Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 136
Текст из файла (страница 136)
СЧе сурссаИу ые пр-гаеИо1аЬе!ег) дп81е-всгапг)ег1 ЬассегюрЬабе М13 ргоЬев (р!еаве вее СЬарсег 9, Ргососо! 5) ас а сопсепсгасюп о(5 х 1Ос со 6 х 1О' ерш)ш! о(ЬуЬпгИгзсюп Ьиу(ег со г!есесс а яп51е-сору репе (п а сошр1ех тапипа1гап Иепоше. А тегпЬгапе ЬуЬпеИаед 1ог 12-16 Ьоигв ш сЬь ТавЬюп ь гчавЬег! )п 500 ш! о(2х 55С сопса)шп8 156 (ъч/ч) 505 Тог 15 пиписев ас гоот сепгрегасиге, всгиЬЬед Иепс)у чдсЬ а вропИе, сЬеп гчавЬед сп 1 Исег о(0.5х 55С сопсасшп8 156 (чг(ч) 505 (ог 2 Ьоигв ас 68'С, апд йеп ыЪ)ессед со аисогад!обгарЬу.
Т)1ООВЕЕ5НООТ1)ЧС 1п Иепега1, йе таг(с о( а 8 юд е1ессгорЬогег)с гип ччЬеп верагабп8 гпагпспаИап Иепот!с ОНА сИИев1ед идСЬ а гевспсбоп епдопис!еаве 'ь 1Ье ргевепсе о1 а сопвсапс втеаг о( вса)пед ОЫА ехсепд(п8 (гот )ивг Ье1ош сЬе ччеИ со сЬе 1оччег геасЬев о1 йе Ие(.
А сопсеп1га1юп о( ОЫА а1 (Ье Ьопот о( 1Ье Ие( ь )пдкасйе Ы попвре- сИ)с де8гадаИоп о( йе Иепопис ОНА. ТЬ)в де8гадас)оп )в ивиаИу саивед Ьу соп1агп)падоп о( сЬе ргерагабоп сч)сЬ а попврес(Ис 014аве, счЬ)сЬ )в с(и)евсепс ччЬеп 1Ье ОЫА 'ь всогед 1п ТЕ, Ьис 'ь асбчасес) ироп !псиЬа1юп !п ап М8гс-сопса!0108 гев1пссюп епауте Ьи((ег. РЬепоЕсйого(опп ех(гасбоп о( йе ОЫА со гегпоче йе о((епд)п8 ОЫаве В оиС о( 1Ье циевИоп Ьесаиве сЬе 0(с(А 'ь егпЬегЫес1 )п ап а8агове р108. Ношечег, гесгеасгпеп( о( СЬе р108в сч!СЬ ргоге(паве К (оИоччед Ьу йе асЫсСюп о( РМ5Е ав с(евспЬед 1ог гпатгпаИап ОЬСА (п Ргогосо( 13 (51ерв 6-8) ог 1ог уеавС 0(4А )п Рго(осо( 14 (5(ерв 9 — 1 1) сап гепюче ОЫаве (гопг а Ьа1сЬ о( сопсат)пагад р!08в.
А(оп8 йеве Ипев, с1 'ь а Иоод Ыеа 1о сЬес)с аИ ргерага1юпв о( а8агове р108в ргерагес) !и сЬь ргососо( Ьу в! гпр! у спсиЬадп8 йе р(и8 й йе ргевепсе о1 а гесс пссюп Ьийег апд аЬвепсе о( гевспссюп епгуте. ТЬегеа(сег, ехагп!пе сЬе ОНА Ьу верагабоп СЬгои8Ь а ТАРЕ Ие( )п ччЫсЬ 60-весопд ри!ве йпев аге ивед очег а 20-Ьоиг е!ессгорЬогев!в гип. И йе 0(с)А !и сЬе р(и8 !в )о!асс, йеп чегу ИФ!е ОНА чч!И епСег йе Ие1 с(ипп8 СЬе е)ессгорЬогев)в.
Ноъчечег, И йеге ь а попврес!Исс ОНаве сопсат(папс, а сопв)дегаЫе агпоипс о1 ОНА счИ( епсег 1Ье Ие! апд Ье МьЫе а(сег есЫд!игп Ьгогп(де всади!08. И а (осив о( ОНА ь де(ес(ед )ивС Ье(очч йе счеИ а(гег гев1псгюп епхугпе сИИевгюп апд РГСЕ, йеп 11 тау Ье аввитед йаС йе гевСпсгюп епауте дЫ поС сИ8ев1 1Ье ОЫА 1о сотр1е1юл. Мапу о(йе гевСпсгюп епаутев ивед )п апа1ух!08 014А Ьу РЕСЕ Ьаче в!пес Ьи((ег гег)и)гегпепсв 1ог гпахапит асбч!су. Ма1се виге сЬа11Ье Ьи((ег гесопипепдед Ьу сЬе епгуте'в тапи(ассигег ччав иж1 апд йаС СЬе д)8евс!оп счав сагпед ои( аС СЬе ргорег 1егпрега1иге. А)1егпа1Ые1у, роог д)8ев()ол Ьу тоге СЬап опе епхугпе сап )пд!са(е а сйггу ОЫА ргерагадоп.
)п йь саве ав счеИ, сЬе соп1ап нпап1 гпау Ье геточед Ьу ге(геа(1п8 1Ье Иепотк ОЫА р(и8в идй рго1е!паве К апд РМ5Е ав девспЬес) 1ог гпагпгпаИап 0(ч)А )п Ргососо! 13 (5серв 6-8) ог 1ог уеавС ОЫА )п Ргососо! 14 (5серв 9 — 11). РГО1ОСО| 18 Ри1ьес1-Йе! с! Се! Е!ес1горЬогеыь иа Сопело< г-с!агпрес! Ногпоцепеоиь Е1ес1пс Г|е!с! Се!~ | Н СОНтОССК-ССАМРСО НОМОСЕНСОСС5 ССССтк!С Н8СЛ (СНЕГ) Пе!я СЬе е1ееСНе Пе!д !а Пепегагес! Сгош пш1Сср!е е!есггос)еа СЬаг аге аггап8ес) ш а ас)иаге ог Ьеха8опа! сопСоиг агоипс! СЬе ЬопхопСа! Пе1 апс! аге с!ашрес1 Со ргес!егегпипес! РоСеп6а!а (СЬи еС а!.
1986; чоПгаСЬ апсс Рач!а 1987; СЬи 1990а). А я!иаге сопсоы Пепегасеа е1есспс Псе16з йас аге опепсеП ас 68Ы ап81ез со еасЬ ойег; а Ьеха8опа1 аггау оу е1есггос!еь Вепегагеа Пе1дь аС ап81еь оу 120' ог 60', ПерепеПп8 оп йе р!асешепс оу сЬе Пе! апд сЬе ро1аНсу оу сЬе е!ессгос!ея Ву ыш8 а сошЬ)пасюп оР 1о1ч Пе14 асгеп8сЬь (1.3 Ч!снап), 1очч сопсепсга6опь оу а8агозе !0.698),!оп8 ьъчПсЫп8 !псегча1ь (! Ьоиг), апс1 ехсепс1ес1 рег!осЬ оу е1ессгорЬогеяв ! 130 Ьоигь), П !а рояПЫе со гено!че РЬСА шо!еси1еь ир Со 5000 1сЬ сп !епПСЬ (ЪЪПгаСЬ апс1 Рач)а 1987).
СНЕР Пе1ь сап Ъе ыес1 Со яхе РХА Сга8шепга ассигасе!у ш Пепогпк РЬСА апд с!о пос аи)уег Ргош сЬе ргоЫешв оу чегска1 Пе1 рояс!оп)п8 сЬас аге епс)ею!с со ТАРЕ 8е1я ТЬе РоПокбп8 ргососо1, аиррПес! Ъу Е1ьу !опеа (1)п!чегясу ос Техас 5оисЬи еасегп МеП!са! Сепгег, РаПаь), с1ея НЬев СЬе геьо1и6оп оу 1аг8е Пепопис РЬ!А шо!еси1ез Ьу СНЕР Пе1 е1ессгорЬогеяь, СоПосчес! Ьу Ыос6п8 апс! Песес6оп Ьу ЬуЪг!П!гас!оп. Ргососо!в 19 апс) 20 с)еьсг)Ье шесЬос!з сот ссю1а6п8 апсс гесочепп8 а рагски1аг РХА Рга8шепс геьо!чес! Ъу РРСЕ.
СОЬ)ОШОМ6 ГОК СНЕГ ЕЕЕСТКОРНОКЕ6!6 ТЬе яхе гап8е ш счЬ!сЬ спахипшп гено!и6оп оу РХА Сга8шепсь !а асЬ!ечес! оп СНЕГ Пе1ь с!ерепс)ь оп сЬе ри1ье сипе. 1п Пепега!, аЬогсег ри!ае сипев аге иаесс со аерагасе япаПег РЬ)А сга8- шепса апс) 1оп8ег ри1ье г!шея аге пьес! со ьерагасе !аг8ег РЬ)Ая ТаЫе 5-11 ргеаепса егпрспсаПу деСегпипед ри1ье апс) е1есСгорЬогеаа Сппеа Сог а 8!чеп яхе гап8е оР РХАа ияп8 а СНЕР арра- гасы Сгош Вю-Касс. Ойег с!еч!сеа гпау у!е16 а!сПЫ1у сНТегепс верага6опь Сог а 8!чеп вес ос сопгПсюпя ТЬе опепса6оп оу сЬе е!ессНс Пе!П ге!а6че со сЬе р1апе оЕ сЬе а8агоае Пе1, саПед сЬе Пе!д ап81е, сап Ье чапе6 Ьегччееп 90' апс! ! 20'.
1п Вепега1, СЬе япаПег СЬе Псе!6 ап81е, йе Разгег а РХА Сга8шепс оу а 8!чеп а!хе ш!Пгасев СЬгои8Ь сЬе Ве!. 5гпаПег ап81еь ((!05') аге Ьеьг Сот гезо!ч!п8 чегу!аг8е РЬ)А Рга8шепсз (> !000 КЪ), и Ьегеаь 1аг8ег ап81еа аге Ъеас сог гено!сбп8 япаПег РХА 6а8шепся 5.79 5.80 СЬаргег 5г Се1 Е1есггорЬогеьгь оу'РАНГА апс( Ри(зес(-усе!с(А5агояе Се1 ИессгорЬогеягя ТАВЕЕ 5-11 Сопя)16опь Еог 5ерагапп8 ОХАь оЕ 9гапоия 5схеь 1п СНЕГ Се!ь сс/см Тяме (НОиаз) 5о АсАЕОзе 512е Кахсе (1сЫ 5и'ятсн Тяме5 гагпрей 3-80 зесопс(я гашрей 6 — 80 весопс(в 60 весопсЬ, сЬеп 90 яесопсЬ гапсрей 30-180 яесопс)в 19о Газ! 1.апе 6-500 10-800 100-1000 18 20 15 9 24 0.896 Гая Еапе 150-2000 АВ се1з вге гнн ш О.ьх ТВЕ.
РЧЬен чегу ЬссЬ ссяо!нСюн Ь гес!Ыгегмн СЬе 800 — 20004сЬ гвнсе, в 1оччег чо1Свсе вн4 в!онсег гнп соне йвн сЬояе янйсвсед вЬочс вге ыей!Е йе и1я вге сви оасЬ 5еяаеш СТО всвгояе, все !0% со йе е1ессгорЬогезн сане югисясей ТЬе иье оЕ гашрес! ьсч!ЕОЫп8 репппь Вгеасег геьо1исюп оЕ РХА Ега8шепсь сспгЫп а В!чеп яхе гап8е. !и гашрсп8, ЕЬе зсч!ссЬ сипе ас йе Ъе8!пп!08 оЕ 1Ье е1ессгорЬогеяь гип !з йЕЕегепс 1гогп сЬас ас йе епс) оЕ ЕЬе гип. Кашрш8 с)есгеазез ЕЬе оссиггепсе оЕ а реси1!аг рЬепопзепоп сп ЕЬе е!ессгорЬогеяз оЕ !агВе РХАь, ш счЬссЬ чесу !агВе Ега8шепгз зошегппея ш18гаге Еаь!ег йап япа11ег РХАз (Саг1е ес а!. 1986; СЬи 1990а). МАТЕЫА1.$ СА()ТЮХ: Р!еаяе яее Аррепепх 12 Еог арргорпа1е Ьапс)608 о( гпа1епа!з таг1сес) сч!ЕЬ <! >.
ВиНег5 апс! ЬО166оп5 Р!еаье яее Аррепспх 1 Еог согпропеп1з о( я(оскс ьо1ибопя, Ьийегз, апс) геаВеп1я. 011и!е з(ос(с яо106опз !о йе арргорг1а(е сопсеп1га6опь. РепагиппВ ЬиЕЕег 0.5 Х ХаОН 1.5 м ХаС! ЕГЬяоВит Ьгот(с)е <1> Л РВ/т() ог ап арргорпаге сЕ(1иг(оп оЕ 5УВК Со)с( < ! > Гог а йзсияюп оЕ вса!шп8 а8агояе Ве!з, р!саяе яее Ргососо! 2. 0.5х ТВЕ Ве) е)ессгорИогез(з ЬиЕЕег Р!саяе яее ТаЫе 5-3 Гог 5х гессре.
Се15 НГВЬ-с(иа)Е(у абрагове ТЬе Ео11осчгп8 а8агозев Ггогп йе В!ОССгЫсса)сег Ьаче Ьееп гиес1 виссеяьй!1у чч!гЬ йЬ ргогосоЬ ° 5еа1сепя 6Т6 АВагове ° 5еа)серп 6016 А8агозе: А пюге ехрепяче а8агояе йас Ьагс)епя !псо а зсгоп8ег Ве1 шаспх йап 5еаЬегп 6Т6 а8вгояе апс) гес(осев е!ессгорЬогебс гип сипев -10ой се1абче со 5еа)сегп 6Тб. ° Гая !.впе АВагозе; А ЫВЬ-Вгас(е а8агояе сЬас Ь з!!866у 1еяз ехрепиче сЬап 5еа)сеш 6010 апс( ша!исагпз йе Газсег е!ессгорЬогесгс сЬагассег оГ йся а8агояе.
бе!в савс н4сЬ Гаяс Еапе а8агояе аге пос ая соиВЬ аз сЬояе псас)е счиЬ 5еа)сегп 6016 апс1 пшзг Ье Ьапс)!ес) вч!сЬ гпоге саге. 196 а8агозе 8е!в геъо1че ОХА Ега8шепсз !и а гап8е оЕ 10-1000 )сЬ, счЬегеав 0.8оа а8агозе 8е1в геяо1че ПХА Ега8шепся 1аг8ег гЬап 1000 )сЪ. Гог ЕнгсЬег я)оса!1з, р!еаве зее аЬоче Сонг)Жопз Гог СНЕГ Е1ессгорЬогеяь апс( ТаЫе 5-11. )ь)ис!есс Ас1!415 апс1 О1фопис!ео11Е1е5 РХА з)ге згапс(агс(з Р1еаяе яее 5гер 3. 5сапс(агс)з сап а1ю Ье ригсЬаяес( Вош сопипегсга! шапа(асгнгегя (е.8., Хесч Е08!апд Вю!аЬз, В!О-Вас), ог б!ВСО-ВКЫ. Сепопнс РХА оЕ тсегеяс Р1еаяе яее 5сер 3.
Ргососо! !В: Ри!зед-ЕзеЫ Се! Е1есггорЛогегйь сда Сопсоиг-с1атред Нотоцепеоиз Е1есггЕс Рйе!д бе!з 5.771 прес!а! Ей!о!ргпепй СНЕЕ де! аррагайик ТЬе аррагасы сап Ье сопзсгиссед аз дезсгсЬед Ьу СЬи Е199ОЬ) ог ригсЬазед соютегсса1!у. ТЬе Еойозчспц ргососо! зчаз гйече!оред Еог ые зчссЬ ессЬег йе СНВР 73К ог СНЕР Маррег аррагасы Егою Вю-Ваа Стси!ай!од ччайег ЛайЛ СНЕР Ве1з аге гип ас 14 С апд гесйийге а дедусе сЬас ЪосЬ с!гси1асез апгй соо!гпЬе е!ессгорЬогеяз Ъийег.
Майей ЬайЛ ргеьей йо 74'С АЕЫ!тсопа! Кеацеп$5 5йер 3 оЕ ЕЛ|к ргойосо! гесйийгек Яе геадепйк йкйес! т Ргойосоь! 73 ог 74, 75, апс! 76 оЕ ЕЛЬ сЛарйес 5серь 70 апд 7 7 оЕ ЕЛ|к ргососо! гес)и!ге Яе геадепйк 77кйед т СЛарйег 6, Ргойосо! В. 5сер 72 оЕ Я!к ргойосо! гес!и!чек Яе геаеепйк 77кйед !и СЛарйег 6, Ргососо! 70. МЕТНО0 йерагабоп ос !за Ггарпепй5 Ьу СНЕГ 7.
Сакс ап ацагоке це! оЕ сЬе арргорпайе сопсепсгасюп ш 0.5х ТВЕ Ьийег ак декспЪед 1и Ргойосо1 1. С)ке а ЪиЪЫе!ече! со епьиге йас йе сакйиц йгау Ь соспр!есе1у йас оп сЬе 1аЬогайогу ЪепсЬ. Айозч сЬе ае! со Ьагдеп Еог 1 Ьоиг ай гоош сепсрегайиге. 2. Р!асе йе айагоке це! ш йе СНЕР аррагасик, адд епоииЬ 0.5х ТВЕ со )икс сочег йе ие!, апс1 соо! СЬе гешашшц Ьийег Со 14'С. 3. Ргераге ацагоке р1ир сопсашйпй сЬе 13ЬЕА оЕ 1псегея 1Р1еаке кее Ргососо1 13 Еог ргерагайоп оЕ шапипа!сап Е7ЬЕА ог Ргососо! 14 Еог ргерагасюп оЕ уеакй Е7!зЕА ешЪеддед сп р1иак) апд саггу ош дсаексюп зчййЬ гекспсйоп епгушек ак декспЬед сп Ргойосо1 15. Ргераге апд еспЬед йе арргорпасе 13!к)А яге кйапдагдк ак декспЪед гп Ргососо1 14 ог 16. 4. Сепг!у р!асе йЬе р1ийк ш спгйчЫиа1 писгойзце йиЪек апд асЫ 200 сй! оЕ 0.5х ТВЕ йо еасЬ.
!псиЬасе сЬе р!ийк Еог 15 пиписек ас гоош сешрегасые. 5. ЕшЪес1 йе дйцексед апд ппкес1 13ЬЕА р1иик 1и Епс119Ыиа! и е11к оЕ йе це1. 5еа1 йе р1ийк йи сЬе и е!1к ъчйсЬ йе каше ко!исюп оЕ спо!сеп айагоке икед йо роиг йЬе ае1. 6. А)!озч йе кеа1ед р!иик со Ьагдеп ги сЬе ае! Еог -5 пиписек, апд йеп адд адсйсюпа1 0.5х ТВЕ Ьийег (ргечюик1у соо!ед йо 14'С сп 5йер 2) со йе аррагасик со сочег сЬе аиагоке ае1 сошр1есе1у.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
