Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 130
Текст из файла (страница 130)
Сочег сЬе гасбоас6че !п1с !аЬе13 ъччй сеПорЬапе саре со ргечепс сопсаш!пабоп от" 1Ье 61пг Ьо1дег ог !п1епягу!п8 асгееп. 1пчегс 1Ье Ке! апс1 ехроке Ь со Х-гау 61ш (е.8., Кос1а1с ХАЯ-5 ог ес)н!ча1епс) ав то1!оъчя а. 1п а с)аг)сгоош, гаре 1Ье аеа)ес) 8е! 1о а р!есе от" Х-гау 61пг спс со йе аатпе яхе аа йе 8!ага р1аге. ТЬе р1асе аегчеа аа а ъче)8Ьс со епаше 8оос) сопсасс Ьесъчееп йе 5агап )Ъггар апс) сЬе Х-гау 6!пъ.
Ь. ъъгтар 1Ье це! апс1 6!ш ш 1!8Ь1-1!8Ь1 а1шпшшп то!1. Ро пос пае а гпеса! 6!гп саяепе; Ь гпау Ьтеа)с сЬе 8!аы р1асе апс) сгпзЬ йе 8е1. !усЬе 8е1 Ьаа Ьееп с)г!ес) опто а ргесе о!)ЧЬаспъап 3ММ рарег !5сер 3), а гпеса1 61гп саыепе гпау Ье пает). с. Ехроае йе 6!ш тот йе арргорпасе репой ог" типе ас тоотп сетпрегашге ог ас — 70"С ъчЬЬ ог ъчч1Ьош ап !осеням)чп8 асгееп.
д. Т)ече1ор, бх, апс) с!гу 1Ье Х-гау 6)ш аа гесопнпепс)ес) Ьу йе шапнтасгнгег. Рго1осо! 12 !ю!абюп от 0МА Егадгпеп1ь тгогп Ро!уасгу!апис!е Се!ь Ьу йе СгиьЬ апс! 5оа1 Мелос! т нт 5ТЛМЭЛКО МГТНОО тО кЕсОчек 0ЬСА гком ротчлскчслмвг стт5 га йе "сгиаЬ апд аоа1с" сесЬп)с!ие ог!8!па!1у с1еаспЬед Ьу Махаш апс1 С!1Ъегс (!977). ТЬе е1шед ТтХА га 8епега11у Ггее оГ сопсапипапсь йас !пЬ!Ь!с епхушеа ог йас аге сохк со сгаиаГессед ог ш!его!и)ессед се115. ТЬе гпейод тес)шгеа сипе Ьиг 16с!е 1аЬог апд геаи1са ш гесочегу оГ <3098 — 90аг8 у!е1д, дерепд!08 оп йе а!хе оГ йе Г))х)А Гга8шепс. 11 сап Ье иаес1 то !501ате Ьой доиЫе- апд яи81е-асгапдед Г)1)Аа Гготп пеисга1 апд депасиг)и8 ро1уасгу1атпЫе 8е!а, соарес!)че1у.
ТЬе тпейод !а счЫе1у иаед со 150- 1асе аупсЬеск 0118опис1еос!деа Гготп т1епасипп8 ро1уасгу1атпЫе 8е15 (р1еаае аее СЬарсег 10, Ргососо1 1) апс1, оссаяопа!1у, со гесочег епд-)аЪе1ед Г)Ь)А Гог сЬешка) Гт))А аес!иепстп8 (р1еаае аее СЬарсег 12, Ргососо!в 8 апд 9). Г)с)А гесочегед Ггош ро1уасгу1атпЫе 8е15 Ьу сгиаЬтп8 апд зоардп8 15 8епега!1у ашсаЫе Гог иае аа а ЬуЬг)д!галоп ргоЬе, аа а ргоЪе !и 8е1-гесепсюи аааауя ог аа а сешр1асе ш сЬеииса1 аес!иепсш8 апт1 епхушаск геас6опя ТЬе Г011отч!08 ргоседиге !а а тподтйсасюп оГ йе сесЬп!с!ие деаспЪес! Ъу Махаш апд Я1Ъегс (1977, 1980). Раагег шейосЬ со гесочег с1оиЫе-ягапс1ед Г)! )А шчо1че: ° етпЬесЫш8 йе ртесе оГ ро)уасгу1ашЫе сопсаипп8 йе Ет!х)А оГ !псегеас 1исо а 511! сис ш ап а8агоае 8е!, апд йеп е106п8 сЬе Г)Ь)А опсо а 51в ег оГ Г)ЕАЕ-се!!и!оае шешЬгапе аа деаспЬед !и Ргососо1 3 ° е1есггое106п8 йе ГтХА Ггош йе 8е1 шсо а д!а1уяа Ъа8 (Ргососо! 4) МАТЕК!АЕЬ СЛОТЮ!х): Р)еаае аее Лррепд!х 12 Гог арргорпасе Ьапд!!08 оГ шасепа)а шаг!сед ис)СЬ <! >.
ВсгГГег8 апг! Ьо!сг6оп8 Р1еаье атее Лррепспх ! Гог сошропепса оГ а!оса ао)и6опа, Ьиттега, апд геа8ептя Ю11исе а!оса ао106опа Со йе арргорпасе сопсепсга6опя Асгу|аттде деl е!ипоп ЬиГГег 05 м апппоптшп асесасе 10 птм спакпеяшп асесасе сесгаЬудтасе 1 пся Етттл (рн 8.0) 0.1% (тч)ч) 5т>5 1ордопа1) 5.5! 5.52 СЬирсет 5т Се! Е1ессторЬотеь(ь о(73ХА апд Ри!ьед-(те!дА5атоье Се! Е!ессторЬотеаь 505 ииргочея тЬе ейк1еису о( гесочегу, июя ргоЬаЫу Ьу Ыостс!иа иопярес!Бс агтяогрс!ои оЕ Ртяса со сЬе тча1!я оГ тЬе сиЬе.
Нотчечег, 5Р5 Ь сеиасюия аигС тт!Гутси!с со гешоче Егоги сЬе е!исег( РЬ7А, еяреста1- 1у тчЬеи риг!Еу!иа о1!цоиис!еосЫея ои 5ер-Ра)с со!шипя. РегЬаря сЬе Ьеяс аочке Ь со ые 5Р5 ои1у тчЬеи астешрссиа со гесочег чету ьша11 ашоиип (<20 иа) оЕ РХАя > ! )тЬ тп я!хе, ччЬеге гесочегу Ь а!геатту тиеЕВстеис аит1 ЕигтЬег 1оыея гиау рте)игт!се сЬе яиссея оЕ сЬе ехрелитеис. ТЬтя!я иос ияоа1!у сЬе саяе тчЬеи риг!Гусли яуисЬедс о!!аоиис!еос!ттея, тчЬтсЬ аге аЬчауя гесат!чту яиа11 аитС ияоа!1у ачат1аЫе си аЪииИаисе.
ОЕЬег Ьи((егя шау Ье яиЬят!сосет! Еог асгу1ашйе це! е1исюи Ьи((ег. Рог ехашр1е, !Е сЬе Ртяи Ггаашепс ы гагтю1аЬе!егт аиг! Ь со Ье пьет! ая а ЬуЬпйхадои ргоЬе, ЬуЬлйхасюи Ьи((ег саи Ье яиЬястсисей СЛ!отоуолл <! > ЕсЬапо! бх Се)-!оад)л5 Ьи((ет Рог а !!яс оЕ ае!-!оатт!и5 ЬиЕ(егя аиг1 тес!Рея, р1еаяе яее ТаЫе 5-8 ш Ргососо! 9.
РЬепо(тсЫото(отт (стт, ч)ч) <!> 5од)ит асетате (3 ат, рН 5.2) УЕ (рН 8.0) Ое15 Ро7уасту!ат)де де! <! > Ргераге аио гии йе це! ая гтеясг!Ьегт ш Ргососо1 9 о( сЬтя сЬарсег. Р1еаяе яее гаер !. Ро(уасту(атЫе де! от Ь(5Ь-теьо(ис!оп ацатоье ае! оЕ йе аррторласе сопсепстадоп Ргераге аист гии йе ае! ая тСеясг!Ьет) !и Ргососо!ь 9 аигС т, геь ресдче1у. Р!еаье яее гаер 12.
(Чос!е!с АснЬ апс! О1фопос1ео11с1еь ОКА тат(сеть Вепетасед Ьу теьслсдол д(Веясь оЕ (гпотчп диапсадеь о( сЬе Е))я(А ьатр!е РНА ьатр!е Бреста! ЕЕ1о1ртпеп1 Со!итп (одьроьаЫе р!аьдс) едшрред тчссЬ а Елс (е.5., (2ит)г-5ер со(итль, Еьо!аЬь, )пс.), от а ьут(лде Латте! солса!л)л5 а ууЬастап СР)С Бает от рас)гед ы(ссолсгед 5!аьь иоо! Коса!(ле ъчЬее((то!агу р(асуоттл )л ал слсиЛасот ртеьес со 37 С С)!Стачто(ет lатр, Лапе!-Ле(д, !опд-тчаче!еп5й (302 пт) А(1(1111опа! Кеацеп15 5сер 7 о( ЕЛ!ь ртососо! теди(теь сЬе теадепсь !(ьсед т Ртососо! 9 о( сЬ!ь сЬарсет.
5сер 7 о( сЬ(ь ртогосо! а!ьо тедипеь йе теадепсь !Еьсед сп етйет Ртососо! 70 от 7 7 оЕ ЕЬ(ь сЬарсет. МЕТНО0 1. Саггу опс ро1уасгу!атпЫе ае! е1ессгорЬогеяь оЕ сЬе Е)ХА ьашр1е атк( тпаг)сеть аь т)еьсг(Ьет( тп ргососо) 9. Ьосасе йе 13)х)А о( 1псегеьс Ьу апсогат)(оагарЬу (Ргососо1 11) ог Ъу ехапппас(оп о( ейЫтшп ЬготпЫе- ог 5'т'ВК Со1д-ясашед ае1ь 1п 1опа-тчаче1епасЬ (302 шп) ()Н ИВЫ (Ргососо) 10). 2. С)ье а с1еап ьЬагр ьса1ре1 ог гахог Ыаде со спс опс сЬе ьеВшепс о( сЬе ае! сопсаш)пВ сЬе Ьапд о( шсегеьс, )сеерша йе яке оЕ тЬе ро)уасгу!ашЫе ь1ке ая япа11 аь роьь(Ые. ТЬ)ь сап Ье асЫечед Ьу апу о( йе Ео!!отч(пц шесЬодгс ° ЪНЬ11е тЬе !3)ч)А Гь тПшшпасед тч)й СЛт 11ВЬс, спс сЬгопВЬ Ъой сЬе ае! апд йе 5агап ЪНгар, апд йеп рее1 йе япа11 р(есе о( Ве! сопсаш(пВ йе РХА Егош йе 5агап ЪНгар, Рта|оса! !2| Егп!абоп оЕЕ)ИА Рга8тепгк)тот Ро!уасгу!атЫе беЬ Ьу йе СгакЬ апсЕ 5оа)с Ме|Ьос! 5.53 10.
12. ° Е)ке а реппапепс Ее1|-6ррес1 гпаг1|ег (е.8., Я|агр(е реп) |о он|1(пе йе РХА Ьапс1 оп йе Ьас1| оЕ йе 8!акк р1а|е ччЬ11е |Ье Ее1 1я 11!и|и(палее) Егогп Ье1о|ч чч1|Ь (Лг 118Ьг. 1пчеп |Ье 8е1, гепюче йе 5агап Хгар, апд си| ои| йе Ъапс( ияп8 йе гпаг)сег ои|! (пе ая а 8шде. ° 1п |Ье саке оЕ а Ега8шепг оЕ Е|ХА Ыеп66|ес! Ьу ашогайо8гарЬу, р1асе |Ье ехрокес! аигогас!!08гарЫс 6Ьп оп йе 5агап |Ассар апс) а118п К |ч1|Ь гЬе 8е1.
()ке а реппапеп| |паг1|ег |о он|1|не йе роя6оп оЕ йе с)ея!гес) 13)ч)А Ега8|пепг оп йе Ьас1| оЕ йе 81ая р1а|е. Кепюче |Ье ехрояес! 61п| апс! 5агап ЪЧгар апс) си| ои| йе Ъапй РЬосо8гарЬ ог аи|огайо8гарЬ йе 8е1 айег йе Ъапс)к оЕ РХА Ьаче Ъееп ехс|ке6 |о ргос)исе а реппапеп| гесогс) оЕ йе ехреп|пепг. Тгапкуег |Ье 8е! я!ке со а |п(сгоуи8е |иЬе ог а ро1ургору1епе |иЬе. ~1ке а йярояаЫе р(репе 6р ог шоси!а|ш8 пее|1!е |о сгияЬ йе ро!уасгу1агпЫе Ее! а8ашя йе чча11 оЕ йе |иЪе.
А1|егпанче!у, пке а с!еап кса!ре1 ог гахог Ыас!е |о |1ке йе 8е1 !п|о гмп к!1чегя рпог |о р!асегпеп| ш |Ье е!пиоп плЪе. Са!си!а|е |Ье арргохипа|е чо1шпе оЕ |Ье я1ке апс1 асЫ 1 — 2 чо1шпея оЕ асгу1а|пЫе Ее1 е1и|юп ЪиЕЕег |о йе писго6л8е |иЬе. С1ояе йе |иЬе апс) шсиЬасе || ас 37 С оп а госа6п8 ччЬее1 ог го|агу р1а|Еопп. А| йЬ гешрега|ше, япа1! Ега8гпепи оЕ РХА (<500 Ьр) аге е1пгег) ш 3-4 Ьопгк; 1аг8ег Ега8шепгк |а1|е 12 — 16 Ьошя.
Сеп!пуи8е йе яа|пр!е а| шахнпшп креес! Еог 1 пнпи|е а| 4"С |и а писгобл8е. Тгапяуег йе кирегпа|ап| |о а ЕгеяЬ пнсгоуи8е |иЪе, Ье|п8 ех|гегпе1у сагеЪл1 |о ачоЫ |гапяуегпп8 Ега8- шепгя оЕ ро1уасгу!а|пЫе (а с(гаччп-оиг Рая|еиг р|ре||е ччог)ся чче11). АсЫ ап ас1й|юпа1 0.5 чо1шпе оЕ ассу!ашЫе 8е1 е1и|юп ЪиЕЕег |о |Ье ре11е| оЕ ро1уасгу!агпЫе, чог|ех Ьпейу, апс! сеп|п6л8е а8а|п. Со|пЬлпе |Ье кирегпа|ап|я (Орг!опа!) Кегпоче апу гегпа|пш8 Ега8шепгя оЕ ро1уасгу1агпЫе Ъу раяяп8 |Ье ялрегпа|ап| |Ьгои8Ь а йкрояаЫе р1ая6с со1шпп ел!шррес) чч1|Ь а Епг (е.8., 1ко!аЬя, 1пс., Ошс)с-5ер со1шппя) ог а яупп8е Ьагге1 р1088ес! чг)ЕЬ а ЮЬаг|пап СЕ!С 61|ег ог я11соп)хес) 8!акк |чоо1.
ТЬе е1шес1 Рл|А сап Ье ах|гас|ее) |ч1|Ь рЬепоЬсмогоЕопп апд сЫогоЕопп |о гешоче 5Р5, |чЬкЬ сап |пЬ|Ъ|| япЬяецпеп| епхуп|а||с п|ап!рп1а|юп оЕ |Ье Р19А. Ргес1рпа|е йе ех|гас|е|1 РЪЛА чбй е|Ьапо1 ая г)ексг(Ъесл |и 5|ер 9 апс! сопиппе |ч|й |Ье гегпалпс!ег оЕ |Ье рго|осо1. АсЫ 2 чо!шпек оЕ ейапо! а| 4'С Со |Ье 60|9-ГЬгои8Ь апс) я|оге йе 50106оп оп ке Еог 30 гпши|ея. Кесочег |Ье РХА Ьу сеп|п(68а|юп а| |пахнпшп яреес) Еог 10 пипи|ея а| 4'С ш а |пкгоЪл8е. Ечеп япаП |рлаппиек оЕ РЪЛА аге еЕйс1епОу ргес1рЬа|ес1 Ьу е|Ьапо1 ш |Ыя п|е|Ьой регЬаря Ьесаые оЕ йе ргекепсе оЕ кша1! ап|опп|к оЕ ро1уасгу!ап|Ые |п |Ье е1па|е (Са!11агг) апсл 5|га|ля 1990).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
