Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 147
Текст из файла (страница 147)
Ргераге Ссььие ог ччЬо1е Ыоосс Сог цепошсс РЫА 1ьо1агюп. РОВ ТС55СЛЕ а. Р)ььесс 10-20 ша оЕс!ььие. Ь. ЕссЬег пипсе сЬе с!ььие 6пе1у чч)сЬ а гахог Ыассе/ьса1ре1 ог !геенне сЬе с)ььие сп 1щшд пагоаеп апс1 сЬеп аг!пс! и со а роччс)ег лп а гпогсаг ргесИ!есс ччпЬ 1)с)иЫ и!сгоцеп, аь с1еьспЬес1 1п Ргососо1 1.
ГОВ ВСООО а. ТгапьЕег 300-)л! а1щиось оЕнчЬо1е Ыоосс со еасЬ оЕ сачи ппсгоЕиае сиЬеь. АсЫ 900 )л! оЕ гесс Ыоос1 се!! 1уяь ЪиЕЕег со еасЬ ыЬе апс1 спчегс сЬе сарред сиЬеь со ппх сЬе сопсепся 1псиЬасе сЬе ьо!шюп ас гоош сегпрегасиге Еог 10 ппписеь, оссаяопа!1у лпнегЬпц йе сиЬеь. Ь. Сепсг)Еиае йе шЬеь ас шахигшш ьреегс Еог 20 ьесопссь ас гоогп сегпрегасиге ш а писгоЕиае. с. Рсьсагсс а!1 Ьис 20 Сс1 оЕ еасЬ ьирегпасапс. й Кеьиьрепсс йе ре!1есь оЕ лчЫсе се!1ь ш сЬе япа11 ашоипс оЕ ьирегпасапс 1еЕс ш еасЬ сиЬе.
СошЬ!пе йе геьиьрепдесс се1! Ре1!есь сп а ь!па!е сиЪе. 2. ТгапьЕег сЬе пппсес1 с!ььие ог йе геьиьрепдед лчЫсе Ыоосс се11 ре11есь со а ш)сгоуиае сиЬе сопсаш!пВ 600 р1 оЕ ссе-со!6 се1! 1уьсь Ъийег. НошоВеп!хе йе яльрепяоп гСиссИу лч!сЬ 30 — 50 ьсго!сеь оЕ а писгоЕиае рея1е. ТЬе 5Р5 чб!1 ргес!раасе Егпгп йе 1се-сп!д се11 !уяь Ьпссег ргпдпс1пВ а с!опду ьо!псгп, ТЫь ргес!рпабоп ипП ппс айесс Во1аппп а!!лула. 3. ЕОрг!опа!) АсЫ 3 Сс1 оЕ ргосешаье К ьо1исюп со сЬе 1уьасе со спсгеаье сЬе усе!6 оЕ аепоппс РХА.!псиЪасе йе Йаеьс Еог ас 1еаьС 3 Ьоигь Ьис по лпоге сЬап 16 Ьоигь ас 55 С.
4. А)!отч сЬе сс)аеас со соо1 со гоогп сеплрегасиге апсс сЬеп асЫ 3 !л1 оЕ 4 тайп! Р)ч)аье-Егее йсчаье. 1псиЬасе сЬе с)!аеас сог 15-60 пппшеь ас 37'С. 5. А))оъч йе ьашр1е со соо! со гоогп сегпрегасиге. АсЫ 200 Сс! оЕ росаьяшп асесасе ьо1ибоп апс1 ппх йе сопсепсь оЕ йе сиЬе Ьу ногсехспа н)аогоиь1у Еог 20 ьесопдь. 1ПЕГОдисбОП ЕО РЕОЕОСО15 8, 9, аЛд 70 5оийегп НуЬпйха6оп оитнвкн тклнвгвк лагг нчвкв!2Ат!он (5оигЬегп 1975) !а паем го агис!у Ьочч 8епек аге ог8ап)хек чч)гЫп Вепотеа Ьу гпарр)п8 геягкгюп а)геа !и апд агоипг) яе8тепгз оЕ 8епопис 1)ХА Еог гчЫсЬ арес16с ргоЬеа аге ача1!аЫе.
Сепот)с 131!А 1а 6гкг 868екгег! чч!гЬ опе ог пюге геьгпс6оп епхугпея апг! гЬе геаи1г)п8 Ега8тепо аге аерагагег) ассог86п8 го яке Ьу е1есггорЬогеяк гЬгои8Ь а агапбагг! а8агоае Ве1. ТЬе Е)ЫА 1а гЬеп г!епагигей ш я!и ап6 ггапаЕеггей Егогп йе 8е1 го а ю1Ы аиррогг Еиаиа11у а пу1оп ог пкгосе11и1оае тетЬгапе). ТЬе 13!ч!А аггасЬег! го йе гпетЬгапе ы ЬуЬПйхег1 го а 1аЪе!ей 13!ч)А, К!)А, ог о118опис!еог)г!е ргоЬе, апг! Ьапй сотр!егпетагу го гЬе ргоЬе аге 1осасег) Ьу ап арргорпаге йегесг)оп ауягет, Еог ехагпр1е, Ъу аигогас)1о8гарЬу. Ву ек6- тагш8 гЬе же апг! пшпЬег оЕ йе Ьапг!а Вепегагег! аЕгег 868еь6оп оЕ йе Вепопис Е)Ь!А чч)гЬ йЕЕегепг геяПсгюп епгугпея яп8!у ог ш согпЬ)па6оп, 1г Ь роя)Ые го р!асе гЬе гаг8ег !3ХА гч)гЬ- )п а сопгехс оЕ геьгПсгюп ягея Рог 2 ог 3 уеага аЕгег 1га !пггог1ис6оп, гЬе лепя!)ч)гу оЕ 5оигЬегп Ыог6п8 ъчаь Ьаге1у шЕ6- с)епг со дегесс ып81е-сору ьециепсеа !и тапппа!1ап Тг1!А, апг! йе ашогасбо8гарЬа оЕ гЬе йпе ччеге гю арес!с!ег1 апг! ьггеа)сес1 чч11Ь Ьас)с8гоипг) (е.8., р1еаае кее ВогсЬап ес а1.
1976) гЬас йеу сегга)п1у сои!6 пог Ье риЫ)аЬег! сог!ау. Ноччечег, я8т6сапг аг!чапсек очег гЬе уеага ш ьечега! агеаь Ьаче ЪгоиВЬг шсгеааег! аепяг)ч)гу апг! гергодис)Ы!Егу, гю гЬаг пптаси!аге геаи1га аге почч йе Вепега1 ги1е гайег гЬап йе гаге ехсергюп. ТЬе тоаг я8п16сапг оЕ йеке 1тргочетепга гк ЕЬе ые оЕ аирроггес! пу! оп тетЬгапеа йаг аге Еаг тоге йигаЫе апг! Ьаче а Ь18Ьег Ыпйп8 сараеву гЬап гЬе ог181па! пЬгосе!1и1оае гпетЬгапея 1п агЫ)гюп, 1)ХА сап почч Ъе соча1епс1у бхед го йе тетЪгапе аЕгег ггапаЕег, е1ип)па6п8 ргоЫепь саиаес! Ьу 1еасЫп8 оЕ пис!е)с ас)г!ь Егопг пкгосе1!и1оае тетЬгапеа 6иг)п8 )псиЬа6оп аг е1ечагег! сетрегагигеа (Наале ег а1. 1972).
ОгЬег аг!чапсеа гпс1иг1е ° Моге еЕ6с)епг гпегЬой оЕ ггапаЕег оЕ 1)ХА Егогп Ве1 го тегпЪгапе, с)оччтчагг1 сар61агу ггапкЕег (ЫсЫепаге1п ег а1. 1990; СЬотсхупаЫ 1992), часишп Ыог6п8 (Мег!чесх)су ег а!. 1987; 01ахеччйа апс! 1опеь 1988; Тгпоча)су 1992), ЬЫ)гесиопа! Ыоишв !р!саке аее Ргогосо! 9), апг! ггапаЕег !и аИса1гпе ЬиЕЕега (Кеес! апгЕ Мапп 1985). ° Рас)!е 1аЬе!ш8 оЕ ргоЪеа ш чггго со Ь18Ьег арес16с асг)ч)гу (Ре)пЬег8 апг) Уо8е1аге)п 1983, 1984). ° Моге ейк)епг Ыос)ип8 а8епга го ргечепг попарес16с аггасЬтепг оЕ гай)о!аЪе!еи ргоЬеь го гпегпЬгапеа (СЬигсЬ ап6 С11Ъегг 1984). ° 1)ае оЕ аепяггче рЬоарЬоПта8егь го саргиге ппа8еа чч)гЬ ЫВЬ еубс)епсу.
бЗЗ Еистот)асс!оп то РтогосоЬ 8, 9, аи!Е 10 6.35 гпепь оЕ РЪ!А (-1 1сЬ ш !епасЬ) сап сЬеп Ъе сгапеЕеггед гарЫ1у Егош сЬе Пе1 сн)сЬ ЬсаЬ ейксепсу. ТЬе т1ерцппаПоп геассюп пшя пос ргосеес) соо Еаг; осЬегснье, йе РЬ!А нн01 Ье с1еачегс тисо япаП Егаашеисе йас аге соо ботс со Ъ)пс! еЕПссепс!у со йе ео1Ы тшррогс. Рерцппасюп)Ьуссго1- уяе сап а!гю сасье сЬе Ъапгсе оЕ сЬе Ппа! ацсогайоПтарЬ со аяшше а "Ецхху" арреагапсе, ргеяипаЫу Ъесацае оЕ спсгеаеег! йсТияоп оЕ РЬ!А г!цпиа сгапаЕег. ТЬетеЕоге, с)ерцппасюп!Ьут!то1- уяе ь гесопипепт1ес) оп!у ннЬеп П ь )!почни аЬеат1 оЕ сцпе сЬас йе сагаес РснА Етаапсепсе М11 ехсеег! 15 1сЬ ти!еписЬ.
0оннпннагсЕ Сар1Пагу Тгап9Еег РЬ!А Егарпепь аге сагпегс тп а гсоннпннаггс йгеспоп 1и а По!у оЕ аПсаПпе Ъцйег апт! аге с!ероясег) опсо сЬе тшгЕасе оЕ а сЬагаег) пу1оп шетпЪгапе. Чапоце аггапаешепса оЕ тук!ся гееетчо!тя апгс ййегепс Еогпш!асюпе оЕ сгапеЕег ЪцЕЕега Ьане Ьееп г!ееспЪегс со асЬтече с!инни!уаттс сгапеЕег 1еа., р!еаее еее ЫсЫепасеш ес а!. 1990; СЬошсхупе!с1 1992). 1и оцг Ьапс)я йе Ьея геец1се аге асЬ)енес! цяпа 0.4 м 1!аОН апс1 а еесцр 1и ннЬ)сЬ сЬе сгапаЕег Ъцйег ь !!санни Егоп! геъетчосте со йе сор оЕ йе ае! сЬгоцаЬ ннсс)са апг1 рцПег! сЬгоцаЬ йе ае! Ъу ап цпс)ег1успа есас)с оЕ рарег сотне!а 1р1еаее аее р)ацге б-2) 1Коеьпег ес а1. 1993). ТгапаЕег оЕ РХА Егаашепь 1е гарЫ, апг! йе 1псепясу оЕ яапа! Ь -30% атеасег йап сап Ье асЬ)енес! Ъу сопчеппопа1 црснагс! сгапеЕег.
ТЬ)е ипргочетпепс ргоЬаЫу гегш1ь Егопс а июге есутс)епс ппПгассоп оЕ РЪ)А ЕгаПшепсе сЬгоцПЬ йе 1псегебсее оЕ йе ае1, снЫсЬ 1а пос цпс1ег ргеяште Егош сне)аЬь р1асег1 оп сор. $1пш!Еапеооб Тгап5Еег Ео Тнно МепсЬгапе9 'уЧЬеп йе сагаес РХА Егаашепсе аге ргееепс 1и Ь)аЬ сопсепсгаПоп Ее.а., 1и геесгкПоп йаеесе оЕ с!опегс РХАа), йе сарП!агу тпесЬогс сап Ье цеегс со сгапеЕег РХА япш!сапеось!у апс) гарЫ1у е!оН соне! еггоеп Г !геен ре! па!осе!!о!оее ог пу!оп о!ео!Ьгеое рте ее! Нйесо!еп змта ререг Ооу ВВенпео а!ага рере! рарет !о!ее!е — — в- !!ау — е Е1СССССЕ 6-2 Роунпунагс) Са !Паг Тгапесег А!ЕаПпе сгапесег Ьиссег Ь г)гаи и !тоти гееегно!те со сЬе сор ос сЬе ае! ЕЬгоцаЬ |и!с)те апгС еис!тет) сЬгоцаЬ сЬе ае1 Ьу аи цпг)ег!у!пе есас!т ос рарег со!неся РМА Егаатпепсе аге сЛие сагпег) !и а г)оънпннагг) йгесооп нн!сЬ сЬе Е!отн ос Ьцссег апг) аге г)ерое!сег) опсо сЬе ецгсасе ос а сЬагает) пу!оп псетиЬтапе.
(Аг)арсе!), ън!сЬ реггппяоп, Егот Кое!а!ег ег а!. 1993.) 6.36 СЬартег 6: Ргерагаг!оп апй Апа!уяз о~ЕиЬтгуоггс Сеиогпгс РХА чге!д!гт — р!ав* ргаге тЧ!татгпап ЗММ рарег е — ре! пйгосе!Оове ог пу!оп гпегпргапе Чгтпатгпап Зтг!М рарег рарег точге!в Е!СстйЕ 6-3 СартПагу Тгапз1ет о1 О!9А Когп Ацагозе Се!з то Тччо 5о1Ы 5иррогтз 5!гпиИапеоиз1у ТЬ!з ргосейиге !з арргорпате 1ог апа!ут!пц с!опей РЧАз апй тЬе цепогпез о! ягпр!е огцагпяпз, Ьит П !з пот зепятгче епоицЬ то Ье изей гчЬеп апа!усйпц согпр!ех гпагпгпа!гап цепогпез. Ггот а япц!е це1 то ттчо пПгосеци!озе ог пу1оп тпетпЬгапез (р!еазе зее Р!циге 6-3).
ТЬе оп1у зоигсе оу тгапзуег Ьийег гз тЬе!н)иЫ тгаррей ш тЬе це! !тзе16 апй тЬиз тЬе еу6с)епсу оу тгапзуег 1з ге!а6че1у роог. ТЬыпетЬой )з пот гесопыпепйей тчЬеп Ь!цЬ зепя6ъчту !з гет)и!гей (е.ц., йетесПоп оу япц!е-сору зес)иепсез ш шапипаПап РХА), Ьиз и !з регГес11у айес)пате Гог 5оитЬегп апа1уяз оу р1аяпЫз, ЬастепорЬацез, ог сояпЫз ог тЬе цепошез оГ яшр!е огцапгзтпз (е.ц., 5. сегеляае апс1 РгозррЬт)гт) Ьу цоигЬегп ЬуЬг!й)гатюп. Тоо 16т!е шатшпаПап цепопис РХА гз тгапзТеггей Ьу тЬ)з тпетЬот1 то аПотч яцпа! йетесйоп гоийпе!у.
Е!ес$гор!чоге6с Тгаойег ТЬ)з тпетЬос1 !з пот ргасйса1 тчЬеп пбгосеПи1озе 1з изей аз тЬе зо1Ы зиррогт Ъесаизе оу ТЬе Ь)цЬ юпк зтгепцгЬз оу тЬе Ьийегз тЬат аге гег)и!гей то Ьшс1 пис1ек ас!йз то пПгосеПи!озе. ТЬезе ЬиКегз сопйист е1естгк сиггепт чету еКтс)епт1у, апй П 1з песеяагу то изе 1агце чо!шпез со епзиге тЬат тЬе ЬиКеппц ровчег оу тЬе зузтетп йоез пот Ъесотпе т)ер1етес1 Ьу е!естго1уяз. 1п асЫпюп, ехтепяче ехтегпа! соо!шц Ь тес)шгет1 то очегсоше тЬе еКестз оу оЬпис Ьеайпц. Е!ессгорЬоге6с тгапзуег Ьаз шн1егцопе а гесепт геятгцепсе ичтЬ тЬе атЬепт оу сЬагцей пу!оп птетпЬгапез апй Ьаз Ьесотпе ТЬе тпетЬой оу сЬо)се Тот апа!уяз оГ япаП Тгацшептз оу Р1в)А зерагагей Ьу е!естгорЬогеяз тЬгоицЬ ро1уасгу1атпЫе це!з !5теПтчац апй РаЫЬегц 1980; СЬигсЬ апй СПЪегт 1984).
)в)ис!е!с асЫз аз япаП аз 50 Ър ичП Ъ!пй то сЬагцес1 пу1оп шетпЬгапез тп Ьийегз оТ чету 1отч юпк зтгепцтЬ !Кеей апй Мапп 1985). АЫюицЬ з!пц!е-зтгапйей РХА апй П)пА сап Ье тгапзуеггей й!гесйу, Тгацшептз оу т)оиЫезтгапт1ей РЬ)А гпизт 6гзт Ье йепатигей !п яти аз йезспЬет1 !п Ргозосо! 8. ТЬе це1 !з тЬеп пеитга!ехет1 апй зоа)сей ш е!естгорЬогеяз ЬиКег !е.ц., 1х ТВЕ; зее Аррепйх 1) Ьеуоге Ье!пц пюишей Ьеичееп рогоиз райз аПцпей Ьепчееп рагаПе! е!естгойез 1п а 1агце тап)с оГ ЬиКег. ТЬе типе гег)и!гей Гог сошр1ете тгапзуег йерепсЬ оп гЬе з!хе оГ ТЬе Тгацшептз оу РХА, ТЬе рогояту оутЬе це1, апс1 ТЬе зтгепцтЬ оу ТЬе арр!тей 6е!й, Нотчечег, Ьесаизе ечеп Ь)цЬ-пю1еси1аг-тче!8Ьт пис1ек асЫз и )цгате ге)аггее)у гарЫ!у 6 отп гЬе це1, йериппатюп!Ьус1го1уяз !з иппесеыагу апй тгапзГег гз цепегаПу сошр!ете мг!тЬ- !п 2-3 Ьоигз.
Весаизе е1естгорЬоге6с сгапзуег тес)и!гез согпрага6че1у 1агце е1естпс сиггепгя П !з ойеп сПКки!т то шатптатп тЬе е!естторЬогеяз Ъийег ат а тешрегатиге сотпраПЫе тч!тЬ еубс)епт сгапзуег от" Р)в)А. Мапу сопипегс)аПу ачат1аЫе е!естгорЬоге6с тгапзуег шасЬ)пез аге ес)шррей тч!тЬ соо1шц йеисез, Ьш огЬегз аге еКесйче оп!у тчЬеп изей !п а со!й гоотп.
1псгогсисг!ои |о Рт|осо1я 8, 9, апг) 10 6.37 Часисспч Тгап8Гег Г))ь)А апс! ПХА сап Ье сгапьГегге|1 гарЫ1у апс) |!иапПсаПче1у 6от Ве!ь ипс!ег часии|п. Вечега1 часишп сгапяГег с!ен!сеь аге по|ч сопппегс!а)! у анаПаЫе |и снЬкЬ йе 8е! !я р!асесс Ы сопсасс чч!й а пПгосеПи1ояе ог пу!оп тегпЬгапе яцррогсес! оп а рогоиь ьсгееп очег а часишп сЬагпЬег. Вийег, с)гасни Гго|п ап иррег геьегчо!г, е!исея пис1е|с асЫь 6оп| йе Ве1 апсс с)ероя!ся йет оп йе гпегпЬгапе. Ъасицт сгапьГег шпиге еГВс!епс |Ьап сарП!агу сгапяГег апс) !я ехсгеп|е!у гарЫ.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
