Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 149
Текст из файла (страница 149)
А тесЬо6 Гог Пиогошеспс Песегтспа6оп оЕ Р!ъ!А сопсепсга6оп ь ц)чеп ас сЬе епд оЕ Ргососо1 1. 1п гпапу сааея сЬе чо!итеа оЕ геасгк6оп йцеяса аге Пейпеб Ьу сЬе сопсепсгабоп оЕ Р!ъ!А ш йе ргерага6опа ипс1ег апа1уяя ТЬе сопсепсгас)опа оЕ Р)ъ)А ш ргерага6опа оЕ ЬсцЬ-пю)еси1аг-ъче)цЬс тапипаПап цепопис Р!ъ)А аге оГсеп ао 1оъч йас )с Ь песеааагу со сапу оис геаспссюп йцеаса 1и )агце чо)шпек ТЬеге ь по геааоп ъчЬу геаспсс)оп йцеаь оГ а сотрагабче аепеа оЕ цепопнс Р!ъ)Аа пее6 Ъе сагпе6 оис 1и есСиа! чо1шиея Аа 1опц аа аП йцеаса аге сотр)есе, сЬе чо)шпе оЕ еасЬ геаспс6оп йцеас Ь нишасепа1.
АГсег йцеяюп, сЬе Ггацтепса оЕ Рсъ!А тау Ье сопсепсгасе6 Ъу ргессрьасюп ъчссЬ ейапо1, теааигед Ъу Пиоготесгу, ап6 сЬеп аррПе6 со йе це1 сп а япаП чо)шпе оГ це1-1оайпц Ьийег Елее 5сер 2). ° ТЬе сЕ!цеха аге соиср1еге. ТЬе сЬ)еЕ ргоЫегп епсоипсеге6 Пиппц йцеа6оп оГ ЬсцЬ-пю!еси1агъчесцЬс Р)ъ)А Ь ипечеппея оЕ йцеъсюи саспенс Ьу чапасюпз сп йе 1оса1 сопсепсгасюпа оГ Р)ъ!А. С1шпра оЕ Р)ъ!А аге ге!а6ъе!у 1пассеяяЫе со геаспс6ои епгутеа ап6 сап Ье йцеъсе6 оп)у Егогп сЬе ехсегюг оГ йе аццгецасе. То епыге Ьопюцепеогь йарегяоп оГ йе РХА: 1.
1Г рояяЫе, аес ир йе геассюпа 1и а соса! чо)ите оГ ас )еаас 45 р1. ВеЕоге адйпц сЬе геаспссюп епгуте, асоге геас6опа ас 4'С Гог ъечега) Ьоига аГсег й1исюп оЕ сЬе Р!ъ)А апс1 асЫЬюп оГ 10х геасгксюп епгуте ЪиГГег. 2. Сепг)у а6г йе Р)ъ!А ао)ос!оп Ггот 6гпе со 6гпе ияпц а аеа1е6 81ааа сарсцагу. 3. АГсег айй6оп оЕ йе геаспс6оп епгуте (5 ип)саЕ!сц оГРХА), цепс1у ас)г йе ъо1исюп Еог 2 — 3 тсписеа ас 4"С ЬеЕоге ъчагпппц сЬе геассюп со сЬе арргорпасе сетрегасиге. 4. АГСег йцеяс)оп Еог 15 — 30 пшшсея асЫ а аесопд а!щиос оЕ геяспсс)оп епгуте (5 ипсь!)гц оЕ РХА) апс) ассг сЬе геасбоп аа беаспЪе6 аЬоче. 5. 1псиЬасе йе геассюп ас сЬе арргорпасе сегпрегасиге Гог 8-12 Ьоигя 1с Ь ипрогсапс со шс)ийе сопсго)а со ъЬоъч ъчЬейег йцеъсюп ъчПЬ йе геасг!ссюп епгуте(а) 1а сопср1есе апс1 ъчЬейег сгапяЕег ап6 ЬуЬпйгаиоп оЕ йе Р)ъЕА Ьаче ъчог1сес1 еГПс)епс)у.
ТЬ)ь цоа1 сап Ье ассотрПаЬе6 Ьу аес6пц ир а аепеа оЕ йцеаь сопса)пспц ЫцЬ-гпо1еси)аг-ъчесцЬс цепопис Р)ъ)А ап6 а чегу япаП аиюипс оЕ а р1аяиЫ саггуспц а ьес)пенсе сот р1егпепсагу со йе ргоЬе Ее.ц., !О рц оГ псапспсаПап Р)ъ)А апг) !О ~, 1О ~, ап6 !О г рц оЕ р1аяиЫ). Риппц йцея сюп, сЬе р)аятЫ ъчсП Ъе с)еачеъс ино а аепеа оЕ ЪапсЬ сЬас тау Ье 1пч)асые ъчЬеп йе це1 ь ехатсие6 Ьу асаспспц ъчИЬ есЬсйши ЬгогпЫе ог 5"г'ВК СоЫ. Ноъчечег, Ггацтепса оГ сЬе соггесс яге яЬои16 Ье г1есессе6 Ъу аиЪаеоиепс ЬуЬгЫЕга6оп со сЬе ргоЬе. То гейке сЬе сЬапсе оГ асс!- Пенса! сопсагпшасюп апг1 со пипипсге йе розяЪ|Псу йас йе ЬуЬпйгабоп яцпа1 Егот сЬе сопсго1а ълП оЪгкиге йас Ггот сЬе сеас аагпр)ея йе сопсгоь хЬои16 Ъе 1оаъ)ес1 шсо ъчеца йас Пе соъчагг! опе яйе оЕ сЬе це1, ъчеП аъчау Ггопс йе сеас аапср1еа оЕ тапипаПап Р)ъ!А.
МАТЕК1АЕБ САСсТЮСь1: Р!еаае аее Аррепйх 12 Еог арргорпаге Ьапдцпц оЕ тасег!а!в таг!гесс ъч!сЬ <! >. ВссГГег8 апд йо!мЕсои8 Р!еахе аее Аррепйх 1 Гог сотропепга оЕ а!ос!ъ ао1и6опя ЬиЕЕегя апг! геацепЬ. Р!!иге агос1ъ ао!иС!опа Со СЬе арргорпаСе сопсепгга6опя А!)га!!пе СгапаЕег ЬиГЕег ЕЕог а!ха!сие СгапаЕег со пу!оп тетЬгапеа) 0.4 я СсаОН <! > С М СчаС! 6.42 СЬаргег 6: Ргерагаг)ои апгЕ Апа!упв ос Еи)сагуос)с Сенат)с ЕЛКА Е4у1оп ог пПгосеПи)оье гпетЬгапе Р1еаве вее йвсняюн ои МешЬганев Свес) Сог ьоисЬ»гн ан|С Хо»|Лего НуЬгй|гаион |и йе спсго|сассюп Со РгоСосо1в Ь-!О.
Р1ех)д1аь ьЬеесь ог Сlаьь р)асеь Во!агу рЕасуогт ьЬа)сег ТЬ)с)г Ыосссп& рарег Ге.ц., И|Ластап ЗММ, БсЬ)ессЬег & БсЬие!1 СВ004, ог 51&та Е2исс)»Рга|ч) Тгапьрагепс ги)ег нЕЕЬ Лиогеьсепс таг)гсп&ь ТЬе гн1ег Ь иве|С со гпеавнге сЬе йяансе |саче!»гс Ьу йе гнагс|ег РСьСАв. А ги1ег р1асе|С а1он8всьсе сЬе 8е1 |Сигси8 рЬосоьгарЬу а11о|чв йе йвсансев сгач»1егс Егош сЬе 1оайн8 |че!1в Ъу РХА шагС|егв оЕ Сспоьчн яге со Ье |пеавнге|С он сЬе рЬосо8гарЫс ннаье ан|С р!о!се|С 8гарЫса!1у.
ТЬе ягев оЕ гайо!аЬе1»|С Ьанс)в |С»се»се|С Ъу ЬуЪгЫ|ганоп сап |Ьеп Ье евссгпасе|С Ьу юсегро!анон. УУеЕВЬС Г400 81 ЧЕТНОО О!деьбоп апе! Е!ес1горЬогеьсь оЕ йе О!ЧА 1. Р!Веьг ап арргорпаге ашоипС оЕ Вепош)с РХА сч)СЬ опе ог пюге геЯпсСюп епгушеь ГР1еаье ьее сЬе сВьсиьяоп оп Веспп8 ир Кеьспсс)оп Р!Веьсюпь оЕ Р)ь)А Еог 5оисЬегп Апа1уяь |и йе !псгог)иссюп со сЬ)ь ргососо1).
Рве!аг8е-Ьоге уе11о|ч р|рессе Врв со Ланс!!е Ь!8Ь-пю1есн!аг-|че|8Ь| РВА. 2. 1Е песеььагу, сопсепсгасе сЬе РХА Ега8шепсь ас йе еп|1 оЕ йе с)18еьс)оп Ъу ейапо! ргес|р|- сапоп. Ессььо1че сЬе Р)ь)Аып -25 Сс! оЕ ТЕ (рН 8.0). Ма1|е я|ге йас йе есЬано1 ы гешоче»С Егогн сЬе РСьСА во! ниоп Ъеуоге и Ь!на|Се|С оп |Ье 8е!. 1Е я8- ЫВсанс |!панс!!сев оЕ ейано1 геша!п, |Ье РСьСА "»гас»1в" ош оЕ сЬе в1ос оЕ |Ье 8е!. Неаип8 йе ю!нсюп оЕ авве!че|С РЬСА со 70'С |и ап о реп сиЬе Еш 10 ннншев В ивна11у внЕВ»сенс со Вг!че оК пюя оЕ сЬе есЬано1. ТЫв сгеасгненс а1во йвгнрп Ьаве ра|пн8 Ьес|чееп соЬеяче сегннп! оЕ ге|си»поп Егаьшенсв. 3. Меаьиге сЬе сопсепсгапопь оЕ сЬе г!18еьсес) Р)ь)Аь Ьу Виогоспесгу ог Ьу йе ейЫшп| ЬгогпЫе ог 5'с'ВК Со!д врос сеьс (р!еаье ьее Аррепйх 8).
ТгапьЕег йе арргорпасе ашоипс оЕ еасЬ й8еьс со а ЕгеьЬ ш!сгоуи8е илЬе. А|Ы 0.15 чо1шпе оЕ бх я|сгоье Ве1-1оас!!08 Ъ|лЕЕег ап|1 ьерагасе йе Ега8псепсь оЕ РХА Ьу е1ессгорЬогеяь сЬгоиВЬ ап а8агоье Ве! (Еог псоьс Вепопск Р)х)Аь, а 0.7»уи Ве! саьс ш 0.5х ТВЕ ог 1х ТАЕ гпау Ье иьей р!еаье ьее СЬарсег 5, Ргососо1 1). Машсасп а!осч чо1са8е сЬгоиВЬ йе 8е1 (аЬоис <! ьг/сш) со а!!о|ч сЬе Р)х)А со пп8гасе ь!осч!у. 1Е |Ь» |1!8»ы»|С РС|САь Ьач» Ь»»н ь~иг»|С а| 4 С, |Ь»у ьЬи»1|С Ь» 1|»ас»0 ю Ьь С Сог 2 — 3 ншю|»в Ь»Гоге сЬеу аге арр1!е|С со сЬе 8е1, ТЬсв Ьеаин8 йвгнрсв ану Ьаве ра|пп8 сЬас и|ау Ьаче осенне|1 Ьеичееп ргосгнйп8 соЬевше сегпнш. Оссав!опа!1у, ргоЫегнв апве |Снг!н8 !на|С!н8 оЕ сЬе 8е! Ъесаые йе РСьсА во1нсюн |»|11 нос ян1| со |Ье Ьоссо|н оЕ |Ье ьче11.
ТЬ~в Воас|н8 оссшв |»Ьен чегу Ь!8Ь-спо!есн!аг-ьче!8Ь| РВА Ь ргевенс ас сЬе енсс оЕ |Ье й8евс, Еог ехагнр1е, ь»Ь»п сЬе й8ея |в |нсон|р!есе ог |»Ьеп гпашп|а1|ап РСьСА Ьав Ьеен й8евсе|! нисЬ епгун|ев вн»Ь ав №г! |Ьас 8енегасе чегу 1агье Ега8шенсв оЕ РХА. То пншннге сЬе ргоЫеп|, |па!ге вше сЬас сЬе РС4А !в Ьогно8»пени|!у йврегвей ан|С !на|С йе вап|р1ев чегу всо|ч1у |нсо сЬе |че1!в оЕ йе 8е1, Айег 1оайн8, а11о|ч йе 8е! со всан|С Еог а Ее|ч пнншев во сЬас сЬе РСьСА сап йЕЕнве ечен1у сЬ|он8Ьонс йе ьч»11в. 4. АЕсег е!ессгорЬогеяь Еь сошр1есе, яаш сЬе Ве! сч)сЬ ейсйшп ЪгошЫе ог 5'г'ВК Со!а апс) РЬосо8гарЬ сЬе Ве1 аь г)еьспЬес) Еп СЬарсег 5, Ргососо1 2. Р!асе а сгапьрагепс ги1ег а1оп&ьЫе Ртогосо! АЬ Боайетп В!о!плес СарП1ату Ттат~ет о)'РАЕА го МетБтапеь 6АЗ сЬе Пе! гю сЬас йе еПьсапсе сЬас апу Ъапг) оЕ Р)х)А Ьаь ш)Пса!ей сап Ье геаг) гПгесс1у Егогп йе рЬосоПгарЬ)с ЕгпаВе.
!Е гСеь!гегс, сЬе ае! гпау Ье ьсогесС ас йа ьсаае ЬеЕоге сЬе РХА Ь гСепасигегС апсС сгапьЕеггегС со сЬе гпешЬгапе. Ч'гар йе ае! ш 5агап ьЧгар апсс ьсоге К оп а Вас ьигсасе ас 4 С. Весаиье сЬе ЬапгСь оЕ РХА ййые оигспВ ьсогаае, йе Ве! ьЬои!д пос Ье рис аьсде Еог псоге сЬап ! гСау ЬеЕоге Ъе!пВ ргосемес!. 5. Репа!иге йе РХА апс) сгапйег П Егогп йе ацагоье ке! со а ппгосеПи1оье ог а пеисга1 ог сЬагВес)-пу1оп гпегпЪгапе ияпП опе оЕ йе гпесЬос)ь деьспЪег! Ъе!очч. Ргерага$соп ог т!те Се! Тог Тгап51ег 6. Айег ЕгаспопаопП сЬе РХА Ьу ае1 е!ессгорЬогеяь, сгапьуег йе Пе1 со а д)аьь ЪаЫпП йьЬ.
1)ье а гаког Ыас)е со сгип асчау иссиьес) агеаь оЕ сЬе Пе1, спс1исПпП сЬе ьессюп оЕ ке! аЬоче сЬе счеПь. Ве ьше со 1еаче епоикЬ оЕ сЬе счеПь ассасЬес1 со сЬе Пе1 ьо сЬас сЬе рояПопь оЕ сЬе !апеь сап Ье гпаг)сес) оп сЬе гпегпЬгапе айег сгапьуег оЕ РЪЕА. Сис оЕЕ а япаП спапци1аг рсесе Егогп йе Ьоиогп 1еус-Ьапг) согпег оЕ йе ае! со ягпрПЕу опепсасюп с)опием сЬе ьис- сеесПпВ орегапопь.
!с ы Ьея со сш оЕЕ йе 1апеь спаса!и!па йе шо!еси!аг-ьче!аЬс псаг1сегь Ьесаше ргоЬеь гпау сопса!и ьесСиепсеь согпр!егпепсагу со ьоспе оЕ йе шаг)сег Ьапг)ь. ТЬе геьи10пц рапегп оЕ ЬапьСь арреагспа оп йе аисгайоагаш и югпесипеь шгоппаиче, Ьис сс ыпоге оЕсеп риххПпВ. !Е сЬе ЕгаВшепсь оЕ !псегеьс аге!агаег сЬап -с5 1сЪ, сЬеп сгапьЕег псау Ье !псргочесС Ьу пкЫпд йе РНА Ьу ЪпеЕ оериг!пас!оп ЬеЕоге гСепасигас!оп (чуаЫ ес а!. 1979). Рериппаиоп 1ауь йе рЬоьрЬасе-ьиааг ЬасЕЬопе оЕ РЕ4А ореп со ьиЬьесСиепс с!еачаае Ьу ЬусСгоху! юпь.
АЕсег 5сер б, юаЕ сЬе ае! сп ьечега1 чо!шпеь оЕ 0.2 м НС! ипи! сЬе ЬгогпорЬепо! Ыие сигпь уе!!оьч апсс йе ху!епе суапо! сигпь усПосчтагееп. !пипегпасе!у р!асе сЬе 0.2 К НС! сп а Ьахагдоиь-ъчаьсе сопсаспег апс$ сЬеп ппье йе Ве! ьечега! сппеь я!сЬ ссе!оп!хек Н,О. Весаые дерпт!пасюп сСерепаь оп ЙЕЕиь!оп оЕ Н сопь !псо йе Вес, йе РХА шо1еси1еь ас о!ЕЕегепс 1ече!ь ъчЬЫп сЬе ааагоье аге с)ериг!пасесС ас ййегепс гасеь апгС со ййсгепс ехсепи, ТЬе геасПоп Ь йегеЕоге гПЕКси1с ЬосЬ со сопсго1 апсс со гергоаисе апй П сагг!ес! оис соо епсЬысаьсюаау, сап гехи!с !и ехсемтче ЕгаВшепсас!оп оЕ РХА апгс а гегСиссюп !и сЬе ьсгепасЬ оЕ сЬе ЬуЬгЫ!хас!оп яапа!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
