Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 123
Текст из файла (страница 123)
4155). ТЬ!к кесир аПоъчк |Ье 1епк со Ье тпочед с1окег со сЬе Ве1, сопсепсгасек сЬе стаВе оп а япаПег агеа оК 61гп, апд аПоччк Кот Пех)ЬППу 1и дече1ор)пг апд рппс)па сЬе ппаге. А Киг1Ьег 10-20-со1д шсгеаке |и йе кепядчПу оК сопчепдопа1 РЬосоатарЬу сап Ье оЬсашед Ьу кса!шпВ РХА чч11Ь 5уВП Со1д (Мо1еси1аг РгоЬек). ОК сошке, йе рпсе оК |Ык Ргогосо! еб Оегесг!оп оТ 15ХА ш Аеагоге СеЬ 5.17 йп По)ггег Ко це! пагог ппег с!ч !!дпсз !о с!!гп по!гсег Когг 'е' мопс це! гС Оаг!с вирроп НСС!КЕ 5-4 РЬого га Ьу о1 Се!а Ь С!!Сгаио1ег 111игп!паВоп ТЬе сор сС!адгагп аЬогге сЬе аггапдегпепс оС йе С!и 1!ВЬс еоигсе, йе де1, апгС йе сагпега йас !а иеесС Сог рЬосоцгарЬу Ьу сгапегп!ссесС !!ВЬс.
ТЬе Ьопопз гС!ацгасп еЬоиъ йе аггапцепгепс сЬас !е иеегС сог рЬосодгарЬу Ьу !пс!гСепг !!5ПС. !псгеаее ш еепе!с!е!су ы асеер: 10 !Вега ог' ъчогЫпц гю!исюп ог' 5УВК Со!с1 еса!и спасе пюге сЬап 100 ссо11аге, геЬегеае сЬе еагпе апюипс ог есЬ!гс!ит Ьгогп!сСе спасе -5 сепии Есесесс!оп ог 1.г!4Ле еса!пес! мчСЬ СЬ!е сСуе гесса!гее СЬе иее ог' а уе11оге ог Вгееп це1аг!и ог се11орЬапе С!1Сег (5-7559, ача!1аЫе Сгот Мо1еси1аг ргоЬеь ог Кос1аЬ! ччсЬ йе сагпега апгс !11шп!пас!оп ге!сЬ 300-пгп ТЛг !!ВЬс.
Рго1осо! 3 Кесо~егу о1 0МА 1гот Ацагоье СеЬ: Е1ес1горйогеыь опто 0ЕАЕ-се!! и1о~е Метогапеэ Анч мтгнотт5 начк веем отчетогей очах гне челх5 го гесочег РХА Егогп ааагоае апт! ро1уасгу1атпЫе ае!я Ечеп потч, асагсе!у ап )авие оЕ тесЬшса!1у ог)епсет! пю1еси!аг с!оп)па )оигпа1а ь рг)пгег! тч)тЬоиг толпе чапатюп оп гЬь аепега! ргосет)иге. Реарье тЬе р1егЬога оЕ шетЬ- от!я попе оЕ тЬеае Ьаче ргочеп аатьуасгогу 1п а11 Ьапт)я ТЬе ргойегпа аааос)атес! ъчтЬ тЬе еЕЕтс!епт гесочегу оЕ РХА Егогп ааагоае 5е!а !пс1ийе: ° РХА тесочететЕ Етот ататозе ае1т Ь Етет1иеттт1у тЕтфси1т го 1т~аге, йтетт, от тат11о1аЬе1. ТЬЬ сбйки! гу ь иаиа11у саиает! Ъу сЬагцет) ро1уаассЬагЫе шЬ)Ъ)тога ш йе е!итет! РХА.
1п йе раат, тпоя агат!еа оЕ ааагоае ччеге соптапипасет) тч)гЬ роог1у сЬагассег)хег! ро1уаассЬагЫея тчЬ~сЬ аге ехтгастес! 1готп тЬе ае! а!опт чч1тЬ тЬе Р)ч)А. ТЬеае аиЬатапсеа аге ротепг !пЬЕЬ)гоь оЕ тпапу оЕ гЬе епхушеа сотптоп)у пает! 1п гпо!еси1аг с!оп!па. А1тЬоиаЬ ппргочегпепга ш йе т)иа!!ту оЕ ацагоае Ьаче гет!исег! йь ргоыеш сопаЫегаЫу, тЬеге ате а61! оссаяопа ччЬеп РХА ь гесочегет! тп а попгеасггче Еопп. ° 1пеЕутс1еттг гесочету оЕ Еатце Ящтетттт оЕ ВХА. ТЬе еЕЕтс)епсу илтЬ гчЬкЬ РХА ь тесочетес) Егош ацагоае ае!а Ь а Еипс6оп оЕ Ьа гпо1еси1аг тче)аЬт. А!тЬоиаЬ шпаг шетЬотЬ а!че геааопаЫе у)е!сЬ оЕ РХА Егаашепта йас аге <5 1сЪ тп !епагЬ ()50%), попе оЕ тЬеш аге епьге1у аат1ауасгогу Еог йе тесочегу оЕ!агаег Егаашепгя Аа тЬе яте оЕ гЬе РЬ)А Егаашепга !псгеазея тЬе у!е16 ргоцгеаяче!у десгеаася еарес!а1!у ъчЬеп йе Р)ч)А ь риг16ед Ьу шейось тЬат !пчо1че Ъ!пйпа то а аоРЫ шагпх аисЬ аа а сбейу!апипоейу1 (РЕАЕ)-се!!и1оае шетпЬгапе.
1.атлет Егаашепта Ь!пт1 тоге гепасюгь1у го аисЬ тиррогь апт! аге пюге сбйки!т то е1ше. ° 1пефс1еттт тесочету оЕата11 атоитть оЕРХА. ТЬе атакует йе ашоипт оЕ РХА ш тЬе Ьапс1, тЬе !отчет йе у!е!д оЕ риг1Етет! Егаашепгя 1п аопге шетЬот)я йе 1оаа оЕ гпагепа! Ь ао цгеаг тЬат Ь 1а пот ъчогтЬтчЬ11е со аиешрт то гесочег Ьапт)а тЬат сопта!и <500 па оЕ РХА. ° 1паЕт11Ыу то тесочег а питЕтет о~тЕЕфететтгЯадтептт яти1тапеоит!у. 5ечета1 оЕ тЬе тесЬп)пиеа аге!аЬог-шгепяче апс! сопяаг оЕ гпапу шт!!чЫиа! гпашри1аьопя ТЬе пшпЬег оЕ Егаашепта тЬас сап Ье ргосеааег1 ат апу опе Ьпте Ь гЬегеЕоге 1ппией 1п гЬ!в рготосо!, РХА Ь тесочегет) Еготп ап ааагоае це1 Ъу е1естгорЬогеа!а опто а рояьче1у сЬагает) РЕАЕ-се11и1оае гпешЪгапе.
Ргаашепь оЕ РМА аге Етгаг аерагагет! Ьу е1естгорЬогеаЬ тЬгоицЬ ап ааагоае Ве1 оЕ тЬе арргорпаге сопсепггатюп. А а! Ь ь гЬеп сит !п гЬе ае! иптпесбаге1у Ршгосо! сб йесонегу оЕРХА Егот А8агоье Се!я Е!ос!гор)гоге5и оп!о РЕАЕ-се!)и!оное МетЬгапег 5.79 аЬеас1 оЕ йе РЬГА Ъап48) оЕ !пгегеаг, апс) а айчег оЕ РЕАЕ-сейи1озе гпегпЬгапе 18 !иаеггес) !иго йе 867. ТЬе гпегЬод сап а!ао Ье ас)аргес! Еог е1иг!п8 Р)н)А Егош а 81ке оЕ ро1уасгу1ашЫе це1 Ъу !иггос)ис!08 йе ро!уасгу1агпЫе 8!ке !иго йе з16 !и ап а8агоье 8е1, )иаг аЬеас1 оЕ гЬе РЕАЕ-сейи1оае шешЬгапе.
Е1есггорЬогеа!8 18 сопбпиес1 ипб! ай оЕ гЬе РХА ш йе Ъапс) Ьаа Ьееп сойесгес1 оп!о ГЬе гпегпЬгапе. ТЬе гпеигЬгапе 18 гЬеп гешочес! !гоги гЬе ь16 апс) ъчааЬес! Егее оЕ сопгапи'- папга ш а Ьийег оЕ 1ою юпк аггеп81Ь. ТЬе РЬГА 18 6пайу е!игес! Егош гЬе шегпЪгапе ш а Ъийег оЕ ЫЕЬ гоше аггеп87Ь.
ТЬе РХА гесочегеб 6..ош гЬе шегиЪгапе 18 оЕ ЫЕЬ рипгу апс) сап Ье иаес! Еог 1Ье гпоя с1ешапсйп8 са8)с8 Ге.8., сгапаЕоппаг!оп оЕ шапииайап сеП Пиеа). ТЬе Еойочбпц шегЬог) га Ьааес1 оп гЬе ргосес)иге оЕ С!гчих ег а1. (1980), нчЬо паем а б)а1уяа шешЪгапе го ггар Ьапс)а оЕ РЬ)А. ТЬе оп8)па1 ргосес!иге ~чаа 1агег пюсййед Ьу Ргегхеп ег а!. (1981), нчЬо гер!асес! ГЬе гйа!уяа шегпЬгапе иигЬ РЕАЕ рарег Гйе гесочегу оЕ Р)нГА !а ишсЬ гпоге ейк)епГ гчЬеп а РЕАЕ шешЪгапе га и8ег)). Нончечег, Ьесаиае РЬГАа 1агйег гЬап 5 )сЬ аге е!игес1 Егош йе роябче1у сЬаг8ес1 шешЪгапе гч)гЬ рго8геьбче!у с!есгеаып8 ейк)епсу, гЬе шегЬод 18 ипашгаЫе Еог РХА Ега8шепга 1агцег ГЬап -10 1сЬ !и яхе.
Е1есггорЬогеяа оп!о а РЕАЕ-сейи!оае шегпЪгапе саппос Ье иаес) го 180!асе яп81е-аггапс)ес) РХАя юЬкЬ Ь)пс1 сепасюиа1у го йе гпешЬгапе. ТЬе ргогосо18 1и ГЬе Еойоюш8 ра8еа с)еасг!Ье гпегЬос)а Еог ехггасбп8 апс) рипЕуш8 РЬ)А йоги ацагоае апс) ро!уасгу!ашЫе Ее!8 гЬаг Ьане нчог)сес) юей ш аечега)!аЪогагопеь апй ш ош. Ьапй, аге сопяагепг апс) ге1гаЫе. ° Е1ессгорЬоге818 оп!о а РЕАЕ-сейи1оае гпегпЪгапе (гЫа ргогосо1) 18 а ге1абче1у ягпр1е гесЬ- и)цие гЬаг сап Ье регЕоппес! яши!гапеоиа1у оп гпапу аагпр1еь апс1 сопа!агепг!у 81чеа ЫЕЬ у)е!ба оЕ Ега8шепь Ьеыееп 500 Ьр апс! 5 !сЬ гп 1епйгЬ.
° Е1есггое!игюп гпго сйа1уяа Ъа88 Гргогосо1 4) га ап !псоичеп!епг Ъиг ейесггче гесЬп)с)ие Еог гЬе гесочегу оЕ!аг8е Ега8шепга оЕРЫА Г>5 1сЬ ги !еп87Ь) апс1 сап Ье иаег) го е1ше РХА 6огп ро!уасгу!ашЫе Ее!я Рипбсабоп оЕ РИА гесонегес! Егош 8е!а Ьу апюп-ехсЬап8е сЬгопгасо8гарЬу Гргососо! 5) !а ап ейк)епг Ьш!аЬог-шгепяче ргосес!иге. ° ТЬе гесочегу оЕ РХА Егогп Ее!а сая нч!ГЬ 1онч-ше!г!п8-гешрегагиге а8агоае Гргогосо)а 6 апс1 7) сап Ье 1е88 гергобис)Ые гЬап ойег шегЬогЬ Ъиг Ьаа гЬе ас)чапга8е йаг сегга!п епхуше геасгюпа (е.8., 618еабоп нч!гЬ геагпсг!оп епхушеа апг! 178абоп) сап Ье сагпег) оиг сйгесг!у ги гЬе гпе!гес! Ее1. ° Р)н)А шау а!ао Ъе гесочегес! Егош айаго8е Ее!ь Ъу абюгЬбоп оп!о 81ааа Ьеас)а Гр!еаае аее гЬе рапе1 оп А!ТЕК!9АТ1ЧЕ РКОТОСО7.: 7ГЕСОЧЕКУ ОР О!9А РВОМ АСАКО5Е СЕс5 Г)51МС СГА55 ВЕАО5 !и Ргососо1 6). МАтниАЬ СА1)Т1ОМ: Р1еаае аее Аррепб)х 72 Еог арргорпаге ЬапсИ)пи оЕ тагес)а18 шаг)сед ил!6 <! >.
ВоЕЕег5 апд Ьо!о6оп5 Р1еаае аее Аррепсйх 7 Еог сошропепга оЕ а!ос)с ао1ибопя Ьийегя апд геадепбп Рйиге а!ос)с ао1ибопа Ео !Ье арргорг)аге сопсепггагюпя Агпгпоп!ипэ асегаге !70 М) РЕАЕ ИГЕЬ-ьа!! е)ибоп ЬиЕЕег 50 гпм Тгб-С1 ГрН 8.0) 1 м НаС1 ! 0 пгМ Е7)ТА ГрН 8.0) Рготосо! 3: Кесочегу оу Р)чА Ет от Ачагоье бе)ьт Е)естгорЬогеь!ь опто РЕАЕ-се!!и!оье МетЬгапеь 5.21 Рье а ьЬагр ьса!ре1 ог гагог Ыас!е то ша)се ап тпс!яоп ш йе ае! с((гесс!у !п Ггопт оГ тЬе !еас)- !пи ес1ие оЕ йе Ьапт1 оЕ шсегея апс! -2 тити >ч!с(ег йап сЬе Ьапс) оп еасЬ ь(с(е.
)Е РЪ)А !ь со Ъе е!исес) Гхош ап еписе 1апе оЕ ап ааагоье ае) (еа., а геьсг!сс!оп с))аеас оЕ шанина! !ап аспосп)с Р)4А), ша)се сЪе )пс!ь)ап сп сЪе ае! рога!)е! со сЬе!апе оЕ спсегеьс апс) р)асе а япа!е!опа р!есе оЕ РЕАЕ-се)!и!оье шептЪгапе (ргерагес) аь )п 5сер 3) тисо сЬе !пс)яоп. Рсеогашс сЬс ае! ьо сЪас йе РХА сап Ъе сгапьЕеггес) е1ессгорЬогебса)1у Егопт сЪе ае! со сЬе тпепсЪгапе. АЕсег е!ессгорЬогеяь, геспоче сЪе шешЪгапе апс) сш и Ьио ьеашепсь. Бисе РЪ)А оЕ сЪе с)еь)гес) яге Егош сЪе арргорпасе ьеашепс(ь) оГ сЪе гпешЪгапе аь с)еьсг!Ъес) ш 5серь 7 — т т.
ЪЧеаг!пц ц1очеь, сис а р!есе оЕ РЕАЕ-се!1и1оье тиетпЬгапе сЬас !ь сЬе ьагпе сч!с)сЬ аь сЬе спстяоп апс! ь1(иЬс!у с)еерег (1 пнп) сЬап сЬе ие1. 5оа1с тЬе шешЬгапе !и 10 шм ЕРТА (рН 8.0) Еог 5 пипшеь ас гоогп сетпрегасше. То аст!часе тЬе птетиЬгапе, гер1асе тЬе ЕРТА >ч!тЬ 0.5 Ъ) )х)аОН, апс) ьоа(с йе гиешЬгапе Гог а Гигйег 5 ппписеь.
ЪЧаьЬ йе шегпЬгапе ях снпеь ти ьсеп!е Н О. Ро пос иье )агаег ртесеь оЕ тпегпЪгапе йап песеяагу, аь сЪсь ехсея гес)исеь сЪе еГ6степсу сч!ЕЬ ыЬ)сЬ РЪ)А сап Ъе е! асей ТЬе ьспрь шау Ъе ьсогес) ас 4'С!п ьсеп)е Н Е> Еог ьечега) счее)сь аусег сЪеу Ьаче Ъееп ассгчасей Рье Ыипс-епс(ес! Гогсерь ог тсчеегегь со Ьо1с( арах! сЬе чча!1ь оГ тЬе тпс!яоп оп тЬе ааагоье ае1 апс! шьегс йе тиешЬгапе тисо сЬе ь!!т. ссешоче сЬе Гогсерь апс) с1оье йе !пс!ьюп, Ье!пи сагеЕи! пос со стар атг ЬиЬЫеь. М)п!ппге сЬе сЬапсе оЕ сопсапипаиоп сч!сЪ ипсчапсес) ьрестеь от РЪ>А Ъу етсЪег ° сисс!па ош а ьеашепс оЕ хе) сопса)п!па сЬе Ъапс) оЕ !псегеьс апс) сгапьЕег!па Ь со а Ъо!е оЕ сЬе арргорпасе яге сш!и апосЬег геа!оп оЕсЬе ае! Еаг Сгош апу ойег ьрес)еь оЕ Р)4А ог ° !пьегс)па а ьесопс) ртесе оЕ шегпЪгапе аЪоче йе Ъапс) оЕ шсегея со стар ишчапсес) ьрес)еь оЕ Р!4А ссеьише е1ессгорЬогеяь (5 Ч/сш) ипс!1 сЬе Ьапс( оЕ Р)х)А Ьаь )ия ш!ага!ее( опто сЬе гпетпЬгапе. Ро1!очч СЬе ргоигеьь оЕ йе е1естгорЬогеяь чч)СЬ а Ьапс1-Ье1й 1опц-счаче1епцСЬ (302 шп) (ЛЕ 1агпр.
Е)ессгорЬогеь!ь ьЬоиИ Ъе соп6пиес) Еог сЬе пнпнпшп инте песеыагу со сгапьЕег сЬе РЪ)А Егош йе ае! со сЬе шепсЪгапе. Ехсепс)ес) е!ессгорЪогеяь сап гехи!с сп сгоя-сопсапнпаиоп тч)сЪ осЬег РЪ)А Егаашепсь (ьсе аЪоче) ог иппесеяагу ассшпи1аиоп оЕ сопсапипапсь Сгопс йе ааагоье. 'ссгЬеп аП оЕ йе РИА Ьаь !еГс сЬе ие! апс! !ь тгаррес! оп сЬе шешЬгапе, тити оЕЕ сЬе е!естпс сиггеис. Г)ье Ыипс-епс!ес( Гогсерь то гесочег йе гпегпЬгапе апс! ппье Ь ти 5 — 10 гп! оГ РЕАЕ !очч-ьа1с ъчаьЬ ЬиЕГег ат гоотп сетпрегасиге со гетпоче апу аиагоье р!есеь Гготп йе тпешЬгапе. Ро пос а!!ою сЬе спешЪгапе со с)гу; осЬегсч)ье, сЬе РЪ)А Ъесошеь !ггечегяЫ> Ъоипй ТгапьГег сЬе птетпЬгапе со а ш!сгоЕице сиЬе.
Ас!с! епоиаЬ РЕАЕ Ь!цЬ-ьа1т е1исюп Ьийег со сочег сЬе гпеп>Ьгапе сошр1есе!у. ТЬе шеп>Ьгапе ьЬост!с! Ъе сгстьЬес) ог Го!с(ес) цепс!у, Ьис пос т!цЬ11у рас1сес1. С!оье сЬе 1Ы оЕ сЬе сиЬе аис! шсиЬасе тс Еог 30 пнписеь ас 65'С. СЪсс)с сЪе сиЪе Егогп Ъгпе со игпе со епьиге сЬас сЬе шегпЪгапе с)оеь пос ехрапс) аЪоче йе 1ече! оЕ сЬе ЪиЕЕег. 'ч>гЬ1!е сЬе Р)х)А !ь е!ис!пи Егопт тЬе тпетпЬгапе, рЬосоигарЬ йе ие! аь с(еьспЬес) (и Ргососо1 2 со еьсаЫ)ьЬ а гесогс) оГ >чЬтсЬ Ьапс(ь чтете ио!асей. ТгапьГег йе Г)и(с! Гготп 5сер 7 со а ЕгеьЬ ш!сгоГиие сиЬе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
