Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 148
Текст из файла (страница 148)
Тч !Аь |Ьас Ьане Ъееп рагПаПу с!ериппасес! апс! депасцгесс ъчсЬ аП|аП аге ср|апПсас|че!у сгапьГеггес) ичсЬ!и 50 пиписея Гго|п 8е!я оГ поппа1 сЫс)гпеяя !4-5 пип) апс1 поппа1 а8агоье сопсепсгаПоп (<!98), 1Г сагг!ес! оис сагеГцПу, часишп сгапьГег сап гея|1| ш а сячо- со сЬгееГо18 епЬапсетепс оГ йе ЬуЪпйгаПоп я8па1 оЬ|а!пес) 6огп 5оцйегп сгапяГегыМессчесх)су ес а1. 1987; О1яхеччя)са апд )опеь 1988). АП оГ йе сопнпегс!аПу анаПаЫе аррагасиьеычог1| |чеП аь 1оп8 ая саге |ь са1|еп со епя|ге сЬас сЬе часишп !я аррПе|1 ечеп1у очег йе епбге яигГасе оГ |Ье Пе!. 5рес!а1 саге ьЬои18 Ье са)сеп |ччсЬ сЬе тчеПя оГ Ьопхопса! а8агояе Пе1ычЫсЬ сепг! со Ъгеа1| с!ипп8 ргерагаИоп оГ йе Пе1 сог сгапьГег.
1Г сЬ|я оссцгь, йе счеПя ьЬои1с1 Ье спттес! Ггот йе Пе! ЬеГоге сгапьГег. (ТЬе счеПь пеес) пос Ъе сптте|С Ггот йе 8е! ая!оп8 аь йеу аге ипЬго1|еп.) 1с |ь а1яо ппрогсапс пос со арр!у соо пшсЬ часишп с)иг!п8 сгапяГег. ччЬеп йе часишп ехсеес)я 60 с|п оГ ччасег, йе Пе1ь Ьесоп|е сотргеяяес! апс! йе ейк!епсу оГ сгапьГег !я ге|!осей МЕМВКАМЕЬ Е)ЬЕ0 ГОК ЬО~ЗТНЕКЧ АМ0 ХОКТНЕК!Ч НУВК!О!УАТ!О1Ч рог а!пюяс 20 уеагь, йе оп1у ачаПаЫе ьцррогс Гог иппюЬП|хаПоп оГ Г|)ч)А |чая и!сгосеПи!ояе, |чЬкЬ ччаь Пгяс ияес) |и ро|ч|!ег Гоггп (НаП ап|1 Вр!е8е!|пап 1961) ап|1 !асег аь яЬеесь (Ху8аагс) апс) НаП !960; СП1еьр|е апс) 5р!е8е1|пап 1965; 5ои|Ьегп 1975).
)ч)огсЬегп ЬуЬгЫ|хасюп счаытПаПу сагпе|1 оис ехс!ияче!у счПЬ ПЯА нптоЪ|1!хес! оп асПчасе|! сеПц1оье рарегя !АЬч!пе ес а1. 1977; 5еес! 1982а,Ь). Ноччечег, и чная яооп геа!пес! йас ПХА с!епасигес) Ьу 8!уоха1, Гогта1деЬс)уе, ог гпесЬу1тегсигк Ьус!гохЫе Ъ!пс!я с!8Ьс!у со пПгосеПи!ояе. Рог ьечега! уеагя, пПгосеПи!оье |ЬегеГоге Ьесате сЬе яиррогс оГ сЬоке Гог ЬосЬ пог|Ьегп апд 5оийегп ЬуЬпйхаПоп. Г|еяр!се Пя еидепс яксеы, и!|госеПи1оье !я пос ап Ыеа! таспх Гог ьо!Ы-рЬаяе ЬуЪ|Ы!гас!оп. ° 1ся сарае||у го Ь!пг$ пис)ек асиЬ 1я 1оън 1-50 — 100 )|81ст') апсс напея ассогйп8 со |Ье я!хе оГ сЬе Г)!)А ап|1 ПЫА. 1п рагПси!аг, пис!ек асЫь <400 Ъаяея |п 1еп8сЬ аге геса!пе|! !пейк!епс!у Ьу пПгосеПи!ояе. °,0)|ГА аи|1 Рсй)А аге ассасЬег! го тггосеИи1ояе Ьу ЬуйгорЬоЬГс тгегассГоия, гайег |Ьап соча1епс шсегассюпь, апсс сЬегеГоге 1еасЬ ь1осч1у Ггогп сЬе гпаспх |1ипп8 ЬуЪпйхаИоп апс! |чаяЬ- !п8 а| Ь|8Ь Се|прега|игея !Наая е| а1.
1972). ° %йгосеИи1ояе тетЬгапея Ьесоте ЬпиИе г1ит1ид Ьа)с!пд иигГег часиит ас 80'С, ъчЬкЬ |ь ия|- аПу ап |псе8га! рап оГ йе ргосеьь со цппюЪП|хе пис1ек асЫя. ТЬе ГпаЫе тетЬгапеь саппос яиЬяес)цепс!у ьцгЫче п|оге |Ьап опе ог пчо сус1еь оГ ЬуЬпйхасюп апс) счаяЫп8 ас Ь!86 сегпрегасшея. ТЬ!ь ргоЫе|п сап Ье аПе|часе|1 Ьис пос соп|р1есе1у яо1чес) Ъу ияп8 ьиррогсе|1 |пегпЬгапеь тас!е Ггогп пасхе|! еяег пПгосеПи1оье, счЬкЬ Ьаче а Ь!8Ьег сепя1е ягеп8|Ь. ° Саге Ь геди!гесс т ясогси8 тпосеИи1ояе теп|Ьгаиея |Т |Ьеу аге со Ье пьес! ьиссеьйиПу Гог пис!ек асЫ ЬуЬпйгаПоп апс! ччеясегп Ыосс!п8.
чнЬеп йе Ьцпийсу !я Ь|8Ь, |Ье тетЬгапе ъчП адяогЬ то!ясцге Гго|п |Ье а|г апс) ехрапй геьц!Яп8 !п сиг!ш8 апс) счг!пас!п8. 'чС|Ьеп |Ье ЬшпЫПу !я 1очч, пигосеПи1оье |петЬгапея ччП! |1гу апс! Ъесоте сЬаг8ес) сч!|Ь яса6с е1есспс!су. 1п сЫя ьсасе, |Ье |пегпЬгапе !я ргопе со сгасЫп8 апс! яр166п8 ап|1 Ьесотеь чегу с!!Гбси1с со ч|ес. б.38 СЬартег б| Ргерага6ои аив( Аиа1уввв оу ЕиЕагуо6с Сепо|и|с 19ХА 1п шое! агеав йгоиВЬои! йе вчог!д, 6 Ь песеевагу го а1гег ЕЬе соп616опв цпбег УУЬ~сЬ п(ггосе1!01ове Ь вгоге|1 со вш! веавопа1 сЬап8ев ш вчеаЕЬег соп616опв. (виг)п8 ЕЬе Ьог ЬшпЫ вшпгпегв ог Хе|ч Уог)с, гог ехагпр1е, пЬгосе1!01ове ЕЬои!6 Ъе в!отед |п а с!ове6 сопса|пег очег а г)еЬус)габп8 а8еп!.
1п вч)пгег, йе деЬус1га608 а8еп! Ь гор!асей Ьу дагпр ра|Ь ог" рарег. ТЬе аип Ь го Ьаче ъчг(пИе-ггее ше|пЪгапев ЕЬат вче! ечег|1у ап|1 в)цкИу (ЗО весоп|Ь ог 1еев) ап|1 га)се оп а ЫшвЬ 6п8е |УЬеп вагигате6 Уч(ЕЬ вчагег. ТЬе ргоЫешв вчЬЬ пбгосе1!ове вчеге |ю!че|1 Ъу ЕЬе 1пггойкгюп ог" чагюцв турев оу пу1оп шеп|Ьгапев ЕЬа! Ь(п|1 пис!е|с аснЬ 1ггечегяЫу, аге гаг |поге 6игаЫе йап п(!тосе!!0!иве гпегпЬгапев (кее6 ап|1 Мапп !985), ап|1 сап Ье гера(гев) 1г дагпа8е6 (Рцав 1989). 1пппоЬ|!Ьед пис!ек асЫЕ сап Ье ЬуЬТ1612е6 вес)цеп6аНу го вечега! Йггегеп! ргоЪев УНЕЬои| с$аша8)п8 йе гпеп|- Ьгапе.
Ригйеппоге, Ъесаиве пис1ек асЫЕ сап Ъе 1шшоЬ1112ед оп пу1оп (п Ьцтгегв ог 1овч юшс втгепВЕЬ, !гана!ег о! пис!ек асЫЕ Егош Ве!в го пу!оп сап Ъе сагпе6 оиг е1естгорЬогебса!!у, ТЬЬ шетЬое( сап Ье иве|и! |УЬеп сар|1!агу ог часишп ггапвгег ов'ИХА Ь 1пейк(епе, гог ехашр1е, ч|Ьеп (га8шепгв ог РХА аге ггапвгеггее) ггош ро1уасгу!ашЫе Ве18. Т|чо гурев ог пу!оп шешЬгапев аге ача(1аЫе сопцпегс)аПу: цпшо6(гве6 (ог пеи|га1) пу1оп ап6 сЬаг8е-пю61гвес1 пу!оп, вчЫсЬ сагг|ев апцпе Вгоирв ап6 Ь ЕЬегеуоге а!во )споивп ав роя6че1у сЬаг8е|1 ог (4) пу1оп.
ВогЬ гурев ог" пу1оп сап Ъ|п6 яп8!е- ап|1 доиЫе-вггапбес( пис!ек аскЬ, ап6 гесеп|юп Ь в)цапбгабче |п |ю1чепь ав е)1чегве ав Учасег, 0.25 Ы НС1, ап6 0.4 Ы ХаОН. СЬаг8ешов)(гвес1 пу!оп Ьав а Вгеагег сарасЬу со Ъш|1 пис!ек аснЬ (р1еаве вее ТаЫе б-2), Ьи| Ь Ьав а |епдепсу |о 81че 1псгеаве6 1ече!в от' Ъас)|8гоип6, УУЬкЬ гевцЬЕ, а|!еав! ш рагт, Уготп попврес)гвс Ь)п6108 ов пе8а6че1у сЬаг8е|1 рЬоврЬаге Вгоирв (п 1вХА апе1 ВХА со йе роят|че1у сЬаг8е|1 Вгоирв оп ЕЬе вцггасе ов ЕЬе ро1ушег. Новчечег, ЕЬЬ ргоЫе|п сап ивиа!1у Ъе соп|го1!е|1 Ьу ияп8 1псгеаве|1 в)иап66ев ог' ЫосЫп8 а8епге |п йе ргеЬуЪпйгабоп апд ЬуЪТ1612агюп вгерв.
Ману с)1ууегеп! Еурев о! пу!оп шешЪгапев аге ачайаЫе йа! чагу ш |Ье ехгеп! апв) туре о! сЬаг8е, йе шейос( цве6 го арр!у 11, апе( йе е(епягу ог" йе пу1оп п|евЬ. ЕасЬ шапигасгигег ргочЫев врес|6с швггпсгюпв гог йе Егапвгег ог пис1ек асЫЕ го йе)г раг6си1аг ргос(исс. ТЬеве (пвггисбопв ЕЬои16 Ъе го!1овче6 ехаст1у япсе ЕЬеу ргеяппаЫу Ьаче Ъееп ЕЬоъчп го у(еЫ йе Ьев! Тевц)гв. ТАВЕЕ 6-2 Ргорег6ее о( Ме|пЬгапее (2вев! 1ог 5ои!Ьегп 81о!6п8 апв! НуЬТ!в!!габон ТУРЕ ОЕ МЕМВЙАНЕ СнАкоеп Хуеон ХеиткА| ХУ|Он РВОРЕВТУ Хвтаосе|еиеове Сарасиу (р8 нис!ек асЫ/сш~) 5(ае о(нис!ек асЫ гев(н!гев! гог тахона! Ь|нсВн8 Тгапвгег ЬиКег 80 †!20 >400 Ьр -!00 400-500 >50 Ьр >50 Ьр !о|ч |он|с в|ген8|Ь очег а л Ые гаду ог РН ЪаЫп8 а| 70 С Еог ! Ьоиг; но часишн гее(швее( аг |и!!Й а!Ьа!! ог ЕЛ' |ггаеВа|юн а| 254 нгн; данвр шегнЬганев аге НенегаПу ехровее! |о !.6 Ь)!|и'-, в(г!еб тегнЬганев ге9и!ге |60 !|Вен| НуЪон0-Ы НуЬоне(-!в|+ Сене-5сгеен 2еив-РгоЬе Ыу|ган '- Сене-5сгеен Р!ы Ь!НЬ юнк в|ген8|Ь а| неи|га! РН ЬаЫн8 а| 80'С инв)ег часишн (ог 2 Ьоигв !ннноЬ|!кабан Сонннегс|а! Ргобись Ра!у л|ну||оеае еННиапое (РЧОР) |ие|иЬ|апев аге иа| гаиине!у шеа |ав пог|Ьегн ог 5аи|Ьегп |гана!в|в.
На|вече|, РУОР |ие|иЪгаиев, Ьу ввввие ат |Ье!» ЬвВЬег |нееЬаика! пген8|Ь аио 8|еа|ев сарае!|у |о Ыиа рва|в|ив, аге рветевгео |а ингоее|!и|аве Гав непегп Ыа|инх. Ну|он |ие|нЬ|ааев вЬои|8 па| Ье шед Еог неяегп Ыоп|и8 Ьесаиве |Ье!ече! от пои|рве|Не аЬ|авр|юп а! ннишна!аабеа! РгаЬев ь ииасеер|аЫу ЬвВЬ. РГО1ОСО~ 8 5оийегп В!оШпц: Сар~!!агу Тгапйег о1 ОНА 1о МетЬгапеь т нс с анлаагюм ог сеслом!с РНА ь яа5т сл!сс5тесл нч)сЬ опе ог тоге геяпсПоп епгугпез апсс сЬе геяп1сспц Егаатепса аге аерагасес! ассогйпа со же Ъу е1ессгорЬогеяа сЬгопаЬ а зсапссагд аеагоае це1. ТЬе РХА Еа сЬеп депаспгесс ш ясп апс1 сгапаЕеггесс Егот сЬе ае! со а зоПс) апррогс !сьпаПу а пу!оп ог ппгосеПп1оае гпетЪгапе).
ТЬе ге1асгче рояПопа оЕ сЬе Р!н!А Егаатепса аге ргезегчесс дпг!пд сЬелг сгапаЕег со сЬе гпеспЬгапе. ТЬе Р!н)А ь сЬеп Елхес) со сЬе теплЬгапе апс1 ргерагес1 Еог ЬуЪпйхаПоп аа ссееег)Ьесс ш Ргососо1 10. Ап а1сегпасгче тесЬосс оЕ япт1сапеось сгапаЕег 1а ргеаепсесс 1п Ргососо1 9. ТЬе ргосесспге Еог прчнагсс сгапвЕег оЕ РЬ)А ш 5опсЬегп Ыосс!пц Ь регЕоппес1 еыепссаПу аа с)еасг!Ъесс Еог прччагй сгапауег оЕ ПХА ш СЬарсег 7, Ргососо1 7. БЕТТ!!ЧС 1.)Р КЕЬТК1СТ!ОМ О!СЕЕТ!О!Ч$ ОГ ОНА РОК БО1Л НЕКХ АМА$Лг$1$ ТЬе ЕоПонн!пц аге сЬе сагйпа1 рошь со гегпегпЪег ънЬеп се!с!па пр геаспсПоп йцеаса оЕ аепогпк Р)н)А Еог асапдагд 5оцсЬегп апа1уяя ° ТБе атоипс оЕ РХА г11цеасел1 тиас Ье зифесепс со ссепегасе и йдпи1.
рог 5ошЬегп апа1уяа оЕ гпапппаПап аепот)с РХА, -10 Ссц оЕ Р)н)А тиас Ъе!оас)ес1 шсо еасЬ а!ос оЕ сЬе це! ччЬеп ргоЬеа оЕ асапдагсс 1епцсЬ !>500 Ър) апд Ь1аЬ лрес!Еле ассп пу (>1Оч срт!)ла) аге паес) со ссесесс япа!е-сору лес)пепсея РгорогПопасе1у 1оччег аплоппь оЕ РЬ!А плау Ъе паес1 лчЬеп сЬе ргерагаПоп оЕ Р!н)А сопса)па Ь!аЬег пю1аг сопсепсгас!опт оЕ сЬе аес)пепсея оЕ спсегея. ° ТЕле гезсгхессоп епаутел иаегЕ иге Иге!у со Ье Еиуоппас1че. рог ехатр1е, сЬеге ь Псс1е ро!пс !п йаеасспа РЬ)А лнЬоае тейап яхе ь 50 1сЪ ччссЬ а геасгсссюп епсуте сЬас с!еачеа оп ачегаце ечегу 100 1сЬ. Ал а цепега! пл!е, сЬе тейап яхе оЕ сЬе Р!н)А Ье1оге йаеасюп аЬоп1Й Ье ас 1еаас сЬгее сстеа агеасег ЕЬап ЕЬе гпейап яке оЕ Егаатепса цепегасед с1пппо сЬе йдеасюп. ТЬе Егесрлепсу оЕ с!еачаце Ьу с)ПЕегепс геасг!сс!оп епхутеа оЕ час)опт зрессеа оЕ депоппс РХАа ь йя спааес) ш СЬарсег 4, Ргососо! 1 !р!еаье аее ТаЫе 4-3).
° ТЬе атоипс оЕ РХА 1оагселЕ Еисо еае)с 1аие оу сБе аде! Еа Есполчи счссЬ аееигаеу. ТЬы с)оеа пос песеыагПу теап сЬас геаспсйоп сс!деаа пшас сопсалп еопа! апюппь оЕ РХА. Меаяпг!па япаП чо1птеа оЕ ехсгепле1у чпеось ргерагасюпа оЕ ЬсаЬ-пю1есп!аг-чге!аЬс шепот!е РХА Ь чегу ййкп!с, апс! 1пасспгассеа!еасс со очес!оаг)!пав ог ппссег1оайпц оЕ 1апеа 1п сЬе ае1.
1Е Ь ь еааепсса! со апа!ухе сЬе яагпе агпоппс оЕ РХА Егот тп!6р1е аатр1еа (е.ц., ччЬеп сотраг!па шепот!с Р)н)Аа Еао!асес) Егот поппа1 шйнсс)паЬ апс1 сЬоае аЕЕессесс чч!сЬ а депес!е с!!аеаае, ог лчЬеп ассетрс!па со десегт!пе сЬе сору пптЬег оЕ а репе), сЬеп Ь Ь Ъеас со аеас а апЕКс!еп- 6.39 6.40 СЬаргег 6; Ргерагабоп ап6 Апа!уйь оГЕийагуогЕс Сепот!с Р)ъГА су оЕ еасЬ оЕ сЬе Р!ъ!Аа ъъчсЬоис ъчоггу)пц соо пшсЬ аЬоис ъчЬесЬег еасЬ йцеас сопсашв йе хате атоипс оГ РХА. ТЬе ехасс сопсепсга6оп оЕ ГЭ!ъ!А 1и еасЬ аатр1е сап Ье теааиге6 Ъу Пиоготесгу аГсег йцеасюп ь сотр)есе ЬеГоге 1оайпц сЬе ацагоае це1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
