Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 143
Текст из файла (страница 143)
НЯЬ-тоЕеси!агачегцЬ1 0МА ео!ийои, ге1егепсе е(алдагд (700 ифп! гп ТЕ) А 0НА лоЕлюп о( Ииоил сопсеп1ганоп В гецьгед |о сопл|снег а леапдагд снгче. Весенне гле ЫпйпВ о1 ниесли 33258 дуе Ю 0МА В |иЯиепсед Ьу ЕЬе Ьале соврол|1юп, |Ье 0МА нлед го соплинсГ йе лглпдагд сигче ллон(д Ье 1гопь Иъе лаве лрес)ел аъ Иъе генг лавр)е. Е!иотгпе(ег, е|ТЬег Яхес! ъчаче!елей ог есаип|п1$ тоде! Ме1Ьос1 1. Тигп оп Яге Яиоготе(ег 7 Ьоиг Ье(оге Яъе ааеау 'ь сагпед ои( (о аИоч Яъе гпасЬве (о ъчагт ир апд 3(аЫИхе. ЧгЬеп Ьонпд |о ЫЯЬ-во(еси)аглче)ВЫ донЫе-4|гаидед 0МА, Ноес631 33258 дуе аЬюгЬл вадгпаИу а1 365 пв апд ев)Ь вах)ва((у а1 458 пт. 2. Ргераге ал арргорпа(е агпоип( о1 гйи(ед дуе ео(и((оп (50 р! о1 сопсеп(га(ед 11уе 30(и6оп рег 7 00 т! о1 Яиогогпе(гу Ьийег). ЕасЬ (иЬе ю 1Ье 0МА алаау гес)и)ген 3 гп! о1 сйи|ес1 НоесЬ51 33258 дуе 30!обои.
Тгапе(ег 3 гп! о1 сйи(е1$ дуе ао(ибоп (о ал арргорпа(е пигпЬег о1 с|еап 6|аль (иЬеь 1пс|иде 3(х ех|га (иЬее 1ог а ЫапИ апс! 1Ье 3(апдагд сигче. 3. Ргераге а 51апдагд сигче Ьу адд(пЯ 7 00, 200, 300, 400, апд 500 пц о1 цепов|с 0МА 1гот ЯЬе ге1егепсе ~ 51осИ 30(и1юп (о |пйчдиа! (иЬеа. М|х апд геад ЯЬе аЬ|югЬапсе оп ЯЬе ргеъчаггпед Яиогогпе(его1еасЛ 10Ье | 'илгпейа(е|у айег адй6оп о1 (Ье 0МА.
4. Адд 07 и! Яе., 1 р! о1 а 7:10 й|01юп), 7.0 и(, апд 70 и! о11Ье ргерага1юп о1 делов|с 0МА, ъчЬоае соп-, сеп(гадал 'ь Ье|06 де(еггп|пед, 1о |пйчдиа| 10Ьеа сопса|и|пЯ ей|и(ед дуе 30$01$оп. 1гпгпесйа(е|у геад 1Ье ! Яиогеесепсе. 5. Сопе1гис( а 3(апдагд сигче р)ои(пц Яиогеасепсе оп (Ле огйпа(е (у ахь) апд ъче)ЯЬ1 о1 ге(егепсе 0МА Яп ( пц) оп |Ье аЬес|еьа (х ахь). Е81(гпа(е |Ье солсеп(га(юп о1 0МА |п (Ье ипулоъчи аатр)е Ьу |п(егро1адоп. 6|Ье геайи8 Еог ЕЬе нп|ъпоъчп Яеиов)с 0МА ло(нг)оп ЕаИл онгл(де |Ьаг о1 |Ье лгаидагд сигче, геад Фе Янигелсепсе о( а гиоге сопсепггагед лавр(е ог ва)ъе ап аррврпаге й|шюп оЕ 16е лавр)е апд гереа1 16е агьау. В|пйпВ о1 Ноесллг 33258 ь адчегле)у |пЯиепсед Ьу РН ех|гегпеЫЬе ргелепсе о1 дегегЯепЬ пеаг ог аЬоче ЕЬе|г сп1|са! пнсеИаг соисепгга1юию апд ла)1сопсепггаг(опл аЬоче 3 м.
|ЕЕЬеле сопи(1)опл ог геацепгл аге илед Ю ргернге йе Иепипъ(с ОНА апд (вргииаЫе геен|и аге оЫа|иед (п гле Ииигогпеггу аълау, ргес)р)гаге ап а$к|ного1 16е 0МА ргерагадоп ъч16 е16аио|, г(пле гле реИег о1 лис|ею асЫ (п 70% егЬапо|, йгьо|че 16е дпед реИег |и ТЕ, апд гереа| ЕЬе агьау. 61Ье ргерагаиоп о1 гел10МА и ЫВЫу ч)леони лагирИи8 ъчй хгапдагд уеИоъч1(рл иъау Ье ло Епассига|е |Ьаг |Ье ййдопл о1 нпИпоъчп 0МА ъчлИ ло1 1гас(ь ъч|16 |Ье гпапдагд снгче. |п гйл сале, 16е Ьеса ло(нгюп ь го илгЛ- дгаъч Еъчо лавр)ел (70-20 ИИ ил36 ап аигопъадс р$реиег еИЫрред ъчлТЬ а снг-о6 уеИоъч Яр, Еаси лавр 16еп йИЛед ъчл16 -0.5 иъ! о1 ТЕ (рН 8.0) аид чог|ехед ч|Вогонл(у 1ог 1-2 инпн1еь 0$6егеиг апъоипЬ о й|нгед лагпр)ел сап |Ьеп Ье ггапдеггед Ео 16е |пйчйиа| гниел сипнъ(и(пВ йИЛед дуе ло(н1$ип.
Тие ге оЬЕа(пед !гоги СЬе Лчо легн о1 лавр(ел хлои(д Ье сопл(лгеи1, С)ле лс(гьогл ог а до8 паИ сИррег (е.8., Гьлег) |о Веиегаге сн|-о6 уеИоъч Ирь АИегпаиче|у, 16е 1(рл са снг ъчл|16 а лЬагр гахог Ыаде. 51епИхе 16е снг-о6 1)рл Ье1оге нле, еИЬег Ьу ан|ос|ачпЯ ог Ьу Еввегл(и 70% а|соли| 1ог 2 в)лиген ЕоИоъчед Ьу дгу)пВ (п а$г. Ргелгег|$|хед, ъч)де-Ьоге 1(рл саи Ье рнгсЬалед Его пивЬег о1 сопниегс|а! соврал)ел (е.ц., В)о-аад).
Тле агьау сап Ье саед |о веалнге ЕЬе сопсепггаиоп о1 0МАл ъчиоле яхел ехсеед -1 ЕЬ. Носе|и|33 Ь|пдл ранг|у го лваИег 0МА ЕгаВвепгь Рго1осо! 2 ! ю1а6юп ог Н~дЬ-гпо1еси1аг-юе~дЬ1 РМА ггогп Магпгпа!~ап Се! 1ь 0ыпц ГоггпагпЫе н!8 аотосос ь А моо!11САт!Рн Ре тне Раосеосае ое КРР!ес ег а1. ( !082) агЫгпчо)чеа йцеагюп оЕ сеца апг1 11ааиеа чч1!Ь ргогешаае К, г)!хаос!аг!оп оЕ РХА-ргосе!и сошр1ехеа (сЬгошаНп) ич!Ь ЬгцЬ сопсепггагюпа оЕ ЕоппашЫе, апг! гешоча) оЕ гЬе ргогеаае апг) огцапк 801чеп! Ьу ехсепяче с)1а!уяа йгоицЬ со!!ос)1оп Ьаця РоппашЫе !8 ап !ошг!пц ао1чепг йас Ьой с1ьаосгагеа рго!е!и-РХА сошр1ехеа апй аиЪаег)иепс!у, с)епа!игеа !Ье ге1еааег! ргоге!пя Ноччечег, Ь г)оеа пог яцшйсап11у аЕЕесг йе асг)ч!гу оЕ ргоге)пабе К.
ТЬе цепоппс РХА ргерагег) Ьу й)а ргосег)иге !а 1агце (>200 ЬЬ) апд аи1!аЫе Еог гЬе сопа!гиспоп оЕ 11Ьгапеа ш ЫцЬ-сарае)гу чесгога апд Еог йе апа1уяа оЕ 1агце РМА Егацгпепь Ьу ри!аед-Еге!0 це! е1ессгорЬогеяа. ТЬе ше!Ьог) Ьаа гтчо с)!аас)- чапСацея (!) 11 тес)и)геа пюге гипе 1Ьап ойег ргосег1игеа апг! (2) йе сопсепггаНоп оЕ РМА !и 1Ье Впа! ргерагаНоп 18 !огч (- ! 0 рц/гп1). Арргохипаге1у 1 гпц оЕ Ь)цЬ-пю1еси1аг-гче)цЬ1 РХА сап Ье ргерагег) Егот 1 х 108 си11игег) апеир1оЫ шапипа11ап се!18 (е.ц., НеЕа се!18). МАТЕВ1Ас5 СА12Т!ОМ: Р!еаае аее Аррепг)!х 12 Еог арргорпа1е Ьапг)!!пц оЕ та!ее!а!а шаг!гег) чч!Ь <!). ВНЕЕег8 апд йо!оЕ1оп8 Р!еаае аее Аррепсцх 1 Еог согоропеп18 от 81ос!с ао)и!1опа, Ьипегя апг! геацеп1я Р!1и!е а!ос)г ао106опа 1о йе арргорпа1е сопсеп!га1!опя Р!а!уяа ЬиЕЕег 7 20 агМ Тпа-С! !РН 8.0) 0.1 м МаС1 10 гпм ЕРТА !рН 8.0! Ргераге б 1Пега оЕ Р!а1уяа Ьоутег 1.
йоге аг 4'С. Р!а/уа!з ЬиЕЕег 2 10 гоМ Тги-С! !РН 8.0) 10 гом Ыас! 0.5 шм ЕРТА !РН 8.0) Ргераге б 1аега оЕ Р!а!уяа ЬоЕЕег 2. 8юге аг 4 С. 6.14 СПаргег 6: Ргерагалол алт/Апа/уяв о/ Еи/тагуопг Селит/г РНА Еогтатг6е дела(ига!гол Ьи//ег 20 гпм Тпв-С! (рН 8.0) 0.8 м Ь(аС! 80ча (ч/ч) ЕоппагпЫе <! ) Мапу ЬагеЬев оЕ геа8епг-Вгат(е ЕоппатпЫе аге виЕВе!епг!у риге то Ье шее ш!тЬош ЕиггЬег ггеагптепг. Новчечег, т( апу уе1!отч со!ог Ь ргевепг, гЬе ЕоппаптЫе вЬои16 Ье г!еюпгает( (Еог ргогосо1, р!еаве вее Аррепйх 8). УЕ (рН 8.0) Се!ь Ри/вег/-Еге/6 ее/ (СПаргег 5, Ргогоео/ 7 7 ог 78) ог 0.6га аеагове де/ /ь/ос!е!с Ас((Ь апд О!коппс!ео1!г!е8 элеат тологлегв алп/ еолеагетегв о/ Ьае(еггорПаее Х РА/А (р(еаве вее СПар(ег 5, Рго(оео/ 76) прес!а! Ецо!рп7еп1 8/елг/ег ит/ГП ь(а(л/еьз в(ее/ гол(атлет (Еог Г/ввиев) СоПод/ол Ваав ТЬе роге яае о( тЬеве со1! орпоп Ъар Ь 8 птп, вчЫеЬ !в ыйк!епг го а11отч т(епагигет( ргогетпв о( шейшп яхе го т(!Е(иве гЬгои8Ь гЬе Ьа8в Жг!п8 т(!а!ув!в.
Со!! орбоп Ьа8в аге вирр!!ег( Ьу Ваггопы ш 20чуч егЬапо(. Ве!оге ые, гЬеу вЬои18 Ъе г!пает( гЬогои8Ыу ш Р!а1ув!в ЬиКег 2, апт( гЬеп !шгпегвет( тп 100 гп1 о( гЬе Ьийег Еог ЗО тптпитев. Со!!от(!оп Ьа8в аге шаг(е Егош рутоху1!и, чгЫеЬ !в еЫейу пагоее1!и1ове, т((вво!чет( ш етЬапо1)егЬег. ЪЧЬеп гЬе вугиру во! ипоп Ь вргеат( гЬтп!у очег а вигЕасе апг1 а1!отчет( го ев арогате, Ь (еачев а тон8Ь, ггапврагепс ВЬп тЬаг сап Ъе пю!йет( шсо Ьаая рог птапу уеагв, 1!т(и!т( со1!огпоп тчав ивет( ав а во1чепс Еог тчагт апт( согп тегпочегв виеЬ ав ва1ку!тс аеЫ. Сиг-о// уе//ои Нрх Сит-о(Е уе!1овч Врв сап Ье 8епегатет( гарЫ1у ъ!гЬ а веЬвогв ог а г(о8 пат! е!тррег (рЬЬег 05-40!А).
А1тегпаггче!у, тЬе ро(пгет( епт1в о( гЬе Ирв сап Ье гепточет( ъч!гЬ а вЬагр гавот Ыа<(е. ТЬе сит-о6 гтрв вЬои1т! Ье вгеп1гаей Ье!оге ые, еЬЬег Ьу аигое1ачап8 ог Ьу шипегяои тп 7080 а1соЬо1 1ог 2 пшшгев !о1- (отчет( Ъу т(гу!тт8 тп атг. Ргевтег!1!хег(, чгЫе-Ьоге Ьрв сап Ье ригеЬавет( Егопт а пшпЬег о( сопипегста! согпрашев (е.8., В!о-Каа). Р/а/уяь ГОЬ~л8 е//рв Врет!та Рог е1овигев Еготп Врееггиш Мегоеа! !пт(ивгг!ев, Нож!оп, Техав. С/авв гог/ Яагег Ьа(П ог /леиЬа(ог ргевег го 75 С Ура(ег Ьа(П ргеве( Го 50'С Се!!5 апг! Т!88оеь Моло/ауегь ог виврелв(олв о/ татта//ал се//в, ог 6евП Г/ввие, ог Ыоод ватр(ев Адй6опа! Кеацеп/8 Матег(а/в алт/ ег/и/ртелт ивет/ т 5терв 7 — 4 о/ Рготоео/ 7 ТЬе гпасепа!в апт( еои!ргпепс гет(и!гет( т(ерепт( оп гЬе гуре оЕ вгаг6п8 птагепаЬ Ыоот(, еи1гигет( ее1Ь, ог гьвие (р1еаве вее Ргогосо! 1). МЕТНО0 7.
Ргераге 1увасев о/ се!! впврепвюпв (ог Егокеп се!! Роччт(егв) ав г(евспЪег( ш 5!ерв 1 — 4 оЕ Рго!осо! 1. 2. Соо1 !Ье во1ипоп сопгаш!па 1увег1 сей апг( 1уяв Ьи/уег го 15'С. Рог ечегу 1 ш! оуее11 1ува!е, атЫ 1.25 ш! оЕ Еогшаш(т(е т/ела!ига!!Оп Ьи/уег, апт( пих (Ье во1шюп аеп((у ияпа а ц1авв гог!.
Ягоге (Ье во!и!юп 1ог 12 Ьошв а( 15'С. Ртогосо! 2: 1ю1адол о) ЕЕтчЬ-то!еси1ат-ъче!еЬ| РИА Егот Матти)тал Се))з (7я(лч Роттаттде 6.15 3. Роиг сЬе чсясоия 801идои !исо оие ог тоге со11ойои ЬаВК 5есиге йе орел еид оЕ сЬе Ьац ъчиЬ а д(а1уяя с1!р аид йа1уге сЬе ю1тюи Гог 45 инписея ас 4'С !и 2 1!сетя оЕ Р!а!уяя ЬиЕЕег 1. Кер1асе йе ЬиЕГег ичсЬ ЕгеяЬ Р|а1уяя Ъийег 1 аид сопстие йе д!а1уя)я Еог ас 1еая 4 Ьоигя, Е011оъчед Ьу а 6|гсЬег 4 Ьоигз !и а й|гд 2-16ег а!!с)иос оЕ Р!а!уяя ЬиЕЕег 1. ТЬеи йа1уге сЬе РМА а8а!пяс 2 1Кегз оГ ГгеяЬ Р!а1уя(з ЬиЕГег 2, йгее Кисея, Еог ас 1еая 4 Ьоигя еасЬ.
Ьда1уыз !псетчаЬ зЬои!д Ъе 45 пиписея Сот сЬе 6гзс Ьибет сЬап8е апд 4 Ьоитз Еот а!1 зиЬзет)иепс сЬап8ез. А соса1 д!а!уз!я силе оЕ 24 Ьоигя !з гет)и!тед со геп|оче ртосе|пз Етоп| |Ье РХА ей:сси е1у. Еот а дезсирсюи оГ а сопчеп!еис апд шехрепзХе дейсе Еот Ьо1йп8 сЬе со1!ойоп ЪаВВ р!сазе зее Кир!ес е| а1. (1987). 4. Меаяиге йе соисеисгасюи оЕ йе РМА. !с и ойеп й|6си!с со шеазиге сЬе сопсепстадоп о( 6!8Ь-шо1еси!ат-ъче(ПЬ| РХА Ьу ыапдатд п|есЬ- одз яисЬ ая аЬюгЬапсе ас 260 псп.
ТЬВ !з Ъесаше |Ье РХА яо!шюп и попЬопю8епеош апд шиа11у ю чисош йас !с !я ипрозяЫе со ъч|йдгаьч а тертезеисадче затпр!е Сот апа1уяз. ТЬезе ргоЪ- !ешя сап Ье пиши|Нет! Ьу ъч|й|Ьаъч|п8 а !ат8е яатпр!е (!Π— 20 и1) ъч|й ап аисотиадс р|рессет ет)и!Рред чдсЬ а сш-о6 уеВоъч с|р.
ТЬе заспр!е В |Ьеп й1исед ъч!ЕЬ -0.5 тп! оГ ТЕ (рН 8.0) ап|1 чотсехед ч|8отоиду Гот 1-2 пиписез. ТЬе аЬзотЬапсе о(сЬе й1исед зап|р!е сап |Ьеп Ье геад ас 260, 270, апд 280 пп| |п сЬе ясапдагд ъчау. А яо1исюп ъясЬ а ча!ие оГ ! (А, „п|еаютешепс) сои|а|из -50 и8 оЕ РХАйп!. Хосе йас езсииасея оЕ раису оЕ пис1е|с ас|дз Ьазед оп ОР „:ОР „тасюя аге ипте!|аЫе (61аяе! |995) апд |Ьас сад|пасе| оЕ сопсепсгадоп аге шассшасе !Г сЬе яап|р!е соша!пз ы8п!6сапс апюипь оГ РЬепо1. Н„О яасигасед ъчВЬ рЬепо! аЬяогЪз ъч!сЬ а сЬатассеиядс реа1| ас 270 пш аит! ап ОР,:ОР, тасю оЕ 2 (5си!и!8 апд Ап|Ьег8ег |994). Хис!е!с ас|д ртератасюпя |гее оЕ РЬепо! (аз |и сЫз ргососо1) зЬои1д Ьаче ОР,„:ОР „гадоз оГ -!.2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
