Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 127
Текст из файла (страница 127)
бх АЕ)са!Епе де1-Еоад)пд ЬиЕЕег 500 |пм МаОН б гпм ЕРТА 18% Еи|ч) )асоП !Туре 400, РЬаппас|а) 0.15% $|ч)ч) Ьгогпосгею1 Пгееп 0.25% $|чСч) ху!епе суапо1 ЕЕИапо1 ЕЕЬ|оПит Ьгот)де <! > ог 5уВ)с Со)д ьса)п)пе 801ипоп <1> рог а еаьсивяоп ос ьса|пш8 а8агоье Пе!ь, р1еаае ьее Ргососо1 2. Чеисга)тпд ьо)идол Еог а!)са!Епе адагоье де)ь ! м Тга-С) 1рН 7.б) $.5 М $4аС! 5ооПит асегасе ЕЗ М, рН 5.2) 1х ТАЕ е!ессгорЬогеыь Ьиууег рог а 1)сс оЕ е!ессгорЬогес|а Ьцссегь апд гес|реь, р)еаье ьее ТаЫе 5-5 ш ргососо! !. )х$ос!есс АСЫ8 апд О!коппс!еоПсде8 РМА ьатр)еь Еиьиа1lу гад101аЬе!ед) <$> оресса! ЕЕЕосрпсепП С!аьь р)асе И|асег ЬасЬ ргеьес со 55'С АЕЫЕПсопа! КеаеепП8 5сер 3 оЕ ЕЬЕь ргососо) гес)и)геь ЕЬе ьрес|а1 ес)и)ртепс Ььсед |и Ргососоl 1 оЕ сЫь сЬарсег.
МОТЕ5 ° АПсабпе Пеа дгаи тоге сиггепс йап пеисга! Пе1ь аС согпрагаЫе чо!СаПеь апс1 Ьеас ир дигспП йе п|п. АПсаПпе аПагоье е)ессгорЬогеь)ь ьЬои!с$ СЬесеЕоге Ье сагпес$ оиС ас < 5.5 Ч)ст, А П)аьь р!асе р)асес1 оп сор оЕ йе Пе) айег йе гип Ы ьсагсед ь!ои|ь сЬе д)ЕЕиы)оп оl йе Ьгогпосгею) Пгееп с)уе оис оl йе Пе! апд ргечепсь |Ье Пе) Егогп десасЬ)пП апд Ноас)пП |и йе Ьийег. ° рагба) Ьаье Ьус)го!уяь оЕ сЬе аПагоье саиьеь ыспП)е-ьсгапдед РМА со т)Пгасе аь ап ипе| еп Ьапд, ойеп аС ь!ои ег гасеь сои агд йе Ьоиот оНЬе Пе) агх$ ас Еаьсег гасеь соъчагс$ сЬе сор о1 1Ье Пе) !сача!ого ес а).
1980). $1 й)ы)ь а ргоЫе|п, сЬес)с йе Ьийег со епьиге |Ьас И|е Япа$ МаОН сопсепсгасюп 'ь 50 п|м; гпаПе сиге йас йе Пе! ьо) ис)оп Ь соо!ед со 00'С Ье)оге адд)пП йе 10х аПса$)пе аПагоье це1 е!ессгорЬогеы!ь Ьи)Еег, апд соо) йе Пе) со гооп| сеп| регаи|ге ЬеЕоге )пьсаП )пП )с )п йе е!ессгорЬогеяь сап)с апс! сочен пП $1 сий а! $сабпе е)ессгорЬогеьь ЬиПег. ° сс Ь пос ппсс) у песеььагу со с1епасиге сЬе РМА |ий Ьаье ЬеЕоге е!ессгорЬогеяь. ТЬе ехроьиге оЕ йе ьатр)еь со сЬе аПса!$пе сопсйдопь сп йе це1 'ь иьиа!$у епоиПЬ со гепдег ЕЬе РМА ы!пП)е-ьсгапдед.
Ргогосо| Ей А1йа!те Аеагозе бе1 Е!есггорйогет(з 5.39 АОТОКА0|ОСКАРНТ ОГ )гуЕТ СЕЕ5: Ео1(оъч опе оТ |Ье те(Ьода деаст(Ьед |п | Ье рапе1 Ье!оъч А003Т|О)ъ(АЕ РКОТОСО|а АБТОКА01ОСКАРНУ ОЕ АОХАЕ1Ь(Е АСАКОЗЕ СЕЕ5 1и гпапу сатеа, ОЫА апа!уаед Ьу а)(ъайпе абрагове ке( е)ес(горЬогеа!ь (а |аЬе|ед чч((Ь сир ъчЫсЬ сап Ье де(ес(- ес| Ьу аитогад(окгарЬу. Огу(пк |Ье ке( (р(еаае аее Ье|оьч) кгеа()у |гпргочеь (Ле аЬагрпеаа о1 (Ье аи(огад(- окгарЫс (таке апд айкЬйу (псгеаъеа йъе зепьйМ(у Ьу гадис(пк г(иепсЫпк.
Ноъчечег, |йЬеге 35 хий(с(еп( гасйо|аЬе| |п йъе 0(ъ(А апд гйе ьЬагрпеаа о( ТЬе Ьапда (а по( а гпа|ог сопсегп, ог К (Ье 0Ь(А Ьалд Ь (о Ье гесочегед 1гогп (Ье ке!, (Ье ке( сап Ье аи(огадюкгарЬед ъч|йюи( дгу(пк. САНТ(О(ъ(: Р1еаъе атее Аррепгйх 32 (ог арргорпа(е Ьапд()пк о( гпа(епан вагйед вКЬ <! >. Адд(т(она| Матела15 С!ата р|а(е ЯЬе акте а|хе ат сйе ке() НуЬпдйаабоп Ьакт НуЬг(дыайоп Ьайх а ге ачи|аЫе (гов ГКЬег ог ЧЪЧК; Ьовечег Зеа| а Меа| Ьайх (гогп е((Ьег Зеагх ог СЬее ч(сК ъчогК |иьг аъ ъчей апд аге гписЬ (еъа ехрепяче а|(егпа(вев Кад(о(аЫес1 |п(г < | > ог (игшпеьселт тадгегь ТЬеппа( яеа)ег (е.к., 5Еага) Тг(сйогоасе6с ас|д (7% ТСА) И%а(гпап ЗММ й(тег рарега МетЬод Еок Аитоклоюсквкнч от акт Ссса 3.
А(сег согпр|ебоп о1 е(ес(горЬогеа)а, р|асе (йе ке! оп а к(аъа р|а(е. 2. Зйде (Ье ке) апд р|асе сагейгйу |п(о а ййп р)ат((с ЬуЬг(д(аайоп Ьак, ьоиееае (Ье а|г (гога |Ье Ьак, апд иеа( (Ье тор о1 йъе Ьак |п а Ьеа( аеа)ег. А)(егпа((че)у, ъътар тйе це( апд Ьас(ъ(пк р|а(е (п 5агап ъъггар. ТЬе иъе о( 5агап ъчгар Ь (еъь таг(ъ(ас(огу Ьесаиае гад(оасг(че йиИ гепдь го оохе оиг о( гйе ъчгар диг(пк аисогад(- ойгарйу.
3. Арр|у адЬеа!че |аЬеЬ гпаг|сед ъч((Ь гагйоасйче |п|с ог (ит(пеасеп( тат(ъега (о (Ье пист(де ог'(йе р(аа()с Ьак ог 5агап Вгар. Сочег (Ье (аЬе(а ъч!(Ь сейорЬапе таре (о ргечеп( соп(апкпайоп ойЛе й |го Ьо3с1ег ог |п(еп- 5(Ту(пя 5сгееп. 4. 1п а даг1сгоогп, (аре|Ье аеа(ед ке( (о а р(есе о1 Х-гау 6|т си( (о сйе хате 5(те ах (Ье к(аха р|а(е. В'гар йъе ке( апд й|пъ (п 3(кЬ(-йкЬ( а|игпвит 1ой. оо пог иье а гпега| й (гп саяъеое; К гпау Ьгеай гйе З(аъь р1аге апд сгихЬ гЬе йе(. 5. Ехроае сйе й|гп 1ог ап арргорпасе репос! о1 йте (1ог гпоге |пгоппа(юп оп аи(огад(окгарЬу, р(еаае аее Аррепсйх 8). ТЬе Ьапд о( )псегеьг сап Ье ъйсед 1гогп |Ье Зе! апд ьиЬьециепйу е|и(ед Ьу опе о( |Ье ргоседигеь деъсг(Ьед |и Рго|осой 3 гйгоикЬ 5.
Рок Аитоклоюскккнч от Овсо Стст 1. Зоа(ь (Ье ке( (п 7% ТСА йъг ЗО айпи(ех а( гоот (етрега(иге. Афа(е т(зе ею|одоп ечегу (еъч т(пи(еь (о епеиге (Ьат (Ье ке( гегпа(пя ссвегес1 ъч((Ь йи(д. 2. Моип( (Ье де( оп а к(ааа р|а(е апд дгу |3 1ог аечега! Ьоига ипдег (ауега о1 рарег тоъче(а ъче(кЬ(ед ъч((Ь апойъег к(ааа р|а(е, ог р|асе (Ье ке! оп Ьчо аЬее(а о1 ъъгЬа(гпап ЗММ ййег рарег апд сйу й ипс|ег часиигп оп а ке( сйуег. Неа( хйои(д по( Ье иъед Ьесаиъе гйе ке( вау гпеК.
3. Сочег (Ье с1пед ке( ъч|(Ь 5агап ъъгар апд а((асЬ адЬеь(че до( (аЬе(а таг1сед ъч((Ь гадьюасс(че (п(с ог |игп|- пеасеп( гпаг1сегь (о айкп гйе й(т ъчйЬ (Ье ке(. Сочег (Ье (аЬе(а ъи(Ь сейорЬапе (аре (о ргечепт гадюасйче соп(апйпатюп о1 (Ье й(гп Ьо|с3ег ог (птепа((у!пк асгееп. 4. Р|асе (Ье дпед ке( апд й(гп (п а Кает-т!ЗЬ( Х-гау й|гп Ьо|дег, Ехрояе (Ье й|гп (о сйе ке( 1ог ап арргорпа(е (епк(Ь о1 йгпе а( гоогп (епърега(иге ог ат -70'С ъч((Ь ап (п(епа|(у)пк ьсгееп (1ог пюге (п(огтайоп оп аи(огад!одгарЬу, р(еаье аее Аррепсйх 8).
Меи1га! Ро!уасгу!агпМе Се! Е!ес1горЬогеыь 5.40 с хохь-птткттт снлж от !отчлсхчтлмвк, !мтаооттско лх млтисе5 тот е!естгорЬогеяа Ьу ттаушопд апд ЪттештгаиЪ (1959), аге ыет! аа е1естгка11у пешга1 шатгкез го ьерагате доиЫеатгапдед (3ХА Гга8шепта ассогсбп8 то а(те апд яп81е-ягапдед Тт(!Аа ассогсбпц то яге апд сопГотшатюп (р1еаае атее Р(дите 5-6 апд йе рапе1 оп РОттЛСйттАчтЮЕ). Ро1уасгу1ашЫе 8е!ь Ьаче йе то!!отч(п8 тЬтее ша!ог адчапта8еа очет а8агозе 8е!я (1) ТЬе(г гено!ч(п8 ротчег (а ао 8геат тЬат йеу сап ьерагате тпо!еси1еа от" ЭХА тчЬоае !еп8тЬа д(ттег Ьу аз Ьтт1е ая 0.198 (т.е., ! Ър ш 1000 Ьр). (2) ТЬеу сап ассопипот)аге пшсЬ (аг8ег с)иапт(г(еа оГ (ЭХА йап а8агоае 8е1я ()р то 10 )т8 от !31чА сап Ье арр1тет1 то а яп81е а!от (1 сш х ! пип) оГ а туртса1 ро!уасгу1ашЫе 8е1 тч)тЬоиг опт6сапс 1оаа от" геао!идоп.
(3) РЬ)А гесочегед тгош ро!уасгу1атпЫе 8е1з та ехтгепте!у риге апд сап Ье ыед гог йе шоат с1ешапебп8 ригроаеа (е.8., ш)сто(п)ест)оп от пюые ешЬгуоа). ТЬе (оПотчтп8 аге ттчо туреа оГ ро!уасгу1ашЫе 8е1а тЬат аге тп сопппоп ые. ° Т3ептттттттдро!уасгу1ат(де де1з аге иаед тот йе аерагадоп апд рип6сатюп от'яике-аттапдед Ега8шепта от !3ХА. ТЬеае 8е!а аге ро1ушепгед тп тЬе ргеаепсе отап а8епт (игеа апд)ог, 1еаа багет(иепт!у, ГоггпагпЫе) тЬат аирргеааеа Ьаае ратпп8 тп пис!ек асЫя 13епатигед (3ХА ш18гатеа тЬгои8Ь тЬеае 8е!а ат а гасе тЬас та а1шоат сошр1ете1у (пдерепдепт оЕ (та Ьаье сошроядоп апд ьет!иепсе. Апюп8 тЬе иаеа от'т1епатипп8 ро1уасгу1агпЫе 8е1ь аге йе !ао!атюп от гадю1аЪе1ед !3т !А ргоЪея апа1уяа от'тЬе ргодиста от'пис1еазе 51 с68еа6опя апд апа1уяь от йе ргодиста о( !3т !А зет(иепсш8 геас6опя Рог шетЬодь от'ргерат(п8 апд гипшп8 депатипп8 ро1уасгу1аптЫе 8е!я р1еаае аее СЬартег 10, Рготосо1 1 апд СЬартег 12, Рготосо1 8.
° Хоттдепагигтщро!уатту(ттттттде деЬ аге иьед 1ог йе верага6оп апд рип6сатюп о(тга8шепта оГ доиЫе-втгапдед Р11А. Аа а 8епега! ти!е, доиЫе-атгапдед ()Ь(Аа пи8гате тЬгои8Ь попдепашпп8 ро1уасгу1аптЫе 8е1з ат гатеа тЬат аге шчегве1у ргорогбопа1 то йе !о8щ от" тЬе(г яхе. Ночтечет, е1естгорЬогетк пюЬ16ту (а а1ао айестед Ъу тЬетг Ьаае согпроябоп апд ает!иепсе, ао тЬат дир1ех ТтХАз от'ехаст1у йе ааше яхе сап д(тТег (п тпоЪ|1ну Ьу ир со 10%. Хопдепатит(п8 ро1уасгу1ашЫе 8е1а аге ыед сЬ(ейу то ргераге Ьт8Ыу рипбед тта8шепта от )3ХА (тЫз ргососо1) апс1 то с1етест рготе(п-(31 !А сошр1ехеа (р1еаае аее СЬартег 17).
МетЬода аге ргеаептед Ьеге (от ргераг(п8 апд типо(п8 попдепатипп8 ро!уасгу!ашЫе 8еЬ (тЬ)а рготосо1), тот детес6оп оГ !)ХА ш тЬезе 8е1а Ьу аташш8 (Рготосо1 10), апс1 (от аитогад(о8- гарЬу (Рготосо1 11). А тпоге арес(а!)хед арр1катюп Ра с1еьспЬед ш СЬартег 13, Рготосо( 8, ш тчЬ)сЬ ро1уасгу!ашЫе 8е!а аге ыед то де!ест соп1огтпатюпа! сЬап8еа 1п яп81е-атгапдед ()ХА геаи16п8 6отп йе ргеаепсе от шитат(оп(а). ТЬ(а рготосо1 дезспЬеа ргоседигеа тот йе ргерагатюп апд саадп8 о( ро1уасгу1аптЫе 8е1я тч)тЬ аиЬает)иепт аааетпЫу апд ргосеаа(п8 тот е1естгорЬогеяя ТЬе регсепта8е о( асгу1атпЫе СНг =СН вЂ” С вЂ” ЙНг !! О во|у)апг|бе СНг — СН вЂ” С вЂ” Н вЂ” СНг — Н вЂ” С вЂ” СН = СНг !! И,(усгпегпу)епе|иввсгу(в|и!бе — СНг — СН вЂ” (СНг — СН вЂ” )п СНг — СН вЂ” (СНг — СН вЂ” )п СНг СО ! СО ! ЙН7 ННг СНг — СН вЂ” (СНг — СН вЂ” )и СНг— СНг СН— (СНг — СН вЂ” )п СО ! ННг ! СО ! Ннг огоев-)(п)ъеб ро(уев|у)впг)бе ННг СО (СНг — СН вЂ” $„ — СН вЂ” СН— г СНг— Е)Съ)КЕ 5-6 5(гос1оге о1 Ро! асг (аиъ(|$е Мопогиегв о1 асгу)а|п(г(е аге ро(угпег(гес) )п|о (опц сЬа|пв (и а геасЬоп (п(((а(ест Ьу |гее га|$(са(в.
(и |Ье ргевепсе о1 гъ),)Ч'-гие(Ьу(еиеЬ)вас!у)аги(г(е, 1Ьеве сЬа)пв Ьесоп|е сговв-$(п(ге|1(о 1оггп а це!. ТЬе рогов((у о1 (Ье гево(1(пд де! (в г(е1ептипеб Ьу (Ье !епд(Ь о1 сЬа(пь апд бедгее о1 сговв-$)п(ъ(пц 1Ла1 оссигь г(иг(пд !Ье ро)угпег)га((оп геасйоп. РОЕУАСКИ.АМ!0Е )п 1Ье ргевепсе о1 Тгее га|$(са(в, ъчЬ)сЬ аге ивов)(у депега(е|$ Ьу гес(ис((оп о1 агпгпоп|огп регги(1а(е Ьу ТЕМЕ0 (Х,Х,)ъ) ',Х'-(е(гагпе(Ьу)е(Ьу)епе г((апипе), ипу( ро(угпепга6оп о1 ас|у(а|и(|(е июпогпегв гево((в (и (Ье 1оггпайоп о1 1|пеаг сЬа(пв о1 ро!уасгу(апъ(бе. уъ)Ьеи Ь(1опс((опа! сговв-$(п(ъ(пц ахеи(в (е.5., Х,Х -пъе(Ьу(- епеЬьасгу(ап|к)е) аге (пс(ы|$е|1, |Ье соро)угпепгабоп геас!юп 5епега(ев (Ьгее-с(ипепв(опа! г)ЬЬоп-$$(ъе пе1- ъчог(св о1 сговв-$(п(ъег( ро)уаоу)апи|(е сЬа(пв ъч((Ь а в(а((в((са! б(в(г)Ьи((оп о1 роге в(уев.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
