Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 128
Текст из файла (страница 128)
Весаове |Ье п|еап г((агие1ег о( |Ье рогов 1оппе|$ |п Еневе пеимог(гв )в с(е(ее|и(пег( Ьу (Ье сопсеп(га(юпв о( (Ье асгу(агп)г(е пюпогиег апс( Епе Ь((опс((опа! сговв-)(п(ъег, (очевидца(огв сап а|$)ив( Еие роге в(ге апг( Ьепсе ехрапб (Ье верагабои гапке о1 |Ье де! (Магно(ь ап|$ )|1/г)д!еу 1975! СагпрЬе(! е( а!. 19С5! |ог геиеи, р(еаве все СЬ(ап' апг( й5Ье((! 1995). Ноъчечег, а иогпЬег о|о|Ьег 1ас(огв аЬо а1(ес( Епе еЯс)епсу о1 верага((оп, )пс(о|$(ид де! ЕЬ~с1|- певв, )ои)(с Ьеайпо, ап|$ е)есгпс йе(с( в(гопы(Ь. )пчеФда(огв ъчЬо ипвЬ (о ор()ги)ге (Ье верага(юп о1 0Ь(А (гадгиеп(в, вЬоо(|$ вес ъ.говвгиап е1 а!.
(1992), и Ьеге (Ьеве Тас(огв аге аиа(угой (и а вув(егпабс и ау. СО НН сн, НН СО Ргогосо! 9: Хеигго! Ро1уаегу!итЫе бе! Е!ееггорЬогеггг 5.41 СО НН СНг ИН ! СО Ргососо! 9| Меигга! Ро!уасгу!атЫе Се1 Е!есггорЬогеыь 5А. МАТЕ!с!А15 СА()ТЕОХс Р(еаье ьее Аррепс(18 12 Еог арргорпасе Ьапс(11пе оЕ пса1ег1а18 тат(сес( чч!1Ь <! >. Войег5 апд ао!ойоп5 Р1еаье ьее Арреп61х 1 Еог сотропеп1ь оЕ ьсос!с 80101!опь, Ьи((егь, апс( геаеепсь. Р!1исе 81ос!с ьо(и11опь со 1Ье арргориасе сопсепсга11опь. Ассу!ат!с(е:Ь(ьасгу!ат(с(е (29:1) (тч ит(ч) < ! > 5|ос)с ьо!ибопь ойег |Ьап 29:1 (аа |ч!ч) асгу1ашЫе:Ь|ьасгу)агиЫе сап Ъе пьес) со саьс ро(уасгу)ашЫе Ве!ь.
Носчечег, Ь (ь тЬеп песеяагу со теса)си!асс йе арргорпасе апюипс оЕ ьсос)с юапюп со ые. Се1ь сап Ье саьс |чиЬ асгу1агпЫе ьо1ипопь соисаш|па с)(ЕЕегепс асгу1аии|1е:Ь|ьасгу)а|иЫе (сгоья(|п1|) габоь, ьисЬ аь 191 апс) 3751, |и р)асс о( сЬе 291 тасю гесогпгпепт)ес( Ьеге. ТЬе гиок!ау оЕ РХА аптс с(уеып ьисЬ Ее!ыч|11 Ье д(Вегепс !гоп| |Ьоье 8(чеп )и |Ыь ргососо). ,ат СА|АВХ!ХС 9((еаг е)очеь ъчЫ)е ччогЫиВ чч!1Ь асгу(агиЫе.
Апипоп|от регьо!Еасе (7()9' исти) <! > Апипопини регги)Еасе Ь пьес( аь а саса)уьс сот сЬе сори!ушег(тасюп о| асгу1ап|Ые апт) Ь|ьасгу!аспЫе Ее1ь. ТЬе ро1утиелтасюп геаспоп и |(пчеп Ъу Егее гас((са1ь сЬас аге 8епегасес) Ьу ап охЫо-ге|1исбоп геасбоп |п |чЬ(сЬ а гаап|ше (е.8., ТЕМЕР) (ь пьес( аь йе а|1)ипсс саса)уьс (СЬгап|ЬасЬ аи|1 Вот)Ьаго' 1972). Е1Ьапо! бх Се(-!оас6лВ ЬиЕЕег рог а )па оЕ Ее1-(оайп8 Ъийегь апт) тес(реь, р)еаье ьее ТаЫе 5-8. КОН(тесЬапо! <|> 51!!соп!е!лВ Е!итсЕ (е.В., 5!Втасосе ог Ассу!еаье) (орйола!) 5х ТВЕ е!ессгорЬогеяь ЬиЯег Еог а !(ь| оЕ гес|реь, р1еаье ьее ТаЫе 3-3 |и Рго|осо) 1. ро!уасгу)агпЫе ЕеЬ аге роигет( апт( гип |п 03х ог 1х ТВЕ аЫо|ч чоиач е (1-8 Истп) со ргечепс |1епасигасюп оЕ яиа11 Ега8шепсь оЕ РХА Ьу )ои(|с Ьеабп8.
ОсЬег е1ессгорЬогеяь Ьи(Есть ьисЬ аь 1х ТАЕ (р1еаье ьее Ргососо) 1) сап Ье ыей Ьис |Ьеу аге пос аь 8оос( аь ТВЕ. ТЬе 8е) пшя Ье гип пюге ь!оит!у ш 1х ТАЕ, счЫсЬ ~соеь пос ргочЫе аь пшсЬ Ьипепп8 сарас|су аь ТВЕ. Еог е!ес|горЬогеяь типа Вгеасег сЬап 8 Ьошь, ъче гесошшепс) |Ьас 1х ТВЕ Ьи((ег Ье иье|Е со епьиге йас ас)ес)пасе Ьи(Еег(п8 сарас|су |ь ача|1аЫе сЬгоиВЬоис |Ье тип.
ТЕМЕР <! > Е)ессгорЬогеяь Вга|)е ТЕМЕР и ача|)аЫе Егош Вю-аат(, 5!Вша, ап|1 осЬег ьирр1(егь. 5соге сЬе ьо1исюп ас 4'С. Ь!ос!е!с Ас!(15 апд О!фопос1ео6де5 РА(А ьатр!еь прес!а! Ецо!репеп1 В!пс(ег ог "Ьи!!с(оВ" рарег с!|рь (б-В, 2 тсЬЕ5 ст сч(с(Я Е!ессгорЬогеыь аррагагиь, В!аьь р!агеь, сотЬ, апс( ьрасе|ь 5о|ие чегбса) е1ессгорЬогеяь сап)сь оЪ|а(пет( !гоги сопииегс|а) ьоигсеь аге соль|гассет) со ЬоЫ 81ая р)асеь о( чагуш8 ятеь. 5расегь (иьиа1|у Тейоп, ьоп|есипеь 1.ос!се) часу !и тЫс1|пеы 1гоп| 0.3 пип то 2.0 п»п.
ТЬе сЫс1|ег сЬе Ве!, сЬе Ьоссег |с |ча! Ьесогпе с(иг(и8 е1ессгорЬогеяь. ОчегЬеабп8 геьи(и |и "япа|п8" Ьапс(ь оЕ РХА апс) ойег ргоЫепи. Тес)сег Ее!ь тип|с Ье шее |чЬеп ргерапп8 (аг8е циапббеь оЕ РХА (>1 08(Ъапс(); Ьотчечег, Ы Ееиега!, сЫппег Ве1ь аге рте(егге|1, аь |Ьеу рго|(исе сЬе ьЬагреьс ап|1 ба!- сея Ьапт(ь оЕ РХА. Се(-ьеайлВ саре Сопипоп сурет оЕ)аЬ саре, ьисЬ аь Типе саре ог Сг(С|В 1аЬ саре, аге арргорпасе Еог ьеа1|п8 йе епс)ь оЕ сЬе асгу)ашЫе Ее( с(иг(п8 роипп8. Се! Еетрегасоге-топ(соппВ ь(прь (орполаВ ТЬеье ьспрь аге йеппосЬгопис !(с(иЫ сгуьса) (ТЕС) (псбсасогь йас сЬап8е со)ог аь сЬе сеп|регасиге оЕ |Ье Ее1 гЬеь с(иг(п8 е)ессгорЬогеяя Теп|регасиге-пюшсопп8 ьспрь аге ьо18 Ьу ьечега) сопипегс(а) соп|- рашеыпс1игпп8 Вюс)ЕЬ(ссаЬег.
Тегирегасиге-|иошсопп8 ьспрь аге пос пес|(е|1 |Е ап е(еспорЬогеяь аррагасиь йас Ьаь ап |п-Ьш)с йепиа) ьепюг ы ыей 5А4 Сйаргег 5с Се! Е!есггорйогет оГВХА апд Ри!сед-Гсе!д Ацагохе Се1 Е!есггорйогеж М!ссор!ресге иой дгасчл-оис р)ахбс пр Ге.5., ГЕехеагсй Ргодиссь Глсеглайола!) ог а Нала))гол хус!лде Реггоlеигл )еПу 5уплае Г50 сс) МЕТНО0 А55егпЫ1щ г1се АррагаГой апе! Ргераг1щ йе Се! Ьо!о6оп 1.
1Г песеахагу, с!еап сЬе а!ахх р!асеа апд храсега сч!ГЬ КОНйпесЬапо1. 2. Ч'ааЬ сЬе а1ахх р1асеа апс1 арасегх си счапп десегаепс ею1исюи апс1 ппае йеги счеП, 6гхс 1и сар счасег апс1 йеп си деюп)гед Н О. Но!д йе р!асеа Ъу сЬе едаеа ог счеаг а!очея ао йас ойх Егош йе ЬапсЬ до пос Ъесоше дероясес1 оп йе ччог)с!па аигГасех оГ йе р1асея Кшае йе р1асеа илсЬ есЬапо! апс1 аес йеш ааЫе со с1гу. ТЬе а1ааа р!асеа тес Ье Ггее оЕ агеаае ароса со ргечепс асг ЬиЪЫеа його Еогспспа !и сЬе ае1. 3.
(Орйолаl) Тгеас опе гшгГасе оГ опе оГсЬе ьчо р1асеа сч)сЬ я1кои)г)пц Пшс1 (е.в., 5!ашасосе ог Асгу!еазе) с Р1асе йе а1аха оп а рад оГ рарег ш а сЬеписа1 Гоше Ьоод апд роиг а япаП с!иапйсу оГ я1кои!г!па ПиЫ опсо ГЬе хигГасе. ЧГ)ре йе Пшд очес сЬе сшгГасе оГ йе р1асе идсЬ а рас1 оГ К)шчг)реа, апд сЬеп ппае йе р!асе 1и де!оп)гед Н О. Г)гу сЬе р1асе счйЬ рарег соисе!я ТЬЬ сгеаспсепс ргечепь сЬе ае! Егопс аск)с!па с!ай!!у со опе р1асе апд гедисеа сЬе роаяЬс!Ьу йсас сЬе ае! ъч111 сеаг счйеп сЬе пю!д !а сйапсапйед айег е1ессгорЬогеася 4.
АхаегпЫе йе а1ахх р1асеа МГЬ храсегя а. 1ауйе 1агиег (ог иппоссЬед) р1асе Пас оп йе ЪепсЬ апд аггапце йе арасегх ас еасЬ ыде рагаПе1 со йе пчо едиеа. Турка11у, сЬе ьчо р1асеа аге оГ а11айс!у д!ЕГегепс яге апд опе оЕ сЬесп и поссЬеа Ь. Арр!у пиписе даЪа оГ ресго!ешп )еПу со 1сеер сЬе арасег Ьагх 1и роясюп диппа йе пехс хсера. с. Еау йе шпег (поссЬед) р!асс ш рояйоп, геас!па оп сЬе арасег Ъага. д.
С!апср сЬе р1асех соаесЬег сч!ГЬ Ъспс)ег ог "ЪиПдои" рарег сПра апс1 Ыпс1 йе епсие 1епасЬ оГ йе пчо ядеа апд йе Ьопош оЕ йе р1асеа сч)сЬ ае1-хеа)!па саре со шайе а счасегс!аЬс веа). Та1се рагдси1аг саге чдсЬ сЬе Ьоиосп согпеп оЕ сЬе р1асеа, аа сЬеае аге сЬе р1асеа счйеге 1еа!са ойеп оссш.
Ап ехсга Ьапс) оЕ саре агоипд сЬе Ьоиогп оГ сЬе р! асеа сап Ье!р со ргечепс 1еа)са. ТЬеге аге гпапу суреа оГ е1ессгорЬогеяа аррагагыеа ача!!аЫе сопипегс!а11у, апд сЬе аггаааегоепс оЕ сЬе а!ааа р1асеа апс1 арасега дйгега а11айс!у Ггосп гпапиуассигег со гпапиуассигег. ЪЧЬасечег йе деасап, сЬе аип Ь со Еопп а ъчасегссайс аеа! Ъесьееп сЬе р1асеа апд сЬе арасега ю сЬас сЬе опро!угоег!аесС ае! ао1осюо аоеа пос !еа)с оос.
5ечега! спаоаЕасшгега а!ао аей ргесаас ро1уасгу!апсЫе ае1а, ъчЫсЬ аге Еоо!ргооЕЬис ехрепяче апд ойеп сап Ье ыед оп1у сп сЬе гпапиЕассшег'а ае1 аррагасия 5. Тай!па шсо ассоипс сЬе яге оГ сЬе а!ааа р1асех апд сЬе сЬк1спеаа оГ сЬе арасегя са1си1асе йе чо1шпе оГ ае! гесригес1. Ргераге сЬе ие! сю)одоп счпЬ сЬе с1еыгес1 ро!уасгу1ашЫе регсепсаае ассогд)пц со ТаЫе 5-7, счЫсЬ а!чех йе аспоипс оГ еасЬ согпропепс гес!шгед со гпа!се 100 сп1.
6. (Орг)огса)) Р1асе йе гес!и)год с!паис)су оГ асгу!аш)десЬ)х ао!ипоп ш а с!еап хЫеапп Пах)с сч!ГЬ а шаипес)с адг Ьаг. Г)е-аегасе сЬе сю1ипоп Ьу арр1ушц часишп, аепс!у ас 6гя. 5ис)г) йе Пах)с диппа де-аегапоп ип61 по псоге асг ЬиЬЫех аге ге!еааед. Ве-аегасюп оЕ сЬе асгу1аспгде ю1шюп Ь пос еыепйа!, Ьис сс с!оеа гедисе йе сЬапсе сЬас асг ЬиЪЫеа чд1! Еопп ъчйеп йис1с ае!а ! >1 пип) аге роигес1, аа сче11 аа гес!исе сЬе апюипс оЕ йгпе гесгшгед Еог ро!угпегыасюп. Ргогосо! 9: №игга! Ро!уасгу1атггЕе бе! Е!есггорЬогеггг 5А5 Са56ПУ, йЕ СЕ! 7. РегГопп |Ье ЕоПоиппд шап1ри1аПопа очег а ггау ао |Ьас апу арП!е|! асгу1ашЫе:Ь!а ао!и!!оп ччП1 пог аргеас! очег йе ЪепсЬ.
'чггеаг ц1очея 'чггог1с г!икИу го сошр!еге йе це! ЬеГоге |Ье асгу!агпЫе ро1угпепхея а. Аг!П 35 !|1 оГ ТЕМЕ!Э Гог еасЬ 100 ш! оЕ асгу1ашЫе:Ъ!а ао1игюп, апг! ппх |Ье |ю1игюп Ьу аепг1е агч!г1ша. Ч1пу! ро!угпегйа|юп оГ гпопошег |о сгоая!1п1сегГ ро1угпег Ь 909б согпр1е|е |чнЬ|п 5-15 пипи!ах ГЕо~чечег, оп!у а Егасгюп оЕ йе Ь|аасгу!агпЫе пю1еси!еа Ьесо|пе !псогрогагег! |пго сгоаа-1!пха. ТЬе гея оЕ |Ье пю1еси!еа аге |Ги!сИу сопчегге|1 го а сус1к Гогш Ьу ап |п|гапю1еси1аг геас|юп Ъеьчееп |Ые сЬа!па. Се!а сап Ье саа| |чпЬ аа гписЬ аа 1 и1 оЕ ТЕМЕР рег пн1!111гег оЕ ае1 ао1шюп го шсгеаае йе гасе оГ ро1ушег1гаг!оп. Ь. Еггагч йе ао1игюп шго йе Ъагге1 оЕ а 50-сс ауг!псе.
1пчег! йе ауг1пае апг! ехре1 апу а|г йа! Ьаа епгегег! |Ье Ьагге1. !пггог!иге йе попа!е оГ йе ауг1пце Гпго |Ье врасе Ьегъчееп |Ье г|чо а!ага р1агея Ехре1 йе асгу!ашЫе Ве! ао!иг!оп Егогп йе ауг!псе, ППшВ йе арасе а!шпаг го йе гор. Кеер йе гешаш!па асгу1ап|Ые ао1иг!оп а| 4'С |о гег!исе |Ье гаге оГ ро!уп|епга6оп. 1Е йе р1агеа Ьаче Ьееп |че1! с!еапеВ апгГ |че11 аеа1ей йеге |ЬоиЫ Ье по ггаррег! а|г ЬиЬЫеа апг! по !еаЫ, 1Е ак ЬиЬЪ1еа Еопп, |Ьеу сап гоше|!гпеа Ье соахег! со |Ье |ор оЕ |Ье пюЫ Ьу аепг1е |арр1па ог |пау Ье апааае|Г ъч||Ь а ЬиЬЫе ЬооЬ шаг!а оЕ |Ь|п ро!ургору1епе гиЪ|пуг 1Г |Ьеае ше|Ьо|Ь Еа|1, е|пргу |Ье ае! пю1й ГЬогоиаЫу с1еап йе а!ааа р1а|еа, апг! роиг а пе|ч ае1.
с. Р!асе йе а!аах р1агек аиа!паг а гея шЬе гас!г аг ап апВ1е оГ -1Оа го |Ье ЪепсЬ гор. ТЫ| роа!гюп1па с$есгеаьеа |Ье сЬапсе оЕ 1еа1гаае ап|1 пип!ш1геа |Пггог|юп оЕ йе ае1. 8. Аа йо|чп ш Е1циге 12-9 ш СЬаргег 12, Ешгпег!Га!е!у шаег! |Ье арргорпаге сошЪ |пго йе це1, Ъе1пц сагеЕи! по! |о аПо|ч а|г ЪиЪЫеа |о Ъесоше ггаррег! ипг!ег йе сее|Ь. ТЬе горь оЕ |Ье геей аЬои1П Ье аПаЬ|1у Ь!ВЬег йап |Ье сор оЕ |Ье и1аая С!ашр йе соп|Ъ |п р1асе гч11Ь ЬиП- г!оВ рарег сПря 1Г песеааагу, иге йе геша!и!пи асгу1аш!Пе це! хо!и!!оп со Я! йе це! шо1П сошр1еге1у. Ма!се Гшге йа! по асгу1ашЫе ао!иг!оп !а 1еаЫпц Егогп |Ье Ве! пю!й 9.
АПо|ч йе асгу1ашЫе со ро1уп|епхе Еог 30 — 60 пппигеа аг гоош ге|прега|иге, агЫ!па пюге асгу1ашЫе:ЪЕа це! ао1ис!оп 1Е |Ье це! геггась яап!ВсапПу. |ЧЬеп ро!ушег!гаг!оп Ь соп|р1е|е, а Всш|егеп рапегп |ч!11 Ье чигЫе |юг Ьепеай |Ье |ее|Ь оГ йе сошЬ.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
