Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 129
Текст из файла (страница 129)
10. АГгег ро1ушег1гаг!оп !а сошр!еге, аиггоипг! йе сошЪ апс1 |Ье гор оГ йе Ве! |чу рарег го|ге!а |Ьаг Ьаче Ьееп аоа!гег! ш 1х ТВЕ. ТЬеп аеа! йе епПге ае1 Гп Вагап Ъ!ггар апг! згоге П аг 4'С ип! П пее|1ей Се!4 |пау Ье ггогес$ Еог 1 — 2 с!ау| !п |ЬЬ |гасе Ьеуоге йеу аге нгей 11. чггЬеп геаг!у го ргосеег! |чПЬ е1есггорЬогеяа, я!шг! 1х ТВЕ ЪиЕГег агоипс! ап|1 оп сор оГ ГЬе согпЪ апс1 сагеЕиПу риП !Ье сошЪ Егош йе ро1у|пег!хе|1 ае!. ЕГае а ауг1пде со г1пае ои! йе чче!Ь чч11Ь 1х ТВЕ. Кешоче |Ье це!-аеа1ша саре Егоп| йе Ъоггогп оЕ йе Ве! ългЬ а гаког Ыас1е ог аса!ре1.
ЧЧааЬ ош |Ье |че1Ь гЬогоиаЫу аа аооп аг |Ье со|пЬ Га гепючей ОГЬегмчае, япа!1 апюипи оЕ асгу!агпЫе ао!шюп !гарро|! Ьу |Ье сошЬ гч|!1 ро1ушепге ш |Ье гче!1|, ргогГис!па 1ггеаи1аг1у аЬарег! аигуасеа йас а!че где |о гПяоггеВ Ьап|14 оГ РГ4А. Еоаг!!щ йе алагир!еь апд Кг|пп1пр йе Се! 12. АггасЬ йе це! |о йе е!есггорЬогеяа Гап1с, ияпа 1агае ЪиПдоа сПра оп |Ье кЫез ог с1ашра ЬигЬ гпго йе аррагагия ТЬе поссЬес1 р1аге аЬои1д Гасе ш|чаг|1 го|чаи! |Ье Ъийег геаегчо!г. 5.46 СЬарсег 5: бе! Е!ессгорЬогез!з оу О)|ГА апгЕ РиЬегЕ-)ле)гЕА5агозе Се! ЫесггорЬогез)з 15. 16. 18. Р111 сЬе гезегчо!гз оЕ сЬе е1ессгорЬогеяз сап1| сч)сЬ е!ессгорЬогеяз ЬцГЕег ргерагег) Егот йе залпе ЬассЬ оЕ 5х ТВЕ цзег) со сазс сЬе Ве!.
1)зе а Ьепс Разсецг р!Рессе ог зуг)пае пеес)!е со гепюче апу а)г ЬцЬЫез сгаррег) Ъепеай сЬе Ьоссогп оЕ сЬе Ве!. Ь Ь ииропапс со ые сЬе загие ЬассЬ оЕ е1ессгорЬогеяз ЬиГГег |п Ъой оЕ сЬе гезегчо!гз ап|! |и йе ае!. 5|иа1! |С!ЕЕегеиеез !и юп|с зсгеиасЬ ог рН ргой|се ЬиГГег Ггоисз сЬас сап агеас!у гВзсоп |Ье пщгас!оп оЕ 1лЬСА. Г)зе а Разсецг р|ресСе ог а зуг!пае со ЙцзЬ оцс сЬе сче))з опсе тоге лч!сЬ 1х ТВЕ. М|х сЬе Гл):1А загпр1ез чч!1Ь сЬе арргорпасе атоцпс оЕ бх Ве1-1оаг)1пВ ЬцЕЕег. 1.оа|1 сЬе пцхсцге |псо йе сче1)з |лз!пп а Напц1|оп зуг)пае ог а пцсгор|рессе ег)ц)ррег) сч)сЬ а |1га|чп-оцс р!азбс Нр.
Ссзиа)!у, -20-!00 р! оЕ РЬСА зашр1е Ь 1оа|се|1 рег |че!1 гСерепгС!пх оп сЬе яге оЕ йе |1ос. Ро пос ассешрс со охре! а1! оЕ сЬе загир1е Егош сЬе !па|С!па |сечке, аз й|з а1июзс а1|чауз рго|Сисез а|г ЬиЬЫез йас Ыо|ч сЬе зашр1е ош оЕ |Ье лче11. 1и |папу сазе|, |Ье залпе |сечцсе саи Ье пчел) со !палс |папу за|ир1ез, ргочасег) |с Ь сЬогоиаЫу ъчазЬел) Ъепчееи еасЬ 1оагС!па.
Но|чечег, Ь Ь иирогсапс иос со са)ге юо 1оиа со согир1есе !па|С!иа сЬе ае1; осЬеглчсзе, |Ье загир1ез лч111 гС|Т6лзе Егош |Ье лче1!з. Соппесс сЬе е!ессго|1ез со а роъчег рас1| (роз)с)че е!ессгог)е соппессе|1 со йе Ьоссот гезегчо|г), сцгп оп |Ье роччег, ап|1 ЬеВ)п сЬе е1ессгорЬогеяз гцп. ЬСоп|Сепасиг!иа ро1уасгу!ашс|Се ае!з аге ияла11у гип ас чо!сааез Ьесъчееи 1 Ч/сш апгС 8 Чгсш.!Ее!ессгорЬогеяз Ь сагпе|С ош ас а ЬсаЬег чоссаае, ЙЕГегепс!а1 Ьеассиа |и |Ье сепсег оГ |Ье ае! гпау саше Ьолч!па оГ сЬе РНА Ъаи|Ь ог ечеи ше!с!иа оЕ йе зсгаи|сз оЕ яиа11 РХА Ггаашепсз.
ТЬегесоге, |ч|й Ь!аЬег чо1сааез, ае! Ьохез |Ьас соисаш а гиеса! р!асе ог ехсеп|СегС Ьийег сЬап|Ьег зЬои1|С Ъе иле|С со йзспЬше сЬе Ьеас ечеи!у. Маиу суре| оЕ ае! аррагасыез аге ел|исрре|Л чА|Ь йепиа! зеиюгз йас гпошсог сЬе сешрегасше оЕ |Ье ае1 |Сиг!иа йе гип. ТЬезе аге рагски!аг1у пзе6л! |чЬеи зсгсчсиа со иишпиае чапасюп Егош опе ае! пш со сЬе иехс. АСсегпас!че1у, ые а ае1-сешрегасиге-шип!сох!па япр. Влп йе ае! цпН1 сЬе таг1|ег |)уез Ьаче т)ага!ее) |Ье с)еягег) йзсапсе (р1еазе зее ТаЫе 5-6). Тцгп оЕЕ сЬе е1есспс росчег, йзсоппесс йе 1еас)з, апг) сВзсаг|1 сЬе е!ессгорЬогеяз ЪцЕГег Егоп| йе гезегчо)гз.
1лесасЬ йе 51азз р1асез, апг) ые а зса1ре1 ог гахог Ыа|)е со геточе йе ае!-зеа! )па саре. 1.ау йе 51азз р1асез оп йе ЪепсЬ (я!кои)хес) р!асе црреппоя). Г)зе а зрасег ог р1азск счете со 1)Ес а согпег оЕ йе цррег а1азз р!асе. СЬес1с сЬас ГЬе ае! ге|па|па ассасЬег) со йе 1оиег р)асе, Рц)1 йе цррег р1асе япоой1у алчау. Кеточе йе зрасе| я Оссаяоиас!у, йе ае! гегиашз ассасЬе|С со йе зс!кошге|С р1асе. 1и йЬ сазе, сиги сЬе а1азз р1асез очег апл! гегпоче СЬе попа!1!сошгегС р!а|е. Г)зе опе оЕ сЬе гпесЬос)з г)езсг!Ъес) т Ргососо!з 10 ог 11 со |1есесс йе рояНопз оЕ Ьапг)з оЕ ГлЬГА 1п сЬе ро1уасгу1ат)с)е ае1. РГО1ОСО! 10 Ое1есбоп ог 0МА ~п Ро!уасгу!атМе СеЬ Ьу Яа~п~пц н инке лсааоьк сегь, Рогчлскчглм)ое снь саь)г)от ве сАьт !и 1Ье ргеьепсе оГ ейгсВшп ЬгошЫе Ьесапье йе с!уе гп16Ьггь ро!ушепкабоп оГ йе асгу!агпЫе.
Ноъчечег, ейЫшш ЬгошЫе сап Ье пьед го ьгаш 1Ье ро1уасгу1агпЫе це! аГгег е1есггорЬогеяь. Весапье ро1уасгу1агпЫе с!пепсЬеь йе Впогеьсепсе оГ йе с1уе, йе ьепя6чпу гч!1Ь гчЬкЬ Г)Ь)А сап Ъе е)егес)ее! !ь е1!пип!ьЬееГ. ТЬе ппс!ек асЫ ьга!и 5'г'ВК Со!6 (Мо!есп!аг РгоЬеь) а1ьо сап Ъе пьес! го ьгаш а ро!уасгу1агпЫе Ве! аугег е1есггорЬогеяь. И ьЬопЫ пог Ье !псогрогагес1 !п1о йе ае! аг ГЬе 6ше оГ ро!ушепка6оп, аь шсогрога6оп шго гЬе ро1уасгу!ашЫе Ве1 гегаге)ь апеГ с!!яоггь йе ш!агат!оп оГ Га!)А. Мейу1епе Ыпе ьга!и!пц, а11ЬопВЬ ьошеьчЬаг!еьь ьепя6че, ргочЫеь а 1еьь ехрепяче а1гегпа6че го егЬ!6!цш ЬгошЫе ог 5"г'Вй Со!й МАТЕК!АЕй САГ)Т1ОЬ): Р!еаье ьее Аррепг!!х 12 Гог арргорпаге Ьапс!1!па оГ шагег)а!ь шаг!се6 чч11Ь <1>. ВоГГегв апг! Яо!оГгопв Р!еаье ьее Аррепб)х 1 Гог согпропепгь оГ ьгос!с ьо1ибопь, ЬиГГегь, апе! геааепгь.
О!!иге ьгос1с ьо!и6опь 1о 1Ье арргорпа1е сопсепгга6опь. 51а!и!пВ ьо)ипопг еГ)г!г)!ит ЬготЫе ьо!ипоп Г0.5 )гд/т! ьГос)с ьо)ипоп), 5УВК Со!с! ь)ос)с ьо)ипоп, ог тейу)епе Ь!ие ьо!ипоп Г0.001 — 0.00257е гп ТАЕ ЬиГГег) <! > Рог а е))ьсоьь)оп оГ яагпсоВ 1ЭЬГА гп Ве1ь, р1еаье ьее Ргогосо! 2 аод Аррепо)х 9. Се!в Ро)уасгу!ат!с)е де! <1> Ргераге аос1 гоо гЬе Ве! аа г)еасг)Ьег) )о Ргогосо) 9. МЕТНОО !. Сепбу ьпЬгпегве 1Ье ае! апс1 !гь аггасЬееГ ц!аьь р1аге ш ГЬе арргорпаге ьга!и!пВ ьо!пбоп. Г)ье )пьг епопаЬ ыа!и!па ьо1п6оп го сочег 1Ье ае! сошр!еге!у, апс! ьгаш ГЬе Ве! Гог 30 — 45 гпшпгеь аг гоош гешрегагиге. 5.47 5А8 СЬаргег 5: бе! Е1есггорЬогези оу" с!МА апг! РиЬег1-усе!с! АПагоге бе! Е1есггорЬогегг5 Тгу со ш!исшсге йе шочешепс оЕ сЬе асаспсиП го1исгоп асгоя сЬе аигуасе оЕ сЬе Ве! ПппиП асагисиц.
ТЬе апп Ь со 1сеер сЬе Ве! апасЬес! со 16 аиррог6иа ц1ая р!асс. 1Г сЬе Пе! Ьесопсеа согир1есе!у с!есасЬег1, и сап исшаПу Ье геасие6 сгош сЬе асаспсиц ао!исгоп оп а 1агПе Всаьь р!асс апд сгапауеггес$ со а аЬаПоъч ъчасег ЬасЬ. 1и гпоас сааеа, сЬе це! саи сЬеи Ье сагейПу ипуоИе6 аи6 геасогед со 1съ ос!а!па! аЬаре.
То ачоЫ ргоЫеша, аопге !ичеа66асога ше а ргесе оЕ р!аасге шеаЬ 1гпеьЬ яге 1 ссп, ачаг1аЫе !гоги Пагбеи апс1 Ьагбъчаге асогеа1 со Ьо!6 йе Ве! си р1асе дог!па асасисиП. 2. Кешоче сЬе Пе! Ггоюп сЬе аса!п1п5 ао1611оп, пяп5 йе 51ааа р1асе аа а ясррогс, ппае йе Пе1 ъчПЬ ъчасег, апг! сагеСпПу Ыос ехсеаа 1щп1с! ггогп йе сшгГасе оЕ сЬе це! ъч11Ь а раг! оу Кппъчсрея ,6ъ ПМРОССТАХТ суо пос чае аЬаогЬепс рарег; П ъчП! ас!с!с со йе Пе!. 3. Сочег сЬе Пе! ъч11Ь а рсесе ог 5агап 5Сггар.
5споосЬ опс апу асг ЬпЬЫеа ог 6о1г1а ш йе 5агап ъъггар ъчпЬ сЬе Ьгоаг! епо о! а а|ос согпЬ ог а сгшпр!ес! Кппъчсре, 4. Р!асе а рсесе о15агап чъггар оп сЬе апгЕасе оЕ а 11'ъ' сгапяПшшпасог. 1пчегс сЬе Пе1, апс! Р1асе П оп йе сгапяПшшпасог. Репсоче сЬе 51ааа р1асе,!еач1п5 сЬе де! оп сЬе 5агап Югар. 5. РЬосо5гарЬ йе Пе! аа с1еаспЬес! ш Ргососо1 2. Хосе йас есЬЫшт ЪгогирПе геъсшгеа аи огаиПе 6!сег апс1 ВУВК бо!6 геошгеа а уеПоъч ог Пгееп 61- сег. Махгпсши аеиыс!ч!су чАсЬ ВУВП бо16 аса!и!иП Ь оЪсасие6 Ьу сПипппа6пП йе Пе1 Егош аЬоче 1ер1-П!ишсиассои) ъчпЬ 254-пш ъчаче1еиПй СЛ' ППЬс. бе1а аса!ие6 ъч!сЬ гиесЬу!еие Ыие саи Ъе рЬосодгарЬе6 чбй оггПиагу гПшпгпапоп апд ъчЬЬош а 61!ее.
РГО1ОСО! 11 Ре1ес6оп ог РМА ~и Ро!уасгу!агирре СеЬ оу Аи1огайоцгарЬу В лноь ое кл)))олст)че ЕуйА ьнлклтеп вч лскч)л)чвм све вгесткорноквю тау Ъе с)егесгес) Ьу аигогасйокгарЬу. Апа1упса1 ро!уасгу1атЫе ке1я сопга)п)пк гасйоасггче РИА аге ияцаПу Пхес) апс) с)г)ес) ЪеЕоге аигогасйойгарЬу. Нои ечег, )Е Ъапс)я оЕ гасйоас6че Р)х)А аге го Ъе гесочегес) Егот йе ке! Ер!еаяе яее Ргососо!я 4 апс1 12), )Ье ке! яЬои16 кепегаПу пог Ъе Пхес1 ог с1пес1.
1п )ЬПя саяе, оппг 5)еря 1 — 3, апс) ргосеес1 сйгесг)у го 5гер 4 го ргосеяя йе ае! Еог апгогасйоагарЬу. МАТЕ К!АЙ СА)31!ОМ: Р1еаяе ьее Аррепсйх 12 Еог арргорпа!е Ьапдйпй оЕ та!ег!а!я таг)сес) чч!!Ь <1>. ВиЕТег апд 5о!и6опв Р)еаяе яее Аррепгпх ! Еог сотропеп!я оЕ я!ос)с яо)п6опя, ЬпЕЕегя, апг) геайеп)я. 0Пп)е я!ос)с ьо!п6опь !о йе арргорг)а!е сопсеп)га6опь. Асейс ас!с) Еууа чпй <! > Се!в Ро!уасгу!ат)с)е йе! <1> Ргераге аай гоп )Ье це) аа с)еасг!Ъес) )и Ргогосо1 9 оЕ с)г!а сЬарсес Прес!а! Ецп!ргпепЕ Соттегоа! де! г)гуег Еорйопа!) Р!аьйс гпеяЬ р)есе ЕтеяИ я)ге ! ст, ача!!аЬ!е Егот дагс)еп апг) Ьагс)ччаге ягогея) Еорйопай Рсас)!оас))че )п)с ог сЬету!ит)пеясеп) тат)сегя <! > И)Ьа)тап ЗАЕАЕ й!Гег рарег МЕТНО0 1.
1пппегяе йе Пе1, гойе)Ьег хч))Ь Пя а)гасЬес) ц1аяя р1аге, гп 7оуо асе6с асЫ Еог 5 пиппгея. Кегпоче йе ке! Егогп )Ье Пха6че Ьу сагейлПу ПЕПпк )Ье к1аяя р1аге Егогп )Ье ЛпЫ. Тгу го пйпгпиы гйе охочегпеаг оЕ йоЫ асгоы )Ье ьогЕасе оЕ гйе це) г)ог!пй йхагюп. ТЬе апп Ь го 1сеер гЬе Ве! аггасЬег) го Ьа аоррогг!ак В!ап р!аге. 1Е гЬе Ве! Ьесогпея сосор1еге1у с)егасЬес), Ь сап ияаайу Ье геьсоей !гого )Ье асс)к асЫ оп а )агцег ц1ап р1асе апс) ггаоатеггес) )о а аЬа))ои иагег 5.49 5.50 СЬарсег 5г Се! Е1есггорЬогеяг ог' Т))ь)А аиг) ри)гет1-яе!т1 Ачагоге Се! Е1ес)горЬогег)ь ЬасЬ. !п пгоас сааеа, сЬе 8е1 сап сЬеп Ье сагебл!!у ппго!с)ес) апс) геасогес) со !са ог)8)па! ьЬаре. То ачог6 ргоЫегпя аогпе !пчеа68асога ые а р!есе от р1аа6с гпеаЬ со Ьа!д сЬе 8е1 сп р1асе с)пг)п8 6хасгоп.
йшае йе 8е! Ьпе6у ш де!оп!гес) Н О. Кегпоче ехсеаа бшс1 тгош 1Ье ангтасе от' 1Ье уе! ъччй а рас! о1 Кнпъчгрея А !МРО)1ТА)ъ)Т Ро по1 нае аЬаогЬеп1 рарег; 6 ъи!! а6с1с 1о 1Ье це!. (Орйоиа1) 1)гу 1Ье 8е! оп!о а ртесе от'Ъй~асшап ЗММ рарег няне а сопппегси1 8е! с1гуег. Ргугп8 сЬе 8е! ь 8епега)!у песеааагу оп1у ъчЬеп йе 8е! сопсаша РЫА !аЬе!ес) чбсЬ ъчеа)с !)-еппсс)п8 ьосореа апсЬ аа н5 от ацсЬ агпаП агпоппь от агр-1аЬе!е6 Р!4А йас !оп8 ехроапгеа (!оп8ег 1Ьап 24 Ьопга) аге песеаьагу со оЬсаш ап ас)ес)пасе апсогасбоагарЫс ппа8е. ЪЧгар йе 8е1, со8егЬег ъч!1Ь !га анррог6пц 81ааа р1асе, ш Багап Ъ))гар.
Яшоой ош апу атг ЪнЪЫеа ог то1сЬ ш 1Ье 5агап Югар ъч!й йе Ьгоас) епс1 от а а!ос сошЬ ог а спнпр1ес1 К!шъч!ре. !! 1Ье Р)4А аатпр1еа аерагасес) сЬгоп8Ь сЬе 8е! Ьаче Ьееп !аЪе!ес) ачй п5, гс Ь Ьессег пос со ые 5агап ЪЧгар Ьесапае сЬе р1аапс 61пг и!!! Ыос!с ъчеа)с 6 рагпс1еа. Ма1се гоге йаг йе 8е! ь чету с!гу !гп 5сер 3) апс) ргосеес) со 5сер 5. То а1!8п 1Ье Ке! апс) йе тт1ш, апасЬ ас1Ьеяъе с)о1 1аЪе!х тпаг1сес) ъч!й гатбоас6че ш1с (р!еаае аее Аррепйх 8) ог ъч!1Ь сЬеш!!шп!пезсепт шаг)сета го 1Ье ангтасе от" йе 5агап Ъъггар.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
