Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 134
Текст из файла (страница 134)
Мсх сче11. 5. Чтагш СЬе се11 аиарепяоп Со 42'С. Мсх 5 ш1 ог йе ше1Сес! а8агоае чч!СЬ 5 пс) оГСЬе аиарепс)- ес) сеПя 5пг сЬе ппхсиге сч!сЬ а аеа!ес( Раяеиг рсрепе со епаиге йас сЬе се!18 аге ечеп1у с)!8- регаес) сЬгоиВЬоис йе а8агоае. 6. Ргрепе ог роиг сЬе пю1сеп пихсиге шсо рге1огшес) Р1ех(8!аа шо1с)ь (50-100 )с1, РЬагшас!а ог В!о-Вас)), ог с!гасе сЬе ппхсиге спсо ап арргорПасе 1епбсЬ оГ Тубоп сиЫп8 (Зт32-!псЬ шсегпа1 сКашесег) ог а 1-ш1 р!аабс ьугшбе Ъагге!.
5соге сЬе пю!сЬ Гог 15 пипи!ее ас гоош СеспрегаСиге, апс) СЬеп Сгапагег СЬесп Со 4'С гог 15-30 пппиСея 7. Ъйзеп сЬе ааагоае Ьаь аес, со!!есс сЬе р1иу ггош сЬе Р!ех!а1аа шо1й, ог Ыосч оис сЬе а8агоае сгош сЬе Туаоп сиЫпа ог аут!пае Ьагге1 (псо а Респ' йаЬ. Сис сЬе су!!пс)г!са! р1иаа спсо 1-сгп Ыос1ся ЕасЬ Ыос!с (50 и!) вЬои!4 соисаш -5 и8 о( уеаьс сЬгошоеоша) ВХА. 8. !псиЬаСе СЬе Ыос)са ш а сЬеписа1 6ппе Ьоос1 гог 3 Ьоига аг 37"С гп 3 чо1ишеа ог уеааг 1уа!а ЬиКег. 9. АсЫ 3 чо1ишеа оу Е ЬиКег сои!а!0108 О.! ш8/ш! Ргосе!паае К апд ! ете (ътlч) 5аг)соау! !псо а СгеаЬ РеСп' йаЬ.
Тгапагег йе Ыос)са Со СЫ8 ЬиКег, апс! шсиЪаСе СЬеш гог 3 Ьоига аС 50'С. Кер!асе сЬе ог!8!па! Йцеьс!оп пнхсиге сч!сЬ ап ес)иа! чо1шпе ог" ггеаЬ с(18ехс!оп ппхсиге апс) сопбпие шсиЬасюп 1ог !2-!б Ьоигь ас 50 С. Ее аь саге!и! ае роебЫе пот Со ьсаг СЬе ахагоье р!и8е мЬеи сЬаиббп8 ЬиКег ю!и!шип 10. 1псиЬ|Се йе р1088 аС 50'С ш 50 чо1ишеа ог ТЕ (РН 7.6) сои!а!и!08 40 сс8йп1 РМ5Е Айег 1 Ьоиг, гер1асе сЬе ог!8!па) Ппае ЪиКег (ТЕ сои!а!и!08 РМВР) ъч(й ап ес)иа! чо1шпе ог" СгеаЬ псе Ьийег апс! сопбпие (псиЬапоп гог апосЬег Ьоиг ас 50"С. 11. Регпоче СЬе Ппье Ьийег (ТЕ сои!а!и!п8 РМЕР), гер1асе ъч!СЬ ап ес)иа) чо1шпе ог СгеаЬ ТЕ (рН 7.б), апс! сопсшие шсиЬабоп гог апойег Ьоиг ас гоосп сешрегасиге.
ТЬе ахагоее р!ихе саи Ье зсогеб !ог кечега! уеагь ш ТЕ (рН 7.6) ас 4'С. р!и8е аге Ьеьс вгогеб Гог !оихег рег)обе ог" спие !и 0.5 хс Е)5ТА (рН 8.0) ас 4'С. СЧЬеп ша!!еб со ойег !аЬогасобез, р!ихе еЬои!4 Ье еЫрред ас гоотп сеп1регашге ш сиЬее 6!!еб сч!сЬ 0.5 м Е)5ТА (рН 8.0).
Рго1осо! 16 Маг!сегь гог Радес!-пеЫ Се! Е!ес1горйогеыь В еслнке ок !т5 слрлс!тч то 5н лклте ехткемегч гАксе могесг)ее5 о( РХА, РЕСЕ гег!шгеа шаг)гего оГ ехггегпе!у Ь78Ь гпо!еси1аг гче18Ьг. ТЬеае гпау Ъе оЪгашег! Ъу ехггасгш8 РЬ(Аа Егош ЬасгепорЬа8еь гшсЬ аа Т7 (40 )гЬ), Т2 (1бб )сЬ), апг! С (758 1сЬ) ассогсПп8 Го йе шеГЬог) оГ Еаиег еГ а1.
(1977). Нотчечег а Ьеггег аепеь оК шаг)гегь, гчЬ!сЬ аге ечеп1у арасег! очег а юЫег гап8е от гпо1- еси!аг гче)8Ьгя сап Ье 8епегагес) Ъу!78агюп оЕ ЬасгепорЬа8е )о РХА шго а пелагее) вепеа оЕ сопсатешегя ТЬе гоПоипп8 ргосег)иге га ап аг1арГаГюп оЕ ГЬе гпейог1 г)еьспЪег) Ъу ЪЪПгаГЬ апг1 Рач(а (!987). геааг сЬгошогюгпев, ргерагег! аь г!еаспЬег! гп Ргогосо1 14, шау Ье иаег! аа ечеп Ь!8Ьег-шо! еси! аг-и е(8Ь! шаг1сегя ТЬ!а ргосег!иге у!е!85 а аепеа оГ сопсагешегв йаг сопгаш ир го 20 гапг!еш1у аггап8ег) сор(еа от ЬассепорЬа8е ).
РМА. ТЬе ч!га) РЬ)А 15 геаг!Пу П8агег! шго сопсагешега Ьу чгггие оГ гЬе 12-Ьр агк)су епгЬ ог сох ыгеа гЬаг оссш аг Ьой епгЬ оГ гЬе ЪасгепорЬа8е 8епопге. ТЬе а!ге оГ гпгасг ЬасгепорЬа8е )о РЬ(А га 48.5 )гЬ; Пшь, йе шсПчи(иа! сопсагепагея аге пш!Пр1еа 01 йга 1еп8й. ()аиаПу, 400-600 п8 оГ йе сопсагепагег1 РЬ)А га 1оаг!ег) оп!о а яп81е 1апе (1 сгп гп 1еп8й) оу а ТАРЕ (РгоГосо! ! 7) ог СНЕЕ (РгоГосо) 18) а8агоае 8е1.
ТЬе гпейог1 8!чеп Ьеге 15 а!о~ч, Ъиг и ргойкеь а хепеа оЕ сопсагегпега гЬаг сопгаш арргохипаге1у ег)иа) ашоипГа оГ РХА. МАТЕК!Асй СА()Т!О!Ч: Р)еаае аее АррепсПх ! 2 !ог арргорпа!е Ьапг)1!08 о! ша!ег!а15 гпаг!гег! гч!!Ь <! >. Вггт!его апд йоМюп8 Р(еаае аее АррепеПх 7 !ог согпропеп!5 о! х!ос!г ао!инопа, Ьийега, апг( геа8еппи Р!1и!е а!оса ао!и!!опт !о йе арргорпа!е сопсеп!ганопя лтР (0.7 м) РГГИГоГ)гге(Гоl Г7 М) еОТА Г0.5 м, рн 8.0) 7х 178а77оп ЬиЯег иггй ро!уейу)епе 87усо! 50 пгм Тгь-С! (РН 7.6) ! гпмАТР 70 пгм г7(г)г)огкге!го! ! 0 гаМ Мкс! 2ого РЕС 8000 <1> 5.
71 5.72 СЬарсег 5г Се! Е1ессгорЬогег)г о) 1ЖА алгЕ Рсг!гегЕ-фе!с)АЕагоге беl Е!есггорЬогегЕг Еоиг-те!!Ела-Гетрегасиге ФИТ) адагоае Ьидег 100 спМ Тпа-С1 ЕРН 7.6) 20 гпМ М8С!г Мес), Е20 т,и) Ро)уегЬуlеле д)усо) !858 и)ч РЕС 8000 ею)ипол) < ! > ТЕ ЕрН 7.6) Епкупсе5 ап41 Вссйегь ВассепорЬаце Т4 Р)ъ!А )!даете Се!5 Еоиг-те)с)лц-гетрегагиге аеагоье С)ае а 8гассе оЕ а8агоае сЬас са ашсаЫе Сог РРСЕ Ее.8., 5еар!аг!пе СТС, В!осчЬ!сса)сег). Нос!е1с АС1415 ап41 О1фопос!еоЕ1деь РигсЕЕес) ЬасгегсорЬаае ъ Р)ъ)А Р!еаае аее СЬарсег 2, Ргососо!а 1! апъ)!2. йрес1а! Ецо1ршеп$ Туаол ЕиЬ)лЕ С)ае ЫЬспа ъчЬЬ а 3/32-спсЬ юсегпа1 йапсесег.
тагес ЬагЬ ргеьег со 56 С МЕТНО0 1. Иаао!че 0.1 а оЕ !ои-гпе16пд-сешрегаспге ааагоае ш 10 ш1 оЕ ЕМТ ЬпЕЕег Ъу Ьеас!па Ь сп а Ъо!!!па и асег ЪасЬ ог Ьу ш!сгоъчач!па. Соо1 сЬе ао!пс!оп со 37оС. 2. Э!аао!че 10 )са оЕ рпг!Е!ес) Ьассег!орЬаае )ъ !)ХА ш 1725 )с! оЕ ТЕ ! рН 76) апс1 Ьеас сЬе ьо!псюп со 56'С Еог 5 ппппсея ТЬса сгеаппепс с)епаспгеа сЬе соЬеяче сегппй оЕ сЬе ЬассепорЬа8е Х ЕгЬ)А.
3. Соо) сЬе ао!пс!оп со 37оС, апс! гарийу асЫ сЬе Ео!1оъчша геааепса ш сЬе огс1ег 1!асес1: 8ого РЕС 8000 62.5 и! 20 гпм М8С1, 5.0 п! О.С МАТР 5.0 п! 1 м йсЬюсЬгепо1 5.0 и! ЬасгепорЬа8е Т4 Е))4А 1с8аае 0.5 ЪЧесаа ппа )96 ЕМТ а8агоае ао!паап 15сер Н 250 и! Ро!уесЬу1епе 81усо! ась !!)ъе а сгоъчйп8 а8епс апс) юсгеааеа сЬе е0!с!епсу оЕ 1с8асюп !р!еаае аее сЬе спЕоппа6оп рапе! оп СО!ъСОЕЫ5!!ъСС АСъСО СКОС4'О!!ъСС СъЕАСЕЙТ5 сп СЬареег Ц.
4. Ргаъч сЬе сшхспге шсо а аЬогс 1епасЬ оЕ Туаоп шЬспд, апс! сЬ!11 сЬе спЬ!па оп ке пп61 сЬе ааагоае Ьаа сошр1есе1у пес. 5. В!оъч сЬе ааагоае р1па спсо а пеп1е, с!!ароааЫе р1апк спЪе солса!и!па ас 1еап 3 чо1шпеа оЕ 1х 1!аас!оп ЬпЕЕег ипсЬ ро1уесЬу1епе а!усо!. Ап а1сегпапче спесЬос) со пяп8 Ту8оп спЬсп8 ы со сгапаЕег сЬе !.МТ ао1ппоп Егою 5сер 3 йгесс)у со а йароааЫе р!аапс шЬе. АПоъч сЬе 8е1 со Ьагс!еп апсС сЬеп а<!с) 3 чо!пгпеь оЕ сх !!8ас!оп Ьпгуег.
Ма!се агае со 6!а!ос)8е сЬе а8агоье р!п8 Егогп сЬе Ьоссосп оЕ сЬе ЫЬе со а11оъч сЬе 1!8асюп ЬпЕЕег ес)па! ассея со ЕЬе епспе р!п8. Рго1осо! 17 Ри!наес!-йе!с! Се! Е!ес1горйогеыь ча Ггапьчегье АЫегпа6пц БеЫ Е!ес1горйогеыь Се!ь с лкст|ыгк кт лс. (с 988; Слкстпчкк лчеь РлттскьОст ! 989) стьест л сн. лкклклтс|ь тчссЬ р1асшшп тч!ге е!ессгот!еь роь!с(опетс оп орроясе ьЫеь оу а чегбсаПу огсепсет) Ее! со ьерагасе 1аг8е АЗХА Сга8тпепсь. 1п сЬ!ь Согш от' сгапьчегье а1|егпа6п8 Ее!|1 е1ессгорЬогеяь (ТАРЕ), |Ье 1|1!А точек 6гьс со|част) опе ьес от" е1ессгот)еь апт( |Ьеп тотчас|( йе ойег аь |Ье е!есспс 6е1т!ь аге яч!ссЬей ТЬе пес геьи1с от йе г|8ха8 пючетпепсь 1ь а ьсга!ПЬ| Ппе 1готп |Ье 1оат((п8 тчеП со|част! сЬе Ьопотп от' тЬе Пе!. Весаиье аП от сЬе 1апеып сЬе Пе! аге ехроьет! со ет!исча!епс е1есспс 6е1т(ь, йеге |ь по Ьог|хопса! сПяогсюп от сЬе РХА Ъапт!ь.
Аь тчиЬ ойег РРСЕ ьуьсешь, йе яке от' йе пю1еси1еь геьо!чет! ас а 81чеп чо1|а8е сь а Гипссюп от'йе ри1ье типе. |тат(асюп 1п |Ьеье рагатпесегь аПотчь йе ьерагасюп оу Раль гап8!п8 ш яте 6огп 2 !|Ъ ир со >6000 )тЬ. ТАРЕ 8е1ь аге сЬиь чету чегьасПе: ТЬеу сап Ъе ат)арсе|с со йе апа1уяь от' а1пюя апу !осиь ог Пепе, апт! йеу сап Ье пьет! со еьсаЬ- ПьЬ асеигасе 1оп8-гап8е геьсНссюп шарь апт) аге еьрес!аПу Поп|с ас геьо!ч(п8 Е|ХА ба8шепсь ш |Ье (1000-)тЬ гап8е.
Кеьо1и6оп оу!аг8ег РЬСА Сга8шепсь ияп8 сопсоиг-с1ашрет1 6е1т! е1ессгорЬогеяь (СНЕГ) Пе1ь сь ргеьепсе|1 |п Ргососо! 18. Рог а тпоге беса!ес( с1исиььюп оп ргерапп8 аптс гиппш8 а8агоье Ее1ь, р1еаье геуег со йе !пстот1иссюп со Ргососо! 1. ТЬе СоПотч(п8 ргососо1, ьиррПет! Ъу Тотп|пу Нуаи апг( Не1еп НоЪЪь (()и!четь!су от Техаь, 5оисЬ|чеьсегп Месс!са! Сепсег, ТтаПаь), т!еьег(Ъеь йе геьо1исюп от Еепош(с ЕтсчА Ьу ТАРЕ, го!- !отчет! Ьу Ыос6п8 апс1 т!есесс!оп Ъу ЬуЬ|1|1(гас!оп.
Ргососо1ь 19 апд 20 |1еьепЬе шесЬот!ь Сот (ьо1ас!п8 апт! гесочепп8 а рагски!аг (|!(А Сга8шепС геьо1че|1 Ъу РРСЕ. Р1)ЕйЕ Т1МЕй ! Ч ТАГЕ СЕТЬ 1п ТАРЕ Пе1ь, чо!|а8е 1ь аррПе|1 со опе ьес от" е1ессгот(еь Сот а репо|1 от" сипе !тпотчп аь |Ье ри!ье типе апт) 1ь |Ьеп яч(ссЬетс апг( аррПе|1 то |Ье ойег е1ессготсе ра|г тот ап ет)и(на1епс сапе. 1п а ТАРЕ аррагасиь ш тчЬкЬ сЬе а8агоье Пе! ыпоипсет( ш а чегска1 роясюп, |Ье геьи!ссп8 е!ессгк беЫ точеь сЬгоиЕЬ йе сЬ!е(тпеьь от сЬе Пе1.
ТЬе 1еп8сЬ от |Ье ри1ье сипе т!есегш(пеь йе яхе гап8е о( РХА йас (ь ор6шаПу геьо!чет! оп йе Пе1. ТаЫе 5-10 согге1асеь ри1ье сипе тч(сЬ йе тга8- шепс яхе гап8е геьо1чей ТЫь саЫе сап Ъе пьем ъч(сЬ йе ргососо1 аь а гоиПЬ 8и(де тчЬеп ьешп8 ир |Ье шП!а! ТАРЕ Пе! ехрегипепсь; сЬе ри1ье 6гпе сап сЬеп Ъе сиьсош!хет! со 6| йе пеет)ь от" а рагски!аг ехрептпепс. РЬСА Сга8шепсь !п йе гпе8аЪаье гап8е, якЬ аь |Ье сЬгошоьошеь от'5.
ропт(те, сап а1ьо Ье геьо!че6 оп ТАРЕ Пе1ь Ьис гет!и!ге а Пе! сопса!п)п8 а 1отч сопсепсгас(оп от а8агоье (0.55'~о) апд 5. 74 Ртотосо! !7: Ри!гег(Тте(г( Се! Е!естторЬотгтт ч!а ТталгчепеАЬетацпцР(е!й Е(ессторЬотег!5 Се!5 575 ТАВЕЕ 5-10 ТАРЕ Сес Сопй(юпа Еог 5ерага11пц О)5)А5 оЕ Чапоиа 517еа 5С75 ССАГССЕ (Сси) Рисхе Тсме (5есотси5) Тсме (Ноиа5) 5 — 50 20-100 50-250 100-400 200-1000 200-1600 Еагцег ЕСХА5 10 !О 14 14 18 20 1 3 10 20 45 70 ьее сехс атее сехс сЬе ые оГ 2х ТАРЕ це1 ЪиГГег. А ьчо-5(ер е1ессгорЬогеяа ргоцгаш га гип сола!51!пц оГ ап !и!с!а! е!ессгорЬогеяа оГ 12 Ьоигх оГ 30-пипше ри!5ех ас 60 Ч, Го!!осчес) Ьу а 60-Ьоиг тип оГ 20-ппписе ри!аеа аг 50 Ч (К.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
