Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 121
Текст из файла (страница 121)
А ЪЧАКН1НС ТЬе ааагозе зо!изюл сал Ьесоте зирегЬеасес! алс! гпау Ьо!1 спо!елку !! Ь !з Ьеасес! 1ог соо !ола !и йе т!егоччаче очел. Неас сЬе з1шгу !ог сЬе пшшпшп силе гессшгес! со а1!осч а1! оГ сЬе ага!па о! ааагояе со йсяяо!че. ССпс!!яяо1чесС ааагояе арреагя ая япаП "!епяея" ог сгапя1исепс сЬ1ря !!пас!па сп йе яо1шюп. ЪСсеаг ап очеп пип апс1 сагеса11у яалг! йе!>асс!е ог Нас!с 6от Ите со Нгпе со пса1се сиге йас апу иппсе! сес1 ага!ля ог ааагояе ясссЫпа со с!се сча11я епсег сЬе яо!илоп. Ьопаес !сеасша сшзея аге гесгшгегС со с1пп яо1че Ь!аЬег сопсепсгас!опя оГ ааагояе сопср1есе1у. СЬес!с сЬас сЬе чо1ите о! сЬе яо!и6оп Ьая пос Ьееп с!есгеаяес! Ъу сгчарогасюп с!ос!па Ъо111па; гер!ешяЬ шЬЬ Н О !упесеяяагу.
5. Т1зе шзи!асес! К!очез ог сопу со сгапзсег сЬе Лаз!с/Ьосс!е шсо а счасег ЬасЬ ас 55'С. 'ссгЬеп сЬе гпо!сеп це! Ьаз соо1ес1, агЫ есЬЫипп Ъгопи1е со а 6па! сопсепсгас1оп ог 0.5 !сцсш1. МЬс йе це! зо!исюп сЬогоиаЫу Ьу цепс!е зсч!г1!пК. А 1МРОРТА1ЧТ 5УВй Со!с! зЬоиЫ лог Ье аг!с!ес! Со СЬе то!Сел ае! зо!и0ол, Р!еазе зее РгоСосо! 2 1ог 1игСЬег с!1зсиззюл. СЧЬеп ргерагспа ае!я сп р1аяие !1испе1 сгауя, и ы ппрогсапс со соо1 сЬе гпе!сес! ааагояе яо!ипоп со <60'С Ьесоге сазсспа сЬе ае1. Нопег яо! исюпз счагр апсС сгаге сЬе сгауя.
Ас опе сапе, яо! ипопя соп- 5.!2 СЬаргег 5: бе! Е!есггорЬогея!я оу" Е3)ъЕА анс( Рн)яес)-Еге!г! Адагняе Се! Е!есггорЬагея)я ТАВЕЕ 5-5 Ранке оЕ 5ерагаВоп 1п Се!я Синга(п1пк Р1ЕЕегепг Агпонпгя оЕ 51апг(агг! Еоъч-ЕЕО Акагояе АОАкО5е СомсемткАтсом см Сес (% !чч)ч)) РАМОЕ ОГ 5ЕРАКАТЮМ ОЕ ЕсмеАк Р)ъ)А МОсес исе5 ((сЬ) саспш8 Ьс8Ь сопсепсгасюпз оЕ а8агозе (2% ог аЬоче) ъчеге зсогес) ас 70 С со ргечепс ргешаснге 8е11)п8. Ноъчечег, йп сгеасспепс Ьаз Ьесогпе нппесеыагу Ьесанзе о! нпргочегпепсз си сЬе шесЬоъ)з наес) со рнп(у апс) ргераге зсапс)агс( а8агозез. ЪЧЬПе йе акагояе яо!исюп 15 сооПпк, сЬоояе ап арргорпасе согпЬ Еог Еогпппк сЬе яаспр!е я!оь (п йе ке!.
Роя(с)оп ТЬе согпЬ 05 — 1.0 ппп аЬоче йе р1асе яо сЬас а соспр1есе ъчеП ь Еоппес1 ъчЬеп ТЬе акагояе 15 асЫес) со ТЬе гпо1й Мозс аррагасняез Ьаче ыбе ъча1!з ог оньЫе "1е8з" сЬас а1!оъч арргорпасе р1асегпепс оЕ сЬе сопсЬ,! Е йЬ сз иос йе саяе, апд (( сЬе сопсЬ ъз соо с1озе со йе 81азз р1асе, сЬе Ъазе оЕ сЬе ъче1! спау сеаг ъчЬеп сЬе соспЬ ь ъч)сЫгачгп, саняп8 загпр)ез со 1еа1с Ьесъчееп йе 8е! апс) йе 81ая р1асе. ТЬсз ргоЫеш Ь июге сопнпоп ъчЬеп!оъч сопсепсгаиопз о! а8агозе (<0.6%) ог 1оъч-8е!1ш8-сешрегаснге а8агозе аге гьес1.
Роиг ТЬе ъчапп акагояе 501исюп шсо йе спо1й ТЬе 8е1 зЬон10 Ье!ъесъчееп 3 инп апс) 5 инп сЬ)с)с. СЬес)с сЬас по асг ЬнЬЫез аге нпс(ег ог Ьесъчееп сЬе сеесЬ оЕ сЬе сонсЬ. Асг ЬнЬЫез ргезепс )и йе шо1сеп Ке! сап Ье генючес1 еая1у Ьу роЫп8 йесп ъч(сЬ сЬе согпег о!а К(шъч(ре. ЪЧЬеп ргерапп8 Ке!з йас санса)п 1оъч сопсепсгаиопз о! а8агозе (<0.5%), Ргзс ронг а знррогсш8 8е! (1% а8агозе) ъчиЬонс ъче!1з. АИоъч сЬЬ 8е1 со Ьагъ)еп ас гооги сенсрегаснге оп йе 81ая р1асе ог р!азс1с ьау, апс) сЬеп роы сЬе!оъчег-регсепса8е 8е! йгесс!у оп сор оЕ йе зиррогип8 Ке1.
5сас)с)п8 сЬе 8е1з сп сЬсз ъчау геъ(всея сЬе сЬапсе сЬас сЬе 1оъчег-регсепса8е 8е! ъч)11 6асшге с)нг(п8 знЬзеъ)непс шашрн!ассопз (е.8., рЬосо8гарЬу апъ) ргосеясп8 Еог 5ошЬегп ЬуЬпйаапоп). Ма)се зиге сЬас Ьой 8е!з аге шас(е Егош сЬе загпе ЬассЬ оЕ Ьн((ег апъ) сопсасп сЬе запъе сопсепсгасюп оЕ есЫйшв Ьгопнде. Се!з сая ъчиЬ 1оъч-нсе16п8-сепсрегасше а8агозе апс( 8е1з сЬас сопса(п 1еь сЬап 0.5% а8агозе сап а1яо Ье сЬ)Пей со 4'С апс) гнп си а со!д гоопс со гес)нсе йе сЬапсе оЕ Сгасшге. АПоъч ТЬе ке! со яес сопср!есе!у (30 — 45 пиписея ас гоогп сегпрегасиге), ТЬеп роиг а япаП а!повис оЕ е!ессгорЬогеяя ЪиЕЕег оп йе сор оЕ сЬе ке1, апс! сагериПу геспоче сЬе сопсЬ.
Роиг оЕЕ сЬе е1ессгорЬогеяя ЬиЕЕег апс! сагериПу гегпоче сЬе саре. Моин! ТЬе це1 ш ТЬе е1ес- сгорЬогеяя сап1с. АсЫ )ияс епоикЬ е1ессгорЬогея)я ЬиЕЕег со сочег йе ке! То а с1ерй оŠ— 1 ппп. 1с ь пос песеяагу со ргегнп ап а8агозе 8е! Ъесоге сЬе запср!ез аге!оас(еъ). М(х ТЬе яагпр1ея оЕ Р)ъ)Л ъч(ТЬ 0.20 чо1ипсе оЕ СЬе с)ея)Тес) бх ке1-!оайпк ЬиЕЕег (р1еаяе зее ТаЫе 5-4). ТЬе сиахниши агпонпс оЕ РХА сЬас сап Ъе арр1)еь( со а з1ос с)ерепс)з оп сЬе пшиЬег оЕ Вацнсеиь сп сЬе зашр1е апс1 сЬен зсзез.
ТЬе инпнпши апюипс оЕ РХА йас сап Ье ъ(есессеъ) Ьу рЬосо8гарЬу оЕ есЬЫинп-ЬгосиЫе-зсаспес) 8е!з сз -2 п8 сп а 0.5-сш-юЫе Ьапс1 (сЬе взна1 ъчЫй о!а з1ос). Моге се и яснее с)уея янсЬ аз 5ТВР СоЫ сап с)есесс аз 1си!е аз 20 р8 о! РМА ш а Ьапй 1! сЬеге Ь гиоге сЬап 500 п8 оЕ РХА ш а Ьапс1 оЕ 05 сш, йе з1ос ъч(11 Ье очег1оас(ей геял!Пп8 )и сгас!сп8, яи)1сп8, апс( япеапв8 — ргоЫегиз йас Ьесоше сиоге яечше аз йе яае о! сЬе РХА (псгеазез. ТЧЬеи ясир!е рорн)аповз о! РХА шо! есн! ез (е.8., ЬассегюрЬа8е К ог р1азшсн РХАз) аге со Ье апа1уаей 100 — 500 п8 оЕ РМА зЬон!6 Ье !оас)ес) рег О 5-сиъ з1ос СЧЬеп сЬе запср!е сопязь о!а чегу 1аг8е пшиЬег оЕ РМА Ва8гнеиь оЕ йЕЕегепс яаез (е.8., гезспссюп й8еяз оЕ спаннпа!сап РХА), Ьоъчечег, и ь розяЫе со 1оас1 20 — 30 08 оЕ РХА рег з!ос ъч(сЬонс я8шйсапс 1оь оЕ гезо1шюп.
10. 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 5 — 60 1 — 20 0.8-10 05-7 0.4 — 6 0.2-3 О.! — 2 Ргогосо! 1: Ассагозе Се) Е!есггорЬогезгз 5.13 ТЬе гпахнншп чо!шпе ос зо!нсюп сЬас сап Ье 1оас!ед ь десепп|пед Ьу йе сПшепзюпз ос сЬе з1ос. !А сурка! з!ос !0.5 х 0.5 х 0.|5 сгп! |ч|П Ьо!д аЪош 40 Н1). Ро пос очегсс!! а з1ос |чЬЬ а РС4А заспр!е зо!одоп. То геднсе сЬе роя|Ьг Псу оЕ сопсапипасспс пе!аЬЪог!па зашр1ез, и ь Ьезс со гпа)се сЬе ае! а 1пс!е сйс1сег ог со сопсепсгасе |Ье Р!хА Ъу есЬапо! ргес!рнадоп га|Ьег |Ьап со 6!! Йе з1ос сошр1есе!у.
11. 51о|ч1у 1оас! йе зашр1е пнхсиге шсо йе з1осз оЕ йе зиЬ|пегцед ке! ияпц а д)зрозаЫе писгор)рессе, ап аисошаск пнсгор)реног, ог а дгасчп-оис Разсеш р!Рене ог ц1азз сар)Вагу сиЪе. 1.оас1 яхе зсапс)агдз нно з1осз оп Ьой сЬе г)кЬ| апд 1еЕс яс1ез оЕ йе пе1. Рог шапу ршрозез, Ь сз пос песеззагу со нзе а ЕгезЬ р!рессе др Еог ечегу ъашр1е аз !опс аз сЬе ир ь сЬогонхЫу |чазЬед чдсЬ Ьнссег Егоп| |Ье апоеПс сЬап|Ъег Ьес|чееп зашр1ез. Но|чечег, !Е сЬе Пе! Ь со Ье апа!ухед Ьу 5онсЬегп ЬуЬпснгасюп ог сс Ьапдз оЕ Р!4А аге со Ье гесочегед Йош йе ае), |с Ь зепяЫе со нзе а зерагасе р!репе с|р Еог ечегу за|пр1е.
12. С1озе сЬе!Ы оЕ сЬе ке! сап1с апс1 анасЬ сЬе е1ессПса)!еадз зо йас сЬе РХА ччд! ш)пгасе сосчагд йе роядче апос1е Егед!еад). Арр!у а чо!саде оЕ 1-5 Юсш (шеазигед аз йе д)зсапсе Ьесзчееп йе роя!|хе апс1 непа!)че е1ессгос)ез). 1Е сЬе!еадз Ьаче Ъееп анасЬед соггесс1у, ЬиЬЫез зЬои!д Ье депегасед ас сЬе апос1е апс1 сайос1е (с1ие со е!ессго1уяз), апс1 нпсЬ)п а Еечч пнписез, сЬе ЪгогпорЬепо1 Ыие зЬои!д пнцгасе !гош сЬе чче1!з |псо йе Ъоду оЕ сЬе пе). Кип сЬе пе! ип61 йе ЬгошорЬепо1 Ыие апд ху1епе суапо1 РР Ьаче ш)пгасед ап арргориасе д)зсапсе сЬгоицЬ сЬе пе!. ТЬе ргезепсе оЕ есЬссдшп Ьго|пЫе аПо|чз Йе це! со Ье ехапнпед Ьу $Л' 01нпнпадоп ас апу асане днг!пц е1ессгорЬогеяз. ТЬе Пе! сгау п|ау Ье гепючед ап|1 р1асе|1 снгесс1у оп а сгапяПшпшасог.
А!сегпас|хе!у, сЬе ае! п|ау Ье ехапипед нз!па а Ьапд-Ьерд зонгсе ос Р'ч' !!аЬ|. !и е|йег сазе, шгп оЕЕ сЬе ро|чег знрр1у ЬеЕоге ехаш!оспа йе де1! Рог|па е1ессгорЬогеяз, йе ей|сншп Ьгопнде пнагасез со|чаед |Ье сайоде !!п йе гПгесдоп орроясе ю Йас оЕ йе Р!4А). Е!ессгорЬогез!з |ог ргосгассед реподз ос сапе сап гезн1с ш йе 1оя ос яй шдса|н ап|онпсз оЕ е|Ьгдшгп Ьгогп|де Его|п сЬе ае), псарне десесдоп оЕ япа1! Егасшепсз ЙЕйсн!с. !и сЬЬ сазе, геяа|п сЬе ае! Ъу зоа!апд |с сог 30 — 45 пнпнсез |и а зо1шюп ос ей|гншп Ьгопнде 10.5 |са)ш!) аз дезспЬед |п Ргососо! 2. 13. Т4|Ьеп йе Е)ХА загпр1ез ог дуез Ьаче пннгасед а зиЕЕк)епс д)з!апсе сЬгоинЬ сЬе ке1, сигп оЕЕ йе е1ессПс сиггепс апд гегпоче сЬе!еадз апд !Ы Егош сЬе пе1 сап1|.
1Е есЬ)д)иш ЬгогпЫе ь ргезепс )п сЬе це! апд е1ессгорЬогеяз ЬиЕЕег, ехапнпе сЬе ке1 Ьу сЛг 1)нЬс апс1 РЬосокгарЬ |Ье ке! аз с1езсПЪес1 ш Ргососо1 2 апс1 аз зЬосчп )п Р)пизе 5-4. ОЕЬегсч)зе, зса|п сЬе ке! Ьу нпшегз!пц К )п е!ессгорЬогеяз ЬиЕЕег ог Н О синга)п)пп есЬЫпнп Ъ|огпЫе Е0.5 Ссц/гп1) Еог 30 — 45 пнписез ас гоогп сешрегасиге ог Ьу зоаЫпц |п а 1:10,000-Ео!д Й1идоп оЕ 5УВК Со1д зсос1| зо1идоп ш е1ессгорЬогеяз ЬиЕЕег. Рог ЕшсЬег деса|!з оп зса!и!па апд рЬососгарЬу ос РХА ш ае!з, р!сазе зее Ргососо! 2.
ЕсЕСТКОРНОКЕ515 ТНКОС)СН М1)Х)!СЕс5 Риг!пк |Ье !азг зечега! уеагз, гпесЬодз Ьаче Ьееп дече!оред Еог апа)ух|па япаП с)иапс!с!ез ос РС4А чегу гаркПу из!пп анагозе |и!и!Пери 5ечега! |урез ос гп|п!айге е!ессгорЬогеяз сап)сз аге гпаписассигед сотгпегс|аПу, сур|саПу аз япаПег чегяопз ос йе со|прап!ез' !агнес е!ессгорЬогез!з п|ос1е1з. ЕасЬ пе! з!оС Ьо!дз 3 — ! 2 н! ос загпр!е, дерепд!пп оп И|е Й|с1|пезз ос |Ье Пе! апд Йе нзйЬ ос йе сеей ос |Ье соп|Ь. С)зиаПу, 10-100 пц ос РНА !п йе де)-!оад!пк Ьиссег ос сЬо|се ь аррПед со а з!ос.
ТЬе не! ь Йеп гип Еог 30-60 и|!пигез аг Ь!кЬ чо!Сане 15 — 20 Ч)с|п) ипд! Йе Ьш|прЬепо! Ыие апд ху!епе суапо! ГЕЬаче ш!агагес1 сЬе арргорпасе сйзсапсе. ТЬе не! 'ь йеп рЬогоцгарЬед аз дезспЬед !п ргососо! 2. М!и!ке!з аге рагдси!аг!у изеЬП |чЬеп а гарк! апз|чег ь гес)|пгед Ьесоге |Ье пехс яер !п а с!оп|па ргососо1 сап Ье ипс!егга1|еп. Весаизе СЬе ччеПз аге згпаПег апд йе не!з сЫппег, !егь РЕ4А Йап поппа! 'ь гес!Ыгес! Еог ч!зиа!ыас!оп. !п адд!с!оп, Ьесаизе йе не!з сап Ье ргерагес! |и адчапсе апс! гип гаркПу, апд Ьесаизе Йеу гес!шге зп|аПег агпоипсз оЕ геанепсз, йеге аге сопяс1егаЫе зач!пнз !п Ьой Пте апс! гпопеу. Мапу !пчезс!пасоса ргераге опе не! ас |Ье Ьек!пп!пн оЕ йе ччее)с, апс! сье !с очег апс! очег аняп сЬгоикЬ йе соигзе ос ап ехрегнпепс. ТЬиз, а рагс|си!аг зес ос зап|р!ез гпау Ье !оадед, пап оиг оп|о сЬе пе), апд Мзиа!аес1.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
