Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 155
Текст из файла (страница 155)
11 Ь иьиаПу песеыагу со гпсгеаье лЬе чо!ла8е Ьу -1096 со плашгаш геплрегалиге. Се!ь соплашш8 ЕоппагпЫе 81че Ьлхпег ЬапсЬ. 1п а<Игбоп ло РЫА ьег)иенс)п8, ЕоггпагпЫе Ь гоилше!у шс!ил!ел) ш Ве1ь иьег) со апа!ухе ро!уплогрйс !СА) гереаь гп гпапнпаПап РЕ4Аь. 1п лЬе ргеьепсе оЕ ЕопнагпЫе, лЬе ынеаг оЕ ЬапсЬ йал Ь Вепегалег) г)шш8 ро1уплегаье сЬаш геаслюп 1РСК) агпрИкалюп оЕ аПе1еь Ь геьо1чес) гпло а йьсгеле Еапн!у лчЬоье плегпЬегь ййег ш ыле Ьу 2 Ьр Е)лгг ег а!. 1993). Репа1нг)пК К)х)А ЬеЕоге Е1ес1горЬогеь15 роппагпЫе !5096) Ь иьел) го аьь)ьл ш л)епагигагюп оЕ РНА ЬеЕоге е!еслгорЬогеьЬ лЬгоиВЬ депагипп8 Еоппа!деЬус)е-а8агоье Ве!ь ЕЬеЬгасЬ ел а!. 1977).
НуЬг)с!!ха!!оп Кеас11опь Воппег ел а!. 11967) лчеге лЛе Пгьл ло ше ЕоппашЫе аь а ьо!чепл ш ЬуЬпйха6оп геаслюпь. Ал лЬе епл1 оЕ ЕЬегг ЬпеЕ рарег, лЬеу лчголе: ТЬал ЕоппашЫе ьЬои!д са1се лЬе р!асе оЕ Ьечалес) лешрегагиге ш лЬе ЬуЬг)йхал)оп ргосеы Ь ло Ье ехреслей Ас)иеоиь ьо1и6опь оЕ ЕоппагпЫе г)епалиге Р)9А аь Ьаь Ьееп ьЬолчп Ьу Не)ш)сашр апг) Ть'о !1961) апс) Магшиг апд Т'ьо (1961). ТЬе сопсеплгалюпь оЕ ЕогплагпЫе гел)и)гел) Еог Р)ь)А-К)ь)А ЬуЬпйгалюп, 30 — 40 чо)9а, аге лчеП Ье!олч гЬе 60 чо!гй Еоипс) Ъу Магпшг апд Т'ьо Со Ье гег)и)гед Еог с)епагигалюп оЕ паггче Р)4А !ш 0.02 Ьь )ь)аС! — 0.002 М ьол)шпг сПгаге). МЪал Ьаь поле Ьееп Еоипг) Ьу ьегепйр)лу Ь йал ЬуЬпйхал)оп аь сопл)ислес) ш а9иеош ЕоппаплЫе роььеыеь йьппсл аг)чапла8еь очег ЬуЬпйхал)оп сопл)ислег! ал е!ечалес) леплрегалигеь, ТЬеье ас)чапса8еь шс1ис)е шсгеаьег) гелеп6оп оЕ )шшоЬП)хел) Р)9А Ьу гЬе шггосе1- !и!оье 6!Еегь апс) г)есгеаьег! попьрес)6с Ьас)г8гоипс) аЬьогр6оп.
ТЬеье ллчо Еаслогь сопгЬ)пе ло геьиЬ ш ап )псгеаьег) гергос)ислЬг!Пу оЕ гер1гсалеь ъч)лЬ лЬе ЬуЬгЫЬа6оп ргосел)иге. НуЬпйха6оп гп ЕоппаплЫе ьо)ииоп ас )олч лешрегалиге Ь Ье1р6л! а1ьо ш пнпнппбп8 ьсЬ- яоп оЕ пис!егс асЫ пго!еси!еь г)ипп8 рго)оп8ед репол)ь оЕ шсиЬа6оп. Гп абай!)оп ло лЬеье аг)чапла8еь, 1псгеаьес) Пех)ЬП)лу Ь )пггос)осел) шло лЬе дея8п оЕ геаслгоп сопйПопь Еог а 8)чеп ехрепшепл,!с ыпоге сопчешепс го сон!го! 1Ыь ьлпп8епсу оЕ ЬуЬпйха6оп лч)ЕЬ ЕоггпаплЫе галЬег ЕЬап гЬгоиВЬ аг))иьлшепл оЕ 1Ье )псиЬалюп леплрегагиге.
660 Сйаргег 6: Ргерагайол апс[Апа[ул[л оГ" Еихагуог[с Сепот|с]3]ь[А НУВР$0$ЕАТ|О(ъ[ $83 ВОЕЕЕР5 СО[ъ[ТА|Ь[$)ъ[С ЕОРМАМ|ОЕ Оергель)оп о1 1Ье псе|Илу сегпрегасиге (Т ) о1 йлр|ех ОЬ(А Ь а йпеаг йлпсйоп о1 1Ье Еоппалп)с[е сопсепсга1юп (МсСопаиеЬу е1 а!. 1969; Сааеу апс! ОанкЬоп 1977). Рог ОЬ)Аз ънЬояе СеС соп1еп1 ийп 1Ье галде о1 30 — 75%, 1Ье Т Ь дергесьед Ьу 0.63'С 1ог еасЬ регсепсайе о( Еоппагп|с|е (п 1Ье ЬуЬпйаас)оп гп|х(иге. ТЬиь (Ье Т„о1 ЕЬе ЬТЬг|с[ Гоггпед Ьесиееп а ргоЬе апс] гь сагеес гпау Ье еайгпасес[6огп ЕЬе Еойои4пй ес|иайоп, ънЫсЬ ь гпоййкх$1гогп Во|(оп апс$ МсСаг|Ьу (1962): Т„= 81.5'С и 16.6 ([ойле [На+]) -г 41 (пю|е 1гасйоп [С-|-С]) — 0.63 (%1огглагпк|е) — 500)п и Ьеге л Ь (Ье [епйсЬ о1 (Ье 0(ъ|А |и пис|еойс$ек ТЬь ес[иайоп аррйеа со (Ье гечега(Ые Т с[ейпес[ Ьу орйса! гпеаюгегпепс о1 ЬурегсЬголхсйу ас ОО .
ТЬе '1ггенега[Ые" Т (НагпайлсЫ апд Се[с[илсЬей 1962), и4Ь[сЬ )л гпоге [горолалс 1ог аисогайоцгарЬ|с с|есесйоп о( 0[ъ[А ЬуЬпсЬ, )а иаиайу 7-1 0"С ЫВЬег ЕЬап ЕЬас ргесйссес[ Ьу |йе ес[иайоп. 5[гпйаг ес[иайопа Ьаче Ьееп с|ег)нес[1ог РЬ(А ргоЬсь ЬуЬг)с$3а|пй со [пъгпоЬ~!ыес[ РЬ(А (Восйап апс$ КписЬоп 1985): Т„= 79.8"С и 18.5 Иойщ йъ[аь]) е 58.4 (гпо3е 1гасйоп [СеСД -'; 11.8 (гпо|е (гас()оп [С-';С[) — 0.35 (%1огглагп[с[е) — 820/л апс[ 1ог ОНА; РЫА ЬуЬпгЬ (Сааеу апс[ ОаисЬоп 1977): Т„= 79,8"С и 18.5 ([ой,о [39а" ]) Ъ 58.4 (гпо|е 1гасйоп [С-~-С]) Е 11.8 (гпо|е 1гасйоп [СЕС[)л — 0.50 (%1оггпагп|с[е) — 8201п Согпрагьоп о1 (Ьсье ес[иайопа аЬоиь ГЬа1 |Ье ге|айне а(аЬ|й(у о1 пис)е(с ас)с$ ЬуЬпсЬ (п ЫВЬ сопсепсгас[опа о1 Еоггпагп)с|е с|есгеаъеа |и йъе Еойоъипй огс[еп РНА-РНА (гилас асаЫе), РЬ(А-0(ъ[А (|есь асаЫе), апс$0$4А- ОЬ[А ([еаъс асаЫе). |и 80% 1оппалзк1е, сйе Т о1 ап Р34А-ОНА ЬуЬпс[ ь — 10'С Ь|ВЬег Илап а 06)А-039А ЬуЬг[с[ оЕ есйлйа|епс Ьаае согпроа)йоп.
Р |а ЕЬеге|оге роль)Ые со йпс[ ЬуЬг|с[)аа([оп сопл[[Иола ЕЬас айоъч (Ье 1оггпа1юп о1 РЬ[А-014А ЬуЬпсЬ апс$ с[$лсоигайе 1Ье Гоггпа1юп о1 0$4А-0$4А ЬуЬпсЬ (Сааеу апс$0ачсЬоп 1977). ТЬЬ аЬИГ(у со ылррге|ь геаппеайпй о1 0$4А иаа ехсгегпе|у иле(и[ и4леп 51 гпарр)пц ог Р)ъ[А ъчгь сагпес[ оис ъчИЬ с[оиЫе-аиапс|ес$06$А ргоЬеа (Вег$с апс$5Ьагр 1977). Ноиечег, !Ье дене|оргпепс о( ей|с)епс гпесЬосЬ со ргераге а(пй[е-асгапс|ес[ ргоЬсь пои айоиь аппеайпд о1 РЫА со ОЬ(А со Ье сагпес| оис ипс[ег скапс$агс| ЬуЬг[с[[аайоп солййопа и41Ьои1 1еаг о1 согпрес(([оп болл 1Ье согпр3егпепсагу а(галс[ о1 06[А Аа а сопяес|иепсе, 1Ье аппеа[(пй солййопл еасаЫ)аЬес[ Ьу Сааеу алс[ Оач|сЬоп (1977) аге (ос[ау илес! оп|у негу гаге|у.
° ТЬе гасе оЕ ОЬ[А-ОНА ЬуЬпс[|аайоп $п 80% 1оггпагпк$е Ь а[оъчег сйап |и ас[иеоиа ю|исюп (Салоу апс$ ОайсЬоп 1977). $псгеаа|пй (Ье сопсеп(гасюп о1 Гоггпагл|с|е с[есгеааел (Ье га1е о1 ОЬ[А:014А гепа|игайоп Ьу 1.1% лог ечегу 1% [псгеаае $п 1Ье сопсепсга1юп о( 1оггпагпк|е (Ни(|оп 1977), ТЬеге1оге, (Ье орйгпа! гаСе |и 50% Еоггпалл)с[е Ь 0.45 йгпеа 1Ье орйгпа! гасе |и ас[иеоиа ю|ийоп (Нииоп 1977). |и 80% Гогллагп[с[е, Ейе гасе о1 039А-0]ъ(А ЬуЬпс[[аайоп Ь ГЬгее- 1о Еоиг(о[с[ а[оънег Илап |и ас[иеоиа ао[ис)оп (Саъеу пс$0ан'с|юп 1977). ТЬь ейесс Ь а соплес[иепсе о1 Гпсгеааес[ ч|лсоа|гу о( 1Ье ЬуЬг(с$)аайоп ю[ис[оп ас (Ье илес[ 1ог гела( и га1юп.
ил о1 Еоггпагп[с)е |Вас оссига с|ос|ой рго(опеес[ лпсиЬасюп а1 1егпрегаилгев |и ехсеаа о1 37'С рН о1 |Ье ЬуЬг|с[[аайоп Ьи1|ег Со с]г|Г( ори агс! (Салоу апс[0ач|с|юп 1977). (4(Ьеп Еогпзагп|с|е (Ье ЬуЬг[с$[аайоп Ьи((ег, 6х 55РЕ Ь рге(еггес$(о бх 55С Ьесасье о|' [Ь цгеа1ег Ьи((аппо роъчег. Еп~огтас(ов РапеЬ б.б1 ВРООЕ!(ЧС ОНА (Н1$ТОК!САЕ ГРООТ(ч)ОТЕ) Е|Ьапо! ргес(рПа|юп оЕ Ь~о!о81саПу асбче пис!е(с асЫ ргес(агент шо1еси!аг с1опш8 Ьу -50 уеагя Еюпе) АПолчау, |чЬо чгог)сел) а| |Ье Кос)сеЕеПег !па|ии|е ш |Ье еаг!у 1930|, илес( П аа а шегЬос( |о сопсеп|га|е "|гапа(оппш8 Еас|ог." Нь рго1ес| |чаа |о ргераге асбче сеП-Егее ах!гас!а оЕ 5-гуре 5ггергососсил риеи|вотае |Ьа| лчои!6 ВепебсаПу ггапк(огш П-гуре ог8ап)агпз ш чЬ|о. Ас |Ьа| |ипе, сгапаЕогшаг!оп Ьаг) Ъееп асЬ(ечег) оп!у лч)ЕЬ ~п|ас|, Ьеаг-Ы!!ес( г)опог сеПя Айег гпапу Егиаггаг!п8 ЕаПигея АПо|чау (1932) героггег) |Ьа| Ье сои!6 Пе| йе аиЪ|гапсе геаропяЫе Еог ггапа(огшаг(оп ш|о ао!ибоп Ьу Ьеабп8 а Егееге-ЕЬалч ех|гас| оЕ |Ье 5 ог8ап|агпа |о 60"С, гегпочш8 рагбси!а|е в|а|лег Ьу сеп|66|8а|юп, апс( рааяп8 |Ье ао!игюп |ЬгоиВЬ а 61|ег ша|1е оЕ рогоы рогсе!аш.
А)!олчауа гиссея а| е1шнпабп8 |Ье пеег) Еог Ьеаг-Ы1!ег! с1опог сеП| |чае а ша)ог а|ер оп |Ье гоаг( |Ьа| |чав ечеп|иаПу |о 1еас! |о |Ье л)!асочегу оЕ РЕ4А аа йе сгапаЕогпип8 в|а|еба! (А| егу е| а!. 1944). Нолчечег, по| аП о! АПолчау а сеП-Егее ргерагабопа |чог(сей, апй ечеп |чЛеп |гапа(оппабоп лчаа оЬгаше|1, |Ье е!6|- с|епсу лчаа чеку )очч АПолчау |пы| Ьаче геа! ыег) |Ьа| |Ьеае ргоыеп|а гчеге саиаес! ш рагс Ьу |Ье с61и|е па|иге оЕ |Ье ех|гас|, Еог Ье Ье8ап |о аеагсЬ Еог с66:егеп| ъчауа |о !уае |Ье рпешпососс| апс( Еог с)!ЕЕегепс гпе|Ьос(а |о совсеп|га|е йе ггапа(огш)п8 ас|пб|у (АПом ау 1933). Мас1уп МсСаг|у (1985) г)еасг)Ьес( АПолчау'а сП|- со|егу оЕ е|Ьапо! ргес|рПа|юп аа ЕоПо|чя АПо|чау |Ьеп !пггос)исег) апо|Ьег пелч ргосел)иге |Ьа| Ьесаше ап (пс()арепааые рагс оЕ аП лчог)с оп |Ье |гапа!огппп8 |шЬ||апсе !го|п |Ьа| |ппе Еог|чагй Не а|Ыег) риге а!соЬо! ш а чо!шпе Пче |ппеа |Ьа| оЕ |Ье ех|гас| лчЬПсЬ геаи1|е|1 ш ргес|рва|юп оЕ пюа| оЕ |Ье п|а|еп'- а! |Ьа| Ьа|1 Ьееп ге!еааес! 6ош |Ье рпешиососс|....
ТЬе ргес|р||а|е|1 ша|епа! сои!8 Ье гег)!я ао1чес( |и аа1| ао1и|юп ап|! 86о|чп |о соп|а|п йе асбче аиЪяавсе ш ггапаЕоггпаг!оп геьгя А1соЬо) ргес)рПа|юп ап|! геао!иьоп сои!6 Ье гереагес( а| ьпП |ч||Ьои| 1оьа оЕ асл!ч)гу. АПо|чау с(еасг(Ьеа |Ье Еоппабоп оЕ "а й|с!с агг)п8у ргес|р||а|е" |Ьас сои!д Ье соПес|е|! Ьу абгбп8 йе е|Ьапо1к аоЬл|юп |чПЬ а араго!а. А1|ЬоиВЬ АПо|чау |чае йе 6гя регьоп |о ые арооПп8 |о гесочег Ьл8Ь- шо1еси1аг-лче(8ЬЕ Ью!о8(саПу асс|хе Р14А, е|Ьапо1 ргес|р||а|юп оЕ аЬагс)а оЕ РХА Ьас( а1геас!у Ьееп иле|1 Ьу аечега1 8епега|юпа оЕ ог8ап|с сЬеш!ага |чЬо лчеге рихх!ш8 очег |Ье ягис|иге оЕ |Ье Ьааеып РгЕА.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
