Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 118
Текст из файла (страница 118)
1977; Еап8шап 1978; Са1!айпе ет а!. 1991). Нотчечег, тЬ!т юпр1е ге!а|юпвЫр Ьгеа)ь с!отти опсе |Ье яте оЕ РХА !га8тпепь ехсеес)з а тпахипшп ча!це, |чЬ|сЬ 1а с)еЕтпес! сЫебу Ьу |Ье сотпроягюп оЕ йе Ее! апс1 |Ье атгеп8|Ь оЕйе е1ес|пс Ете16 (Негчет апс1 Веап 1987). ТЬь 1пп!т оЕгею1ц6оп Ь геасЬес1 тчЬеп |Ье гас)1ца оЕ Еугатюп оЕ |Ье 11пеаг РЯА с)цр1ех ехсеесЬ |Ье роге яте оЕ |Ье Ее1.
ТЬе РЫА сап |Ьеп по 1опЕег Ье яечес) Ьу йе Ее1 ассогйп8 |о !та яте Ьц| шцат !патеас) пегасе "епйоп" тЬгоцЕЬ йе тпа|пх аз 1Е |ЬгоцЕЬ а япцогь шЪе. ТЬ!а шос)е оЕ пи8га6оп !а )спотчп аа "тертатюп." 5ечега1 гиайеша6са! Ееаспр6опт оЕ гер|абоп Ьаче Ъееп рцЫ!аЬес) ргечю|ь1у !р1еаае атее Ееппап апс1 Ег!асЬ 1982; 1.шпрЫп апс) Х!шш !982; 5те11|ча8еп !983; Ейпоп|Ьоп апс! Сгау 1984; 5!а|ег апс) Хоо1апс!! 1985, 1986; Еа1апс!е ет а1. 1987). ТЬе 8геа|ег |Ье роге яте оЕ |Ье 8е1, |Ье 1аг8ег йе Р)4А |Ьа| сап Ъе яечей ТЬцв, а8агоае Ее!а саат тч!|Ь 1отч сопсеп|га6опа оЕ а8агоае (0.1-0.2"Ст чт1ч) аге сараЫе оЕ гею)ч!п8 ехтгеше1у 1аг8е РЬ)А шо!есц!еа (Еап8шап 1978; 5егтчег 1980).
Нотчечег, ацсЬ Ее!а аге ехтгеше1у 6а8!!е апс) шцат Ье гцп Еог аечега! Еауя Ечеп |Ьеп, йеу аге шсараЫе оЕ геао1гАп8 1)иеаг РХА пю1есц!еа 1аг8ег йап 750 1сЬ ш 1еп8|Ь. ТЬе ипрогтапсе оЕ |Ьь !ши|атюп Ьесошеа аррагепт тч!|Ь йе геа1|ха6оп йа| а яп8!е Еепе6с 1осгь !е.8., йе Ьшпап с)уатгорЬтп!ость) тпау оссцру течега1 тЬоцаапс) 661оЬааез !аечега! ше8аЪааеа) оЕ Р)ч)А апс) йа| РХА пю1есц!ез ш йе шйчЫца! сЬгошоюшеа оЕ !отчет ец)сагуотет тпау Ье 7000 1сЪ ог |поте 1и 1еп8|Ь. А ю!цтюп то |ЬЬ ргоЫети ъчаа Еоцпс1 ш 1984, тчЬеп 5сЬ|чагтт апс! Сап|от герогтес) |Ье с)ече!оршепт оЕ рц!тес)-Ете!д Ее! е1естгорЬогеяа (РЕСЕ).
1п тЬ|а ше|Ьос1, а1|егпа6п8 огйо8опа1 е1естпс Ете!<Ь аге арр!1ес) то а Ее!. 1.аг8е РХА шо!есц1еа Ъесоше тгаррес1 )и тЬе!г гер|а6оп тцЬеа ечегу типе |Ье йгесбоп оЕ |Ье е!естпс ЕеЫ Ь а1тегес) апс) сап шаЬе по Ецгйег рто8геаа тЬгоцЕЬ |Ье Ее1 цп61 йеу Ьаче геог!ептес) тЬешае1чеа а1оп8 йе петч ахь оЕ |Ье е1ес|пс 6е1й ТЬе 1аг8ег |Ье РХА тио!есц!е, йе 1ои8ег йе типе тес)ц!тес! Еог йь геа68пшепт. Мо1есц1еа оЕ РЬ)А тчЬозе )итгог)ист)ои 5З геог[епсас|оп йпеа аге !еах йап йе репот1 оГ сЬе е!есспс ри[ае ъч$!1 (Лете[осе Ъе Ггасс|опасес[ ассотс)|пц со яге. ТЬе 1птис оГ гехи!ос|оп оГ РРСЕ т[ерепс[а оп хечега[ Гассогя [пс[ит)|пд ° йе т)евсее от пи[[отти[ту оГ йе Съчо е1естпс тле[с[а ° сЬе аЬео1исе [епксЬь оу йе е!ессгк ри!ьез ° сЬе апк)еь Ьесъчееп йе съно е!есспс 6е)т)х ° сЬе ге!астне хсгепйсЬ оГ сЬе е1ессПс тле!т[ ТЬе от[В[па[ РРСЕ гпесЬос[ т[ехст[Ъес) Ьу 5сЬъчагсг апт[ Сап(от [1984) снами сараЫе оу геао[чшй 0[ъ[Аь ир со 2000 1сЪ ш 1епйсЬ.
Ноигечег, аь а сопьеъ)иепсе от" |тпргочетпепсь со йе сесЬп[т)ие, гехо1исюп от" 0)ъ)А пю1еси!еь !агат йап 6000 1сЪ сап поъч Ье асЬтечей ТЬеае т|ече[ортпепса тпеап сЬас РРСЕ сап Ье пает[ со ъ)есегпт|пе йе яге от" Ьассепа! Вепотпеь апт[ сЬе пшпЬегь апт[ а[тех от" сЬгопюаотпеь оу ятпр1ег еи)сагуосеь [е.й., Тъ[еиголрога сгаяа, 5аггйаготугел сегеипае, апс1 5сйгаолаггйатотусел ротйе). Рог а!! огкап[хпь, Еготп Ьассепа со Ьшпапя РРСЕ |а ихет[ со хсис)у Вепотпе огйашга6оп апт$ со с1опе апт[ апа[ухе [атее 6.айгпепся ЕАЗСП' А|ъ|АЕУ515 ОГ 03ъ|А 053Ь|С ЕЕЕСТ|ъОРНО|ъЕ515 ТЬе Ыеа о( их!пд е|ессгорЛогеьь сЛгоиПЛ а гюррогйпй гпатпх со апа!)ае 0МА саите йов Н|п ТЬогпе, а ЫосЛепт ьйн| го!ой|я ъчЬо |и йъе иск|-С 960ь ънаь ъчогЫ пц ас сЛе |пас|сисе о( М гойлку ! и С!ахйоъч. ТЛогпе ънаь 1псегеяет$ |и йп6!пц Ьепег ънаух Со сЛагассег|ге сЬе ити|6р|е (огва о( 0|ъсА (Ьас соиЫ Ье ехсгассет$1гопь рип[(ед раг6с!еь о( ро|уогпаяпля Не геаъопед сЛас а согпЫпа6оп ос И|ссюпа$ апд е|есспса| (огсеа ъчоиЫ айоъч ьерагаСюп о1 0НА во1еси1ех СЛаС 6!Иеген |и Фаре ог а!ге.
0я|пд е)естгорЛогеь|ь 6тгоиПЛ айаг Ве1ь, Ье ънаь аЫе со ьерагасе хирегЛе1$са!, Ысйед, апс| йпеаг (огвх о( ро|уотан|гиь 0МА 6тас Лат| Ьееп га61о1аЬе|е6 ъч|сЛ ['Н)сЬупткйпе (ТЬогпе 1966, 1967). 1п !Лохе т|ауя ч(гол апт| гийосЛопдпа| 0МАа ъчеге сЛе оп|у |и(асс | депогпеь сЬас совЫ Ье ргерагет| |и риге(огв, ТЛогпе'х ъног|ь сЬеге1оге ассгассет$ $|п|е депега1 |псегея ип61 йте $ еаг|у С 970х ъчЛеп гезсг|сбоп ептугпеь орепет| сЬе роыЬ|!$(у о( апа|уг|пц!агдег 0МАь, апд а ъчау ънаь (оипт| со с3есес| яиай г|иапсЫеь о1 попгатйоас|Ые 0$ъ|А |п бе|я ТЬе посюп о( их|ой есЫдегп Ьгоитк|е со яа|п ип|аЬе|е6 0МА |и деЬ веете со Ьаче оссиггет1 |пт$ерепт|епс!у со съчо дгоиря ТЛе ргосебиге иае6 Ьу Аа|) апт| Вогьс (1 972) |пно|нет| )гпгпега!пй сЬе Ве| Ы сопсепсгасед т$уе ео|ийоп апд а |епе(Лу беата|и|па ргосеаа со гебисе сЛе Ьас|тйгоипс$6иогеьсепсе.
Ас СоЫ 5рг!ий НагЬог $.аЬогатогу, а Вгоир о[ ЫчеьйцаСогь Ьат1 (оипт| !Лат Наепюрйбит рога)ийиеигае сопта|пет$ Ьчо геьтг|сйоп асйнЫеь апт$ ъчеге апеврс!пй со ьерагасе йе ептугпеь Ьу юп-ехсЛапйе сЛгогпасойгарЛу. 5еагсЛ|пд (ог ъчауа Со аъаау со|ипьп (гасйопь гаркйу, СЬеу 6ес|6е6 Со Яа|п абрагове ее!ь сиота|и|ад Иайвепть о[5Н40 0ЫА ъч|ПЛ |оъч сопсепсгас|опь о( есЛк|юиз Ьгов|бе. ТЬеу юоп геайтет| сЛас сйе т|уе сои|с$ Ье |псогрогасес$ |псо йе це1 аид гиии|ай Ьийег ън|сЬоис ь|дп!йсапс!у аИесйпд сЛе гп1дга6оп о( йпеаг 03ъ|А (гайтепсх сЛгоиВЛ йе де1.
ТЬе сесЛпк|ие Веьсг|Ье6 1п сЛе|г рарег (5Лагр ес а|. ) 975) 'ь хсй1 нное!у иьед |и ап ехаепс|а$1у ипа|сегет$ (оггп сот1ау. Весъчееп )972 ап6 ) 975, йеге чная а чаъс 1псгеахе 1п сЛе иве о1 айагоае цеЫ аъ 3пчеас|дасогь гпарре6 с|еачайе я!сев оп сйе|г (аног!се 0МАь ън|сЛ сЬе гар)д!у ехрапсйпй хи|се ос геьсг|сс|оп епгуиъея |и (Лохе дауь, Пе1ь ъчеге садыс 3п ьаъчи-оИ 61аъх р!репеь апт| ъчеге гип негйсаПу !п е|ессгорЛогеьь сап|та апасЛе6 со Ьогпептат1е Неа(ЛЫС роъчег раей я ЕасЬ 0 МА тавр!е ънаь апа!утед оп а херагате 116|е су1 1пбг|са1 Ве|.
ТЬе Игнат гпот1- егп е|ес|горЛогеа|х аррагааль ънах 6ече|оре6 Ьу ъча|тег 5сЛаИпег, ъчЛо ъчаа СЬеп а Пгабиате атис1епт ат УвпсЬ. Кеа!$г!пд !Лат СЛе е| ее|пса| геь|атапсе о( ап абрагове це1 ь еахепт|айу СЛе ьагпе аъ (Лат о1 Сйе хиггоиптй па ЬиИег, 5сЛаИпег сопатгиссес$ Лог|топ(а| сап|та со Ьо1т$ хиЬвегее6 Ве!ь сйас сои|с| ассоптптот$асе пюге сЛап а 6отеп хагпр|ея 5сЬаИпег 6|ьспЬисе6 сЬе р!апх (ог сЛеье гпасЛ|пеа со апуопе ъчЬо аъ|ъет3 (ог СЬегп.
Опсе реор|е Вот очег йек |псгебийсу сЛас Л|ь гпасЛ|пеь ассиайу ъчог|ъе6, суйпдпса| це!ь сает |и Пп!е 61аъь сиЬеь гарк$|у 6!ьарреагет|, аи6 йе пеъчег "хиЬгпаппе" це|ь Сои|с Ьо|г|. РГО1ОСО~ 1 Адагоэе Се! Е!ес1горпогеыь ТНЕ КАТЕ Ор М!СКАТ!ОЬ! ОГ О!л!А ТНКОЕ.)СН АСАКОЬЕ СЕ!.$ ТЬе Ео!!очч!пц Еастотз т1ететш!пе тЬе гасе оЕ пи8гаг!оп оЕ 111)А гЬгои8Ь а8агозе 8е1з: ° Т)те тио!еси1ат з1ае оЕйе )9АЕА. Мо1еси!ез оЕ т!оиЫе-зггапт!ет1 Е)Ь!А пи8гате гЬгои8Ь 8е! шатп'- сез ат гатез йат аге !пчетзе!у ргороггюпа! со гЬе!о8ю оЕ йе пшпЪег оЕ Ъазе рапз (Не11ш8 ет а!.
1974). Еаг8ег пю1еси!ез ш!8тате тпоге з1оъч1у Ъесаизе оЕ 8геатег Егктюпа1 т!та8 аптек Ьесапзе тЬеу тчотш гЬе!г тчау тЬгои8Ь тЬе ротез оЕ тЬе 8е! 1езз ейк!епт!у тЬап япа!1ег пто1еси1ез. но з,в-альузто ода~асгозе о-да)асгозе Е!С!3КЕ 5.1 СЬепнса! 51тосйге оЕ Л агозе 5.4 д слаозе тз л из!ела дотчмеа сомдозетт от лттеаялт!з!с аезвттез оЕ в- апт! т-8а1астозе !о!пег) Ъу а-(! — тЗ) апт! р-(! — т4) 81усоз!т!!с 1!п)та8ез.
ТЬе !.-8а1ассозе гез!т)ие Ьаз ап апЬут1го Ьг!т!це Ъеттчееп йе йгее апс1 ях рояпопз (р1еазе зее Р!8иге 5-1). СЬа!пз оЕ а8агозе Еопп Ье1ка1 ЕтЬегз йас а88те8ате што зирегсот!ес1 зтгистигез гч)гЬ а тат!!из оЕ 20-30 птп. Се!атюп оЕ а8агозе гезп)гз ш а тЬгее-т!)тпепяопа! гпезЬ оЕ сЬаппе1з ччЬозе йашесегз тапа Егош 50 пш то >200 птп (Мог!оп ет а!. !98б; Еог геч!етч, р!сазе зее К!г)тратт!с)т 1990).
Сопипегста11у ргерагед а8агозе ро!утпегз аге Ье1!ечет! то сопсаш -800 8а1ассозе гезЫиез рег сЬатп. Ноччечег, а8агозе !з пот Ьогпо8епеоия ТЬе ачета8е 1еп8тЬ оЕ йе ро!узассЬагЫе сЬа!пз чаПез Еготп ЬатсЬ то ЬатсЬ апт! Егош шапиЕасшгег со шапиЕасгигег.
1п атЫЬюп, !отчет 8гат1ез оЕ а8агозе шау Ье соптапипагет! зч!1Ь ойег ро1узассЬагЫез, аз чче11 аз за!гз апт! рготешз, ТЬ!з чатт- аЬ!1Ьу сап аЕЕесс гЬе 8е111п8/ше1т!п8 тепгрегатите оЕ а8агозе зо1ит)опз, йе з!ечш8 оЕ РХА, апт! тЬе аЬт1Ьу оЕ йе Его гесочегет! Еготп йе 8е1 то зегче аз а зиЬзтгате !п епхушат!с геасг!опз. ТЬезе рогепт!а! ргоЫешз сап Ье ш)п!ш)хет! Ьу ияп8 зрес!а1 8гат!ез оЕ а8агозе тЬас аге зсгеепет) Еог йе ргезепсе оЕ !пЬтЪ|гогз апс! пис1еазез апт! Еог пипипа1 Ьас)с8гоипт! Е!иогезсепсе аЕтег зта!п!п8 и!й ейЫшш ЬгошЫе. Ртотосо! 1: Ацатоее ч е! Е!есгторЬотетц 5.5 Внбег: 0.5х Т85, 0.5 рб/гп! е1Ьб~нпг Пгспгие, е1ес1гсрбсгева 1 Нгсгп 1сг 1б Панга в 4 Ф е с с Ф н З с сг с 3 2 1 2 3 4 5 б 01аГапсе гпгбгагед (спг1 Е!С!!КЕ 5-2 гЬе гге!а!!опеЬ1 Ье!ччееп !Ье 5еее о! 06!А апг! !15 Е!ес!то Ьотейс МоЬ!И ° ТЬе сопсепчтаГ1оп 07 ацатобе. А 1шеаг РХА !гацшепг оуа ц)чеп ыхе пщгагеб аг дНегепг гагеб йгоицЬ це15 соптагпгпц ЙКегепг сопсептгацопб ог" ацагобе (р1еабе бее р)циге 5-2).
ТЬеге гб а 1шеаг ге1агюпбЬгр Ьегччееп йе 1оцапйпг ог' йе е1есггорЬогецс гпоЬ1!Ьу ог 1Ье Р)х)А ()г) апс1 йе це1 сопсепггацоп (1) йаг 15 г)ебсг)Ьес) Ьу йе ег)иаг)опг 1оц р = 1оц р, — К 1 1НЬеге р, 15 йе 1гее е1есггорЬогегк гпоЬ11Ьу ог" Р)х1А апг) К, 15 1Ье гегагдагюп сое11)с!епс, а сопбгапс ге1асег) го 1Ье ргорегцеб ог йе це! апг) йе ыхе апд 5Ьаре ог гЬе пицгацпц шо1еси1еб. ° ТЬе сопуоттиг!оп 07' гЬе РМА. ЯирегЬе11са! сиси)аг (гогш 1), п)с)сед с)гси1аг (1огш П), апг) 11пеаг (уогш 1П) Р)х)А5 ппцгаге 1ЬгоицЬ ацагобе це!5 аг 11Негепг гагеб !ТЬогпе !966, !967). ТЬе ге1агтче гпоЬ1116еб 01 1Ье йгее гогшб с)ерепг) рпшаН!у оп йе сопсепггацоп апс) гуре ог" ацагобе ибес) го ша1се йе це!, Ьш гЬеу аге а150 !пггиепсег) Ъу 1Ье бггепцгЬ ог" йе арр11ег! сиггепг, йе юпк ыгепцгЬ 01 1Ье Ьи!Тег, апг) йе г)епыгу 01 бирегЬе!1са1 ггч1515 ш 1Ье уогш 1 РХА ! )оЬпбоп апд Сгоббшап 1977).
!)пс1ег боше сопйгюпб, Тогш 1 РХА пицгасеб уабгег йап уогш П! РХА; ипг1ег ойег сопйг)опб, йе огс1ег 15 гечегбед. 1п гпобг сабеб, 1Ье Ьеы 1чау го НбцпцшбЬ Ьегччееп йе Йууегепг соп!оппацопа! !оппб ог' Р)х)А 15 ышр1у го 1пс1иде ш 1Ье це! а башр1е 01 ипггеагег) сггси1аг РЬ)А апг) а багпр1е 011Ье баше Р)ч)А 1Ьаг Ьаб Ьееп 1!пеаг)хег) Ьу с)1цебгюп чч!1Ь а гебгпсцоп епхугпе йаг с1еачеб 1Ье Р)х)А 1п оп!у опе р!асе. ° ТЬе ртебеисе 07 еГЬ!г1!ит ЬтотЫе 1и гЬе це! апг! е!естторЬотеь!5 ЬиЯет. 1пгегса1ацоп оуегЬ)с1- югп ЪгошЫе саибеб а г)есгеабе 1п йе пецагтче сЬагце 01 йе г)оиЫе-бггапг)ес) РЬ!А апг) ап шсгеабе ш Ъой 115 51Нпебб апд 1епцгЬ. ТЬе гасе ог пицгацоп ог йе !шеаг Р)х1А-41уе согпр1ех йгоицЬ це15 15 сопбес)иепг)у гегагс1ес1 Ъу а гасгог 01-159с (цЬагр ег а!.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
