Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 119
Текст из файла (страница 119)
1973). ° ТЬе арр!1ег! чо!Гаце. Аг !очч чо1гацеб, гЬе гаге 01 пицгацоп ог" !гпеаг Р)х)А угацшепгб 15 ргороггюпа! го 1Ье чо!гаце арр!гед. Ноччечег, аб 1Ье бггепцй ог" йе е!есгпс !)е1й !5 га)бег), йе шоЪ!11!у 01 Ь)цЬ-шо!еси1аг-чче)цЬг угацшепгб шсгеабеб дНегепг)а11у. ТЬиы 1Ье е!Тес!)че гапце 5.6 С)сарсет 5: Се! Е1ессторЬотег(5 оЕРИА апс( Ри15ес(-)тсе!с(АРатоге бе1 Е!есгторЬотегсг ТАВЕЕ 5-1 Ргорегйеа о( (31((егепг Туреа оЕ АВасоаеа СЕШМС Темреклтпке ('С) Местсмс ТемрекАтоке ('О СОммекОАЕ )У(Аме5 ТУРе Ог АсАкО5е 5сапс(атс( а8атогег 1осч ЕЕО Ьо!асей (сосо СейтВит срр. 5еаКет 1.Е (ВюИЪспа1сет) А8агосе-ЕЕ (НЗВ) Еосч ЕЕО А8агоье (5ггага8епе) Мо!еси1аг Вю!о8у Сеггсйей 6гас)е (В!о-Кас)) 35-38 90 — 95 5!а ос(оп( ахи тагес !осч ЕЕО Ьо1асей Стого Стасс1апа срр.
5евКепс Н6Т (ВюИЪВса1сег) А8агоге-НСТ (()5В) 40-42 ЕаяЕапе (ВюИЪспа1сег) 5еаКегп 6о10 (В!оИЪ!сса)сег) СЬгопюьогпа! 6гайе АВагоье (Вю-Кас1) Н!8)с-Ке)-зстепхг)с а8атогез 85-95 34 — 43 Кот те!с!и878е!!!пе сетретасите (тоа5)с ес0 ахи тагес 1ой те10п8 25-35 35 8-!5 Зеар!аопе (В!оИЪ!сса)сег) Хп5!ече СТ6 (ВюИЪВса1сег) 5еаргер (В!оЧЛпССа)сег) 63-65 65 40-45 и1сга-1осч спе!пп8 Еосч-ч!Тюог!ТВ !оп те!с!ахуне!!тх сетретасите ахатазег 25 — 30 38 30 1пСеп (ВюИЪВса1сег) Хп5(ече 3:1 (В!оИЪ!Сга)сег) АВагоге Н5 (ВюИЪсССа1сег) 70 85 75 оЕ аерагабоп (и а8агоае ВеЬ с1есгеаае5 а5 сЬе чо!саВе !5 шсгеааес1.
То оЬсаш шахппшп геао!п- сюп оЕ РЬ)А Ега8шеп15 >2 1ЕЬ !и 5!Ее, аВагоае Ве15 5Ьоп1с! Ье гпп ас по пюге ТЬап 5-8 ст)сш. ° ТЬе суре о~адатоге. ТЬе сии пта)ог с!а55е5 оЕ а8агоае аге 5сапс!агс( а8агоае5 апс! 1ои -ше11!п8- Сешрегагпге а8агоае5 (К(г)сраггсс)с 1990). А СЬ(гс) апс( Вготч(08 с1а55 сопя515 оЕ спСегшейаге ше!с)пц)8е11)п8 сепсрегасцге а8агоае5, ехЬ(Ь(с!пц ргорегс!е5 оЕ еасЬ оЕ ТЬе сио спа)ог с1а55е5. 14т!СЬ!п еасЬ с!а55 аге чагюп5 Суреа оЕа8агоае5 СЬаг аге иаес( Еог ареста!(гес( арр!)сагсоп5, р!еаае ТАВЕЕ 5-2 КапВе о( 5еРагаНоп оЕ ЮЫА Гга8шеп15 СЬгоиВЬ О!Е(егепг ТУРе5 оЕ АВагоаеа Я!хе КАмсе От Ес)У)А ГВАсмемт5 Ке5Осуео Ву стАксоо5 ТТРе5 Ое АсАкО5е5 ЕОТУ Сешмс)Местсмс еоуч Сешмс)Местсмс ТемРекАтоке Нссн Сес Вткемстн Т е м Р е к Ат о к е еоуч тт!5СО5сту АСАКО5Е(%) БТАмоако 700 Ьр со 25 )сЬ 500 Ьр со ! 5 )сЬ 250 Ьр со 12 )сЬ 150 Ьр со 6 )сЬ 80 Ьр со 4 )сЬ 800 Ьр Со 10 )сЬ 400 Ьр со 8 )сЬ 300 Ьр Со 7 )СЬ 200 Ьр со 4 )сЬ !00 Ьр со 3 1сЬ 500 Ьр Со 1 1сЬ 100 Ьр со 500 Ьр !ОЬрю !ООЬР 0.3 0.5 0.8 1.0 1.2 15 2.0 3.0 4.0 6.0 800 Ьр со 10 )сЬ 400 Ьр со 8 )сЬ 300 Ьр со 7 )сЬ 200 Ьр со 4 )сЬ !ОО Ьр Со 3 КЬ 500 Ьр со ! 1сЬ Ртсосо! $| Ацаголе Се! Е$есггорйогел(л 5.7 аее ТаЫеа 5-1 ап|$5-2 апс$ СЬе ассотрапу|пц рапе|, СЕА55Е5 ОЕ АСАКО5Е АЫ0 ТНЕ|К РКОР- ЕКТ|Е5.
° ТБе е1естгорйотеяЬ Ьюфет. ТЬе е)ессторЬотецс пюЪ||йу оЕ 0)ъ|А ь аЕЕессег$ Ьу йе сотроясюп апс1 юпк астепцсЬ о1йе е(ессторЬотеял Ъи11ет. (п сЬе аЬаепсе оГ |опа (е.ц., |Е ъчасет ь юЬасзсисес$1от е! ессюрЬотеяа Ьийег |п йе це| от $0 сЬе теаетмойь), е(есспса| сопг|исс|м|су Ь пппипа! СЕА55Е5 ОЕ АСАКО5Е А)ъ30 ТНЕ|К РКОРЕКТ|Е5 ° Яапдагг! (Тл(цИ-те!1!пц-Сетрегаелге1 ацагоаеа аге гпапи1ассигеИ 1гогп сизо арес|еа о1 аеаъчеег$; Се||с(|ит апИ Сгасйапа.
ТЬеае ацагохех д(йег |и йе|г цеИпц апг| гпей|пц СегпрегаСигея Ьиз, 1ог ргасСка| ригроаея ацагоаеа йопз е|йег юигсе сап Ье иаед со апа|уле аиИ Ьо|асе 1гацгпепса о1 0$йА гапц(пц |п а)ле 1гогп 1 (гЬ со 25 ||Ь. 5енега| сопзпзегс|а| цгада о1 ацагоееа Ьаче Ьееп сеасеИ сЬаС О) Иьр|ау пкп|гпа| Ьас(ъцгоипИ йиогеасепсе айег Яа|п|пц илй еСЬк3впз ЬготЫе, (2) аге 1гее о1 0Ы|ье ап|$ КЬ|аае, (3) И(ар(ау гп|пипа| |пЬ|Ь|сюп о1 гели)ссюп епг|опис(еаъсь апг$ Пцаае, апИ (4) цепега1е гпос$еас агпоипЬ о1 е|ессгоепс|о ояпоС|с йоъч (ЕЕО; р)еаае аее Ье|онч). (ъ|еънег сурок о1 асаис$агс$ ацагоае согпЫпе ЫцЬ це| ягепц(Ь зчй (оън ЕЕО, айпи |пц цеЬ со Ье саъс илсЬ ацагоае сопсепСгайогь ав |оъч аа 0ЗУи ТЬеае це)а сап Ье ихеИ |п сопнепСюпа$ е(ес|горЬогеа|а Со юрага(е Ь(цЬ-то(еал(аг-иге(цЬс 0ЫА (ир со 60 $гЫ, Ас апу сопсеп1гаиоп о1 сйеае пеъч ацагоаее, йе арееИ о1 т(цгасюп о1 Изе 0)ъсА Ь (псгеалеИ Ьу 10-20',4 очег йас асЫечеИ ияпц сЬе 1оггпег ~апИагд ацагоаее, с$ерепгйпц оп Ьийег суре апд сопсепсгасюп.
ТЬ|а (псгеале сап (еаза со а(цп|йзсапс лам(пца о1 Итие |и РГСЕ о1 тецаЬааеа(лед 0МА. ° Еоъч те!1(пц(цеИтц тетрегасиге ацапьсь Ламе Ьееп тоИ|йзеИ Ьу Ьус|гохуесЬу|асюп апг$ Феге1оге те|с ас сегп регасигеа |ои|ег сЬап сЬоае о( яапдагИ ацагоаея ТЬе с$ецгее о( а иЬхс(сит(оп де(ест! пел йе ехасс гпе|сЫц апИ цей|пц Сетрегазиге. $.оиг псе(С(пцгцей(пц Сетрегаг|лге ацагоаеа аге сьег$ сЫейу 1ог гарЫ гесачегу о1 0МА, |ь пзоаз ацагсьеа о1 СЫа Суре пзе|С аз Сепзрегазигеа (-65'С) йаС аге а(ци|йзсапг(у |оъчег Изап СЬе пзе|йпц сетрегасиге о1 Иир|ех 0МА.
ТЬь 1еасиге айоига 1ог ягпр|е риг)йсайоп, еплугпаск ргосеаа(пц (гелсг(сс)оп епдопис(еале И)цеас(оп(3(цас(оп) о( 0ЫА; апд айоъча Ьассепа| сгапа(оггпас)оп илсЬ пис|ек аскЬ И(гесс(у |п йе гепзессед це!. Аа Ь сЬе сале илсЬ яапс$агс$ ацагохея пзапи(ассигега ргоМИе цгадеа о1 (оънпзе|йпц-сетрегасиге ацагоаех йас Ьаче Ьееп сеасеИ со с |ар(ау пкгкгпа! Ьас||цгоипс| йиогеасепсе айег яа)п(пц ъчйЬ ейЫвгп Ьгот)де, 1о Ье 1гее о( 0(ъ|тье апд К)аале асс|м|(у, апИ со И|ар(ау гп|пнпа| |пЫЬ|сюп о1 геасгссс(оп епИопис(еаъеа апИ 3(цаъе.
$.оил-гпе|с)пц-(епзрегасиге ацагоаеа по1 оп|у псе)с, Ьис аЬо це| ас |ои сетрегасигея ТЬ|л ргорегсу айоиь йет со Ье ЬеЫ ть П9в|Ып сЬе 30 — 35"С гапце, ю Фа1 се|Ь сап Ье епзЬесЫеИ илйоис Иатаце. ТЫа сгеасгпепс Ь иаейз! |и ргераппц апг| етЬесЫ|пц сЬгопзоюпза! 0)ЧА |п ацагоае Ыос|ь Ье1оге апа(ух|а Ьу РЕСЕ (р(еаъе аее Ргососо)а 13 апг! 14). СЬет|сайу пзоИ|йзед ацаголе Ьаъ а(цп|йзсап((у |поте яеч|пц сарасйу СЬап ап е9ияа|еп1 сопсеп1гайоп ог' яапИагИ ацагоае (р(еаае аее ТаЫйь 5-1 апИ 5-2). ТЫа йпИ(пц Ьгь Ьееп ехр(о(сед со пса(ъе ацагоась сйас арргоасЬ ро|уасгу|агпк|е |и сЬе|г геюсч|пц рои ег апИ аге йеге(оге | ьейл$(ог лерагас|оп о| ро! упзегаъе сЬа|п геасйоп (РСК) ргоИись, хгпай 0МА 1гацгпепь, апг$ агпай Как к1 3|Ь.
и Ь поъч ргьа(Ые 1о гею|не 0)ъ)А Иоъчи 1о 4 Ьр апс| 1о лерагасе 0МАа |и сЬе 200-800-Ьр гапце Фас И|йег |п х)ле Ьу 2 / (р(еале аее ТаЫе 5-2). Весаиае о1 Фе напасюп |и ргоИись (гоги гпапи1ассигег со пзапи1ассигег, й ь ахи ааЫе со геаИ йе ялр- р|$егЬ саса|оц со оЬ(а|п пюге ргесье |п1оппасюп аЬоис арес|йзс Ьгап|Ь о1 ацагоае. ° Е!естгоепс|о.оятоа)а |п ацагоае цеЬ, сЬе хреед а1 и|Ь|сЬ гюс$е|с ас|гЬ гп|цгасе сои|аг|3 сЬе роа(с(че е|ес1гог|е Ь айесСеИ Ьу а е|есСгоепс|о-ояпояя ТЫа ргосе|ь ь Иие Со Ыпаед аскйс цгоира (иаиайу юйазе) айасЬес$ со йе ро)ухассЬапг|е гпаспх ог'йе ацагоае це!.
ТЬе ас(И(с цгоира (пйке роясяе|у сЬагцед соипсег(опа (п сЬе Ьийег сЬас гп|цгасе йгоицЬ йе це! сои агг$ Изе пецайче е|ессго||е, саияпц а Ьи(сг Пои| о1 |к|- иЫ Изас т|цгасеа |п а гйгесйоп орроясе со (Ьас о1 сЬе 0ЫА. ТЬе ЫИЬег йе Иепл|(у о1 пецайне сЬагце оп йе ацаголе, СЬе цгеаСег СЬе ЕЕО йои апд йе роогег йе аерагас(оп о1 пис|ек асЫ 1гацтепся КесагИас|оп о1 япай 0ЫА (гацтепса (к10 ИЬ) Ь гп|пог, Ьис |агцег 0Ь(А пзо(еси(еа сап Ье а|цп|йзсапз(у ге|ап|ег|, еарес(айу |и РГСЕ. То аноЫ ргоЫетя |С Ь Ьеат 1о ригсЬаае ацагоае 1гогп герисаЫе пзегсЬапса апд со иле суреа о1 ацагоае (Ьас И(ар(ау |оъч |ел еЬ о( ЕЕО.
Ацагоаеа Иза( аге аоЫ аа "лего" ЕЕО аге ипг|еягаЫе (ог Лно геаюпя ТЬеу Ьане Ьееп сЬегп|сайу гпоИ)Изей Ьу аИИ|пц роя(ве|у сЬагцег! цгоира, иФз|сЬ пеиггайле йе юйаСед ро(уаассЬаг(Иеа |п йе це! ЬиС пзау |пЫЬ|1 аиЬаег|иепс еплупзе геасйопц аиИ сЬеу Ьаче Ьееп аг|и|сегасес$ Ьу агЫ|пц |оссьс Ьеап цит, ъчЫсЬ гесаггЬ ехри|- а)оп о1 иазег (гопз СЬе це! ($0г)ъразпсй 1990). 5.8 СЬартет 5: бе! Е!естторЬотеть 07'!хЖА апсГ Ри!тес)-Яе!сГА8атозе Се! Е!естторЬоте515 апс1 РХА ии8гасез 5!овч!у, 1Т ат аП.
1п ЬцГГег оГ ЬТВЬ юпк 5!ТепВТЬ (е.8., 1Т 10х е!естгорЬогеяз ЬцГГег ып)зта1сеп1у цзес)), е!естПса1 сопс!цстапсе 15 чету еГЕстепт апс1 я8пгПсапс атпоцптз оГ Ьеат ате Вепегасес1, ечеп ччЬеп пюс!егате чо11а8ев аге аррПей 1п тЬе июгзт сазе, ТЬе Ве1 тпе115 апс) ТЬе Р)х)А с)епатцтев. Рог с!етаП5 оГ соиипоп1у цзес! е!ессторЬогеяв ЬцГГегв, р1еаве зее ТаЫе 5-3. ЕЕЕСТКОРНОКЕЯЬ В!.)ТГЕКЯ Еечега1 сНГетепт Ьцууегв аге ачаПаЫе Гог е1естгорЬогеяв оГ паНче, 11оцЫе-втгапс1ес1 РХА.
ТЬеве сопташ ТП5-асетате апс1 ЕРТА (РН 8.0; ТАЕ) (а!50 саПес! Е Ъцйег), ТгЬ-Ьогате (ТВЕ), ог ТП5- РЬоврЬате (ТРЕ) ат а сопсептгаПоп оГ -50 тим (РН 7.5 — 7.8). Е!естгорЬогеяз ЬцГГегв аге цвца1- 1у шас)е цр ав сопсептгатес! 5о1цНопз апс) втогес) ат гоопт сетирега!цге (р1еазе зее ТаЫе 5-3). АП ОГ йезе ЪШТегв вчот)с ъчеП, апс) йе сЬоке апюп8 ТЬетп ь!агВе1у а тпаьег ОГ регзопа! ргеуегепсе. ТАЕ Ьаз йе!озчеа! ЬцГГет)п8 сарасПу оГ ТЬе ТЬгее апс1 зчП1 Ьесопте ехЬацатес1 !Г е1естгорЬогеяв 15 сагу)ес) оцт Гог рго!оп8ес1 реутов!5 оГ типе.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
