Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 141
Текст из файла (страница 141)
Ночгечег, яиапс)ассам 81азз ргрепез сап Ье тес)!) 7Ьеу аге атос!ачес) ш 1Ье ччгоп8 опепгагюп ячиЬош сопоп р1иаз. 5ресьа СеПВ апс! Т155ое5 Мало)ауегь ог ьиьрельюль о) таттаПал ееПь, ог )геьП Нььие, ог Ь)оос) ьатр)еь Мос!е!с Ас!4Ь апе! О!коппс!ео6де5 Вае1ег)орПаВе Х Р)чА, гл)ае1 Рип)у ) )5ХА аь с)еясг)Ъес) ш СЬаргег 2, Ргогосо1 11 ог 12. ТЬе Р)4А Ь изес) аз а Ыхе ягапс)аг8 с)иг)п8 Ве1 е1ессгорЬогеяз )р!еазе яее 51ер !! ). бб СЬаргет б: Ртерата6оп апйАпа!уйз оЕЕи/сатуоггс Сепот!сР/0А МЕТНО0 Ве1олч атеЕоит а1/етиапче четз|опз оЕ 5/ер 1 изей то 1узе й/Яетеп! |урез оу се11з от 71ззие затр!ез.
Еузе тЬе чета|оп аррторт|атеЕот тйе татеНа! ипйет зтийу апй 7Ьеп ртосеей то 5/ер 2 оп расе б.9. Еу8!ь оЕ Се!!5 Стола/!пе |п Мопо!аует5 Адд!попа! Матег!а!з Азрааиоп деч!се аиасЬед Го а часиит Впе ег/и/рред чи(Ь тгарз Вед о/!се !аде епоицЬ то ассотилодаге 70-72 си/(иге д/зЬсз Ег!ептеует Лаз/с (50 ог 7 00 тп0 ЯиЬЬет ро!кетпап 5огчаИ сепии/|ае, Н70008 гогот (ог едитча!епо апс! сеп|п/и8е |иЬез соо!ес/ |о 4 С тт!з-Ьи/Еегед з|//пе (ТВ5), к'е со/д 1.
1узе се!1з Вгочч)08 ш пюпо!ауег си1|игез. !| Ь Ьез| |о |чог!с лч!|Ь Ьа|сЬез о/ !Π— !2 си!|иге д!зЬез а| а типе. 5|оге йе ге|паиип8 си1шге гН|Ь- ез |и |Ье |псиЬа|ог ип|Н йеу аге гецшгей а. Та1|е опе Ьа|сЬ оЕ сиЬиге д!зЬез, сопла)п)п8 се!1з Вгоччп |о сопбиепсу, Егоги йе шсиЬа|ог апд ппгпед)асе1у гепюче йе гпеебши Ъу азр)габоп. ХогЫп8 |)шсЫу, ъчазЬ гЬе пюпо1ауегз оЕ се!Ь гчч!се чч17Ь ~се-со1д ТВ5. ТЬВ 1з тпоз! еая1у ассо|пр1ВЬед Ьу Вепг!у р!Реп|п8 -10 тп1 оЕ ТВ5 оп|о |Ье 6гз| топо!ауег.
5|ч)г! йе д)зЬ Веп(!у Еог а Еечч зесопдз апд йеп 6р йе Вш|1 шсо а 2-!пег Ьеа1|ег. А|Ы апойег 10 гп! оЕ ке-со!д ТВ5 апд згоге йе гбзЬ оп а Ьед оЕ !се. Кереа! йе ргоседиге ип6! |Ье еп6ге Ьа|сЬ оЕ пюпо!ауегз Ьаз Ьееп ргосеззед. Ь. Т)р |Ье Вшд Егогп |Ье 6гз| гпопо!ауег !и|о |Ье 2-16ег Ъеа1|ег. лзепюче йе !аз| сгасез оЕ ТВ5 Его|и йе си!|иге сбзЬ Ъу азр!га|юп. АсЫ 1 т1 оЕ ЕгезЬ 1се-со1д ТВ5 апд з|оте йе д)зЬ оп а Ьед оЕ ке.
Кереаг йе ргосе|1иге цп61 |Ье еп6ге ЬассЬ оЕ пюпо1ауегз Ьаз Ъееп ргосеззед. с. ()зе а гиЬЬег ро!кетап |о зсгаре гЬе се!!з 6огп йе 6гз| си1шге сВзЬ )п|о |Ье 1 гп! оЕТВ5. ()зе а Раяеиг р)репе |о |гапзЕег йе се!1 зизрепяоп со а сепгг(Е08е |иЬе оп ке. 1гптесВа|е1у ччазЬ 7Ье сиЬиге сы| ччЬЬ 0.5 |п1 оЕ ке-со1д ТВ5, апд согпЬ|пе йе ччазЬ108з лч17Ь гЬе се1! зпзрепяоп 1и |Ье сепгг16|8е шЬе.
Ргосезз |Ье геша)п)и8 пюпо1ауегз |и йе залпе ччау. |1. Кесочег |Ье се1!з Ьу сепгг)Е08абоп а| !5008 (2700 гр|п 1и а Ботча!! Н!ОООВ гогот апд злч!п8!п8 Ъис1|е|з) Еог !О |и/полез а| 4'С. е. Кезизрепд |Ье се1!з ш 5 — 10 чо!шиез оЕ ке-со1д ТВ5 апд гереа| йе сепгг1678адоп. Е.
Кезизрепд йе се11з !и ТЕ (РН 8.0) а| а сопсеп|га6оп оЕ 5 х !07 се1!з/ш1. Тгапзуег |Ье зо106оп со ап Ег!ептеуег Ваз1|. Рог ! |и! о(сеН зизрепяоп, изе а 50-и|! Яаз1с; (ог 2 ш!, ые а |00-гп! Яаз/с, апд зо оп. ТЬе |!сия|у о( сеНз 8гоччп аз а |иопо1ауег сиЬиге (Его|и 5|ер а аЬоче ! чдН чагу чдй |Ье сеН суре апд сиЬше сопгНиопз. Аз а ги!е о( |ЬшпЬ, а сопйиеп| сопппиоы сиЬиге (е.8., о( Неса ог ВНК сеНз) Нго|чп оп а 90-шш си!|иге сН|Ь сои|а!пз оп ачега8е ! х !Оз |о 3 х !Оз сеНз/сш'. д. А|Ы 10 гп1 оЕ1уяз Ъ|лЕЕег Еог еасЬ пп1666ег оЕсе1! зизрепяоп. !псиЬа|е |Ье зпзрепяоп Еог 1 Ьоиг а! 37'С, ап|1 7Ьеп ргосеед ипп|еебаге1у го 57ер 2 (р.
6.9). Ма(се лиге |Ьа| |Ье сеНз аге ъчеН сНзрегзед очег |Ье |ппег зш/асс о( йе Вг!епп|еуег Наз/с |чЬеп |Ье !уяз Ьиоег и а|Ые|!. ТЬЬ гНзрегза! ш!и!ш!лез йе Еоппа||оп о( |п|гас|аЫе с!ишрз о(/ЛНА. Ргогосо! Н Его1апоп о) Н(цЬ-то(еси!аггее(цЬ( РХА ф огп Матти((ап Се1Ь (Еяпц Рго(е(паге К апг( РЬепо! б7 !уб!ь оЕ Се!!ь Сгочч(пц (и Бцьрепь!Оп 1. 1уае се!1а цгочч!пц (п аиарепяоп си!гигея а. ТгапаЕег йе се!!а со а сепг!Еице (иЬе ог Ьоп1е апд гесочег йегп Ъу сепгпуицагюп аг 1500ц (2700 гргп !и а Богча11 Н100В гогог апд ачч!пц(пц Ьис)се(а) Еог 10 т!пи(ее аг 4чС. Кегпоче йе аирегпагапг тесцшп Ьу аар!га6оп. Ь.
чЧааЬ йе се!1а Ьу геаиарепд!пц йет !и а чо!шпе оЕ!се-со1д ТВ5 едиа1 (о йе чо1шпе оЕ йе опц!па! си1(иге. Кереас йе сепгп(ицагюп. Кегпоче (Ье ягрегпагапг Ьу аар!гагюп апд йеп цеп(1у геаиарепд йе се1!а опсе тоге т !се-со!д ТВ5. Кесочег йе се!1а Ьу сеп(г!Вгца(!оп. с. Кепюче ЕЬе аирегпа(ап( Ъу ааргга6оп апд цеп(1у аиарепс1 (Ье се!!а гп ТЕ (рН 8.0) аг а сопсегига6оп оЕ 5 х 1Ог се11а(т1. ТгапаЕег (Ье аиарепяоп го ап Ег1етпеуег Йаа)с. Еог ! т! о( сец аиарепагоп, ые а 50-гп1 Ваа(г! Еог 2 гп1, пае а !00-гп! Йаа)г, апд ао оп.
ТЬе депягу оЕ се1!а Пгокгп !п анрепа!оп (Егогп Епер а) чд!! чагу кч(Ь йе се!1 суре апг! сп!гше сопйпопа. Аа а пл1е оЕ йпгпЬ, а аагшагед апарепагоп сп1гпге о( а сопдппоы се1! 1гпе (е.ц., о! НеЕа ог ВНК се11а) Пгочгп !п а Е-!((ег сп!гиге сопса(па оп ачегаце ! х !Па се!!а(т!. й Агы 10 т! оЕ!уяа ЬиЕЕег Еог еасЬ пн1И(гег оЕсе!1 аиарепа(оп. 1псиЬаге йе гю1шюп Еог 1 Ьоиг аг 37еС апг1 йеп ргосеес1 птипесцаге1у (о 5(ер 2 (р. 6.9). Ма)ге апге йаг (Ье се!!и аге кге!! йарегаед очег гЬе гппег аог(асс о( йе Ег!епгпеуег Яаа(г гчЬеп гЬе !уяа Ьи((ег ь аддед. ТЬЬ д!арегаа! ппп(ппаеа (Ье Еоппадоп о( !пггассаЫе с!шпра о( ггХА. !уВ(ь о1 Т!55(ее Багпр!еь Весаиае г!ааиеа цепегаПу сопгагп!агце атоипга оЕ 6Ъгоиа тасепа1, Ь !а д(Е6си1( го ехггасг цепопис ()ХА Егот йеп! !и ЬгцЬ у!е1й ТЬе еццс!епсу оЕ ехггас6оп га цгеа(1у ппргочес1 (Е (Ье Вааие !а гедисед (о роччдег ЪеЕоге Ьотоцепгха6оп !и 1уа!а Ьийег. 1Е а 1агце агпоипс оЕ ЕгеаЬ г!ааие ()! ц) !а ачаг!аЫе, рогчдег!пц сап Ъе ассотр!!аЬес1 чч!ГЬ а чггаг!пц Ыепс1ег.
Аг)д!11опа1 Ада(ег(а(а Веа(гег (25 тр ((ди(с( п((гоцеп ( ! ) ро(ургору(епе сел(с(егце (иье (50 т(( Га(соп ог едива(епг) Яаг(пд Ыепг(ег еди(ррег( чп(Ь а а(яп!съем а(ее( сап(а(пег ог Мог(аг апс( рея(е, ргесЫ(!ес( кп(й ((ди(с( п(ггоцеп (г В (гпропапг го соо! йе гпоггаг а(огч)у Ьу адд(пц агпаП агпоопь о( (к!Ыд п(ггоцеп очег а репой о( гппе. ЕППпц (Ье тоггаг со йе Ьпгп ог аиддеп(у (гпгпега(пц йе Пппд(пц рагг о( (Ье реаг(е (и Пди(д п(ггоцеп сап саоае (гас(иппц Р(аопц гЬе тоггаг (п ап 'ке Ьис(ге! (П(ед чч(й дгу (се (а а Вопд шау го ргесоо! ЕЬе гпоггаг Ье(оге адйпц гЬе Пдо(д п(ггоцеп. Ве сагепд шЬеп Вппд(пц Ьигпап апд рпгпаге г<ааиеа аа роччдегед аегоюц аге геадау депегагед, еарес(аау ччЬеп адд(пц Пди(д п(ггоВеп со ЕЬе тоггаг.
6.В СЛаргег 61 Ргерага6оп апд Апа!усдь оЕ Еи)сагуог(с Сепот!с ОЫА 1. Р01чеПге 1)ььие ьашр!еь. а. 13гор -1 ц оЕ ЕгеьЫу ехс)ьед 11ььпе шго 1щц!д и)ггоВеп !и 1Ье ыа!01еьь-Нее! соп)а!пег оЕ а ЪЧаг)пе Ыепдег. В1епд аС 1ор ьреед ипд! 1Ье 11ььие 1ь цгоипд Со а роъчдег. А1)егпадче1у, ьшапег Пнапппеь о( Пине сап Ье ьпар-(гоген Еп $)с)н)г) ппгоцеп апъ))Ьеп рн1- чег)гед го а рени)ег няп8 а шоггаг апй реь11е ргесоо)ед чдй $)с)н)д паго8еп. Ь.
АПоъч йе Пг)и)д п)ггоцеп !о ечарогасе, апд асЫ 1Ье роъчдегед 11ььие Пь Пе Ъу 1Пг!е То -10 чо1шпеь (ъч(ч) оЕ!угдь ЬиЕЕег 1и а Ьеа1сеи АПоъч йе роъчдег го ьргеас1 оъег 1Ье яьгЕасе оЕ йе !угдь Ьи((ег, апг1 йеп ьЬа1се йе Ьеа1сег го ьпЬгпегВе !Ье гпагепа1. с. ТА)Ьеп аП оЕТЬе ша1еда! 1ь )и ьо1идоп, 1гапьЕег 1Ье ьпьрепяоп То а 50-гп! сеп)ОЕ)ВегиЬе. 1псиЬаге йе 10Ье Еог 1 Ьопг а1 37'С, апд йеп ргосеед го 5!ер 2 (р. 6.9).
1.у5$5 оЕ В!Оое! Се!15 !п ГгеВЫу Огаччп ог Ггохеп Кап)р!е5 Адд!1!опа! Ма1еиа!ь Аод сага)е с(ехггоье ьо)идол В ГАСО) Г(ог ЕгеьЛ)у г(гаъчп ог Ггогеп Ыоод ьатр)еь) 0.48% чччч сппс аог) 1.32% ъч1ч ьог))нги с)!гаге 1.47% ъч)ч ИЫсоье Аьр(гаггоп с(еч$се аиасЛед го а часиит Ггпе ег)и(рред ъч)ГЛ !гарь ЕОТА Гап а)сегпагве Го АСО, Еог Егеьйу г)гаъчп ог Егогеп Ыоог) ьатр)еь) АСО, ап апг)соаан)апг )Ьаг Ы ньеа ъчЬеп ргераг)п8 Веиопас ОНА !гоги ъчЬо)е Ь)оог), Ы ьнрепог го ЕОТА )п ргеьепап8 ЫИЬъто)есн)аг-чче)ВЫ О)4А (Снаа(ьоп е1 а). 1987). Ноъчечег, Ь)оод и гиоге Ггег)иепИу со))есгеа )и согппъегс)аИу ачаИаЫе гнЬеь )Ьаг сопга3п пъеаьнгед агпонпе оЕ ЕОТА аь ап апнсоаИЫапг.
)п гиоь) Ьоьрпае )и 3Ье Г)п)гег)53агеь, Ыоод соИесИои ГнЬеь аге сопчеп$епИу со)ог-спаса го )иа)саге ъчЫсЬ санга)и апПсоаВн3апп аид ъчЬкЬ до иог: Рнгр)е-Горрег) гнЬеь солса)п апг)соахн)ап), ньнаИу г)г)ег) ЕОТА, ъчпегеаь уе))оъчгорред гнЬеь ао пог. )и ию)есн)аг с)оп)пИ, 1Ье !оппег (рнгр)е) аге ньед !о соИесг Ь)ооа (гоги и ЫсЬ Вепогп)с ОНА ъчиИ Ье ех)гасгед, ъчпегеаь )Ье )апег (уеИоъч) аге гур)са))у ньед го со)- )есг Ь)оог) 1Ьаг ъчИ) Ье ньеа аь а ьонгсе о1 )угпрЬосугеь Гог 'ппгпогга)ыагюп ъч)1Ь Ерьге)п-Вагг мгнь. 5нсЬ )шгиоаа))геа сеИь ргочае а гепеъчаЫе геьонгсе !гоги МкП )агхе агионпгь о( О)9А сап Ье Ыо)агеа Гог )агег нье )и, Гог ехагпр)е, цепеИс пнд)еь. РЛоьрЛаге-Ьибегед ьаВпе ГРВ5, Еог Вогеи Ыоог) ьатр)еь) ямча)$ Н10008 гогог (ог ег)и)чаlепг) апд сепгггиВе гиЬеь соо)ед го 4нС Гог ЕгеьЛГу с)гамп Ыоос$ ыпр)еь 5огча)! 55-34 го!ог Го Ига)ег Ьа!Л, а! гоогп 1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
