Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (522940), страница 133
Текст из файла (страница 133)
Нагчеаг йе сеПа Ьу асгаршВ лпго а япаП чо!шпе пуке-соЫ РВ5 цяпа а агегП!хе6 гцЬЬег ро1келпап. СоПесг йе сеПа Ьу !олч-ареес! сепгг)рцВа6оп. с. Кевиарепс1 гЬе сеПа аг а сопсепггагюп оу -2 х 1Ог сеПь/ш! лп ке-соЫ 1. Ьиу/ег. ГОк еке5н т155еле 5Амрее5 а. !п а Регб 6!аЬ, иве а с!еап оса!ре) го пцпсе угеаЫу ехс!аес) г!яше )пго япаП сиЬеь (1-2 пцп') апд гЬеп ЬошоВеп!ге гЬе сцЬеа !п !се-со!6 РВ5 !п а сЬП!ес1 а1ааа ЬопюВеп!хег чч!гЬ а г!ВЬг-Пллг!пВ рея!е. Ь.
Кешоче Ггакгпепга оу соппес6че багие Ьу 61сгагюп гЬгоиВЬ глчо 1ауега оу сЬеезес!огЬ. с. ЪлгаьЬ йе ьиарепбе6 сеПь йгее г!шел ш !се-со!6 РВ5 апс1 геяларепс) гЬеш аг а сопсепсга6оп оу 2 х 1О' сеПа/гп! ш ке-со!6 1 Ьийег. л/ле а Ьегпасуголпегег го соцпг гЬе се1!ь (р1еаве вес Аррепл)гх 8). ГОк екОеей тл55гле 5Амрее5 а. Сппб 6огеп г)алие ло а Ппе ролчс!ег ияпВ а шоггаг апс) реаг1е сГППед со — 70'С апл! аия репг! лЬе ролчс!еге6 г!яше лп !се-со!6 РВ5.
Ь. Кепюче 6аПшепга ог соппес6че г!алие Ъу П!ггабоп гЬгоцВЬ глчо !ауега ог" сЬееьес!ой. с. Ч/ааЬ гЬе ацарепбес! сеПь гЬгее г!шея лп !се-со!6 РВ5 апс! геялареп6 йеш ас а сопсепгга6оп оу 2 х 1Ол сеПа/ш) !п ке-соЫ Ь Ьигуег. ГОК ИлН!ТЕ ВЕООО СЕЕЕ5 а. Ггас6опаге 5-!О ш! оу яаггшВ Ыоос! Ьу сепгг)рцааг!оп ш |еисоргер сеП ьерагаг!оп гиЬеь го Вгоаа!у ьерагаге лчрбге апс1 гес1 Ыоос1 сеПя Ь. То йе ччГПле Ыоос! сеП 1ауег (Ъи!Ту соаг) асЫ 4 чо1шпеа оу ге6 Ыооб сеП 1уа!а Ьцууег апс1 Вепг1у пнх Ъу гччо го йгее !пчегяопь оуйе гиЪе. с. 1псиЬаге гЬе сеПа !п Ьилгег Еог 5 ш!пи!ел аг гоогп гешрегагиге, ап6 йеп сепгп6лПе йе гиЪе аг 3000г (5000 грш ш а 5огчаП 55-34 гогог) Гог 5 ш!пцгеа аг гоогп лелпрегагцге.
д. Кеялзреп6 гЬе реПег лп 1 пл1 оу РВ5 аг гоогп сегпрегагиге. 2. Ргераге а чо1шпе оу !о/о 1олч-ше1г!па-лешрегагиге аВагоае ш 1 Ьи/уег йал !а ес!ца! го лЬе чо1- шпе оу гЬе сеП ргерагагюп лп 5гер 1. Соо1 йе лпе1гес1 аВагоае го 42'С. 3. лллЬеп гЬе аВагоае Ьаа соо1е6 со 42'С, ъчагш гЬе сеП вцарепяоп (5гер !) го гЬе залпе гегпрегагиге. Млх гЬе ше1гес! ааагоае ъч!гЬ гЬе ацарепл!е6 сеПя 56г гЬе пцхгиге ъч!гЬ а аеа1ел! Раагеиг рлреие со епаиге йаг йе сеПз аге ечеп1у 6!арегаел! гЬгоцВЬоил гЬе аВагозе. 5.64 СЬаргег 5: бе1 Е1есстрЬогетЬ оЕОМА аиг/ Рн/тег/-/те/г/Аеаготе бе1 Е1ессгорЬогегта Р(рессе ог роиг сЬе пю11еп пихсиге 1пго ргеЕоттес) Р1ех!81аа то1с(а (50-100 )с1, РЬаппасса ог В)о-Кас)), ог с)гачч сЬе ппхсиге шсо ап арргорпасе 1епцсЬ оЕ Ту8оп сиЪ(п8 (1/8-шсЬ ог 3.2-ппп шсегпа1 с)1атесег), ог а 1-ти1 р1ааНс ауПп8е Ьагге1.
Есоге йе то1сЬ Еог 15 пшппеа ас гоогп сепсрегасиге, апс) сЬеп сгапаЕег сЬепт со 4'С Еог 15-30 тсписея реп сЬе а8агоае Ьаа аес, Кепс!у со1!есс сЬе р!и88 Егоги йе Р1ех(81аа то1с(8 ог Кепс1у Ыочч оис сЬе а8агозе Егосп сЬе Ту8оп сиЬш8 ог ауппЕе Ъатге1 шсо а Респ' йаЬ. Сис сЬе су1шс(т(са1 р1и88 што 1-стп аесНопа. ЕасЬ 1-сги 1еп8й оЕ а8агоае (45 01) ьЬон16 сопсаси -0.5 х 1оа се1!а апг) у)е16 -2 — 5 Сс8 оЕ РХА. Апа1уа)а оЕ!аг8ег апюниса о/ РХА ш йе шсбчЫна1 !аиеь оЕ а рн!аес)-6е16 Ве! сч)11 с)псогс йе са1- сн1асес) пю1есн1аг арче)8Ьса оЕ йе РХА Ега8шепса. ТЬе ио8га6ои ос 1аг8е РХА Ега8шепса Ь я8- ш6сапс1у а!очес) счЬеп е1ессгорЬогеяа Ь сагг)ег) ош ас ЫВЬ РХА сопсепсгасюпа. !п шгп, й|а а!оъчи8 сч!11 !еад со ап очегеаснпасе оЕ сЬе яае о( ап шйчЫна! РХА Ега8шепс, ТгапаЕег йе р1и88 со 3 чо1шпеа оЕ Е ЪиЕЕег сои!а)п)пц 0.1 т8/т1 ргосешаае К апс) 1% (чч/ч) 5аг1соау1.
1псиЬасе йе р1и88 Еог 3 Ьоига ас 50"С. Кер1асе сЬе от!8!па! ЙЕеас(оп пихсиге ъчЬЬ съчо чо1шпеа оЕ ЕгеаЬ с)18еас)оп пихсиге апс1 соп6пие сЬе шсиЪайоп Еог 12-16 Ьоига ас 50'С. Ве аа сагеуи! аа роаяЫе пос со асаг сЬе а8агоае р!н8а ччЬеп сЬап84п8 Ьн//ег ю1нсюпа, 5отпе РХА ссо!асюп ргососо!а шс1нс)е чету 1оп8 )иснЬас)оиа (24 — 48 Ьонл) ас 50'С счЬеп сгеасш8 йе егиЬесЫе6 се!1а счссЬ ргосешаае К сп сЬе ргеаеисе о( 5аг)соьу1. ТЬеае ехсеис)ес) 1иснЬасюи сниеа аге пос гег)н)ге6 (Могснпег ес а1. 1990) апс1 гпау!еас) со 6е8гайапоп ойЬе ЫВЬ-пю1есн)аг-чче)ВЬс РХА. 1псиЬаСе СЬе р1и88 ас гоот Сетрегагиге си 50 чо1шпеа оЕ ТЕ (РН 7.6) чч)СЬ йгее Со йче сЬапцеа оЕ ЬиЕЕег очег а репой оЕ 3 Ьоига. Кепюче йе ТЕ апс1 гер1асе ичсЬ 2 чо1итпеа оЕ ТЕ (РН 7.6) сои!а(п(п8 40 )сфп1 РМВЕ !псиЪасе Еог 30 т)писеа ас 50'С.
1псиЪасе йе р1и88 ас гоот сетрегасиге ш 50 чо)итеа оЕ ТЕ (РН 7.6) ичсЬ сЬгее со йче сЬап8еа оЕ ЬиЕЕег очет а рег)ос) оЕ 3 Ьоигя ТЬе а8агоае р!н8а сап Ье асогес) Еог аечега! уеага!п ТЕ (рН 7.6) ас 4 С. Р!н8а аге Ьеас асогег! Еог !ои8ег регюс)а оЕ 6ше ш 0.5 М ЕРТА (рН 8.0) ас 4'С. СЧЬеи ша)1ес) со оЖег 1аЬогасопеа, р!н8а аЬон)6 Ье аЫррес) ас гоогп сеспрегаппе ш снЬеа 6!1ес) ъчсЬ 0.5 м ЕРТА (рН 8.0). рго1осо~ 14 Ргерага6оп о1 0МА аког Ри!ьед-йе!д Се! Е!ес1горпогеыь: Ьо!акоп о1 )п1ас1 0МА 1гот Уеай р ве Аклт!он от у| Аьт ОМА ток етгсткоенокеь|5 гес)и|геь (Ьаг (Ье се11ь йгьг Ье тгеасес1 епкутпа6са!1у то Ьгеа1с с!осчп (Ье се11 тча11, апс1 | Ьеп геьиьрепс(ес( ш 1отч-шевой-гешрегатиге айагоье р1ийь. ТЬе р1ийь аге ш|иьес1 ей(Ь 1уяь Ьийег апс1 ргогеаьеь го Еасййасе с(!ьгирт|оп оГ (Ье се11ь апс1 гешоча( от ргогетпь Гготп (Ье 1)ХА. ТЬ|ь ше(Ьос( (ь а ь115Ь( тпогййсайоп от гЬат опй!па(1у с(еьспЬес) Ьу 5сЬсчагтк апс1 Сап(от (1984) апс1 сап Ъе пьес( то ргераге Ьо| Ь Ь!ВЬ-тпо1еси)аг-тче|ВЬ( уеаьт сЬготпоьошеь аь яке тпаг1сегь аис( уеаьт агггйста! сЬготпоьошеь ( тАСь).
СНКОМО5ОМЕ 5!ТЕ 1М УЕА5Т5 А(с(О ВАСТЕК|А ТЬе ь!теь о( гйе сЬгоитоьогиеь ргеьепт !п ьечега! ьрес1еь о! Ьассеиа аис( уеаьт (5. сегеч|ь(ае апс( 5, )ютиЬе) Ьаче Ьееп с(етепп(пес(, ТЬе ь!кеь Ье)отч аге га(сеп (гопт СЬи (! 990а). ° 5. сегеч|ь|ае (ьтга(п Ит(А(295)г 245, 290, 370, 460, 580, 630, 700, 770, 800, 850, 945, 1020, 1200, 1570, апс( 2190 1сЬ.
уАСь ъзту |и ь!те ир то 2000 (сЬ (и гйе Ьас(с8гоиис( о( гЬе пат!че уеаьт сЬгогпоюгпеь. ОтЬег уеаьт ьтга|пь гпау Ьаче чапайопь |п сЬгогиоюгие ь(те. 1п асЫ!т!оп, сЬгогиоюгпе ХП чапеь !п ь!те Ьепчееп ~ 2 аис( 3 МЫи с(!Йегепт Во!атеь о(гйе у)с))с) 295 ьиа!п. ТЫь сЬгогпоюизе сиота!пь — 1.! МЬ о( 1осч-сорупиптЬег 0(с)А апс! чаг!аЫе питиЬегь о( таис(еит гереать епсос(!08 (Ье гКНАь. ° 5. РогпЬег 3500, 4600, апс( 5700 1сЬ. ° Е. со16 4700 Иэ. ТЬВ 'ь а с|гси|аг сЬгогпоьогпе апс) гииьт Ье !!иеаптес( сч(тЬ !оъч-с(оье т (ггас(!ат!оп Ье(оге | иье аь а ь!те ьтапс(агс(. )чтАТЕК1АЕ5 САс)Т(О(с|: Р!еаье ьее Аррепс!!х 12 Гог арргорпате ЬапсН!п8 о( итатепа!ь гиаг(с с( тчИЬ <!>.
Войег5 апс1 Ьо!61!оп5 Р|еаье ьее Аррепгйх ! (ог согпропепть о( ь(ос(с ьо106опь, Ьийегь, апс( геаееп(ь. Е61и(е а!ос(с ьо1и6опь (о (Ье арргорна(е сопсеп1га6опь. Сей тчаьЬ Ьиттег 0.0! М Тгй-С| (РН 7.6) 0.05 М ЕРТА (РН 8.0) 5|оге аг гооит сетирегасиге. 5.65 5.66 СИаргег 57 Се! Е!есгтрИогеяг оТ РИ/А апг( Ри(гег(-/ге!г( Аеагоге Се! Е!есггорИогеггг ЕРТА (0.05 м, рН 8.0) Е Ьи//ег 0.1 м Е))ТА (РН 8.0) 0,01 м Тпз-С1 (РН 7.6) 0.02 М НаС! йоге аг 4'С. Е Ьи//ег иг/(И рго(еЕпаае К апс! 5аг!гоьу! Ашепг( гЬе 1. Ьийег го а Впа! сопсепггагюп о(1еА (и/ч) 5аг)гогу!. йоге 1. Ьи((ег и)гЬ 5аг)гогу! аг гоош гешрегашге, апг( агЫ ргоге!паве К го 0.1 го8лп! )изг Ье(оге иге.
ТЕ (рН 7.6) ТЕ (РН 7.6) соп(агл!лВ 40 РВ/т! РМ5Е <! > РигсЬаье РМВР ае а ю!Ы, апг( вгоге В аг гоогп гешрегагиге. Вью!че гЬе арргорпаге агпоипс о( РМВР ш ТЕ )ыг Ье(оге иве. Уеаяг !уа!в Ьи//ег 0.01 м ТгеиС! (РН 7.6) 0.5 м ЕРТА (РН 8.0) !1-шегсаргоегЬапо1 (19о ч/ч/ < ! > АгЫ )1-шегсаргоегЬапо! )ыг Ье(оге ые. йоге гЬе сопсепсгагег1 зо!иг!оп 1п а сЬешка1 Вгше Ьооа Уеаа( сеП и аП с/!Веа!!оп елаутеги Луто!уаае 5000 (К/пп Вгегчеггеь) 1)ью!че хушо1уаье аг 2 ш8/ш! ш 0.01 м гой(иш РЬогрЬаге сопгаиип8 50% 81усего! )иьг Ье(оге иге. ОГ (УВсаье (67 тд/глП (5!Вта) 7)Ью!че аг 67 ш8/гп) (900 ип(гг/ш1) ш 0.01 м югВиш РЬоярЬаге сопгашгп8 50еа 81усего! ) изг Ье(оге иге. Се15 Еогч-те!!гпВ-(етрега(иге аВагоье (7/а) ()ге а Вгаг(е о( а8агоье гЬас Ь зшгаЫе (ог РРСЕ (е.8., Веар1агрге СТО, В)оЧЧЫгга)гег, ог ге8и)аг ЕМР, О1ВСО-ВВЕ).
Сеп1г1й~е8 апд гсо1ог8 5ол аП С5А гоГог ог ег/и/ча!еп( Ьрес1а1 Е(101ргпеп1 Рге/огтег/ Р!ех!8!аь то!г/5 (50-700 ф, РИагтасга ог В!о-/гас/), ог а !епВ(И о/ ТуВоп гиЫпд (7/8-тсИ ог 3.2-тт гп(егпа! с/!ате(ег), ог а р!аа(!с яуг/пВе Багге! (7 т!) Р1еаяе атее 5гер б. Се!18 апд Ть5ое5 Уеаа( ьиарепь!оп сипиге Ргераге гЬе уеазг си!гиге аг а чо)ипъе апг1 се1! г)епе(гу арргорпасе го у)е18 гЬе гег(и(гег( пшпЬег о(р!и8е о( ешЬегЫег) 7)Ь)А. МЕТНОО 1.
Со!1есг уеаа! се!Ь цгоъч(п8 гп яырепяои Ьу сепгг(уицаг(оп аг 3000е (4300 грт (и а ВогчаБ СЕА гогог) Гог 5 пипи(ея аг 4'С. ХааЬ (Ье се!1 ре11ег ггч!се ил(Ь се)1 ъчааЬ Ъиууег. 2. Кеяиареиг! (Ье се!18 аг а соисеиггапои оу 3 х 109 сеца/гп! (и 0.05 М ЕРТА (рН 8.0) а( О"С. 3.
Ргераге ап ег)иа! чо1игпе оу 188 1очч-гле11(и8-!егпрегагиге ацагоае (и 1 ЪШТег. Соо! (Ье гие11- ег( а8агоае го 42'С. Ртососо! 14: Ртератабоп 07' Р!4А Тот РЖЕ: 15о!абоп оу" 1псасс РМА 7тотп Уеасс 5.б7 4. АгЫ 75 !с! ог" кугпо1уаае ог 1устсазе тю1ибоп со сЬе се!1 аиарепяоп оу 5сер 2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
