Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 120
Текст из файла (страница 120)
ЪЪеп ТЬ15 Ьаррепз, йе апоеПс рогтюп оГ йе Ве1 Ьесотпев асЫк апт) йе ЬгоиюрЬепо1 Ыце пи8та!108 ТЬгоцВЬ йе Ве1 тотчатс! йе апис)е сЬапВев !и со1ог Гготп ЫшвЬ-рцгр1е то уеПовч. ТЬь сЬаи8е Ъе81пз ас РН 4а5 апс! ь сошр1ете а! РН 3.0. ЕхЬацзтюп оГ ТАЕ сап Ье ачо!с!ес! Ьу реПосПс гер!асешепт оГ йе ЬцГГег с!цгш8 е!естгорЬогеяа ог Ъу гестгсц1аНоп оГ йе ЬцГГег Ъетвчееи ТЬе ттчо гезегчо)гз. Вой ТВЕ апт! ТРЕ аге 5ПВЬТ!у тпоге ехрепяче ТЬап ТАЕ, Ъцт йеу Ьаче я8шЕсап11у ЫВЬег ЪцГГеттп8 сарасЬу. РоцЫезтгапс)ес) Ппеаг РХА Гга8шепь инВгате -10% Гаа!ег йгоцВЬ ТАЕ 1Ьап йгоцВЬ ТВЕ ог ТРЕ; йе гезо!ч!08 роччег оГ ТАЕ !5 5ПВЬТ!у Ьеьег йап ТВЕ ог ТРЕ Гог Ь18Ь-шо1есц1аг-вчетВЬ1 Раз апс1 тчотзе Гог!Отч-аппо!есц1ат-вче)ВЬТ Р)в)А5.
ТЬь Й)ГГегепсе ргоЬаЫу ехр1ашз йе оЪзегчаПоп 1Ьат е!естгорЬогеяв тп ТАЕ у!е1сЬ Ьеттег гево1цНоп оГ Т)ЫА Гга8шеп!5 ш ЫВЫу сошр1ех штхтцгев вцсЬ ав шатпшаПап РХА. Рог !Ь!5 геазоп, 5оцйегп ЫоЬ цвет) Со апа1ухе сотпр1ех Веиошев аге ВепегаПу с)еттчев) 1гош Ве15 ргерагес1 1и апс) гцп тч)ТЬ ТАЕ аз !Ье е1естгорЬотеяз ЪцГГег. ТЬе гезо1цтюп оГ зцрегсоПес) Раз 15 Ьеиег тп ТАЕ ТЬап ш ТВЕ. ТАВЕЕ 5-3 Е!ес1торЬотеяв Вцйега ЕтОск 5отцт1О!иЛ1теа Вцетей Итоахтьзс 5отцтзопв ТАЕ 1х 40 тпМ Тть-асетате ! тпм ЕРТА 50х 242 8 оГ Тпз Ъазс 57.! тп! оГ81ас!а! асепс асЫ 100 пт) оГ 0.5 М ЕРТА ГРН 8.0) ТРЕ 1х 90 тоМ Тть-РЬоврЬатс 2 тпм ЕРТА 10х 108 8 оГ Тть Ьазс 155 тп1 оГ РЬоврЬотк асЫ !85%, 1.679 8)тп!) 40 тп! оГ 0.5 м ЕРТА !РН 8.0) ТВЕ' 0.5х 45 тпм ТНв-Ьотатс 1 пзм ЕРТА 5х 54 8 оГ Тпв Ьазс 27.5 8 оГ Ьопс асЫ 20 ш! оГ 0.5 М ЕРТА !РН 8.0) 'ТВЕ Ь июаНУ юас)с апс) зтогед ав а 5х ос !ох пост во1иВоп, ТЬс РН о! йс сопсспссатсс) атос)с Ьиисс зЬоп!8 Ьс -8хх Рв!итс йс сопссптгатса зтосх Ьиист !ивт Ьатосс изс апд тата 1Ьс 8с! ю!ит!оп апд йс с1встсорЬосспв ЪиГГсс Гготп 1Ьс запзс сопссптсатео зтос1с во1ииоп.
5онс !пчсвеаатосз рссГст то ивс итоге сопсспттатсст «тос1с ю!Ыюпв оГ ТВЕ 110х ав оррозс8 то 5х). Ноззсхсг, 5х втос1с ю!итюп !з изота аамс Ьвсаивс йс во1йсв с!о пот рсссзрпатс дипп8 в!огата Равзйх йс сопссптсаьм Ьиттст зсостп 1Ьгои8Ь а 0 45-псп 61тсг свп ргсвспс ог з)е!ау Готспапоп оГ рсссзриатсв.
Ргососо! 1: Аеагоге Се) Е!есггорйогего 5.9 ТАВЕЕ 5-4 6х Се!-1оасппВ ВиГГега Винех ТуРе 6х Виегеа 5гоаАсе ТеасРеаАгияе 0.25% ЬгопюрЬепо! Ыие 0.25% ху1еие суапо! РР 40% счг)ч! аиегоае ш Н О 4'С 0.25% ЬгошорЬепо1 Ыие 0.25% ху1епе суапо1 РР 15% Бсо!1 !Туре 400; РЬапиас!а) ш Н О гоош сепгрегагше 0.25% ЪгошорЬеио! Ыие 0.25% ху!еие суапо1 РР 30% ц!усего! ги Н О 4С П1 0.25% ЪгогиорЬепо! Ыие 40% !гч!ч) аисгоае ш Н,О СЕЕ-ЮАОПЧС ВОЕЕЕсей МАТЕВ!АЕ5 САС)Т!О!хС: Р1еаае аее Аррепспх 12 Гог арргорг!аСе Ьапгс1!пВ оГ та!ее!а!а тагКегС сч!СЬ <!>.
ВЕЕ11ег5 апе! йо1ЕЕЕсоп5 Рсеаае аее Аррепспх 1 Гог согпропепСЕ оГ ЕСосСг ао1ипопа, Ьийега, апг! геааепСЕ. О!1иСе ЕСосК ао1иоопа Со СЬе арргорг!аСе сопсепСгаСюпа. АВагоае ьо!ипопа ГУаЫеь 5-1 апсГ 5-2) Ацагоае це!а аге саас Ьу гие16иц сЬе ацагоае ш йе ргеаеисе оГ сЬе гСеыгегС ЬиВЬг ии61 а с!еаг, сгаиарагепс ю1исюп И аеЬгечей ТЬе ше!сегС ао1исюи и сЬеи роигед гасо а шо!гС апгС аССогчегС со Ьаг4еи. Орои ЬаггСеи!ид, йе ацагоае Гоппа а пса!сии сЬе г!ешпу оГ гчЫсЬ га гСесегш!пег! Ъу сЬе сопсепггасюп оГ гЬе ааагоае. Рог гарЫ аиа1уыа оГ 135!А аагпр!еа, гЬе ше оГ а шгпсце! и гесошшепгСегС !р!еаае аее йе рапе1 ои ЕЕЕСТКОРНОКЕ5ЬВ ТНКООСН Мсй!СЕЕ5 Ъе1огч Яер 131. Е!есггорЬогеяь ЬиГГег Гиьиа!!у ух УАЕ ог 0.5х РВЕ) Р1еаае аее ТаЫе 5-3 Гог гес!Реа.
Ейпйигп Ьгогпгссе <! > ог 5УВК Со!ЕГ яа!п!пВ ео!ипоп < ! > Рог а йасшыоп оГ ага!и!п5 С)Г4А ш ацагоае ае!а, р1еаае аее Ргососо! 2. 6х Се)-!оасСгпВ ЬиГГег Р!еаае аее ТаЫе 5-4 Гог гес1реа. Се1-1оагсспа ЬиГГега аге тгихед ччКЬ йе аатр1еа ЬеГоге 1оас!!иВ !псо йе 51оса оГ йе Ве1. ТЬеае ЬиГГега легче йгее рпсроее: ТЬеу шсгеаае йе с1еиясу оГ йе аатр1е, епаиг!пц сЬас йе Е!14А а!п1са ечеп1у шсо сЬе сче!1; ЕЬеу агЫ со!ог со йе аатр!е, сЬегеЬу ятрИу!иц йе 1оагсспВ ргосея; апг1 сЬеу соисаш гнуса сЬас, 1и ап е!ессг!с Ве1й точе соччагг$ йе апос1е ас ргейссаЫе гасеа.
ВгогпорЬепо1 Ыпе т!Вгасеа сЬгопВЬ аВагоае Ве!а -2.2-Го!а Гаасег йап ху1еие суапо1 РР, !пг1ереиссеис оГ йе аВагоае сопсеисгаооп. ВгоиюрЬеио! Ь|пе т!Вгасеь сЬгоиВЬ ааагоае Ве15 гии !и 0.5х ТВЕ ас арргохпиасе!у сЬе хате гасе аа 1!иеаг г1оцЫе-асгапг1ед Е)ХА 300 Ьр ш 1епВЕЬ, ччЬегеаа ху1епе суаио1 РР ииВгасеа ас арргохииасе1у йе аагие гасе аа 1шеаг г1оиЫе-асгапдед !ЗА 4 ЬЬ ш 1епВЕЬ. ТЬеае ге1асюпаЫра аге пос яВшВсапс1у аГГессегс Ъу сЬе сопсепсгасюп оГ аВагоае Ги йе ае1 очег йе гапае оГ 05-!.4%, "чйнсЬ суре оГ 1оасВпВ ануе со пае !а а гиапег оГ регаопа1 ргеГегепсе; чагюпа гес!реа аге ргеаепсед ш ТаЫе 5-4.
5!О СЬарсет 5: бе1 Е!ессторЬотекгк оЕРИА апгЕ Ри!кес)усе)с) АКатоке Се! Е!ессторЬотеко !ь!ссс1е1с Ас1ЕЬ аМ О1фопссс!еоЕ1Е1е5 РАСА катар)ек Р)к!А к)ге ксапс)атс)к 5ашр!ек оЕ РХАк оЕ)киоски яае аге сурка11у цепегасес) Ьу текст)ссюп епхугие йцекпоп оЕ а р1акшЫ ог Ьассег)орЬаце РХА оЕ )списки кес)иепсе. А1сегпапче1у, йеу аге ргос)исег) Ъу!)кассиа а гпопошег РХА КаВшепс оЕ )спочгп яхе сиса а 1асЫег оЕ ро1ушепс !опик. 5)ае ксапг)агс)к Еог ЬосЬ ааагоке апс) ро1уасгу1апгЫе аес е!ессгорЬогеяк шау Ъе ригсЬакес) Стою сопииегсса1 юигсек ог йеу саи Ье ргерагес) еая1у гп йе 1аЬогасогу. 1с Ь а аоос) Ыеа со Ьаче ско яае тапочек оЕ ксапс)агй, шс!ийпа а Ь)ВЬ-шо!еси1аг-сче)иЬс гаиае Егош 1 1сЬ со >20 1сЬ апг) а )ои-гпо1еси1аг-кесцЫ гапае Егоис 100 Ър со 1000 Ьр. А ксос1с косипоп оЕ яке ксапс)агс)к сап Ье ргерагег) Ьу й!ипоп к)сЬ а ае1-!пайпс ЬиЕЕег апс) йеп икес) ак пеег)ег) !и шйчЫиа! е!ессгорЬогеяк ехрегипепь.
прес!а! ЕЕ1сс1репеп$ Ес)исртепг Еот ааатоке де) е)есгторЬотекск С!еап, г)гу Ьопхопса) е1ессгорЬогеяк аррагасы кссЬ сЬагпЬег апс) согпЬ, ог с1еап г)гу 01ая р1асек мпсЬ арргорпаСе сошЪ. Се)-кеа)та саре Сопипоп сурек оЕ 1аЬ саре, кисЬ ак Типе саре ог Ст)сгр 1аЬ саре, аге арргорпасе Еог кеа!ша йе еиг)к оЕ сЬе аиагоке ае) диг)пВ риис!па, !ч)ссточчаче очеп от Во!!А иагет Ьай Расчет кирр!у с)еч)се сараЫе оЕ ир Ео 500 Ст апс) 200 тА.
ууасет Ьай ртекес со 55 С МЕТНОР 1. 5еа! йе ес)аек оЕ а с1еап, с)гу д! акк р1асе (ог сЬе ореп епс!к оЕ йе р1акпс сгау кирр11ес) счсй йе е!ессгорЬогеяк аррагассь) ълсЬ саре со Еогпс а псо1д !Р)аиге 5-3). 5ес сЬе псо!К оп а Ьоп'- хопса1 кессюп оЕ йе ЬепсЬ. 2. Ргераге киЕВс)епс е!ессгорЬогеяк ЬиЕЕег (цаца!!у 1х ТАЕ ог 0.5х ТВЕ) со КП йе е1ессгорЬогеяк сапЬ апс) со сакс йе де!. !с Ь ипрогсапс со ые сЬе каше ЬассЬ оЕ е!ессгорЬогеяк ЬиКег Ы Ьой йе е1есьорЬогеяк сап!с апс) сЬе це1. 5пга11 тВКегепсек си юпк ксгепасЬ ог рН сгеасе Егопск сп йе це1 сЬас сап агеас1у аКесс сЬе споЫ!гсу оЕ РХА Егаашепск. ЪчЬеп гиеакиппц сЬе яхек оЕ ип)спокчи РХАк, епкиге сЬас аП кагпр1ек аге арр1)ег) со сЬе ае! сп йе какие ЬиЕЕег.
ТЬе Ь15Ь сопсепсгапопк оЕ ка1с гп сетка!и гекспссюп епаугпе ЬиКегк Ее.а., ВаигН! апг) Есор!) гесаЫ сЬе шсагасюп оЕ РХА апг) гпксогс йе е!ессгорЬогек)к оЕ РХА ш сЬе а0)асепс сче1!к. 3. Ргераге а ко1гпюп оЕ ааагоке )п е1ессгорЬогеяк Ьийег ас а сопсепсгасюп арргорпасе Еог кер- агаКпВ сЬе рагпси!аг яке Егааспепск ехрессес) 1п йе РМА капср1е(к): Ас)д йе соггесс агпоипс оЕ росчс!егес) ааагоке !р!еаке кее ТаЫе 5-5) со а псеакигес1 с)иапсссу оЕ е1ессгорЬогеяк ЬиКег сп ап Ег1епгпеуег Е)ак!с ог а а!акк Ъосс!е.
ТЬе ЬиКег кЬои10 оссиру 1ея сЬап 50ч оЕ сЬе чо!шпе оЕ йе Вак)с ог Ъои1е. ТЬе сопсепсгасюпк оЕ ааагоке гег)и)тес) со керагасе РХАк си ййегепс яге гапаек Ь а)чеп сп ТаЫе 5-2. РХАк йКеппд си яге Ьу оп!у а Еекч Ьаке ра)гк сап Ъе керагасесс ъчЬеп сегсаги Ь)аЬ-геко1исюп ааагокек Ее.а., МесарЬог ааагоке, Вюсс0с)сса)сег) аге икес) со сакс сЬе ае1. А)сегпассчесу, шойае0 ро!укассЬаг)0ек Есопипепса11у ачас!аЫе) сап Ье айг)еи со геаи!аг ааагоке со епЬапсе керагапоп.
ТЬск киЬяапсе, ыесс ас а сопсепсгасюп оЕ 0.5 — 2.09б Екч)ч), соаесЬег ъчсЬ ааагоке, Ысгеакек геко1иКоп, гепс)егк сЬе сая ае) июге с!еаг, апс) шсгеакек йе ксгепВсЬ оЕ сЬе ае1. Ргосого! 1с Аеагояе Се! Е1ееггорЬогеясз 5.11 Е!СБ!сЕ 5-3 Роиг!па а НолкопСа! Ааагозе Се! 4. Ьоозе!у р!иа сЬе пес!с оу сЬе Ег1епспеуег йаз1с жаЬ Кппсч1рез. 1Е из!па а ц1азз Ьоп1е, гпа1се сегса!и сЬе сар гз 1оозе. Неас сЬе з1иггу сп а Ьо!!!пав-счасег ЬасЬ ог а шгегосчаче очеп ип61 йе ааагозе Йззо1чез.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
