Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 125
Текст из файла (страница 125)
Нос!е!с АспЬ апс! О!коппс!ео(!с!еВ (3ХА хаглр)еып ТЕ (рН 7.6) прес!а! Ег!о!р|пеп1 Со)итл ОгпаП с)(ьрохаЬ)е) ог Вагге) оу 2-сс хуНлце 5|паП йьроааЫе со!ншпа аге сопнпегс|аПу ачаПаЫе (еа., В!о-Ва|(, РЬро Со!ншпа) Ночгечег, |Ье Ьагге! о( а 2-сс хуг!пце сопса!и!пВ а япаП с!гс!е о(ЕЬег рарег |о ге|а|п йе РЕАЕ-берЬасе! сап аЬо Ъе наей !( р!а|Пс со!ншпа аге по| ачаааЫе, а я1!соп!хег) Раяенг р|репе р!наВег) |чпЬ а|Пеон|хе|1 61ам гчоо! сап Ье анЬ|6ш|ей рог аг(ч!се оп аП!соп!х!пВ д!ам|чаге, р!еаье аее Аррепйх 8. Кех!л, ргех|чоПел (3ЕАЕ-сеПи)охе ог РЕАЕ-БерЬасеl РЕАЕ-анЬаг!гоге|( сеПн1оаеа аге сопппегс!аПу ачаПаЫе (гогп аечега! п|апо(асп|гегя !пс!нйпВ И%астап (РЕ-52), РЬаппас!а-ЕКВ, апг) 5!Вша.
РЕАЕ сеПн!оаеа Ьаче Ьееп шее |о рта у Ьой ргоге!па апг( пнс1ек ас!|)а (ог шапу уеагя ТЬеу аге |ур!саПу оЬга!пег) (гош шапн(асгнгега аа ргеячоПеп геяпя ьнсЬ аа 33|Ьагшап РЕ-52 ап|) РЬаппас!а-ЕКВ РЕАЕ-5ерЬасе(, |и ЬнПег| |Ьа| сон|а!п апЕЬас|епа! аВепга (е.ц., юйшп ах|Ее, руг!|Ппе-Х-охЬ(е, ап|) ЪепхаП|опшш сЫоп|1е).
ТЬеае анЬ|гапсеа аге |ох!с ап|) сап юЬ|Ьн епхугпея рог йь геаюп, п ь !п|рог|ап| |о ецшПЪга|е |Ье РЕАЕ геяп |ч!|Ь ТЕ ЪнПег сопса(п!пВ 0.6 м ЫаС! аа |(еасг!Ьег( |и |Пер |. Вой РЕАЕ-сеПн!о|е апс( РЕАЕ-берЬасе! сап Ье аег)ешепге|) |и а гп|сгойВе, аПоннпВ Ьа|сЬ е1н|юп п|ейо|Ь го Ье наес(. МЕТНО0 1.
5ихрепд |Ье РЕАЕ геяп ш 20 чо1шпех ог" ТЕ (РН 7.6) сопса)п(пд 0.6 м ХаС1. АПочч йе геяп со хе||1е, апс) йеп гепюче йе |шрегпагапс Ьу ахр(га|юп. АИ апо|Ьег 20 чо1шпеа о( ТЕ (рН 7.6) сопса(п(пд 0.6 м ЫаС1, апг) цепс!у геяырепд гЬе геяп. АПо|ч |Ье геяп го хегг)е опсе пюге, ап|1 |Ьеп ге|поче пюх| оу йе хирегпа|ап| Ьу ахр(гапоп.
5гоге |Ье е|)шПЪгаге|1 геяп а| 4"С. 2. Рас1| 0.6 гп1 (Вийк)епг со Ь|п|1 20 )гд о( Т)(х(А) о( йе 61иггу о( 1)ЕАЕ геяп ш|о а япаП со1- шпп ог 1п|о |Ье Ьагге1 о( а 2-сс хуПпде. 3. "чЧахЬ йе со1шпп ах ЕоПоччх: ТЕ (рН 7.6) сон|а!и!пВ 0.6 м Ыас! ТЕ (рН 7.6) ТЬ (рН 7.6) санга!и!пВ 0.1 м Нас! 3 и|! 3 гп! 3 ш! 4. М(х |Ье ())х(А ((п ТЕ ас рН 7.6) чч(гЬ ап ег)иа1 чо1шпе оу ТЕ (РН 7.6) сои!а(п(пВ 0.2 м )ч(аС1.
1оас) йе ппх|иге |Пгес|1у оп|о йе со!шпп. СоПесс йе Почч-|ЬгоиВЬ ап|1 геарр1у Ь го (Ье со!шпп. 5. 'чЧахЬ гЬе со1шпп гччке чч1|Ь 1.5 |п! оГ ТЕ (рН 7.6) солса(п(пВ О.З м !х(аС1. 6. Е1и|е йе ()ЫА ъч(гЬ йгее 05-ш! |чахЬех оу ТЕ (РН 7.6) сои!а)п(пд О.б м ЫаС1. 7. Ех!гас) йе е!иа|е опсе чч|й рЬепоЬсЫогоуогш. Адйг1опа! Кеареп$5 5гер 70 оу й|ь рго|осо) гес)и(гех геаПелгх Пхгес) т Ргогосо) 72 о) гЬ)х сЬар|ег.
Рго1осо! б Кесочегу о1 0МА ггогп Еою-гпе!1~пц-1егпрега1иге Адагояе Се!э: Огцап~с Ех1гасбоп д СЛКО5Е тНЛТ НА5 ВЕЕН Мот3!НЕО ВЧ НЧЕтКОХЧЕТНЧтЛТЮН, а яиЪябшбоп йат гедисея тЬе пшпЬег оу 1птгаятгапд Ьудго8еп Ьопдя, тпе1ь апд яеь ат !отчет тешрегатигея тЬап ятапдагд а8агояея. ТЬе де8гее от" яиЬя6титюп чч)тЬ)п йе ро!уяассЬагЫе сЬатп десегпипея йе ехаст тпе1с)п8 апд Ве11ш8 сешрегашге.
ТЬеяе ргорег6ея Готш тЬе Ъаяя оу тесЬп)т)иея то тесочег апд шашри!ате Л1!А Гга8шептя тп Ве!я (ТН)ея!апдег 1979; Раг1сег апд 5еед 1980). Мапу Ьгапдя оу 1очч-ше!т)п8-тетпрегашге а8агояе сап Ье Ье1д ая 1)т)и)дя ш тЬе 30-35'С гап8е, яо йат епхушатк геас6опя !геятпстюп епдопис!еаяе д18ея6опЛ18атюп) сап Ье регуотшед ат а геаюпаЫе тешрегатиге тч)тЬ- оит тЬе а8агояе яо1иИуш8. 1п агЫтбоп то епхутпатк геасбопя, 1оъч ше16п8/Ве!!1п8 тегпрегашге а8агояея тпау Ье ияед Гог гарЫ гесочегу оГ 13!ч!А антош Ве!я апд Гог Ъастепа1 ттапяуотшатюп тч)тЬ пис!е)с асЫВ 1п йе геше!тет1 Ве1.
Весаияе 1очч-ше!6п8-тешрегатиге а8агояе гепта)пя йшд ат 37'С, епхутпа6с шап!Ри1а6опя яисЬ ая!т8атюп, яупйеяя оу гасйоас6че ргоЪея, апс1 сй8еябоп тч)тЬ геятгктюп епхутпея сап Ье сагпес1 ош Ьу атЫ)п8 рогтюпя оу тЬе тпе!тед Ве1 я1ке сопта)пш8 йе )3!я)А оГ )птетеят сйгест1у то йе геасбоп пихшге (Раг)сег апт1 5еет1 1980; 5тгиЫ 1985). 1п Вепега1, Ьотчечег, ро1утпегаяея, 118- аяея, апд геятпспоп епхушея тчог1с 1еяя ей)с)епс!у 1п тЬе ргеяепсе оу ше1тед Ве1 тЬап ш сопчеп6опа! ат)иеоия Ьийегя. ТЬе ша8пйиде оГ тЬе десгеаяе 1п епхутпабс ейк)епсу сап Ъе еябшатед Ъу яетбп8 ир соптго! геастюпя сопта)шп8 д)йегепт апюипь оу епхуше апд !1) РХА Тга8шептя рип6ед Егош сопчепбопа1 а8агояе Ве1я !Рготосо1я 3 апд 4) ог (2) РХА Ега8шептя ехсгастед Еготп !отч-ше16п8-тешрегатите 8е1я (Рготосо!я 6 апд 7).
Ая ь йе саяе тч)тЬ ятапдагд а8агояея ияед Еог ргерагабче ригрояея, шапиГастигегя ргочЫе 8гадея оГ 1отч-ше1ттп8-тептрегашге а8агояея тЬат Ьаче Ъееп теятед то д)яр!ау пшшпа! Ъас)г8гоипд йиогеясепсе айег ятатпш8 тч)тЬ ейтсйитп ЬготпЫе, то Ъе 1гее оу 13!я!аяе апд КЬ)аяе аст)ч)ту, апд то сйяр!ау пипппа1 )пЬтЬт6оп оГ геятпсбоп епдопис1еаяея апд!т8аяе. 1п тЬе сиггепт рготосо1, !ЭХА Гга8шептя аге яерагатес1 ассогд)п8 то я)хе Ьу е!естгорЬогегдя тЬгои8Ь !отч-ше!6п8-тешрегатиге а8агояе,!осатед Ъу яташш8 тч)тЬ ейЫштп ЪгошЫе апт1 !)Н !18Ы т11ипппа6оп, апт1 йеп гесочегед Ьу ше!6п8 йе а8агояе апт1 ехтгас6п8 тч)тЬ РЬепойсЫогоГотш.
ТЬе рготосо1 тчог1ся Ъеят )ог 13ХА Ега8птепь гап81п8 тп я)хе Егош 0.5 )тЬ со 5.0 )сЪ. У)е!дя оу 131чА Ега8птептя ошгдс1е тЬь гап8е аге ияиа11у !отчет, Ьит ойеп аге яийк)епт Еог тпапу ршрояея. Ап а!тегпа6че тпетЬод Тот гесочепп8 РХА Тгош Ве!я ь деяспЪед тп тЬе рапе1 АЕТЕКмАТ1НЕ РКОТОСОЬ КЕСОНЕКУ ОЕ ОНА ЕКОМ АСАКО5Е СЕЕ5 Ет51НС СИ55 ВЕАО5 ат тЬе епд от тЬтя ргососо1. Кесочегу Ьу д18ея6оп тчиЬ а8агаяе ь деяспЪед ш Ргососо1 7. А тпоге детат!ед тпетЬот1 Еот 118а6оп тп тЬе ргеяепсе оГ 1отч-тпе!6п8-тегпрегатиге а8агояе ь деяспЪет1 тп СЬартег 1, Рготосо! 22.
5.29 5.30 СЬартет 5: Се! Е!ессгорЬогеаЬ о! Т))ЧА алсЕ Ри!аесЕ-!се!сЕ Ацагоае Се! Е!есгторЬотезЕа МАТЕК1АЕЬ СА$)Т1Осхс: Р1еаае аее Аррепс$!х $2 Еог арргорпаге Ьапс$1!пд оЕ псасеПа15 спас!тес! иаЕЬ <! >, Вссйег5 апс! ао1с$6оп5 Р1еаае аее Аррепспх $ Еог сотропепса оЕ а!ос!с ао!ипопа, ЬиЕЕега, апс$ геадепга. Описе агос$$ ао1ипопа Со $Ье арргорПасе сопсепсгаоопа. Аглтолсит асееасе 170 м) СНогоЕогт <! > ЕсЬапо! Е7Ь!ЕЕ!ит Ьгот!с)е <!> от 5УВ)с Со!с! егаслслд ьо!идол <!> Рот а гаасиыюп оЕ агаси!п8 а8агоае Ве1а, р!еаае асс Ргососос 2. бх Се1-!оас7!ла ЬиЕЕег рог а 1Ьс оЕ 8е1-1оагап8 ЬпЕЕега апсс гессрея р!еаае все ТаЫе 5-4 ш Ртососос 1. 1МТ е!и6ол ЬиЕЕег 20 тпМ Тла-С1 !РН 8.0) 1 псм ЕЕсТА ! РН 8.0) РЬело!ссЫогоуогт Е7:7, У)У) <1> РЬело1, ес7иЕ!!Ьгасес7 со рН В.О <! > Тх ТАЕ е!есСгорЬогеауа ЬиЕЕег рог а 1ас оЕ е1ессгорЬогеяа ЪиЕЕега апс$ гсс!реа, р!еаае аее ТаЫе 5-5 сп Ргососос 1. ТЕ ЕрН В.О) Се!5 Ацагоае Ве! тасЕе и ЙЬ !оя-те!!Ела-СетрегаСиге аВагоае ТЬЬ а8агоае !а ага!!аЫе Егопс пипсетоиа сошгоегсса1 тпапиуасштега ЕР1саас аее ТаЫе 5-1 ш Ргососос $).
Ртсраге Вс!а оЕ а регсепса8с оЕ а8агоае арргорласе Еог аерагаип8 сЬе Ета8шепса сп сЬе Е$5$А аатпр1с. Рот с!оса!1а оп ргерапп8 а8агоае Вася р1саас асс Ргососос 1. $х$$$с!е1с Асн!5 апс! О!!копос1ео6$!е5 ОХА аатр!е Сеп1г!йце5 апс! Ко1ог5 5оггаП 55-34 го!от ог есЕиЕуа!елС прес!а! Ее!осргпепТ ИСгач!о!еС !аглр, ЬалсТ-Ье!с), !олВ-иа е!елаСЬ !302 лгл) <!> $УаСег ЬасЬ ргеаеС Со 65"С МЕТНОО 7. Ргераге а де1 сопса101па сЬе арргорг1асе сопсепсгабоп оЕ 1ои-гпе1$1па-сегпрегасиге ацагоас ш 1хТАЕ Ьийег. ТЬеге аге аетсга1 геааопа со цае ТАЕ Ьп Сует 1пасеаВ оЕ ТВЕ ЬоЕЕсг, 1и рагВси1ат, Ьогасе юпа шЫЬ- сс !!Вас!оп геассюпа апс! сап $псегуеге МсЬ гиЬаесрсепс ролВсасюп оНЬе е1иссс$ $1$4А Ста8гпепс оп 8!асс Ьсасса Ер!еаас аее йе рапс1 оп АЕТЕКЬ$АТ1ЧЕ РКОТОСОЫ КЕСОЧЕКЧ ОГ ОЬ$А ГКОМ АСАКО5Е СЕЕ5 $)51Ь$С С$А55 ВЕА05).
ЕсЬ18$иш ЬгопсЫе шау Ье асЫсд со йе Вес Ьесоге сааип8 10.5 и87ш1) ог сЬе Вс1 сап Ье асашес$ апет йе е!ессгорЬогеяа гоп сг!сЬ есЬЫштп ЬгошЫе ог чг!сЬ 5ТВК Со1д. Соо! йе 8е1 го гооп| гешрегаьиге, апс! ЕЬеп Егапьуег Ь аи|1 Ьь ьиррогбп8 81аьь р!аге Ео а ЬогЕхопга1 ьигуасе |и а 8е! Ъох. ТЬе 8е! тиау Ье р!асе6 !и а со!6 гоош |о еивше сошр1ете ве|6и8. М|х йе ьап|р1еь оЕ ЕуХА чч!ЕЬ 8е1-!оа6!и8 ЬиЕЕег, 1оа6 йети !пЕо ЕЬе ь1огь оЕ ЕЬе 8е1, ап6 саггу опг е1ессгорЬогеяь аЕ 3-6 Тт/сш. РХА оЕ а 81чеи яге тиив |08!61у !апет йтоиПЬ 8е!в сая |ч!ЕЬ 1овч-ше16и8-тешретагиге а8агове йаи |ЬгоиПЬ соичеи6оиа1 а8атове Пе!в, рот |Ь~в теавои, йе чо1та8е аррПед со 1овч-ше!6и8-тешретагите а8агове Пе1в вЬои16 Ье 1о|чет йаи ЕЬа| аррПе6 то втаибаг6 а8атове Пе!в. 1Е пеедес1, ьга!и ЕЬе а8агоье Пе! ъч!ЕЬ еЕЬ!с)!пш Ьгош!с)е ог вч!ЕЬ 5'г'ВК Со!д аь с)еьсПЬед ш Ргогосо! 2, ап6!осаге ЕЬе 13ХА Ъап|1 оЕ |пгегеьг ияп8 а Ьап|1-Ье1й 1оп8-ъчаче1еп8ГЬ !302 пгп) !Лт !а|ир.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
