Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 152
Текст из файла (страница 152)
1995; кее а1ко СЬарьег 9). А!ьЬоиВЬ ьЬеке теьЬоь!к обжег асЬапсацек кисЬ ак !опв к!отаве гипек апг! гес!ььсег! ехрокиге со гасба6оп, ьЬеу саппог уеь Ье гесопппепь!ег! Уог ь)егесь)оп ог яике-сору кег!иепсек Ьу 5оийегп Ьу!ьг)г!1хаь)оп. ТЬе Ьас1сдгоипс! гк ойеп Ь)цЬ апс1, ьп пьапу кукьетк ьЬаь и61ьге попгасбоас6че ргоЬек, йе яапа! 1к пос ргорог6опа! со йе апюипс ог' пис1еЫ асЫ Ьоипь! со ьЬе гпегпЬгапе. ьчогкь оу а!1, ьЬе с)еьесгюп ог" япв!е-сору кег)иепсек 1п 5оийегп апа!уяк оь" пьатгпа!ьап Р!к)Ак 1ьек аь ог )иы Ьеуопг! йе 1ппЬ оГ кепяь)ч)ьу ог" пюы попгаг!1оась)че ргоЪек.
А)гЬоивЬ попгайоас6че !аЬе1шц Ьак 1тргочес) г!гата!)са11у г!иг)пц ьЬе рак! Ееьч уеагк, Ь к6!1 Ьак копье ьчау го ао Ъеуоге и сап Ъе гесопыпепг!ег! 1ог аепега! ике. 6.50 Ртсасо110; 5оийегп НуЬт3дсгас3ои оЕ ЯадЕо!аЬе!ед РгоЬел со ЕъЕис1е3сАс|дс ЕттоЬ31ггед ои МетЬтапел 6.51 Н с'ВК101ЕАТ1ОЬ3 СНАМВЕК5 ТЬе Ягсс 5оийегп ЬуЬидыасюпв 3п сЬе Ипаес1 5сасес иеге сагпед оис 3п а Ьошегпаде ЬуЬпйг сопясдпд оЕ а госадпц ънЬее| Ьоисед ъч|сЬ|п а 05оС онеп йас ъчах !сер! ипдег йе Ьас|с ьсшггйп а 5рппц НагЬог СаЬогаСогу. ТЬе ргес|оис п|Сгосе!!и|осе сЬеелс ъчеге гоПес| ир апс$ !псегСед, Соде! ЬуЬпд|гасюп со!ил|оп, Ысо ц!ахх сиЬес сЬас ънеге ьеа!ед чисЬ а 61|сои илЬЬег Ьипа Ье3с| 3п р!асе са1 саре. ТЬе СиЬес снеге йеп с!агп рес| Со сЬе ъчЬее! апд 1е13 со госасе 1ог 18 Ьоигш ТЬе апс|еи!, ая онеп доог чная а|Ьчауь орепес| ндсЬ сгерЫадоп с|псе ехрепепсе Ьад сЬоъчп сЬаС ас 1еасс опе ъчои!с$ Ьгеа1с апс$ йас йе Ъипес ъчойс$ рор Еплпз осЬеп.
О! соигяе, йе инеи апд сЬе ъчЬее! Ьеса ес| чдсЬ с$пес$ ЬуЬпйгасюп Яи!д апд сопсаиипасед Ьеуопс| гедеплрдоп. Нос ьигргь!пЕ!у, сшссе гпепсь ънеге Ееъч |и пипъЬег. |с ъчас а агеас геВеЕ ъчЬеп 5еагь' 5еа|-А-Меа| Ьаас арреагед оп СЬе ссепе ьогпе шопСЬс |гпгпед|асе! у, 1еа|сх ъчеге а сЫ па о1 сЬе расс апд сЬе аи Ы1 |ене! ъ о1 Ьас|сцгоипс$ ЬуЬпйгадоп епде 1у го|!ес$ плегпЬгапеь шеге гедисед со шапааеаЫе ргорогдопа рог йе пехс 10 уеагь, ънЬеп сЬ 5оисЬегп ЬуЬпйгасюпь ънеге риЫ|сЬед ас ап анегаЕе гасе о1 >10,000 рег уеаг, ЬуЬпйга)юп |и Ь плейод Ы сЬо|се. С|чеп йе еаг!у ЕпЕЬСеп|пЕ ехрепепсе ъч|СЬ ЬуЬпдаагюп онеги, 31 !ылпдепС СЬе|г геарреагапсе дис| па СЬе 1980х снах ЕгееСед ънеСЬ гоше |псгейл1 33у апд яьр|с|оп.
Ноъчечег С анадаЫе содау Егопл согпгпегс|а! гпапи)ассигегс аге а 1аг сгу Егопл сЬе Е!гпсгас|с аггапЕегпепСс !инесс!аасогш ТЬе сиЬес аге Мгила$! у!еа$сргоо1 апд сап Ье й~ед ънесЬ гпееЬ со Ьо|с$ йе го1!ь о1 йе арагс апс| гедисе Ьас|сагоипд. Согпплегоа| го)ад па и Ьее!с Ьаче опе адд!13опа! аднапсаЕе очег 5еа|-А-Меа! Ьааш ТЬеу аге |есь ргопе со |еа1с ън4леп их|па ЬуЬпс$ыадоп ЬиЕЕегс ъий Ь|ЕЬ сопсепсгадопс о1 5Р5. Весаиье р|аьЕс ЬаЕс спаса!и|па ьисЬ ЬиЕЕегь аге чесу д|ЕЕси!с со ьеа3, сЬе псЕ о1!еа|сх апд сопсаплшаСюп ндй гадюасс|н!су ь 3псгеасед. МАТЕИА15 САЕ)Т1ОЫл Р1еаье атее АррепсВх 12 1ог арргорпаСе Ьапд!!пе о1 спасена!8 гпаг1сед ъч|СЬ <! >.
Вссйер5 аМ Ьо!ойоп5 Р!еахе атее Аррепсбх 1 Еог согпропеп18 о1 81ос|с ьо|06опь, ЬиЕЕегс, апд геадеп18. Р|!иСе 81ос|с хо!01!опх Со 1Ье арргорпаСе сопсепСгаС|опь. РЬозрЬаСе-5Р5 игаяЛ!ие лю301!ои 1 40 шм яод|иш РЬохрЬасе Ъиссег |РН 7.2) 1 шхс ЕРТА |РН 8.0) 50/Ъ 3чл/н) 565 0.5еа 3члЕч) Егасс|ои-Ч-Егаде Ьочше селеш а1Ьшши РЬоерЬасе-5Р5 и азЬ|иа зоlидои 2 40 илм мойши РЬосрЬасе Ьийег |РН 7.2) ! шМ ЕРТА |РН 8.0) !чае 3ъчгЕч) ЕР5 РгеЬуЬгЕд|гаслоп/ЬуЬг!д|гасЕои зо1013опх Ргераге йе ргеЬуЬийгасюи со1идои арргориасе Еог йе гас|с ас Ьаиг$.
Арргохипасе1у 0.2 ги1 оЕ ргеЬуЬг1йгасюи яо1ис|ои 1с гег|шгед Еог еаеЬ лг|иаге сеидшесег оЕ гиешЪгаие. 5ила11ег чо!палея 1-0.! ш13ешл) саи Ье исед шЪеп ЬуЬийдп8 лп гоПег Ьои1ес. Еог адйее ои шйсЬ ю1идои со ше, р1еасе атее йе шсгодиедои со Ргососо! 32 ш СЬарсег 1. РгеЬуЬгЫЬасюи)ЬуЬийгадои со!ос|оп гиау Ье ргерагед ндсЬ ог ъч1сЬош ро!у|А) КНА. 'ъНЬеи ллр|аЬе|ед сРХА ог К34А 6 мед ас а ргоЬе, ро|у!А) 3Съ|А гпау Ье шс1идед ш ргеЬуЬийгадои ог ЬуЬийгадои со1шлоис со ргечеис сЬе ргоЬе Егоги Ьлийи8 со йуиийие-исЬ кециеисез соиииои1у Еоиид ш еи|сагуоде РЬ|А.
Ро!у|А) КНА яЬои|д Ъе агЫес$ со аг|иеоис аид ЕопиагиЫе ЬуЬийгасюп Ьиаегь ас а Еиа! соисепсгадои оЕ 3 и87гп1. 5о1идоп Еог ЬуЬг361гаС|ои т ас)иеоиз ЬиЕЕег бх 55С (ог бх 55РЕ) 5х РеиЬагй*я геа8еис 0йеле |шсч) 5Р5 1 и8)ш! ро!у!А) ! 00 р8сил! са|шои ьрегш РЬ|А б 52 СЬарсег б| Ргерагабоп апгГ Апа1уяся оГ Еи)сагуоггс бепоппс Г)А|А бх 55РЕ сопса|пя ЕРТА, счЫсЬ )я а Ьепег сЬе)асог оЕ йча1епс |песа) юпь 1е.8., М8|" ) сЬап спгасе, ап|! |п ыгп сч61 |ноге еГ6с|епс!у шЫЬп РХаяе асбч!су сЬас сап бес|саяе ргоЬе апб сагбес РХА сопсепсгасюпь.
Айег йогонЕЬ пцх|п8, 61|ег йе ю1ш|оп сЬ|онЕЬ а 0.45-ип| йьроьаЫе се11н1оье асесасе п|еп|Ьгапе !5сЫекЬег бг 5сЬие)1 С)п!Еосч ьуппбе шегпЬгапе ог е|)шча!епс). 5о1ибоп Гог ЬуВгГс71хасгоп Гп ГогтатлГе ЬиГГегя бх 55С Гог бх 55РЕ) 5х РепЬагбс'ь геабепс 0598 (иГч) 505 1 щ'ш) ро1у!А) 100 ИЕ! гп! |а!и|оп |репи 0 ХА 5098 Сч)ч) ЕоппаспЫе (! > Айег йогоиЕЬ сп|х|п8, 6)сег йе ю1нбоп йгонЕЬ а 0.45-нш йяроьаЫе се11н!оье асесасе гпеспЬгапе ГбсЫекЬег 8| 5сЬие11 !)п|бо ьупп8е гпешЬгапе ог е|)и!ча!епс). То бесгеаье Ьас)|8|оной счЬеп ЬуЬпйхш8 ипдег сопйсюпь оЕ гедисеб ьсппбепсу Ге 8., 20-309о ЕоппаспЫе), !с Ь опрогсапс со ояе ГогшашЫе |Ьас Е ая рше аь рояяЫе. Р!еаье яее йе |пЕогшасюп ране) оп РО)!МАМ!РЕ АХ0 !Т5 !)565 !Х МОГЕСОСАК СГОХ!ХО.
5о!ибоп Гог ЬуЬ|1|ЕгхасГоп т рЬоьрЬасе-505 ЬиГГег 0.5 М ьод!иш РЬоьрЬасе ГРН 7.2) 1 гпМ ЕРТА 7РН 8.0) 7чго Гчг)ч) 505 1чь Гчу~ч) Ьо ппе яегшп а1Ьцпнп С)ье ап е1ессгорЬогеяя Егабе оГ Ьоч!пе ьегнпс а1Ьшп|п. Хо ЫосЫп8 абепи ог ЬуЬпйхапоп гасе епЬапсегя аге ге|)и!геб чбй сЬ!я рагбсн1аг ргеЬуЪгЫаабоп)ЬуЬгЫ|ханоп ю1шюп. 5ообит рЬоярИасе Г1 м, рН 7.2) 0.7х 55С О. 1х 55С и |ГЬ О. 7;4 Гсч)ч) 5Р5 2х 55С ипГЬ О. 7;4 Гиясч) 5675 2х 55С ияГЬ 0.574 Гчч)ч) 5Г)5 бх 55С ог бх 55РЕ )5)с!с!ек Ас!ГЬ апд О!фопссс!еоГЫеб Г)7я)А ГттоЬГ1 хес) оп тегпЬ|апе РоlуГА) й)ь)А Г70 тат!) т ясег11е Н,О Орсюпа1, Еог ЬуЬпйхасюп ЬиГГегь. Ргераге яо1шюп Ьу йыо)шп8 ро)уГА) КХА |п ьсеп1е Н О апд ьсоге 1п 100-И! а1ц4нося РгоЬе РГ)А ог )с)сЕА <1> Рог 5ошЬегп апа!уьЬ оЕ п|апнпабап Еепопцс РХА, счЬеге еасЬ 1апе оГ |Ье Ее! сои|а|па 10 р8 оЕ РХА, ше 10-20 п87ш! габ!о!аЬе1ед ргоЪе Гьр, асс, с!Оя срп|ГРЕ), Рог 5онйегп апа1уяя оГ с!опеб РХА Ега8- шепся счЬеге еасЬ Ьапб оГ |Ье геяспсбоп йбеяс сопса!пь 10 п8 оЕ РХА ог пюге, пшсЬ 1ея ргоЪе Ь ге9шгей реп апа!у|бп8 с1опеб РХА, ЬуЬпйхабоп Ь сагг!еб ош Гог б-8 Ьонгь няп8 1-2 п8)сп! гайо)аЬе!ед ргоЬе !ьр.
ас|. 10ь со 10| ерш/ИЕ). 1.аЬе)ш8 ьЬои16 Ье сагг!еб оцс ассогйп8 со сЬе шесЬобя деясг!Ьед ш СЬарсег 9 ог 10. 5аГтоп яреггп Г27ь)А Г-10 тфт)) Репасцгеб Ггабшепсеб яа)пюп |репи РХА ьЬои!д Ье ыеб ас а сопсепсгасюп оЕ 100 н87гп! ш ргеЬуЬпйгабоп апб ЬуЬгЫ|хасюп ю1нсюпя шчо)чш8 емепба11у апу суре оЕ ЬуЬгЫ|хабоп ехрепшепс. То ргераге; Е РЕю1че ьа)пюп |репи РХА (518ша суре 1!1 ьойиш яа!с) |п Н О ас а сопсепсгабоп оЕ 10 ш81ш1.
1Е песеыагу, ясп |Ье ю1шюп оп а гпабпес)с ьбпег Гог 2-4 Ьонгь ас гооп| сеп|рега|нге со Ье1р сЬе Г|ХА со йью1че. 6. Аб)ияс сЬе сопсепсгасюп оЕ ХаС) со О.! и, апб ехсгасс сЬе ю1шюп опсе сй|Ь РЬепо) апб опсе ц|1|Ь РЬепобсЫогоЕопп. ш. Еесочег |Ье а0неош РЬаяе, апб яЬеаг йе РХА Ьу рая|п8 Ь !2 синея гарЫ1у йгонЕЬ а 17-Еацбе Ьуробегш!с пее61е. |ч. Ргес|рбасе |Ье РХА Ьу а|Ы1п82 чо1шпея оГ!се-со16 е|Ьапо1, гесочег Ьу сепспб|8асюп, ап|1 йяо1че аС а сопсепСгаС|оп о| !О шип! !п Н,О.
Рготосо! 10: 5оийегл НуЬг!г(!гаг!ои оу'йат)!о!аЬе!ег( РгоЬет го !хтис!е)с Аси6 1ттоЬ(!(гег! оп МетЬгапет 6.53 ч. Ретепп!пе йе Аие от тЬе ю!п0оп апе! са!сп!ате т!те арртохппате сопсепттаВоп оу йе !)ЬтА. л'. Вот! йе ю!шюп тот !О пипи!ее апт! Воге ат — 20 С ш егпа!! а!п!поь. !пп Ье(оге ые, Ьеат тЬе хо!итюп (от 5 пппптея ш а Ьо!!!п8-тчатет Ьай апт! сЬт!1 т!шс!т(у тп ке пасет. прес!а! Ег!ыртттег!1 Ас(Ьехве г)отх тат)гег( тч11Ь гасВоасггче (л)т < ! > ог РЬохрЬогезселг ас(Ьех(че с(отх НуЬг(г)1каттол сол!а1лег 1лсиЬатог ог соттегс(а1 ЬуЬлс(сга!тол г)еч(се ргехет то 1Ье арргорлате тетрегатиге 1лсиЬа!ог ог хЬаИл8 тчатег Ьай ргехет то 65"С Мог ЬуЬгЫсгаиол т рЬохрЬаге-5Р5 ЬиПег) Яа!ег ЬатЬ, Ьойлд МЕТНОО 1.
Ноас йе птегпЪгапе солта(п(п8 йе саг8ет Р)хА оп тЬе хигуасе оу а тгау от бх 85С (ог бх 55РЕ) ипт!1 тЬе тпетпЬгапе Ъесошех тЬогоиВЫу иге!тес( !гпмнп ЬепеатЬ. 5иЪшегВе тЬе шептЪгапе 1ог 2 пипи!ее. 2. РгеЬуЪгЫЬхе йе шешЬгапе Ьу опе ог" йе го11отч)п8 шетЬосЬ. ГОк нУВкю!УАт!Оы !Ьт А неАт-5еАтАВее ВАО а. 511р йе тчес тпешЬгапе 1пто а Ьеат-хеа1аЫе Ъа8 (е.8., 5еагх 5еа)-А-Меа! ог ет)и!ча)епт), апг1 агЫ 0.2 тп! от' ргеЬуЪг(г(1гатюп ко!и!(оп тот еасЬ хт)иаге сепНтпетег от' птешЪгапе. 5с!иеехе ах пшсЬ атг ах рохсйЫе тгош тЬе Ъа8. Ь.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
