у гпошсог ЕЬе атпоипс оЕ гасКоассМиу оп сЬе тпепгЬгапе ияпд а ЬапйЬе!6 пипипоптсог. ТЬе рать оЕ сЬе пгепгЬгапе йат гСо пос сиота!и РМА аЬоиЫ пос епис а гСесессаЫе ядпа!. Ро пос ехресс то р!сСг ир а ядпа! оп йе пипипопиог сгогп птетпЬгапех сопса!и!пд гпаптгпа1!ап РМА сЬас Ьах Ьееп ЬуЬг!йгегС со япд1е-сору ргоЬея Впебу ъчааЬ сЬе гпетЬгапе сч!сЬ О. 1х 55С ас гоогп сегпрегаспге. Кегпоче пюхс оЕ сЬе !!г)п!г1 Егопт сЬе гпетпЬгапе Ъу р1ас!пд и оп а раг) оЕ рарег !отче!я Р1асе сЬе г)апср гпегпЬгапе оп а аЬеес оЕ 5агап гСтгар.
Арр1у адЬехгче г1ос !аЪе1х тпаг1сег1 мЬЬ гайоас6че !п)т (ог рЬохрЬогеасепс г)оса) 1о хечега! ааупспсеспс 1оса6опх оп йе 5агап гСтгар. ТЬехе птагЬега хегче со а1!дп сЬе аисогаг!!одгарЬ иг)сЬ йе тпетпЪгапе. Сочег сЬе 1аЬе1х чч!1Ь 5соссЬ Таре. ТЬ)а ргечепь сопсапппа6оп оЕ сЬе 6!тп Ьо!г)ег ог !псепх!Еу!пд асгееп илсЬ сЬе гайоас6че тп1с. А!сегпабче!у, гСгу сЬе гпешЬгапе !и йе атг апгС 51ие и со а ртесе оЕ ЗММ рарег ияпд а гчасег-аосиЫе 51ие. Сочег йе гпетпЬгапе иг!СЬ а хЬеет оЕ 5агап г)Егар, апг) ехроае йе тпегпЬгапе Со Х-гау 61гп Сот 16 — 24 Ьоигь а1 — 70"С сч!ЕЬ ап !псепа)Еу!пд хсгееп со оЬса!и ап ашогайодгарИс ппаде !р!еахе хее Аррепйх 9). А!сегпагМе!у, сечет сЬе ЬуЬг!г)!гегС апг! г!пает! шешЬгапе гч!ЕЬ дагап ччгар, апг) ахрам и со а РЬоя РЬопшадег р1ате. Ап ехрогиге сапе оЕ 1-4 Ьоига !г авиа!!у 1опд епоидЬ со гСетесс япд1е-сору депе аедиепсеа ш а дошЬегп Ыос оЕ гпапипаВап депогптс РМА.
ЕЕ гЬе РМА оп ЕЬе гпегпЬгапе и со Ье ЬуЬг1тВге6 сч!1Ь а гСНегепс ргоЬе, р!еахе зее йе рапе1 оп А001Т1ОМАС РКОТОСОЫ 5ТКсрр! МС РКОВЕ5 ГРОМ МЕМВКАМЕ5 ас сЬе епг) оЕ ЕЬь ргососо1. 10. ТКОССВЕЕ5НООТ!МС 5ечега) Еассогх саиье Ьас1сдгоипг! !и 5оийегп ЬуЬг!г)!гат!опх. ТаЫе 6-4 оис!!пег йе гпохс согпгпоп хугпр- сотх апг! ргорЬу1асбс тпеасигех со гег)исе ЬасЬдгоипд. Ртососо! !О: 5оийетп НуЬгсг)!гаг!оп ау тхаг!!о!аЬе1ег) РтоЬег го ЕгЕис)е!сАс!г)г ЕттоЬг)тает!оп МетЬтапег 655 6.56 СЬарсет б: Ртерагайоп аптЕ Апа!уягя о~Еи)сатуотгс Сепотгс РЫА САО5Е РОтеястсхс ПО!Отсох!5 Пчмвос РгеЬуЬпйге сот !опвег репойя оЕ с!тпе. В!оссЬу Ьас1свтоип6 очет сЬе еп6ге тпепсЪгапе. С)яс ОЕ !09я дЕХСтаи яи1Еатс Ш ЬуЬпйтасюп ехрепшепся.
На1оея очег сЬе епые псеспЪгапе. Ргеяепсе оЕ ЬиЬЫея ш ргеЬуЪпйг- а6опгЬуЪгЫ1гасюп яо!шюпя, ЕаПиге со а8)саге шепсЪгапе. 1шргорег!у Пела!отей сагпег РЪСА. Вас)свгоип6 сопсепстасе6 очаг сЬе 1апея солса)шп8 пнс1ек асЫ. Ряе оЕ ргоЬея солса)п1п8 ро1у!Т) стасо ш погсЬегп ЬуЪпйга6опя. С)яе оЕ КХА ргоЬея. Тоо тлену шеглЬгапея ЬуЬгЫтге6 1и сЬе тапсе чепе!, пос епопвЬ чо1шие оЕ ргеЬуЪпйга6оп) ЬуЬпйгасюп ю1ш1оп. В1оссЬу Ъас)свгоип6 арреаплв оп югле псешЬгапея Ънс пос осЬегя.
1)яе оЕ о!6 гайо1аЬе! со ргераге ргоЬе. !псепяе Ыас)с ароса аП очег шетлЬгапе. ТАВЪЕ 6-4 ВасППгоипд апд Ночь Со АчоЫ И 1псошр!есе ЫосЫп8 Пиппв ргеЬуЪТЫ)галоп. Ргушв ош оЕ шешЬгапе Пиппв ехрепшепс. Я)5 ргес)р)!асей Еготп апу оЕ сЬе яо!шюпя ияес1 1и сЬе ехрепшеы. Рарег !отче)я Ьесапсе согпр1есе)у счет Пиппв сарП1агу сгапяуег 1яее Ргососо) 8). Ряс о! сЬагве6 пу!оп шешЬгапея ап6 яо1шюпя сопсаш1п8 1осч 5Р5. Ряе оЕ пирите ЕуеПотч) ЕогпсашЫе.
С)яе оЕ ппргорег ЫосЫп8 геа8епт. Ве ЫЕП!апс 1и 1сеер1п8 шешЬгапе счет ас аП синея. Ма1се ю!н6опя ас гоош теспрегасиге, ргешапи со 37*С, ап6 йеп асЫ 5Р5. Ро пос аПотч 5Р5 то ргес)рссасе ас апу с!спе. КеЬеас)и8 а яо!нсюп Еготп шЬссЬ 5Р5 Ьая ргес)р)сасе6 оп1у оссая)опаПу усе16я а с1еап геяи!с, Рехсгап яи!Еасе епЬапсея сЬе гасе оЕ ЬуЪпйгасюп. Вхсерс ш гаге шясапсея 1сп яси ЬуЬгЫтга6опя ог счЬеп ияп8 шЬсгассе6 ргоЬея), Пег!сап ы!Еасе сап Ье 1еус онс оЕ июяс ЬуЪТЫпа6оп яо1и6опя. Ряс оЕ 1агве чо1шиея оЕ чгаяЫп8 яо!и6опя аге геци)ге<1 со гепюче йВ Ыьсоия согпроипй счЫсЬ !Е !ей оп сЬе псегпЬгапе ассег ЬуЬпйга6оп, старя ргоЬе апд ргобисея Ъас)свгоипй Ряс а !агвег ясас)с оЕ сосче!я ог тешоче счет сосче1я ап6 гер!асс чбсЬ Лгу опея Йиппв Сгапятег ргосе6нге.
1псгеаяе сЬе сопсепсгасюп оЕ Я)5 со !чтя ЕМч) ас аП ьсеря. 5чАссЬ со ипсЬагве6 пу1оп спепсЬгапея. Рипсу СопиашЫе оп Ростах Хб-8 Ьесоге ияе ЕАррепйх 8). Ро пос ые ВЪОТТО Еог Вепопис 5ошЬегп Ыопс !пясеад сгу 50 рвйп! Ьерагси ая ЫосЫп8 геавепс 1ЯпПЬ ап6 )опея 1984) ог ияе СЬшсЬ ЪиЕЕег ЕСЬнгсЬ ап6 СПЬегс 1984) ая ЬосЬ ргеЬуЪТЫ)г- иоп ап6 ЬуЬгЫ!га6оп ю1исюпя.
Ргесчагш яо1и6опя ЬеЕоге ияе. Авпасе сЬе гпешЬгапе. КеЬоП сЬе яа!пюп ярепп РЪСА ые6 ш сЬе ргеЬуЪТЫ1гасюп! ЬуЬпйгасюп ю!и6опя. Ро пос аПосч йе Ьеас-с)епасигес) РЫА со геаппеа!. 1пс!ш)е ро!уЕА) ас 1 и8)ш! сп ЬуЬпйгасюп ю1и6опя. Ргая6саПу 1псгеаяе йе ясппвепсу оЕ ЬуЬпйгасюп Ьу )псгеаап8 6се сопсепсгасюп оЕ ЕопиаисЫе сп сЬе ЬуЬпйгабоп ЪиЕЕег; ше ся Я)5 си сЬе ЬуЬпйгаиоп ЪиЕЕег, шсгеаяе сЬе счаяЬш8 сеш- регасигея, апд десгеаяе йе юшс ясгепвсЬ оЕ счаяЫп8 ЬиЕЕегя 1е.8., 0.1х 55С). ! псгеаяе сЬе чо!шпе оЕ йе ЬуЬпйга6оп апд счаяЫп8 яо1исюпя апйог Песгеаяе лнтлЬет оЕ гпетлЬтапея сп а ЬуЬпйга6ол Ьав от сопсашег.
А рерреге6 Ъас)с8гоипд Пне со 'гр ргеяепс ая )пог8ашс РЬоярЬасе ог ругорЬоярЬасе яисЫп8 со сЬе шепсЬгапе В !тес)оепс1у епсоипсегед счЬеп нып8 5н!аЬе1е6 ргоЬея. Ро пос няе о16 гайо!аЬе1 ш счЬ)сЬ гайо!уяВ Ьая оссшгей Рипуу йе ртоЬе Ьу арии-со1шпл сЬгогпасовгарЬу, ргессрпасюп, ог Пе! е!ессгорЬогейя Ьеуоге ияе. !пс1ибе 0.5ятя (Мч) яойшп ругорЬоярЬасе !и ргеЬуЪгЫ1га6оп! ЬуЬпйгасюп ьо!~сюпя. АОО1Т|ОМАЕ РКОТОСО|а 5ТК|РР|МС РКОВЕ5 ЕКОМ МЕМВКАМЕ5 А3!ЬоиВЬ |и тапу сасе5, |1 'ь росыЫе 1о ге|ионе ргоЬе5 1югп иъепъЬгапе5 айег ап |гпаде Ьах Ьееп гесогдед апд со гергоЬе сйе тетЬгапе ъч|!Ь д|йегепс ргоЬе5, |Ье 1оПоъъ|пВ аге вогпе о1 сЬе ргоЫегп5 а55ос|асед мхй 1Ы5 ргоседиге.
° сгге|егяЫе Ьипдспа о1 11|е ргоЬе со 1$|е тетЬгапе. РгоЬе5 Ьесоте !!гене!5!Ыу Ьоипс| ъчЬеп гх!госеви- ~ |оае гпегпЬгапе5 апд пу|оп гпегпЬгале5 аге аПоъчес$ со дгу 1ог ехсепдес| реподв о1 6гпе. й а 83неп гпет-|: Ьгапе В 1о Ье ЬуЬг|д|аед ъчсй люге сйап опе ргоЬе, ечегу ейогс 5Ьои|д Ье гладе со епылге 1Ьас 1Ье 5оПВ ылррогС гегпа|п5 ъче! аС аП 51аде5 дилпВ ЬуЬг|д||аа!|оп, ъча5ЫпВ, апс$ ехрохиге !о Х-гау П|п! ог рЬоарЬог- | |тацег са55еле5. ° Ргаегуссу о1 тетЬгапе5. Му|оп гпегпЬгапе5 сопса|п|пВ е|1Ьег депогп|с ОМА ог ЯМА сап Ье 51прред апд геЬуЬг|д|кед Пне со !еп 6гпе5. Н|сгосеПи|оае гпегпЬгапе5, Ьоъчечег, аге гпоге 1гаВПе апд Вепегаву до по1 | 5игч|че тоге |Кап Ьчо ог 1Ьгее сус|е5 о1 ЬуЬг|д|хайоп апд 5!г|рр|пВ.
° сеассгспд оЕ пис|е|с аод5 Егот Яе тетЬгапе5. А йас6оп о1 сЬе ОНА ог КМА иппюЬ~|гае|3 оп |Ье тепьЬгапе |еасЬе5 аъчау диппВ еасЬ сус|е о1 ЬуЬг|д|аа!$оп апд 51г|рр|пВ 5о 1Ьа! 1Ье 51гепасЬ о1 6|е 538па! с3есгеасе5 ргоВге55$не|у ъч|1Ь еасЬ |л5е. Мйгосе||Ыосе гпеп|Ьгапе5 аге сйе их|!5! ойепдег5 |и 1Ы5 ге5рес|. Ме1Ьод Кеточа| о1 а НуЬг|д|аед РгоЬе 1гот а МКгосеПи|ове МетЬгапе 1. Ргераге е|и!3оп Ьийег Ьу Ьеа!3пВ 5ечега| Ьипдгед т83333!ег5 о1 0.05х 55С, 0.01 М ЕОТА |рН 8.0| 1о ЬоП|па.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
