Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 122
Текст из файла (страница 122)
ТЬе пе! Йеп пспу Ье "егазед" Ьу гнпп!пц йе зап|р!ез оЕЕ йе ае! !псо |Ье Ьиссег. Носе | Йаг |и!и!ке!з аге Ьезг зшсед Еог йе апа!узь ос згпаП РНА Еган|пепЬ (к3 !|Ы, Сагпег Егангпепсз гезо!че ! роог!у Ьесаизе ос |Ье Ь!ф чо!санез йас аге пепегаПу изед апс! Йе соп|рагасгче!у зЬогс !епаСЬ ос йе не!.
Рго1осо! 2 Ое1ес6оп о1 0МА ~и Абрагове Се!ь иСГЕ|С ЛС|О5 тНЛт НЛчв ВЕЕМ 5||В)ЕСтЕЕ| тО ЕЕЕСтКОИНОХЕ5|5 тЬгоиВЬ авагохе Ве!х и|ау Ъе детестед Ьу хта)п!пк апд ч!аиа1!гед Ьу 111шп|патюп тч)тЬ 300-пш )Л~ 11ВЬт. Ме|Ьо|Ь Еог ьта)п)па апд Ы|ша!Ьадоп оу Е|Ь)А ияпк еЬЬег е|Ь)йшп ЪгошЫе ог 5УВВ Со)д аге деаст!Ьед Ьеге; Еог 6|г|Ьег дега!1ь оп детесдоп оЕ пис!ек асиЬ, р1еахе хее |Ье ВЬсихяоп оп йе |2иапт)тат!оп оЕ Кис!е!с АсиЬ ш Аррепйх 8. ЬТАИММС О!л!А ИЧ СЕРБ 0ЬИЧС ЕТН10ШМ ВКОМ!0Е ТЬе пюя сопчешепт апд сопииоп!у ихед шейод со ч)аиа1!ае 13Ь)А ш абрагове Ве1а Ь ага!п!пВ |ч)й |Ье Виогеасепт |1уе е|Ь~гИшп ЬгогпЫе (5Ьагр ет а1.
1973), |чЫсЬ сопса!па а |Псус1к р1апаг кгоир йат !птегса1атеа Ъегъчееп йе атас)сед Ьазез оу Е|Ь)А. Едийиш ЪгогпЫе Ь)псЬ то Е|Ь!А тч)тЬ 1!и!е ог по зег)иепсе ргеуегепсе. Ас аатигадоп ш |ю1итюпа оЕ Ь)кЬ юпк ягепдтЬ, арргохипа|е!у опе е|Ь1|Ишп п|о1еси!е Ь 1птегса!атед рег 2.5 Ър (ЪЧагшВ 1965). АЕтег шаегтюп што йе Ье!)х, |Ье дуе!)еь регрепд!си1аг то |Ье Ье1ка! ахЬ апд ша1сех чап дег ЧЧаа1ь соптастх тч!|Ь йе Ьаье ра)гь аЬоче апд Ье1отч. ТЬе Вхе|1 роядоп оЕ йе р1апаг Вгоир ап|1 !та с)оае ргохипиу |о |Ье Ъаьеа салье дуе Ьоипд |о Е|Ь)А со ВЬР1ау ап !псгеахед Виогехсепс у!е!д сошрагед то |Ьас оЕ дуе ш Егее |ю!итюп. 0Ч гайатюп ат 254 птп Ь аЬаогЬед Ьу йе Ет!ч!А ап|1 тгапапипед то йе дуе; гад!ат!оп ат 302 пгп апд 366 пгп Ь аЪ|югЪе|1 Ьу йе Ьошп1 дуе Ьае! Е 1п Ъо|Ь саьея |Ье спетому Ь те-епииед а| 590 тип |п йе гед-огапае геВ!оп оЕ |Ье гдяЫе арестгиш !Еересг! апд Рао1етд 1967).
Весаиае |Ье Виогехсепт у!еЫ оу ей|дшгп ЪготпЫе — Е|Ь)А сошр!екель Ь -20 — 30-Ео)д Вгеатег |Ьап йат оГ ипЪоипд дуе, ЪапсЬ солта)п)пВ аь 1Ьт1е аь -10 пВ оЕ Е|ХА сап Ье детестед 1п |Ье ргеаепсе оу Егее етЬ!д)иш ЬготпЫе !0.5 !|В1ш1) ш |Ье Ве1. Е|Ь!д!иги Ьгогпк)е тчаа ауп|Ьеяхе|1 |и йе | 950ь !и ап е6ои |о дече!ор рЬепапйпсйпе со|про вче пурагюсЫа! адепта. Е|Ь|дюгп егиегкед |гоги |Ье ьсгееп!па ргокгати тч|тЬ Ву!па со!огя!| пюге Яест|че ада!пят тгурапохогпеь |Ьап |Ье рагепт сотпроипд, тчах по |поте тох!с |о иксе, !!ег рЬепалйгкйпея ВЫ по| !пдисе рЬотоьепь!т!хатюп гп саи!е (|Чат!а!пь апд ччоо11е | 952). Е| Ь ьт!!! иьед 1от йе тгеа|п|епт ап|1 ргорЬу!ахЬ о1 ттурапотяхЬ 1п сап!е !и |гор|са! апд аиЬ|го Е|Ь)д!иш ЪгошЫе сап Ъе иаед то де|ест Ьо|Ь япц1е- апд доиЫе-ьтгапдед пис!ек аскЬ (Ьо|Ь )ЭХА апд тстчА).
Нотчечег, йе аут|и!ту оЕ йе дуе Еог япВ!е-хтгапдед пис!ек асЫ Ь ге1аИче1у 1о|ч апд |Ье Виогехсепт у)е1д Ь сошрагат|че!у роог.!п Еасс, шлат Яиогеасепсе аааос)атед тч)тЬ яаш!пВ япц!е-хтгапдед РЬ!А ог ВХА Ь ат|ПЬитаЫе то Ь!пд!пк оГ йе дуе со аЬогт 5.14 Ргогосо) 2: Ресесдоп о) Р)чА т Аяагоье СеЬ 5.15 тсгаьсгапс1 дир!ехеь (и (Ье то1еси1еь. Рог асЫВюпа1 де1а(1ь оп ейЫшпс ЬготЫе, р1еаье ьее сЬе тЕоггпаИоп рапе! оп ЕТН)01БМ ВКОМ|0Е т СЬар1ег 1. Е(Ь!д|ит ЬгоспЫе Ы ргерагед аь а ьсос1с ьо1шюп оЕ 10 тВйп! |и Н О, лчЬ|сЬ Ы ьсогес1 ас гоот сегпрегасиге ш даг1с Ъосс1еь ог Ьосс!еь счгарред ш а1ипппигп Ео(1.
ТЬе с1уе Ы иьиа!1у тсогрогасед шсо аВагоье Ве!ь апсс е1ессгорЬогеыь ЪиЕЕегь ас а сопсепсгабоп оЕ 0.5 ри)т1. Носе йас ро!уасгу1атЫе Ве1ь саппос Ъе саьс нн|1Ь есЬЫшт ЪготЫе Ъесаиье В спЫЪссь ро1угпепхаВоп оЕ сЬе асгу1аисЫе. Асгу!агпЫе це1ь аге сЬегеЕоге ьса|пес1 ъчЬЬ йе е(ЬЫшпс ьо1исюп аЕ(ег сЬе Ве1 Ьаь Ьееп гип (р!еаье ьее Ргососо1 10). А11ЬоиВЬ йе е!ессгорЬогеВс гпоЫ!иу оЕ 1спеаг с1оиЫе-ьсгапс1ес1 Р)х)Л ы гедисед Ьу -15% |и йе ргеьепсе оЕ сЬе дуе, йе аЬс1Ьу со ехаиипе 1Ье аВагоье Ве)ь йгесс1у ипдег СЛг сПииипаВоп дог|па ог ас сЬе епд оЕ йе гип Ы а егеас аднапсаее. Ноъчечег, ьЬагрег РЫА Ьапдь аге оЬ(атед лчЬеп е!ессгорЬогеяь Ы сагпед оис т (Ье аЬьепсе оЕ есЬЫшпс ЬготЫе.
ТЬиь, счЬеп ап ассигасе ь(хе оЕ а рагдси!аг ЕгаВтепс оЕ Р)х)Л гь Со Ье еьСаЫЫЬед (е.ц., лчЬеп а геьгпсдоп епдопис!еаье тар Ы Ье)ие с|есегпипес1 Еог а Егаатепс оЕ Р)ч)А), сЬе ацагоье це! ьЬои1д Ъе гип т йе аЬьепсе оЕ е(Ь(йшп ЬгоспЫе апд ьса|пед айег е1ессгорЬогеяь Ы согпр!е1е. 5(а|п|иВ гь ассотр1ЫЬед Ьу (ттегяпц СЬе Ве! сп е1ес(горЬогеяь ЪиЕЕег ог Н,О соп(а|шпВ е(Ыйигп ЪгогпЫе (0.5 рВ)т!) Еог 30 — 45 иппи1еь а1 гоосп сегпрега1иге.
Реьса|и|пВ Ы по1 ияла!1у гес)и(гед. Нолчечег, десесдоп оЕ чегу япа1! аиюипсь (<10 пц) оЕ Р!х)А (ь шаде еаяег |Е йе Ъас)сВгоипд Виогеьсепсе саиьед Ьу ипЬоипд ейЫшт ЬготЫе (ь гедисед Ьу ьоардпВ сЬе ьсатед Ве1 гп Н О ог 1 тм МВ5О4 Еог 20 пшш1еь ас гоогп сетрегасиге. йТА!Ы!ЫС ОНА 1(Ч СЕРБ 1лЫЫС йс(ВК СОШ 5УВК Со1д Ы йе сгаде пате оЕ а песч и1сгаьепядче дуе чч|(Ь ЫВЬ ай!пду Еог Р)х)А апс1 а!аде Виогеьсепсе епЬапсетепс ирои Ъ|пд|пВ со пис!ек асЫ. ТЬе с(иапсит усе1д оЕ 1Ье 5УВК Со1д — Р)х(А сотр!ех |ь агеагег йап СЬаС оЕ1Ье ес)и|ча1епС е1ЬЫшгп ЪгогпЫе — РХА согпр!ех апд 1Ье Йиогеьсепсе епЬапсеисепс Ы >1000 Втеь цгеасег.
Аь а геяй, <20 ре оЕ доиЫе-ьсгапдед РХА сап Ъе с!егесСед си ап аВагоье Ве! (ир Со 25 Вгпеь 1еьь йап йе агпоип1 чдяЫе аЕСег ейЫпии ЪгоспЫе ага|и|пи). )и ас1йсюп, ьса(шпе оЕ аеагоье ог ро1уасгу1атЫе ВеЬ лч)1Ь й|ь с1уе сап генеа1 аь 1ис!е аь 100 ри оЕ япВ1е-ьсгапдес1 Р)х)А |и а Ьапд ог 300 ре оЕ КХА. 5'с'ВК СоЫ ьЬоъчь тах!тит ехсдаВоп ас 495 пт апс1 Ьаь а ьесопс1агу ехсдадоп реа1с ас 300 пгп. Ниогеьсепс еипььюп оссигь ас 537 пт. Рог асЫЬюпа1 деса|1ь оп 5'с'ВК Со1д, р1еаье ьее 1Ье рапе! Ье1очч. 5УВСС СОЕ0 5ТВх СоЫ 'ь а ртриесагу Яиогеьсеп1 ипьупчпеспса| суап|пе дуе, ьо!д Ьу Мо!еси!аг РгоЬеь, Ялас (ь иьед со ь(а!п ь)пе)е- апс| доиЫе-ьсгапс1ед пис!ек ас|дь (и Ве)ь. А)ЯсоиеЬ 1аг тоге ехрепяче, 5ЧВК СоЫ Ьаь ьенега! адчапсаВеь очсг РЬспаи(Ьпд(пе дусь ьисЬ аь е1ЫЕЯит Ьгогп|де.
|с В июге ьепяиче апс1 сап Ье оьед со ьса(п Ьо(Ь 0)с(А апд )С)с(А )п сопнепяопа| пеи1га! ро!уасгу|апяде апд ааагоье цеВ апд |и деВ соп(яп(пц депасигапя, ьисЬ аь игеа, а1уоха1, аид (оггпа!с1еЬус1е. ННЬеп ехс|сед Ьу ь1апс1агд сгаия|!иги|падоп а1 300 пт, 5УВК Со1д Я)неь гВе со Ьг!цЬ( ао)д Яиогеьсепс ь(Впа)ь (Ьас саи Ье сарсигес1 оп сопчепдопа| Ыас1с аис| ннЬЬе Ро|агоЫ Я!т ог оп сЬагцед соир1е деисе (1 СР)-Ьаьед )таВе десесбоп ьуьсепзь. СеВ аге ьСа|пед гМй 5ТВК Со1д айег е!ессгорЬогеяь (ь согпр!е1е.
ТЬе |ече! о( Ьас)сагоипд Яиогеьсепсе В ьо )осч йас по деьсап!пВ В гес)и(гед. ТЬе ь|а|пед пис|ек асЫ сап Ье сгаиь(еггед д(гес()у Со тетЬгапеь Еог поИЬегп ог 5оийегп ЬуЬпд)ласюп. 5УВК Со1с| гпау Ье геточед Егот пис|ек ас(дь гесочегед (гот Ве) ь Ьу едсапо) ргес)р(гасюп. 5УВК Со!с| В ьирр1юд аь а 10,000х сопсеп1гасе (п апЬудгоиь днпейу!ял!(ох|де (РМ5О). ТЬе ЫаЬ соьс о( йе дуе ргесЬЫеь Вь иье Еог гоидпе ьса!п)пе о( ее)ь. Носченег, (Ье дуе гпау Ье соьс-ейеп(че аь ап а|сегпаспе со иь)па гайо!аЬе1ед РЫАь (и 1есЬпк!иеь ьисЬ аь ь(пВ)е-ьсгаид соп(оппа(юп ро)утогрЫьт (55СР) апд депасиг)па ассад)епс ае) е|ес1горЬогеь(ь (РССЕ).
5.16 Отартег 5: 6е! Е!естгор)|отек!к о7" Р)к)А апд Ри1кед-Яе!д А5агоке бе! Е!естгор)|отек)к 5УВП Со!д 1к ыед со к1а|п Р!к)А Ьу коа!сспц |Ье ае1, айет кератадоп оК1Ье РсчА Пацтпеп1к, !и а 1:10,000-Ко!д й1ибоп оКсЬе ксос)т дуе ю1идоп. 5уВП бо!д кЬои1д пос Ье а|Ыед со йе п|о!сеп ааагоке ог со йе ае! ЬеКоге е1ес1горЬогеяк, Ьесаике 1ь ргекепсе 1и сЬе Ьагдепед ге! счП! саике кечеге йксогсюпк ш сЬе е!ессгорЬогеск ргоретдек оК |Ьс Р!к)А апд ПХА.
ТЬе Вгеасекс кепяПЫ|у ь оЬсашед ччЬеп сЬе це! ь П!шпшасе|1 чч11Ь 1Л' ПВЬс ас 300 шп. РЬотоВгарЬу ь сагпед ои| ак декспЬе|1 Ье!очч чч)СЬ ггееп от уеПо|ч 61Сегк. ТЬе дуе ь кепядче Со Пиогексепс ПВЬс, апд ччог)т)пц ко!исюпк сои|а)п!пц 5УВП Со1д (1:10,000 й1исюп оК |Ье ксос)с ко1шюп юррПед Ьу Мо1еси!аг РгоЬек) кЬои!д Ье КгекЫу спаде даду ш е1ессгорЬогеяк Ьийег апд к|отед а1 гооти Сегирега1ше. РНОТОСКАРНЪт ОГ 0)Ъ)А !)Ъ! СЕЕ6 РЬосоцгарЬк оК е|ЬЫпнп-ЬготЫе-ксаше|1 Ве!к гпау Ье та|1е ияпг сгапяшссед ог шсЫепс !Л' ПаЬ| 1Р1еаке кее Р15иге 5-4).
Мокс соиппегс|аПу ачадаЫе дечкек 1сгапкП)шп)пасогк) еиис РЪ' ПВЬс ас 302 пгп. ТЬе Пиогексепс у)е1д оК есЬЫш|п Ьгоп|Ые — РХА сотр1ехек 1к сопкЫегаЫу Вгеасег ас сЬ|к ччаче1епВ|Ь йап ас 366 птп ап|1 кПгЬ|1у 1екк сЬап ас кЬогс-счаче1епгсЬ (254 пгп) ПВЬ|. Но иечет, йе атпоипс оК пкЕдпц оК сЬе Р!к)А ь ишсЬ !е|ь ас 302 птп йап ас 254 пгп (Вгип)с апд 5ипркоп 1977). Тодау, ппаВек оК ейЫшгп-ЬтогпЫе-ксашед ге!к |пау Ье сарсиге|1 Ьу 1псеВгасед куяеиь списанное ПВЬ| юш сек, 6хед-Косы ЖВ)са! сагпегак, апд |Ьеппа! Рппсегк. ТЬе ССР сагпегак оК сЬеке куксетк ые а ччЫе-аиВ1е гооп|!епк !К = 75 иип) 1Ьас аПоччк сЬе десессюп оК чету япаП атпоипск оК есЬЫшт-ЬготЫе-кса)пед РХА (0.01 — 0.5 пц и с1аипед).
1п сЬе пюге адчапсед куксетпк, ае1 ипааек аге д!гесду сгапкписсед со а сотприсег ап|1 чьиаПгед 1и геа! 1ипе. ТЬе ппаае сап Ье гпашри1асе|1 оп ксгееп гч!1Ь гекресс 1о 6е1д, Косик, апд сшпи1ас|че ехроюге 1ипе ргюг со рппсспа. 1пйчЫиа1 1таВек сап Ье рппсед, качед, ап|1 ксоге|1 е1ессгопкаПу |п кечега1 61е Коппаь апд Кигйег тпашри!аСед сч)СЬ ппаВе апа!укь кой|чаге ргоВтатк.
ТЬе ачегаце 61е яге сот а кса!пед ацатоке ае! ппаге ь -0.3 МЬ; сЬы, ехсепяче агсЬ)ч)пц гет)шгек! атае-сарае)су к|отаре куксеиь. А!1ЬоиВЬ 1пйчЫиа1 рппсои1к сок| оп!у а Ке|ч репшек сотрагед со -1 доПаг Кот а Ро1агоЫ РЬосоцгарЬ (р1еаке кее Ье1осч), |Ье Ьагдччаге Кот а т)п)тшп 1п1ецгасед куяет сап сок| кечетй сЬоыапд доПагк апд сопядетаЫу тоге Кот а кесир чч11Ь а 1агВе аккогстпепс оК ассеккопек.
Ътепдогк йас кеП це1 досшпепсадоп куяетпк |пс1иде А1РЬа 1ппосесЬ (5ап Ьеапдто, СаПкогша, Росодупе (Наг|1агсд, ЪЪт!ксопяп), апд 5|гасацепе (Ьа )оПа, СаПКогша). АЫюиВЬ сЬе гею1|к оЬсашед |чПЬ |Ьеке досшпепсадоп куксеиь аге епдге1у касьКассогу Кот |иипейасе апа!уяк, сЬе рппсед ппааек Каде диг|пд ксогаВе апд аге дечоЫ оК ек|Ьеск арреа1. Моте р!еакспд апд дигаЫе гею1ь аге оЬсашед Кгои| Ь!ф1у кепядче Ро!агоЫ 66п Туре 57 от 667 1АВА 3000). ЪЪт)СЬ ап еКК|с!епт 1!Ът ПаЬС коигсе ()2500 тпЪЪ|7сшг), а Ъ|тгаггеп 22А (год)огапВе) КП|е, апд а аоод 1епк 1К = 135 иип), ап ехрокиге оК а Кебич кесопдк и юйк)епс со оЬСаш 1таВек оК Ьапдк сопташшВ ак ПП!е ак 10 пВ оК РХА.
ЪЪ'11Ь а!опц ехрокше Сипе апд а к|типа 1Л' ПаЬ| юигсе, сЬе Пиогексепсе еипссед Ьу ак!гп!е ак 1 пд оК ей|йшп-ЬгогиЫе-кса|пед Р!к)А сап Ье гесогдед оп 6!т. Рог |1есессюп оК ех1гете1у Кашс РЬ)А Ьап|Ь ксашед чч11Ь сЬь |1уе, а 1епк сч11Ь а кЬогсет Коса1 1епасЬ (К = 75 иип) кЬои1д Ье ыед 1и сотЬ)пасюп чч11Ь а сопчепсюпа1 ччес-ргосекк 6!т (е.ц., Кода)т по.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
